CN103254212A - 番荔枝内酯衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及番荔枝内酯衍生物及其制备方法和抗肿瘤的用途，特征是其结构由通式(1)表示，其中R1，R2和R3中的一个或两个基团或R4，R2和R3中的一个或两个基团分别为羟基，其余基团为生物素酰氧基，或6-生物素酰氨基己酰氧基，或4-氧-4-(6-生物素酰氨基己胺)丁酰氧基，并且当R1为上述基团时，R4为H，当R4为上述基团时，R1为H，共涉及20个化合物。该衍生物是通过酯化或酰化反应将番荔枝内酯Bullatacin或Squamocin与生物素直接偶联，或先将生物素和不同的Linker连接获得长臂生物素，然后与Bullatacin、Squamocin分别偶联，最后用硅胶柱层析、高效液相色谱层析分离纯化而获得，其抗肿瘤活性比其母体化合物Bullatacin或Squamocin更强。
Description
技术领域
本发明涉及番荔枝内酯衍生物和该衍生物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
在全球各种疾病死亡统计中，癌症仅次于心血管疾病列第二位，约占总死亡人口的13％。在我国10大死因统计中，恶性肿瘤死亡人数在城市列第一位，在农村列第四位。WHO最近发布的数据显示，我国已经成为世界第二大癌症高发国，每年新增220万名癌症患者，约占全球癌症病人总数的20％。因此，癌症是当前危害人类健康的重大疾病。
传统的肿瘤化疗药物对肿瘤细胞无明显特异性，在杀灭肿瘤细胞的同时往往对正常细胞产生毒害，有严重的毒副作用。定向作用于肿瘤细胞而不进入正常、健康细胞的靶向抗肿瘤药物研究已成为当前临床应用和研发的主流，有十余种直接作用于肿瘤生长相关特异性蛋白的小分子靶向药物已被FDA批准上市，还有100余个正处在临床试验中。另外，以肿瘤生长必需的营养素为靶向输送工具的营养素-药物偶联物在靶向抗肿瘤药物研发上也愈来愈受到重视。研究表明，癌细胞因其快速生长的特点而需要大量的营养素，比如生物素(biotin)、叶酸(folic acid)、不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid)等。这些营养素进入细胞需要膜受体介导，因此这些受体在癌细胞表面有比正常细胞较高的表达水平。具有抗癌活性的化合物可以通过化学方法与生物素、叶酸或不饱和脂肪酸等分子偶联，产生新的药物或药物前体，定向输送到癌细胞中而对正常细胞的影响则大大降低。这种将本不具有靶向作用的抗肿瘤药物通过与营养素偶联改造成具有靶向输送的药物亦是当前靶向抗癌药物的研究重点。目前，国际上已设计、合成了多个抗肿瘤药物与生物素或叶酸偶联物，如喜树碱-生物素、Taxol-生物素、丝裂霉素-叶酸、去乙酰长春花碱-叶酸、喜树碱-叶酸、5-FU-叶酸等，大多数偶联物的靶向抗肿瘤作用已被证明。虽然至今尚无一个这类靶向抗肿瘤药物用于临床，但现有研究已证明了其良好发展潜力。
番荔枝内酯成分是番荔枝科植物特有的一类天然化合物。这类化合物不仅抗肿瘤活性强，其中Bullatacin和Squamocin的体外抗肿瘤活性分别是Taxol的300和80倍，而且作用机理新颖、对MDR肿瘤有效，曾被认为是“明日抗癌之星”。但由于这类化合物对肿瘤细胞的选择性较差、毒性较高、安全系数较低，国际上针对该类化合物的新药研究与开发一直未能取得实质性进展，至今无一个这类化合物进入临床试验。因此将番荔枝内酯化合物与营养素偶联使其具有靶向传输性，能够获得更具实用性的新番荔枝内酯衍生物。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种新的番荔枝内酯衍生物，另一目的是开发出这种番荔枝内酯衍生物的制备方法，又一目的是开发出这种番荔枝内酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
我们通过酯化或酰化反应将邻双四氢呋喃环型番荔枝内酯化合物Bullatacin或Squamocin与生物素直接偶联，或先将生物素和不同的Linker连接获得具有Linker的长臂生物素，然后将长臂生物素与Bullatacin、Squamocin分别偶联，得到不同的偶联物，最后用硅胶柱层析、高效液相色谱层析等方法分离纯化，得到新的番荔枝内酯衍生物，这些衍生物对癌细胞的生长具有抑制作用，从而实现了本发明的目的。
本发明的番荔枝内酯衍生物，特征是其结构由通式(1)表示：
式(1)
其中
化合物1：R1＝H，R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物2：R1＝H，R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R4＝OH；
或化合物3：R1＝H，R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH；
或化合物4：R1＝H，R2＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝OH；
或化合物5：R1＝H，R3＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝OH；
或化合物6：R1＝H，R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物7：R1＝H，R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R4＝OH；
或化合物8：R1＝H，R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH；
或化合物9：R1＝H，R2＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R4＝OH；
或化合物10：R1＝H，R2＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH；
或化合物11：R1＝H，R3＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH；
或化合物12：R1＝H，R2＝式(4)表示的4-氧-4-(6-生物素酰氨基己胺)丁酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物13：R1＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物14：R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物15：R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H；
