CN112094278B - Aurovertin B衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

Aurovertin B衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种aurovertin B衍生物和aurovertin B衍生物的制备方法，以及aurovertin B衍生物在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的应用。本发明所述的aurovertin B衍生物极性得到明显提高，有利于制剂和体内生物利用度的提高；具有更好的成药性；另外，本发明所述的aurovertin B衍生物与aurovertin B相比，化合物的活性得到了提高，并降低了对正常细胞的毒性，提高其成药性。因此aurovertin B衍生物在制备治疗三阴乳腺癌的药物中有极好的应用前景，特别是三阴乳腺癌细胞为HCC1937细胞和MDA‑MB‑231细胞时药效活性极佳。

Description

Aurovertin B衍生物及其制备方法与应用
(一)技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及aurovertin B衍生物和aurovertin B衍生物的制备方法，以及aurovertin B衍生物在制备三阴乳腺癌治疗药物中的应用。
(二)背景技术
乳腺癌是女性癌症中最常见的疾病，占癌症发病人数的23％，每年死于该病的人数高达40万人。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌的一种亚型，在免疫组织化学中被定义为缺乏雌激素受体、孕激素受体以及人表皮生长因子受体2基因的表达。虽然三阴乳腺癌患者在所有乳腺癌患者中只占15％-20％，但其5年存活率显著低于其他乳腺癌亚型。TNBC是一种异质肿瘤，与其他亚型的乳腺癌相比，它具有明显的侵袭性，远处转移率更高，复发率更高，而且总生存期更短的特点。
目前，三阴乳腺癌的治疗还属于摸索阶段，没有特定的指南有关三阴乳腺癌的治疗，还没有一种明确，有效的单一药物针对三阴乳腺癌，因此其治疗一般按常规标准治疗进行。目前化疗仍然是治疗三阴乳腺癌的主要手段，化疗药物如蒽环类药物，紫杉烷，伊沙匹隆和铂类药物，以及生物制剂和抗表皮生长因子受体药物。但是预后很差，死亡率较高，而且大部分药物在服用后会出现很多毒副作用。因此，寻找和开发治针对性的三阴乳腺癌治疗的药物对于三阴乳腺癌患者具有重要意义，也具有巨大的商业价值。
本发明通过合成aurovertin B衍生物，并通过大量的活性评价发现了一类对三阴乳腺癌具有良好的抑制作用的化合物。药理研究表明本发明的化合物不仅有抗三阴乳腺癌的作用，而且对三阴乳腺癌的转移也有很好的抑制作用。另外本发明所述的aurovertin B衍生物与母体化合物aurovertin B相比具有更好的选择性和安全性，其具有抗三阴乳腺癌细胞活性，但对正常乳腺癌细胞没有明显的杀伤作用，因此具有巨大的药用前景。
(三)发明内容
为了克服现有药物在治疗三阴乳腺癌上的活性和特异性不足的缺陷，本发明提供了一种aurovertin B衍生物和aurovertin B衍生物的制备方法，以及 aurovertin B衍生物在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种如式I所示的aurovertin B衍生物，
Figure RE-GDA0002767559030000021
其中，R为C4-C6直链烷烃、烯烃、炔烃或烷基醚。
进一步，式I所示的aurovertin B衍生物为下列之一：
Figure RE-GDA0002767559030000022
Figure RE-GDA0002767559030000031
本发明还提供一种式I所示的aurovertin B衍生物的制备方法，所述的aurovertin B衍生物按下列步骤制备：
Figure RE-GDA0002767559030000032
Figure RE-GDA0002767559030000041
式1 aurovertin B衍生物的制备方法
具体如下：
(1)将苯硫基乙酸溶于乙酸中，在0℃冰浴条件下；加入H2O2水溶液，室温下搅拌反应完全，反应过程中点板检测反应进度，在0℃冰浴条件下缓慢加入发烟硝酸后，在110℃回流反应，反应结束后，将反应液在-20℃静置有白色针状晶体析出，抽滤，取固体用洗涤真空干燥后得到式II所示化合物；所述苯硫基乙酸、H2O2水溶液中的H2O2、发烟硝酸的物质的量之比为1:2.5:10.7, 每1mmol苯硫基乙酸加1.07ml的乙酸；
