CN105237452A

CN105237452A - 一种度骨化醇的新结晶形式及其制备方法

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Publication number: CN105237452A
Application number: CN201510728373.5A
Authority: CN
Inventors: 陆晨光; 丁伯祥; 闵涛; 袁尚; 徐丽; 石若鹏
Original assignee: Nanjing Hairong Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nanjing Hairong Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-11-01
Filing date: 2015-11-01
Publication date: 2016-01-13
Anticipated expiration: 2035-11-01
Also published as: CN105237452B

Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种度骨化醇的新晶型A及其制备方法，本发明还涉及包含该度骨化醇新晶型A的药物组合物及其在治疗骨质疏松症或者继发性甲状旁腺功能亢进症中的应用。所述的度骨化醇的新晶型A，使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射在7.82、8.51、12.06、13.01、15.60、17.05、17.82、18.71、19.35、20.06、20.37、20.62、21.98、22.68、22.90、23.81、24.79处有衍射峰。本发明同时还公开一种用于制备高纯度的度骨化醇的工艺改进方案，步骤简便，易于操作，用时短，成本低，十分利于工业化大生产。

Description

一种度骨化醇的新结晶形式及其制备方法

技术领域

本发明属于维生素D类衍生物的制药领域，具体涉及一种度骨化醇的新结晶形式及其制备方法。

背景技术

维生素D类化合物不仅能够促进骨骼对钙磷的吸收保证体内钙磷的充分供应，促进骨骼的正常钙化，还有广泛的生物学效应，例如抑制细胞增殖、诱导细胞分化、调节机体免疫系统等。维生素D类化合物在钙代谢、细胞增殖和细胞分化中的核心作用，使其成为治疗多种疾病包括癌症、骨质疏松症、甲状旁腺机能亢进和银屑病的极具潜力的候选者。研究表明，维生素D类化合物的1位被α羟基取代，即得1α-羟基维生素D类化合物，能够更好地发挥生理功效。

目前，用于临床的1α-羟基维生素D类化合物及衍生物主要有度骨化醇、骨化三醇、他卡西醇，帕立骨化醇和阿法骨化醇等。其中，由于度骨化醇具有对伴有继发性甲状旁腺功能亢进症的血透患者没有毒副反应的优势而获得广受关注。

度骨化醇（Doxercalciferol，1α-hydroxyvitaminD₂）是一种维生素D₂类似物，分子式C28H44O2，相对分子质量412.65。度骨化醇由美国BoneCareInternational公司研制，获FDA批准在美国上市，临床用于骨质疏松症、继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）等。

度骨化醇是首个用于SHPT适应症的维生素D₂类似物，发展前景广阔。度骨化醇进入血液后经肝脏微粒体25-羟化酶的作用，在C-25位上羟基化后生成1α，25-羟基维生素D₂，与受体结合后发挥促进钙磷吸收、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移等作用。同时，将度骨化醇用于治疗前列腺癌、结肠癌和乳腺癌的临床研究也正在进行中。最近研究表明度骨化醇对骨髓增生异常综合征、慢性单核细胞性白血病等亦具有一定疗效。

1α-羟基维生素D类化合物及衍生物的合成具有重要意义。现有技术已经公开了多种包括度骨化醇在内的1α-羟基维生素D类化合物的合成方法，例如光化学方法、会聚合成法和结构修饰法等。其中，光化学方法是首先将天然维生素D进行1α-羟基化，再通过光照开环合成1α-羟基维生素D类化合物。会聚合成法是将A环维生素D与CD环合反应，再通过偶合反应得到1α-羟基维生素D类化合物。结构修饰法是直接对维生素D进行结构修饰得到1α-羟基维生素D类化合物。

孙博等人在中国新药杂志，2009年18卷，13期，1243-1245中报道了一条避开光化学反应的路线合成，是其以维生素D2为原料，经过甲磺酸酯化保护、环合、二氧化硒氧化、开环、纯化5步反应生成了度骨化醇。该反应虽然避开了使用光照反应的条件和设备，但是开环反应那步基本生成了等量的立体异构体产物，不仅产率降低一半，而且后续将两者分离纯化十分困难。