或化合物16：R1＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物17：R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物18：R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H；
或化合物19：R1＝R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH，R4＝H；
或化合物20：R1＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH，R4＝H；
本发明的番荔枝内酯衍生物的第一种制备方法，其特征是包括以下的步骤：
将番荔枝内酯Squamocin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4、95∶5洗脱部分得到流份1，合并氯仿-甲醇体积比93∶7、90∶10洗脱部分得到流份2，将流份1用高效液相色谱仪分离纯化，按保留时间依次得到流份3和化合物3；将流份3再用高效液相色谱分离纯化，按保留时间依次得到化合物1、化合物2；将流份2静置，析出的沉淀为化合物5，流份2滤去沉淀的母液用高效液相色谱纯化得到化合物4。
本发明的番荔枝内酯衍生物的第二种制备方法，其特征是包括以下的步骤：
将番荔枝内酯Bullatacin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4洗脱部分得流份1，用高效液相色谱分离，按保留时间依次得到化合物15和流份2，流份2再用硅胶柱层析，用体积比4∶1的石油醚-异丙醇混合溶剂作为洗脱剂，将薄层层析板上石油醚-异丙醇体积比2∶1展开时比移值为0.35的流份合并得到化合物13，比移值为0.47的流份合并得到化合物14。
本发明的番荔枝内酯衍生物的第三种制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Squamocin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并90∶10洗脱部分得到流份2，流份1和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份1依次得到化合物6、化合物7和化合物8；流份2依次得到化合物9、化合物10和化合物11。
本发明的番荔枝内酯衍生物的第四种制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Bullatacin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、92∶8的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并92∶8洗脱部分得到流份2，流份1和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份1依次得到化合物16、化合物17和化合物18；流份2依次得到化合物19和化合物20。
本发明的番荔枝内酯衍生物的第五种制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素与己二胺进行酰化反应得到6-生物素酰氨基己胺；将番荔枝内酯Squamocin和丁二酸酐进行酯化反应得到粗产物，粗产物用硅胶柱层析得到Squamocin 28-丁二酸酯；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰氨基己胺与Squamocin 28-丁二酸酯进行酰化反应得到粗产物，粗产物先用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5、93∶7洗脱部分，再用高效液相色谱分离，得到化合物12。
上述制备方法中的酯化反应和酰化反应是本领域通用的反应方法。
通过试验表明，本发明的式(1)表示的番荔枝内酯衍生物能显著抑制生物素受体高表达肿瘤细胞株L1210FR、4T1、P815的体外生长，且其活性比其母体化合物Bullatacin或Squamocin更强。本发明的番荔枝内酯衍生物和其药学组合可以制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂、乳剂、栓剂、贴剂、滴剂的形式，通过口服、静脉、肌肉、皮肤、粘膜给药用于预防和治疗恶性肿瘤。
本发明的番荔枝内酯衍生物可以用于制备抗肿瘤药物。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实验中所用溶剂氯仿、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、盐酸为广州试剂二厂和天津富宇试剂公司生产，均为分析纯。Bullatacin和Squamocin由中国科学院华南植物园植物化学资源生物学研究组制备(见参考文献1：云南植物研究，1999，21(3)：381-385；2：Chem Pharm Bull，1988，36：4802-4806)。生物素、6-氨基己酸购自上海源叶生物科技有限公司，氢氧化钾、4-二甲氨基吡啶、N，N′-二环己基碳二亚胺、丁二酸酐、N-羟基琥珀酰亚胺、1，6-己二胺购自天津大茂化学试剂厂，叶酸由上海伯奥盛科技有限公司生产，4A型分子筛和氯化亚砜由上海沪试化工有限公司生产，无水硫酸钠、柠檬酸由广州化学试剂厂生产，对甲苯磺酸由上海市化学工业学校实验工厂生产。柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产(200～300目)。薄层硅胶层析板为烟台黄务硅胶开发试验厂生产。旋转蒸发仪为EYELA N-1001，EYELAA-1000S型循环水真空泵，EYELA CA-1111型低温冷却液循环泵，Tokyo Rikakai Co.Ltd生产。电热恒温水浴锅为上海精宏实验设备有限公司生产。制备HPLC：泵为Shimadzu LC-6A、检测器Shimadzu RID-10A refractive index detector、柱子XTerra prep MS C18 column(10μm，19mm×300mm)，