(2)将式II所示化合物溶于四氢呋喃中混匀，加入NaOH水溶液，并加入二醇类化合物HOROH，室温下反应完全，通常需2～5h，加入蒸馏水终止反应，所得反应混合液A经后处理得到式Ⅲ所示化合物；所述式Ⅱ化合物、NaOH 水溶液中的NaOH、二醇类化合物的物质的量之比为1:2～3:1～3；所述的R为 C4-C6直链烷基、C4-C6烯基、C4-C6炔基或C4-C6醚基；每1mmol式II所示化合物加10～20ml的四氢呋喃；蒸馏水与四氢呋喃体积比为0.5～2：1；
Figure RE-GDA0002767559030000043
(3)将式III化合物溶于无水二氯甲烷中混匀，加入丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应完全，通常3～5h，反应液B经后处理得到式Ⅳ所示化合物；所述式Ⅲ所示化合物、丁二酸酐、DMAP的物质的量之比为1:8～10:0.1～1；每1mmol式III化合物加60～100ml的二氯甲烷；
Figure RE-GDA0002767559030000051
(4)将式Ⅳ所示化合物、DMAP溶于二氯甲烷中混匀，再加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)、aurovertin B，室温下反应完全，所得反应液C经后处理得到式Ⅰ所示aurovertin B衍生物；所述式Ⅳ化合物、 DMAP、EDCI及aurovertin B的物质的量之比为1:0.1～1:2:0.5,每1mmol式Ⅳ所示化合物加20～40ml的二氯甲烷。
具体地,所述制备方法包括如下步骤：(1)将苯硫基乙酸溶于乙酸中，在0℃冰浴条件下缓慢滴加H2O2水溶液，完成投料后撤去冰浴，在室温下搅拌反应，过程中点板检测反应进度至反应完全，在0℃冰浴条件下缓慢加入发烟硝酸后，在110℃回流2h，将反应液放置在-20℃静置12h至有白色针状晶体析出，抽滤，取固体用水洗涤，真空干燥后得到式II所示化合物；所述苯硫基乙酸、 H2O2、发烟硝酸的物质的量之比为1:2.5:10.7,每1mmol苯硫基乙酸加1.07ml 的乙酸；
(2)将式II所示化合物溶于四氢呋喃中混匀，加入NaOH水溶液，并加入二醇类化合物HOROH，室温下反应2～5h，加入蒸馏水终止反应，所得反应混合液A经后处理得到式Ⅲ所示化合物；所述式Ⅱ化合物、NaOH水溶液中的 NaOH、二醇类化合物的物质的量之比为1:2～3:1～3；所述的R为C4-C6直链烷基、C4-C6烯基、C4-C6炔基或C4-C6醚基；每1mmol式II所示化合物加10～20ml 的四氢呋喃；蒸馏水与四氢呋喃体积比为0.5～2：1；
Figure RE-GDA0002767559030000062
(3)将式III化合物溶于无水二氯甲烷中混匀，加入丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，室温反应3～5h，反应液B经后处理得到式Ⅳ所示化合物；所述式Ⅲ所示化合物、丁二酸酐、DMAP的物质的量之比为1:8～10:0.1～1；每1mmol 式III化合物加60～100ml的二氯甲烷；
Figure RE-GDA0002767559030000063
(4)将式Ⅳ所示化合物、DMAP溶于二氯甲烷中混匀，加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)、aurovertin B，室温下反应48～96h，所得反应液C经后处理得到式Ⅰ所示aurovertin B衍生物；所述式Ⅳ化合物、 DMAP、EDCI及aurovertin B的物质的量之比为1:0.1～1:2:0.5,每1mmol式Ⅳ所示化合物加20～40ml的二氯甲烷。
优选地，所述H2O2水溶液的质量分数为30％。
进一步，步骤(2)中所述的后处理方法为：反应终止后，用乙酸乙酯萃取，合并有机层旋干，进行硅胶柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，收集含目标产物的洗脱液A，减压蒸馏除去溶剂得到式Ⅲ所示化合物。
进一步，步骤(3)中所述的后处理方法为：向所述的反应液B加入反应液 B一半体积的蒸馏水洗涤，洗涤液分液后合并有机层旋干，进行硅胶柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，收集含目标产物的洗脱液B，减压蒸馏除去溶剂得到式Ⅳ所示化合物。
进一步，步骤(4)中所述的后处理方法为：向所述的反应液C中加入1～2 倍反应液C体积的蒸馏水终止反应，用二氯甲烷萃取3次，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3～2:1，收集含目标产物的洗脱液C，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物即得如式I所示的aurovertin B衍生物。