Calverley等人在1987年申请的世界专利WO87/00834中公布以一条简单方便的合成路线，其以维生素D₂为原料，对维生素D₂直接进行结构修饰，经过SO₂的Diels-Alder加成，TBSCl的羟基保护，脱SO₂保护，Riley氧化上羟基，共计五步反应合成重要中间体化合物。但是，后续没有记载对度骨化醇最终合成的报道。

发明内容

本发明人针对现有技术中度骨化醇合成的工艺路线存在的诸如立体选择性差，终产物分离纯化困难，路线的总收率偏低等缺陷，研究和开发了一种合成度骨化醇的优化工艺和改进方法。本发明工艺在二氧化硒氧化的关键步骤中优选了协同氧化剂和增效催化剂，提高了反应效率，增强了产物的立体选择性；采用马来酸酐的Diels-Alder反应除去了难以去除的立体异构杂质，提高了终产物纯度和整体作步骤简便，利于工业化大生产。同时，我们在研究度骨化醇晶型过程中，意外地获得了一种理化性质和稳定性都较为理想的新晶型形式，命名为度骨化醇新晶型A。

本发明提供了一种度骨化醇的新晶型A，其PXRD图谱中，辐射源为Cu-Kα₁，在2θ值为7.52、9.31、10.42、11.74、13.02、14.53、16.94、20.11、21.34、22.30处有衍射峰，其中2θ值误差范围为±0.2。

进一步特征地；其DSC图谱在133.6±5.0℃有吸热峰。

更具体地，上述的度骨化醇的新晶型A，使用Cu-Kα辐射，其X射线粉末衍射的图谱如附图1。DSC图谱见详见附图2。

本领域技术人员应当理解的是：本发明所列的各种晶型数据，由于受到检测设备及条件等各种因素的影响，同一种晶型所测得的X射线粉末衍射图谱的出峰位置或者强度会存在一定差异。因此，本发明晶型的粉末X射线衍射图谱中2θ值的实验误差可为±0.2。

本发明的另一个目的是提供一种度骨化醇的新晶型A的制备方法，该方法包含如下步骤：

（a）在温度35-40℃下，将高纯度的度骨化醇搅拌溶解于酮类溶剂和醇类溶剂的混合溶剂中；其中，所述的“高纯度的度骨化醇”是指HPLC纯度在99.0%以上；

（b）趁热过滤，滤液降温至10-15℃，缓慢搅拌析晶5-10h；

（c）过滤析出晶体，25-30℃真空干燥，即得；

其中，酮类溶剂选自：丙酮，丁酮，甲基叔丁基酮中的一种；醇类溶剂选自：甲醇，乙醇，叔丁醇，异丙醇，异丁醇，正戊醇，丙二醇中的一种；酮类溶剂体积是度骨化醇重量的4-6倍，单位是mL/g；醇类溶剂体积是度骨化醇重量的0.5-2.0倍，单位是mL/g。

更加优选地，上述醇类溶剂选自异丙醇，其体积是度骨化醇重量的1.5倍，单位是mL/g；酮类溶剂选自甲基叔丁基酮，体积是度骨化醇重量的5倍，单位是mL/g。

研究度骨化醇合成工艺的改进和优化是本发明的主要目的之一，本发明公开了一种制备上述的“高纯度的度骨化醇”的方法，具体包含如下步骤：

（1）将维生素D₂（即式2化合物）的二氯甲烷溶液冷却至-15至-20℃，缓慢通入SO₂气体，保温反应1-2h，TLC监测反应完全，将反应液旋蒸除去SO₂气体，得到泡沫状黄色固体，即式3化合物；

（2）将式3化合物溶解于含有咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷的DMF溶液中，室温搅拌2-3h，TLC监测反应完全，加入水和乙酸乙酯的混合液，萃取分层，有机相干燥浓缩后得到黄色油状物，即式4化合物；

（3）将式4化合物溶于乙醇和水的混合液中，加入碳酸氢钠，加热回流2-3h，TLC监测反应完全，加入水和乙酸乙酯的混合液，萃取分层，有机相干燥浓缩后得到黄色油状物，即式5化合物；