HR C18 column(7.8mm×300mm，6μm)。ESI-MS仪器为MDS SCIEX APCI 2000 LC-MS-MS，直接进样测定。NMR谱用Bruker AVANCE 600型超导核磁共振仪测定，以氘代溶剂作标定。各种氘代试剂为美国剑桥公司(CIL)生产。
实施例1：
将番荔枝内酯Squamocin、生物素、4-二甲氨基吡啶、N，N′-二环己基碳二亚胺和对甲苯璜酸按摩尔比1∶1.2∶0.5∶2∶0.5加到圆底烧瓶中，通入氮气保护，然后吸取适量无水二氯甲烷和无水二甲基甲酰胺溶解，室温下搅拌过夜，用薄层色谱层析以体积比95∶5的氯仿-甲醇展开剂检测，在薄层层析板上检测不到反应物Squamocin的存在来判断反应完成。反应完成后，在30～40℃减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，然后依次用0.5％盐酸和饱和氯化钠萃取，萃取后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥并过滤，滤液浓缩得到Squamocin-生物素偶联物的粗产物1.9g。
将粗产物上200～300目硅胶柱，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，用薄层色谱层析(TLC)检测合并相似的流份。合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4、95∶5洗脱部分得到流份1，合并氯仿-甲醇体积比93∶7、90∶10洗脱部分得到流份2。将流份1用日本Shimadzu公司生产，LC-6AD型半制备高效液相色谱仪分离纯化，用RID-10A检测器检测，以体积分数83％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到流份3(保留时间Rt＝52min)和34mg黄色油状物(Rt＝61min)，经结构鉴定为化合物3，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH。
化合物3的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.00(1H，s，H-35)，5.99(1H，s，H-8′)，5.60(1H，s，H-10′)，5.00(1H，m，H-36)，4.88(1H，m，H-28)，4.51(1H，s，H-11′)，4.32(1H，s，H-7′)，3.91(2H，m，H-19，20)，3.82(3H，m，H-16，23，24)，3.39(1H，m，H-15)，3.16(1H，m，H-6′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-12′a)，2.75(1H，d，J＝12.8Hz，H-12′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.5(C-1′)，163.7(C-9′)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，83.2(C-16)，82.8(C-19)，82.4(C-20)，82.1(C-23)，77.4(C-36)，74.1(C-15，28)，71.3(C-24)，61.9(C-7′)，60.1(C-11′)，55.0(C-6′)，40.5(C-12′)，34.2(C-27，29)，33.2，32.3，31.7，29.7，29.5-29.6，29.4，29.2，29.1，28.9，28.4，28.3，28.1，27.3，25.6，25.1，24.8，24.7，22.5，22.0(C-3-14，17，18，21，22，25，26，30-33，2′-5′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
将流份3用高效液相色谱(仪器同上)进行纯化，以体积分数70％的乙腈为流动相(流速为5mL/min)，得到25mg浅黄色蜡状固体(Rt＝95min)，经结构鉴定为化合物1，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝R4＝OH，和43mg浅黄色蜡状固体(Rt＝104min)，经结构鉴定为化合物2，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R4＝OH。
化合物1的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：6.99(1H，s，H-35)，6.36(1H，s，H-8′)，5.53(1H，s，H-10′)，5.00(1H，m，H-36)，4.83(1H，m，H-15)，4.50(1H，s，H-11′)，4.32(1H，s，H-7′)，3.89-3.95(3H，m，H-16，20，23)，3.85(1H，m，H-24)，3.79(1H，m，H-19)，3.59(1H，m，H-28)，3.19(1H，m，H-6′)，2.92(1H，m，H-12′a)，2.74(1H，d，J＝12.6Hz，H-12′b)，1.41(3H，m，H-37)，0.88(3H，m，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.8(C-1)，173.4(C-1′)，164.0(C-9′)，148.8(C-35)，134.2(C-2)，83.0(C-23)，82.1(C-20)，81.4(C-19)，80.3(C-16)，77.3(C-36)，74.4(C-15)，71.6(C-28)，71.3(C-24)，61.1(C-7′)，60.1(C-11′)，54.8(C-6′)，40.5(C-12′)，37.3(C-29)，37.2(C-27)，34.8，32.7，31.8，30.7，29.4-29.5，29.3，29.2，29.1，28.1，28.0，27.4，27.3，27.0，25.6，25.3，25.1，24.3，22.5，22.1(C-3-14，17，18，21，22，25，26，30-33，2′-5′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