优选地，所述的含目标产物的洗脱液A、含目标产物的洗脱液B或含目标产物的洗脱液C均为除原料外在254nm下显强紫外吸收斑点的洗脱液。采用薄层硅胶进行检测，收集在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，但是由于收集洗脱液中可能存在未反应完全的aurovertin B，因此要通过TLC检测弃去在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点与aurovertin B呈相同斑点位置的洗脱液。
本发明还提供一种所述的aurovertin B衍生物在制备预防或治疗三阴乳腺癌的药物中的应用。
所述的aurovertin B衍生物在三阴乳腺癌细胞为HCC1937细胞或 MDA-MB-231细胞有显著的活性作用，可以作为制备治疗HCC1937细胞或 MDA-MB-231细胞引起的癌症药物的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明所述的aurovertin B衍生物对三阴乳腺癌有很强的抑制作用，其活性强于临床用药紫杉醇。本发明所述的aurovertin B衍生物与aurovertin B相比，通过薄层和液相分析发现，本发明涉及的化合物的极性得到明显提高，有利于制剂和体内生物利用度的提高； aurovertin B无明显的剂量依赖，而经过修饰后的衍生物在给药范围内均表现出明显的剂量依赖，具有更好的成药性；另外，本发明所述的aurovertin B衍生物与aurovertin B相比，化合物的活性得到了提高，并降低了对正常细胞的毒性，提高其成药性。因此aurovertin B衍生物在制备治疗三阴乳腺癌的药物中有极好的应用前景，特别是三阴乳腺癌细胞为HCC1937细胞和MDA-MB-231细胞时药效活性极佳。
(四)附图说明
图1为空白对照和添加不同浓度的AUB-4后MDA-MB-231细胞的侵袭行为图
(五)具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实例，对本发明进一步详细的说明。应当理解，此处所述的具体实施例用以说明本发明，并不用于限定本发明的范围。
实施例1：式Ⅱ所述化合物的合成
称取苯硫基乙酸4.75g(0.028mol)于圆底烧瓶中，加入30ml乙酸，在搅拌器上搅拌至完全溶解，在0℃冰浴条件下缓慢滴加30％H2O2 7ml(0.069 mol)，完成投料后撤去冰浴，室温下搅拌反应3h，过程中点板检测反应进度。至原料反应完全，同样在0℃冰浴条件下缓慢加入发烟硝酸12.5ml(0.300 mol)，110℃回流2h，反应结束后将圆底烧瓶放置在-20℃冰箱静置12h，即有白色针状晶体析出，过滤，将过滤后得到的固体用少量水洗涤三遍，真空干燥后得到目标产物，共2.29g，产率按苯硫基乙酸投量计算为44.3％。
实施例2：aurovertin B衍生物AUB-1的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000081
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入1,4-丁二醇(0.63mmol)，室温下反应3h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIIa(50.2 mg)，分离产率按式Ⅱ投料量计算为41.3％。
称取IIIa(31.4mg，0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(事先以分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100 mg,1.0mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应3h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVa(38.0mg)，分离产率按式IIIa投料量计算为91.7％。
称取IVa(8.3mg,0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01mmol)，加入2mLCH2Cl2(事先以分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应48h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入4mL蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300 目)柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂到目标产物AUB-1(6.4mg)，分离产率按aurovertin B投料量计算74.2％。