（4）将式5化合物溶于含有过氧化氢异丙苯和4-二甲氨基吡啶的二氯甲烷溶液中，加入二氧化硒的甲醇溶液，在40-50℃加热回流2h，TLC监测反应完全，加入二氯甲烷和水的混合液，萃取分层，有机相干燥浓缩后得油状物，即式6化合物；

（5）将式6化合物溶解于含有咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷的DMF溶液中，室温搅拌2-3h，TLC监测反应完全，加入水和乙酸乙酯的混合液，萃取分层，有机相干燥浓缩后得到黄色油状物，将上述油状物用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行柱层析，收集得到白色固体，即式7化合物；其中洗脱剂的使用方式是石油醚/乙酸乙酯的体积比从20:1至6:1的梯度洗脱；

（6）将式7化合物，9-乙酰基蒽和三乙胺溶于无水甲苯中，冷却至0-10℃，氩气保护下搅拌均匀，然后暴露在含有铀滤光器玻璃管的UV灯的光线照射下反应1-1.5h，通过HPLC监测反应，减压旋蒸，将包含式8浓缩物溶于无水乙醇中，加入盐酸/乙醇溶液，室温反应2-3h，TLC监测反应完全，缓慢地分批加入碳酸氢钠固体，调节pH为7-8，继续搅拌0.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，得到式1化合物，即度骨化醇的粗品；其中，式7化合物在甲苯中的质量体积浓度是1.11-1.25%；“盐酸/乙醇溶液”浓度为1mol/L；9-乙酰基蒽重量是式7化合物重量的10-15%；

（7）纯化步骤：将度骨化醇的粗品溶解于乙酸乙酯中，加入马来酸酐，在20-30℃搅拌8h，再加入5-10%碳酸钠溶液，搅拌反应20-60min，静置分层，有机层用水洗至中性，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩，得类白色固体粉末；

（8）精制步骤：将上述所得类白色固体粉末溶解于2倍体积的异丙醇和3倍体积的丁酮组成的混合溶剂中，降温至-15至-10℃，缓慢滴加5-10倍体积的甲酸乙酯或者甲酸异丙酯溶剂，其中，所述“倍体积”是指溶剂体积/类白色固体重量的体积重量比，单位mL/g；滴加完毕后同温搅拌2h，静置析晶6h，抽滤，滤饼在25±2℃下真空干燥7-10h，得高纯度的度骨化醇，HPLC纯度大于99.0%。

优选地，步骤（4）中，式5化合物：二氧化硒：过氧化氢异丙苯的摩尔比为1:0.4-0.5:2.5-3；4-二甲氨基吡啶重量是式5化合物重量的8-10%。

优选地，马来酸酐重量是度骨化醇粗品重量的5-8%，所用碳酸钠溶液的质量体积浓度为7%，搅拌反应40min。

优选地，步骤（8）中所述的甲酸酯类溶剂选自甲酸异丙酯，其体积为类白色固体重量的6倍，单位是mL/g。

本发明还提供了一种药用组合物，其特征在于，含有上述的度骨化醇的新晶型A和药用辅料，且该药用组合物的制剂形式选自：片剂，胶囊剂，或者注射剂中的一种。本发明的药用组合物可采用本领域公知的常规药用辅料，加以常规制备方法得到。

明显地，本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗骨质疏松症或继发性甲状旁腺功能亢进症的药物中的用途。该药用组合物可以用于骨质疏松症或继发性甲状旁腺功能亢进症的治疗。

本发明还提供所述的药物组合物固体制剂形式，例如片剂，颗粒剂，胶囊剂，微囊剂，丸剂，干混悬剂，粉剂。优选地，本发明的制剂，优选为片剂，胶囊剂。其中每单位制剂中含有本发明晶型A为2-5μg。

对于固体制剂而言，常规的药用辅料包括填充剂，粘合剂，崩解剂，润滑剂等。填充剂包括淀粉，乳糖，甘露醇，微晶纤维素；粘合剂包括淀粉，乳糖，甘露醇，微晶纤维素；崩解剂包括交联纤维素钠，交联聚维酮，低取代的羟丙甲基纤维素；润滑剂包括硬脂酸镁，滑石粉，聚乙二醇，十二烷基硫酸镁，微粉硅胶，滑石粉等。药用辅料根据实际需求，还可加入着色剂和甜味剂等。