化合物2的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.00(1H，s，H-35)，6.12(1H，s，H-8′)，5.56(1H，s，H-10′)，5.00(1H，m，H-36)，4.93(1H，m，H-24)，4.51(1H，s，H-11′)，4.31(1H，m，H-7′)，4.02(1H，dd，J＝13.4，6.4Hz，H-23)，3.80-3.88(3H，m，H-16，19，20)，3.56(1H，m，H-28)，3.38(1H，m，H-15)，3.16(1H，m，H-6′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-12′a)，2.75(1H，d，J＝12.8Hz，H-12′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝7.0Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.8(C-1)，173.4(C-1′)，163.7(C-9′)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，83.4(C-16)，82.2(C-20)，81.7(C-19)，80.6(C-23)，77.4(C-36)，74.9(C-24)，74.0(C-15)，71.4(C-28)，62.0(C-7′)，60.1(C-11′)，55.3(C-6′)，40.5(C-12′)，37.5(C-29)，37.0(C-27)，34.1，33.3，31.8，31.2，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3，29.2，29.1，28.8，28.4，28.3，28.2，28.0，27.8，27.3，25.6，25.1，24.6，22.6，21.4(C-3-14，17，18，21，22，25，26，30-33，2′-5′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
将流份2静置，析出沉淀通过过滤得到21mg白色粉末状固体，经结构鉴定为化合物5，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R3＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝OH。
化合物5的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1098[M+Na]+，负离子ESIMS：1111[M+Cl]，1075[M-H]。1H NMR(600MHz，CDCl3)：6.99(1H，m，H-35)，6.53，6.18，5.94，5.61(1H，1H，1H，1H，s，s，s，s，H-8′，10′，8″，10″)，5.00(1H，m，H-36)，4.93(1H，m，H-24)，4.84(1H，m，H-28)，4.50(2H，s，H-11′，11″)，4.32(2H，m，H-7′，7″)，4.01(1H，dd，J＝12.6，6.3Hz，H-23)，3.86(2H，m，H-19，20)，3.82(1H，m，H-16)，3.38(1H，m，H-15)，3.16(2H，m，H-6′，6″)，2.90(2H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-12′a，12″a)，2.74(2H，dd，J＝12.7，5.4Hz，H-12′b，12″b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.6(C-1″)，173.5(C-1′)，164.0(C-9′，9″)，148.9(C-35)，134.3(C-2)，83.3(C-16)，82.3(C-20)，81.7(C-19)，80.5(C-23)，77.4(C-36)，74.8(C-24)，74.0(C-15，28)，62.0(C-7″)，61.9(C-7′)，60.2(C-11′)，60.1(C-11″)，55.4(C-6′)，55.3(C-6″)，40.6(C-12′，12″)，)，34.2(C-27，29)，34.1，34.0，33.4，31.7，30.8，29.7，29.6，29.5，29.3，29.2，28.3-28.4，28.0，27.5，27.4，25.6，25.3，25.2，25.0，24.8，22.6，21.4(C-3-14，17，18，21，22，25，26，30-33，2′-5′，2″-5″)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
将流份2滤去沉淀的母液用高效液相色谱(仪器同上)纯化，以体积分数85％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到50mg白色粉末状固体(Rt＝51min)，经结构鉴定为化合物4，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝OH。
化合物4的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1113[M+K]+，1098[M+Na]+，负离子ESIMS：1110[M+Cl]-，1074[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.00(1H，m，H-35)，6.62，6.47，6.14，5.77(1H，1H，1H，1H，s，s，s，s，H-8′，10′，8″，10″)，5.00(1H，m，H-36)，4.88(1H，m，H-28)，4.83(1H，dd，J＝13.5，6.7Hz，H-15)，4.50(2H，m，H-11′，11″)，4.32(2H，m，H-7′，7″)，3.95(1H，m，H-16)，3.90(2H，m，H-20，23)，3.79(2H，m，H-19，24)，3.16(2H，m，H-6′，6″)，2.90(2H，dd，J＝12.7，4.9Hz，H-12′a，12″a)，2.74(2H，dd，J＝12.6，7.8Hz，H-12′b，12″b)，1.41(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.87(3H，m，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.6(C-1″)，173.5(C-1′)，164.5(C-9″)，164.2(C-9′)，148.9(C-35)，134.3(C-2)，83.2(C-20)，82.2(C-23)，81.6(C-19)，80.4(C-16)，77.4(C-36)，74.7(C-15)，74.1(C-28)，71.5(C-24)，62.0(C-7″)，61.3(C-7′)，60.3(C-11′)，60.1(C-11″)，55.5(C-6′)，55.1(C-6″)，40.6(C-12′，12″)，)，34.8，34.4，34.2，32.7，31.7，30.9，29.7-29.5，29.3，29.2，29.0，28.3，28.2，28.1，27.6，27.4，25.4，25.3，25.2，25.1，24.8，24.7，22.6，22.1(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-5′，2″-5″)，19.2(C-37)，14.1(C-34)。