AUB-1(C41H48N2O16S):ESI-HRMS m/z:879.2629[M+Na]+；1H NMR(CDCl3, 600MHz):δ1.08(3H,t,J＝7.5Hz),1.12(3H,s),1.17(3H,s),1.70(2H,m),1.78 (2H,t,J＝6.6Hz),1.91(2H,t,J＝8.5Hz),1.93(3H,s),2.13(3H,s),2.59-2.71(4H, m),3.80(3H,s),3.91(1H,dd,J＝4.6,8.6Hz),4.14(2H,m),4.35(1H,t,J＝7.9Hz), 4.41(t,J＝6.3Hz,2H),4.79(1H,d,J＝8.8Hz),4.87(1H,s),5.46(1H,s),5.73(1H, dd,J＝7.0,15.1Hz),6.32-6.44(4H,m),7.13(1H,dd,J＝11.0,14.9Hz),7.60(2H,t, J＝8.0Hz),7.74(1H,t,J＝7.5Hz),8.03(2H,d,J＝7.4Hz).13C NMR(CDCl3,150 MHz):δ9.1,12.1,15.3,16.5,20.2,21.0,25.2,25.4,29.2,29.9,56.4,64.2,71.2,74.8, 75.9,80.8,82.8,83.2,85.7,89.1,108.4,110.7,120.1,128.8(2×C),129.9(2×C), 132.7,132.7,132.9,135.6,135.8,136.9,138.3,154.4,159.1,163.7,169.8,170.7, 171.4,172.2.
实施例3：aurovertin B衍生物AUB-2的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000101
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入1,5-戊二醇(0.63mmol)，室温下反应3h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIIb(41.4mg)，分离产率按式Ⅱ投料量计算为32.4％。
称取IIIb(32.8mg，0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100mg,1.0 mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应3h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVb(37.6mg)，产率按式IIIb投料量计算为88.0％。
称取IVb(8.6mg，0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01 mmol)，加入2mLCH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应48h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入少量蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300 目)柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物AUB-2(5.7mg)，产率按aurovertin B投料量计算为65.3％。
AUB-2(C42H50N2O16S):ESI-HRMS m/z:893.2756[M+Na]+1H NMR(CDCl3, 600MHz):δ1.08(3H,t,J＝7.5Hz),1.11(3H,s),1.17(3H,s),1.50(2H,m),1.71 (4H,m),1.87(2H,m),1.93(3H,s),2.13(3H,s),2.63(4H,m),3.80(3H,s),3.91(1H, dd,J＝4.6,8.7Hz),4.09(2H,t,J＝5.6Hz),4.35(1H,t,J＝7.8Hz),4.39(2H,t,J＝ 6.4Hz),4.79(1H,d,J＝8.8Hz),4.87(1H,s),5.46(1H,s),5.73(1H,dd,J＝7.0, 15.1Hz),6.32-6.42(4H,m),7.12(1H,dd,J＝11.0,14.9Hz),7.60(2H,t,J＝7.9 Hz),7.74(1H,t,J＝7.4Hz),8.02(2H,d,J＝7.6Hz).13C NMR(CDCl3,150MHz): δ9.1,12.0,15.3,16.5,20.2,21.0,22.3,28.2,28.3,29.2,29.9,56.4,64.6,71.5,74.8, 75.9,80.8,82.8,83.2,85.7,89.1,108.4,110.7,120.0,128.7(2×C),129.9(2×C), 132.7,132.7,132.8,135.6,135.8,137.0,138.3,154.4,159.2,163.8,169.8,170.7, 171.5,172.3.