本发明技术方案取得了如下有益的技术效果：

（1）本发明所提供的度骨化醇新晶型A，具有理化性质好、稳定性高等优点，经过影响因素试验和加速稳定性试验都表明，作为原料药的度骨化醇新晶型A，在外观、性状、有关物质，含量等方面，跟对比实施例相比均具有显著优势。

（2）本发明提供的制备度骨化醇新晶型A的方法，步骤简便，易于操作，用时短，成本低，十分利于工业化大生产。

（3）现有技术中，在维生素D及其衍生物的合成领域，针对例如本发明所述式5化合物的烯丙位立体选择性地氧化成羟基的办法不多，其中较为优选的方案是使用二氧化硒作为氧化剂，N-甲基吗啉-N-氧化物（NMO）作为助氧化剂，并且二氧化硒的用量约为底物的1倍摩尔量，N-甲基吗啉-N-氧化物的用量高达底物的将近5倍摩尔量。但是，本领域技术人员都知晓，二氧化硒是剧毒物，毒性和砒霜类似，且溶于水后所得的亚硒酸具有较强的酸性和刺激性。药物研发的指导原则中对剧毒物及其残留量有严格控制，剧毒试剂应当考虑不用或少用。此外，N-甲基吗啉-N-氧化物置于空气中极易吸收水分，文献报道中往往先对其用分子筛或硫酸镁干燥处理后再使用，否则将对反应收率大大折扣。然而，我们经深入研究后惊喜地发现，采用0.4-0.5倍摩尔量的二氧化硒，2.5-3倍摩尔量的过氧化氢异丙苯，以及适当催化量的4-二甲氨基吡啶可以很好地替代上述文献报道的氧化剂组合来使用，其中过氧化氢异丙苯作为二氧化硒的协同氧化剂，发挥了更多温和氧化的作用，再辅以增效催化剂4-二甲氨基吡啶，使得该氧化剂的组合物能够理想地实现立体选择性氧化烯丙位的目的，提高了氧化步骤中目标物与异构体的比值（1α/1β的比值），以及该步的反应得率。如下式所示，大大提高了目标物6的收率，降低了杂质6b的生成。

（4）式7化合物在光照异构化反应时，如果反应不完全的话，反式的式7化合物会有残留。经过下步的脱除TBS保护基后，形成度骨化醇的反式杂质7b。由于与终产物理化性质极其相像，故极难去除。

经过后处理摸索，我们惊喜地发现采用马来酸酐在室温下，选择性地与该杂质进行Diels-Alder反应，再在碳酸钠的中等碱性条件下，水解酸酐结构后得到开环的二羧基产物。其水溶性强，后处理只需通过水洗即可将该二羧基杂质留在水层而易于去除，省去了柱层析的繁琐步骤，提高了终产物的纯度和质量。

（5）本发明路线中的光化学反应是涉及光学异构化的关键步骤，其光学异构化的效率和程度直接影响到该步产物的纯度和杂质种类及含量。我们发现，除了光敏增效剂的用量（本发明控制在底物重量的10-15%）之外，底物式7化合物在甲苯溶液中的浓度（本发明控制在底物量的1.11-1.25%）也是关键工艺参数之一，也即：该光学异构反应适合于在较低浓度下进行温和反应，浓度增大，虽然反应迅速，但引入杂质增多，难以去除；另外，反应时间不宜过长，否则即使生成得到目标产物也易发生其他降解。

附图说明

图1为度骨化醇新晶型A的XRPD图。

图2为度骨化醇新晶型A的DSC图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明技术方案作进一步的说明。

实施例1度骨化醇新晶型A的制备

（1）将维生素D₂（即式2化合物）约15g溶于二氯甲烷100mL中，冷却至至-15至-20℃，通过钢瓶缓慢通入SO₂气体，保温反应1-2h，TLC监测反应完全，旋蒸除去SO₂气体，得到泡沫状黄色固体，式3化合物18.3g；

（2）将式3化合物18.3g，加入DMF约130mL，咪唑11g，叔丁基二甲基氯硅烷13g，室温搅拌2h，TLC监测反应完全，加入水300mL，乙酸乙酯萃取（3*100mL），合并有机相，用400mL饱和食盐水分三次洗涤有机相，有机相干燥浓缩后得到黄色油状物，即式4化合物约22.1g；

（3）将式4化合物约22.1g溶于250mL乙醇和15mL水的混合物中，加入碳酸氢钠25g，加热回流2-3h，TLC检测反应完全，体系旋蒸至约50mL，加入200mL蒸馏水，乙酸乙酯萃取（3*200mL），合并有机相，用300mL饱和食盐水分两次洗涤有机相，干燥浓缩后得到15.2g黄色的油状物，即式5化合物；

（4）将过氧化氢异丙苯约（11.4g，2.5倍摩尔量）和4-二甲氨基吡啶（1.6g，底物重量10%）溶于200mL二氯甲烷中，加入上步式5化合物约15.2g，溶解澄清后加入二氧化硒（1.7g，0.5倍摩尔量）溶于10mL甲醇中的溶液，将上述混合物在40-50℃间加热回流2h，TLC监测反应完全，加入200mL二氯甲烷，用饱和食盐水300mL洗涤，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到18.5g红色油状物，即式6化合物；

（5）将上步粗品的式6化合物18.5g，加入120mLDMF中溶解，再加入咪唑9.5g，叔丁基二甲基氯硅烷12g，室温搅拌2-3h，TLC检测反应结束后，加入300mL水，乙酸乙酯（2*200mL）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗（3*100mL），干燥浓缩后得到黄色的油状物，将所得粗品采用以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行柱层析纯化，收集得到式7化合物约11.3g白色固体；其中洗脱剂的使用方式是石油醚/乙酸乙酯的体积比从20:1至6:1的梯度洗脱；

（6）将式7化合物11.3g，9-乙酰基蒽1g，新蒸馏的三乙胺3.5g，以及900mL甲苯的混合物搅拌均匀，冷却至0-10℃间，在氩气保护下，暴露在含有铀滤光器玻璃管的UV灯的光线照射下反应1h，通过HPLC监测反应，将反应混合物转移至烧瓶，减压旋蒸，得到9.8g粗品；将上述粗品9.8g溶于无水乙醇100mL中，加入5mL1mol/L的盐酸/乙醇溶液，室温反应2h，TLC监测反应完全，缓慢地分批加入碳酸氢钠固体，直至调节pH为7.5左右，继续搅拌0.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，得到式1化合物，即度骨化醇粗品8.7g；

（7）纯化步骤：将上述度骨化醇粗品8.7g用乙酸乙酯60mL溶解，加入马来酸酐0.8g，25±2℃下搅拌8h，再加入7%碳酸钠溶液30mL，搅拌40min，静置分层，有机层用水洗至中性，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得类白色固体粉末7.6g；

（8）精制步骤：将上述所得类白色固体7.6g溶解于2倍体积的异丙醇约16mL和3倍体积的丁酮约25mL的混合溶剂中，降温至-15至-10℃，缓慢滴加6倍体积的甲酸异丙酯约50mL，滴毕，同温搅拌2h，静置析晶6h，抽滤，滤饼在25±2℃下真空干燥7-10h，得“高纯度的度骨化醇”约6.3g，HPLC纯度约为99.2%。

（9）晶体制备：

a）在温度35-40℃下，将高纯度的度骨化醇6.3g，搅拌溶解于甲基叔丁基酮35mL和异丙醇11mL的混合溶剂中；其中，甲基叔丁基酮是度骨化醇的5倍量约35mL，异丙醇是度骨化醇的1.5倍量约11mL；

b）趁热过滤，滤液降温至10-15℃，缓慢搅拌析晶5-10h；

c）过滤析出晶体，25-30℃真空干燥，即得度骨化醇新晶型A约5.1g，HPLC纯度为99.8%。

实施例2度骨化醇新晶型A的制备

（1）将维生素D2（即式2化合物）约18g溶于二氯甲烷120mL中，冷却至至-15至-20℃，通过钢瓶缓慢通入二氧化硫气体，保温反应1-2h，TLC监测反应完全，旋蒸除去二氧化硫，得到泡沫状黄色固体，式3化合物21.3g；