实施例4：aurovertin B衍生物AUB-3的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000121
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入1,6-己二醇(0.63mmol)，室温下反应4h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIIc(23.7 mg)，产率按式II投料量计算为17.8％。
称取IIIc(34.2mg，0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100mg,1.0 mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应3h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVc(39.6mg)，产率按式IIIc投料量计算为89.5％。
称取IVc(8.8mg，0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01 mmol)，加入2mLCH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应72h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入少量蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300 目)柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物AUB-3(7.2mg)，产率按aurovertin B投料量计算为81.2％。
AUB-3(C43H52N2O16S):ESI-HRMS m/z:907.2900([M+Na]+)；1H NMR (CDCl3,600MHz):δ1.07(3H,t,J＝7.6Hz),1.08(3H,s),1.15(3H,s),1.41(4H. m),1.62(2H,m),1.71(2H,m),1.79(2H,m),1.96(3H,s),2.12(3H,s),2.60(4H,m), 3.86(3H,s),3.91(1H,dd,J＝3.9,9.4Hz),4.06(2H,t,J＝6.7Hz),4.34(1H,t,J＝ 8.0Hz),4.37(2H,t,J＝6.3Hz),4.76(1H,d,J＝8.7Hz),4.84(1H,s),5.58(1H,s), 5.76(1H,dd,J＝7.0,14.9Hz),6.38-6.56(4H,m),7.07(1H,dd,J＝10.1,14.9Hz), 7.67(2H,t,J＝8.3Hz),7.81(1H,t,J＝7.5Hz),8.01(2H,d,J＝7.3Hz).13C NMR (CDCl3,150MHz):δ9.1,12.0,15.3,16.5,20.2,21.0,25.5,25.7,28.5,28.7,29.2, 29.9,56.4,64.8,71.7,74.8,75.9,80.8,82.8,83.4,85.7,89.1,108.4,110.7,120.0, 128.8(2×C),129.9(2×C),132.7,132.7,132.8,135.7,135.8,136.9,138.4,154.4, 159.2,163.7,169.8,170.7,171.5,172.3.
实施例5：aurovertin B衍生物AUB-4的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000131
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入1,4-丁烯二醇(0.63mmol)，室温下反应3h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIId (63.3mg)，产率按式II投料量计算为52.1％。
称取IIId(31.2mg，0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100mg,1.0 mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应4h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVd(36.6mg)，产率按式IIId投料量计算为89.2％。
称取IVd(8.2mg，0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01 mmol)，加入2mLCH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应48h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入少量蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300 目)柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物AUB-4(8.8mg)，产率按aurovertin B投料量计算为92.3％。
AUB-4(C41H46N2O16S):ESI-HRMS m/z:877.2460[M+Na]+；1H NMR (CDCl3,600MHz):δ1.08(3H,t,J＝7.5Hz),1.10(3H,s),1.17(3H,s),1.61-1.73 (2H,m),1.93(3H,s),2.12(3H,s),2.59-2.70(4H,m),3.80(3H,s),3.90(1H,dd,J＝ 4.6,8.6Hz),4.34(1H,t,J＝7.7Hz),4.70(2H,t,J＝4.2Hz),4.79(1H,d,J＝8.8 Hz),4.86(1H,s),5.01(2H,d,J＝5.2Hz),5.45(1H,s),5.72(1H,dd,J＝7.0,15.1 Hz),5.85(2H,m),6.31-6.43(4H,m),7.12(1H,dd,J＝11.0,15.0Hz),7.59(2H,t,J ＝8.2Hz),7.72(1H,t,J＝7.5Hz),8.03(2H,d,J＝7.4Hz).13C NMR(CDCl3,150 MHz):δ9.1,12.0,15.3,16.5,20.2,20.9,29.2,29.9,56.4,60.5,66.8,74.8,76.0,80.9, 82.8,83.3,85.7,89.2,108.4,110.8,120.1,126.1,128.8(2×C),129.9(2×C),130.4, 132.7(2×C),132.9,135.6,135.9,136.9,138.3,154.4,158.7,163.7,169.8,170.7, 171.3,171.8.