（2）将式3化合物21.3g，加入DMF约150mL，咪唑13g，叔丁基二甲基氯硅烷15g，室温搅拌2h，TLC监测反应完全，加入水300mL，乙酸乙酯萃取（3*100mL），合并有机相，用400mL饱和食盐水分三次洗涤有机相，有机相干燥浓缩后得到黄色油状物，即式4化合物约24.1g；

（3）将式4化合物约24.1g溶于250mL乙醇和15mL水的混合物中，加入碳酸氢钠28g，加热回流2-3h，TLC检测反应完全，体系旋蒸至约50mL，加入200mL蒸馏水，乙酸乙酯萃取（3*200mL），合并有机相，用300mL饱和食盐水分两次洗涤有机相，干燥浓缩后得到17.2g黄色的油状物，即式5化合物；

（4）将过氧化氢异丙苯约（13.8g，2.5倍摩尔量）和4-二甲氨基吡啶（1.8g，底物重量10%）溶于200mL二氯甲烷中，加入上步式5化合物约17.2g，溶解澄清后加入二氧化硒（2.1g，0.5倍摩尔量）溶于10mL甲醇中的溶液，将上述混合物在40-50℃间加热回流2h，TLC监测反应完全，加入200mL二氯甲烷，用饱和食盐水300mL洗涤，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到21.4g红色油状物，即式6化合物；

（5）将上步粗品的式6化合物21.4g，加入120mLDMF中溶解，再加入咪唑11.5g，叔丁基二甲基氯硅烷15g，室温搅拌2-3h，TLC检测反应结束后，加入300mL水，乙酸乙酯（2*200mL）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗（3*100mL），干燥浓缩后得到黄色的油状物，将所得粗品采用以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行柱层析纯化，收集得到式7化合物约13.6g白色固体；其中洗脱剂的使用方式是石油醚/乙酸乙酯的体积比从20:1至6:1的梯度洗脱；

（6）将式7化合物13.6g，9-乙酰基蒽1.3g，新蒸馏的三乙胺5.2g，以及1100mL甲苯的混合物搅拌均匀，冷却至0-10℃间，在氩气保护下，暴露在含有铀滤光器玻璃管的UV灯的光线照射下反应1h，通过HPLC监测反应，将反应混合物转移至烧瓶，减压旋蒸，得到10.8g粗品；将上述粗品10.8g溶于无水乙醇100mL中，加入5mL1mol/L的盐酸/乙醇溶液，室温反应2h，TLC监测反应完全，缓慢地分批加入碳酸氢钠固体，直至调节pH为7.5左右，继续搅拌0.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，得到式1化合物，即度骨化醇粗品9.9g；

（7）纯化步骤：将上述度骨化醇粗品9.9g用乙酸乙酯80mL溶解，加入马来酸酐1.0g，25±2℃下搅拌8h，再加入7%碳酸钠溶液30mL，搅拌40min，静置分层，有机层用水洗至中性，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得类白色固体粉末8.9g；

（8）精制步骤：将上述所得类白色固体8.9g溶解于2倍体积的异丙醇约19mL和3倍体积的丁酮约30mL的混合溶剂中，降温至-15至-10℃，缓慢滴加6倍体积的甲酸异丙酯约50mL，滴毕，同温搅拌2h，静置析晶6h，抽滤，滤饼在25±2℃下真空干燥7-10h，得“高纯度的度骨化醇”约7.3g，HPLC纯度约为99.1%。

（9）晶体制备过程：

a）在温度35-40℃下，将高纯度的度骨化醇7.3g，搅拌溶解于丙酮和甲醇的混合溶剂中；其中，丙酮是度骨化醇的4倍量约29mL，甲醇是度骨化醇的0.5倍量约5mL；

b）趁热过滤，滤液降温至10-15℃，缓慢搅拌析晶5-10h；

c）过滤析出晶体，25-30℃真空干燥，即得度骨化醇新晶型A约5.1g，HPLC纯度为99.7%。

实施例3度骨化醇新晶型A的制备

高纯度的度骨化醇的制备同实施例1，HPLC纯度为99.2%

晶体制备过程：

a）在温度35-40℃下，将高纯度的度骨化醇6.0g，搅拌溶解丁酮和乙醇的混合溶剂中；其中，丁酮是度骨化醇的6倍量约36mL，乙醇是度骨化醇的2倍量约12mL；

b）趁热过滤，滤液降温至10-15℃，缓慢搅拌析晶5-10h；

c）过滤析出晶体，25-30℃真空干燥，即得度骨化醇新晶型A约4.7g，HPLC纯度为99.7%。

实施例4关键中间体和终产物的结构确证

关键中间体式6化合物的结构确证数据

ESI-MS：641.42（M+1）

IR(KBr，cm-1)的特征峰为：2951(-CH₃)，1640(C=C)，1257(Si-CH₃)，1082(Si-O-C)

¹H-NMR（ppm）：0.07（12H，s），0.54（3H，s），0.88-0.91（18H，d）1.03（3H，d，J=10Hz），4.18-4.28（1H，m），4.53-4.55（1H，m），4.95（1H，s），5.01（1H，s），5.17-5.23（2H，m），5.83（1H，d），6.47（1H，d）。

终产物度骨化醇的核磁氢谱数据

¹H-NMR（ppm）：0.56（3H，s），0.88（6H，t，J=7.4），0.94（3H，d，J=6.9），1.1（3H，d，J=6.7），1.23-1.41（3H，m），1.44-1.78（7H，m），1.85-2.19（6H，m），2.35（1H，m，J=13.5，6.4），2.59（1H，d，J=14.0），2.81-2.91（1H，m），4.22-4.33（1H，m），4.51（1H，m，J=7.4，4.1），5.05（1H，s），5.16-5.30（2H，m），5.36（1H，s），6.07（1H，d，J=11.3），6.44（1H，d，J=11.3）。

实施例5晶型的对比试验

本领域技术人员都熟知，在通常情况下原料药的结晶体比相应无定型物的分子能量低，稳定性高。也即固体的结晶形式更方便于固体制剂的贮存和使用。因此，本发明主要针对现有技术中报道的度骨化醇结晶物进行对比研究，进行稳定性考察。

对比晶型1US20120108554A1的实施例1

该文献报道的操作描述为：19.9g粗品度骨化醇加入到378g甲醇中溶解，过滤，浓缩到138g时，加入175g乙腈，在0-10℃下静置析晶3h，过滤，干燥得到一次析晶产物16.9g。上述一次析晶产物再用321g甲醇溶解，溶液过滤，浓缩到117g，加入149g乙腈，在0-10℃下静置析晶3h，过滤，干燥得到二次析晶产物13.3g

我们按照上述方法的用量比例，以0.5g度骨化醇粗品为起始物，进行甲醇/乙腈的两次重结晶，得到对比晶型1，约0.24g。

对比晶型2WO2014024210A2的实施例24（度骨化醇晶型H1）

该文献报道的操作描述为：度骨化醇10mg，DMF约40mL搅拌溶清，在20分钟内滴加纯化水400mL，室温静置6h，抽滤所得固体，干燥，得到9mg度骨化醇晶型H1。

我们按照上述方法的用量比例，以0.5g粗品度骨化醇为起始，进行DMF/水的混合溶剂重结晶，得到对比晶型2，约0.31g。

实施例6度骨化醇新晶型A的表征

通过X射线方法（中国药典附录关于X射线粉末衍射法）将上述实施例1制得的度骨化醇新晶型A置于粉末衍射仪（ThermoX’TRA型X射线衍射仪）上，用Cu-Kα40kV～40mAX-射线辐射，以8度/分的扫描速度在3～50度2θ进行扫描。通过差热分析（DSC）法，在NETZSCHDSC204型差热分析仪上，以10℃/min升温速率，在30-300℃温度范围内扫描。

实施例7度骨化醇新晶型A的稳定性评价

将制得的对比晶型1和对比晶型2，以及本发明的度骨化醇新晶型A开展影响因素试验、加速稳定性试验，试验方法参见中国药典中《原料药与药物制剂稳定性试验指导原则》。

（一）、影响因素试验：

1.高湿试验：取对比晶型1，对比晶型2，以及实施例1的度骨化醇新晶型A，于RH75%下放置10天，于第5天和第10天取样，测定各项指标与0天样品进行比较，试验结果见下表。