实施例6：aurovertin B衍生物AUB-5的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000151
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入1,4-丁炔二醇(0.63mmol)，室温下反应5h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIIe(12.3 mg)，产率按式II投料量计算为11.5％。
称取IIIe(31.0mg,0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100mg,1.0 mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应4h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVe(24.1mg)，产率按式IIIe投料量计算为58.5％。
称取3e(8.2mg,0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01mmol)，加入2mLCH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应48h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入少量蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300目) 柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物AUB-5(4.9mg)，产率按aurovertin B投料量计算为57.4％。
AUB-5(C41H44N2O16S):ESI-HRMS m/z:875.2291[M+Na]+；1H NMR(CDCl3, 600MHz):δ1.09(3H,t,J＝7.5Hz),1.12(3H,s),1.17(3H,s),1.67(2H,m),1.94 (3H,s),2.13(3H,s),2.58-2.66(4H,m),3.80(3H,s),3.91(1H,dd,J＝4.6,8.6Hz), 4.07(2H,m),4.35(1H,t,J＝7.8Hz),4.38(2H,t,J＝6.5Hz),4.79(1H,d,J＝8.8 Hz),4.87(1H,s),5.47(1H,s),5.73(1H,dd,J＝6.9,15.0Hz),6.33-6.41(4H,m), 7.13(1H,dd,J＝11.0,14.9Hz),7.60(2H,t,J＝8.2Hz),7.74(1H,t,J＝7.5Hz), 8.03(2H,d,J＝7.3Hz).13C NMR(CD3OD,150MHz):δ9.1,12.1,15.7,16.7,20.7, 21.1,29.5,29.8,57.5,65.9,72.7,76.2,77.1,78.9,82.0,84.2,84.4,84.9,86.9,89.5, 110.3,111.9,121.3,129.7(2×C),131.1(2×C),133.8,133.9,134.4,136.9,137.1, 138.4,139.7,155.8,160.6,166.4,171.5,173.1,173.1,174.1.
实施例7：aurovertin B衍生物AUB-6的合成(合成路线如式1所示)
Figure RE-GDA0002767559030000161
称取式Ⅱ所述化合物(144mg,0.39mmol)于圆底烧瓶中，加入4mL THF，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入0.4mL NaOH水溶液(36.8 mg,0.92mmol)，并加入二乙二醇(0.63mmol)，室温下反应3h，过程中TLC 监测反应进程，待原料完全转化，加入4mL蒸馏水结束反应，反应液用乙酸乙酯5mL萃取三遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3.5:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm 紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IIIf(63.1 mg)，产率按式II投料量计算为49.0％。
称取IIIf(33.0mg,0.1mmol)于圆底烧瓶中，加入8mL CH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使其溶解后，加入丁二酸酐(100mg,1.0 mmol)、DMAP(12mg,0.1mmol),室温反应4h，TLC监测反应进程，有极性增大产物生成，反应结束加入4mL蒸馏水将剩余丁二酸酐洗出，分液后富集有机层旋干，进行硅胶柱层析分离(200目-300目)，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物IVf(28.5mg)，产率按式IIIf投料量计算为66.3％。
称取3f(8.6mg,0.02mmol)于圆底烧瓶中，加入DMAP(1.4mg,0.01mmol)，加入2mLCH2Cl2(分子筛干燥)，选择适中搅拌磁子，在搅拌器上搅拌使之溶解，再加入EDCI(4.2mg,0.02mmol)，aurovertin B(4.6mg,0.01mmol)，室温下反应48h，TLC监测反应进程，待原料反应完全，加入少量蒸馏水终止反应，用二氯甲烷5mL萃取3遍，分液后取有机层旋干，进行硅胶(200目-300目) 柱层析分离，洗脱剂为石油醚：丙酮＝3:1，采用薄层硅胶进行检测，收集除原料外在254nm紫外灯下显强紫外吸收斑点的洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到目标产物AUB-6(5.6mg)，产率按aurovertin B投料量计算为64.6％。
AUB-6(C41H48N2O16S):ESI-HRMS m/z:873.2730[M+H]+；1H NMR(CDCl3, 600MHz):δ1.08(3H,t,J＝7.5Hz),1.11(3H,s),1.17(3H,s),1.71(2H,m),1.94 (3H,s),2.13(3H,s),2.58-2.66(4H,m),3.75(2H,t,J＝4.8Hz),3.80(3H,s),3.88 (2H,t,J＝4.6Hz),3.91(1H,dd,J＝4.50,8.7Hz),4.25(2H,t,J＝4.6Hz),4.35(1H, t,J＝7.7Hz),4.53(2H,t,J＝4.4Hz),4.79(1H,d,J＝8.8Hz),4.87(1H,s),5.47 (1H,s),5.73(1H,dd,J＝7.0,15.0Hz),6.31-6.41(4H,m),7.12(1H,dd,J＝11.0, 14.9Hz),7.60(2H,t,J＝7.9Hz),7.73(1H,t,J＝7.5Hz),8.04(2H,d,J＝7.5Hz). 13C NMR(CDCl3,150MHz):δ9.1,12.0,15.3,16.5,20.2,21.0,29.1,29.9,56.4, 63.9,68.6,69.6,70.7,74.8,75.9,80.8,82.8,83.2,85.7,89.1,108.4,110.7,120.0, 128.8(2×C),129.9(2×C),132.7(2×C),132.8,135.7,135.9,137.0,138.3,154.4, 159.1,162.1,169.8,170.7,171.4,172.2.
实施例8：AUB-1-AUB-6对细胞增殖的影响
测各化合物作用于MCF-7，HCT-116，HCC1937，MDA-MB-231细胞株的 IC50如表1所示，AUB-1-AUB-6能显著抑制三阴乳腺癌(HCC1937和 MDA-MB-231)的增殖，大多化合物活性强于母体化合物。对HCC1937细胞，除了AUB-6，其余化合物的活性均显著强于aurovertinB。对MDA-MB-231细胞，化合物AUB-1-AUB-4的细胞毒活性相较于aurovertin B都有不同程度的提高。AUB-1-AUB-6还表现出很高的特异性，对其他品系的肿瘤细胞(HCT-116) 和非三阴系乳腺癌细胞(MCF-7)的抑制作用较弱。AUB-1-AUB-6还表现出很高的特异性还具有很好的安全性，对正常的乳腺细胞(MCF-10A)基本没有细胞毒性，其选择性也优于aurovertinB。另外，如表2所示aurovertin B在给药浓度范围内对HCC1937和MDA-MB-231瘤株无明显的剂量依赖关系梯度抑制，而 aurovertin B衍生物具有良好的剂量关系，并表现出更大的治疗窗口，说明经过修饰后的衍生物具有更好的成药性。
表1：各化合物对不同瘤株的IC50(μM)
Figure RE-GDA0002767559030000181
Figure RE-GDA0002767559030000191
表2：化合物对MDA-MB-231细胞的量效关系
Figure RE-GDA0002767559030000192
表中数据为不同浓度AUB-1、AUB-4和aurovertin B对MDA-MB-231细胞的抑制率，单位：％。
实施例9：AUB-4对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响
在24孔板中每孔加入1ml含有10％血清的细胞悬液(4×105cells/孔)，在37℃培养箱中孵育，直至细胞长满。用20μl的枪头在孔中间进行划痕，用PBS清洗三次，加入含药的0.5％血清培养液。培养24h后进行观察。
如图1所示可知AUB-4在0.05μM、0.25μM浓度下的细胞迁移明显减少，与对照组区别较明显，且给药组根据其浓度显示出较好的剂量依赖，浓度高抑制迁移明显，说明AUB-4可以抑制三阴乳腺癌的转移。本发明涉及的化合物对三阴乳腺癌具有很强的抑制，同时具有很好的抗转移作用，具有很高的应用价值。

Claims (3)

1.一种如式I所示的aurovertin B衍生物，
Figure FDA0003076239010000011
其特征在于所述的式I所示的aurovertin B衍生物为下列化合物之一：
Figure FDA0003076239010000012
Figure FDA0003076239010000021
2.如权利要求1所述的aurovertin B衍生物在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的应用；所述三阴乳腺癌细胞为HCC1937细胞。
3.如权利要求1所述的化合物AUB-1～AUB-4在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的应用，其特征在于：所述三阴乳腺癌细胞为MDA-MB-231细胞。
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