2．强光照射试验：取对比晶型1，对比晶型2，以及实施例1的度骨化醇新晶型A，于照度为（4500±500）lx，温度为10℃±2℃的低温光照箱中放置10天，于第5天和第10天取样，测定各项指标与0时样品进行比较，试验结果见下表。

（二）加速稳定性试验：

取对比晶型1，对比晶型2，以及实施例1的度骨化醇新晶型A在恒温恒湿箱中进行6个月的加速稳定性试验，温度25±2℃，湿度60±10%，分别于0、1、2、3、6个月取样，进行纯度和杂质检验（高效液相色谱法）以及XRPD表征，结果见下表。

由上表结果可知，度骨化醇新晶型A的稳定性强于原研晶型。特别是在高温、高湿条件下，度骨化醇新晶型A的稳定性有了较明显的提高。

实施例8氧化条件的对比试验

本发明深入考察了不同氧化条件对于由式5化合物制备式6化合物的氧化反应的影响，有效地解决了现有技术中对于烯丙位氧化的立体选择性不高的问题。

条件A：现有技术中较优的方案，二氧化硒用量是底物的1摩尔量，N-甲基吗啉-N-氧化物用量是底物的4-5倍摩尔量。

试验操作如下：将式化合物1.24g和N-甲基吗啉-N-氧化物1.16g溶解于二氯甲烷中，无水硫酸镁干燥1h，过滤，滤液回流条件下，快速加入二氧化硒0.27g的甲醇溶液15mL，回流反应1.5h，TLC显示反应完全，加入水100mL和二氯甲烷200mL萃取，合并有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，得到黄色泡沫状物。

条件B：本发明实施例1的步骤（4）所示。

将高效液相检测相关数据，汇总结果见下表。

应当说明的是，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明的范围，凡在本发明的精神和原则之内所作出的任何修改、等同的替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种度骨化醇的新晶型A，其特征在于，使用Cu-Kα辐射，其粉末X射线衍射图谱中位于2θ值为7.52、9.31、10.42、11.74、13.02、14.53、16.94、20.11、21.34、22.30处有衍射峰，其中2θ值误差范围为±0.2。

2.根据权利要求1所述的度骨化醇新晶型A，其特征在于，其DSC图谱在133.6±5.0℃有吸热峰。

3.一种制备如权利要求1或2中任一项所述的度骨化醇新晶型A的方法，其特征在于，包含如下步骤：

（b）趁热过滤，滤液降温至10-15℃，缓慢搅拌析晶5-10h；

（c）过滤析出晶体，25-30℃真空干燥，即得；

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，醇类溶剂选自异丙醇，其体积是度骨化醇重量的1.5倍，单位是mL/g；酮类溶剂选自甲基叔丁基酮，其体积是度骨化醇重量的5倍，单位是mL/g。

5.一种药用组合物，其特征在于，含有如权利要求1或2中任一项所述的度骨化醇的新晶型A和药用辅料，且该药用组合物的制剂形式选自：片剂，胶囊剂，或者注射剂中的一种。

6.如权利要求5所述的药物组合物在制备治疗骨质疏松症或继发性甲状旁腺功能亢进症的药物中的用途。

7.一种制备如权利要求3中所述的“高纯度的度骨化醇”的方法，其特征在于，具体包含如下步骤：

（8）精制步骤：将上述所得类白色固体溶解于2倍体积的异丙醇和3倍体积的丁酮组成的混合溶剂中，降温至-15至-10℃，缓慢滴加5-10倍体积的甲酸乙酯或者甲酸异丙酯溶剂，其中，所述“倍体积”是指溶剂体积/类白色固体重量的体积重量比，单位mL/g；滴加完毕后同温搅拌2h，静置析晶6h，抽滤，滤饼在25±2℃下真空干燥7-10h，得高纯度的度骨化醇，HPLC纯度大于99.0%。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，式5化合物：二氧化硒：过氧化氢异丙苯的摩尔比为1:0.4-0.5:2.5-3；4-二甲氨基吡啶重量是式5化合物重量的8-10%。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，马来酸酐重量是度骨化醇粗品重量的5-8%，所用碳酸钠溶液的质量体积浓度为7%，搅拌反应40min。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（8）中所述的甲酸酯类溶剂选自甲酸异丙酯，用量体积为类白色固体重量的6倍量，单位是mL/g。