实施例2：
将番荔枝内酯Bullatacin、生物素、4-二甲氨基吡啶、N，N′-二环己基碳二亚胺和对甲苯璜酸按摩尔比1∶1.2∶0.5∶2∶0.5加到圆底烧瓶中，通入氮气保护，然后吸取适量无水二氯甲烷和无水二甲基甲酰胺溶解，室温下搅拌过夜，用薄层色谱层析以体积比95∶5的氯仿-甲醇展开剂检测，在薄层层析板上检测不到反应物Bullatacin的存在来判断反应完成。反应完成后，在30～40℃减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，然后依次用0.5％盐酸和饱和氯化钠萃取，萃取后乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥并过滤，滤液浓缩得到式(1)表示的化合物的混合粗产物324mg。
将粗产物上200～300目硅胶柱，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，用薄层色谱层析检测合并相似流份，合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4洗脱部分得到流份1，流份1用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数84％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到10mg黄色蜡状固体，经结构鉴定为化合物15(Rt＝151min)，即式(1)的化合物，其中R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H，和流份2(Rt＝135min)，流份2用硅胶柱层析，用石油醚-异丙醇混合溶剂(体积比为4∶1)作为洗脱剂，将薄层层析板上石油醚-异丙醇体积比2∶1展开时比移值为0.35的流份合并得到6mg黄色蜡状固体，经结构鉴定为化合物13，即式(1)的化合物，其中R1＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H，将薄层层析板上石油醚-异丙醇体积比2∶1展开时比移值为0.47的流份合并得到17mg黄色蜡状固体，经结构鉴定为化合物14，即式(1)的化合物，其中R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H。
化合物13的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，849[M+H]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.10(1H，m，H-35)，5.69，5.39(1H，1H，s，s，H-8′，10′)，5.11(1H，m，H-4)，5.01(1H，m，H-36)，4.51(1H，m，H-11′)，4.32(1H，m，H-7′)，3.91-3.96(2H，m，H-19，20)，3.84-3.88(3H，m，H-16，23，24)，3.40(1H，m，H-15)，3.15(1H，m，H-6′)，2.92(1H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-12′a)，2.75(1H，d，J＝12.8Hz，H-12′b)，1.40(3H，m，H-37)，0.87(3H，t，J＝7.0Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.6(C-1)，173.2(C-1′)，163.5(C-9′)，151.1(C-35)，130.2(C-2)，83.2(C-16)，82.8(C-19)，82.5(C-20)，82.3(C-23)，77.6(C-36)，74.1(C-15)，72.0(C-4)，71.4(C-24)，61.9(C-7′)，60.1(C-11′)，55.3(C-6′)，40.5(C-12′)，34.1，33.4，32.5，31.9，29.9，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3，28.9，28.4，28.3，26.1，25.6，25.2，24.8，24.5，22.7(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-5′)，19.0(C-37)，14.0(C-34)。
化合物14的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，849[M+H]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.19(1H，m，H-35)，6.11，5.30(1H，1H，s，s，H-8′，10′)，5.06(1H，m，H-36)，4.85(1H，m，H-15)，4.50(1H，m，H-11′)，4.32(1H，m，H-7′)，3.95(3H，m，H-16，20，23)，3.80-3.86(3H，m，H-4，19，24)，3.20(1H，m，H-6′)，2.93(1H，m，H-12′a)，2.72(1H，m，H-12′b)，1.43(3H，d，J＝6.7Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.7Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：174.6(C-1)，173.4(C-1′)，163.7(C-9′)，151.8(C-35)，131.2(C-2)，83.2(C-23)，82.2(C-20)，81.6(C-19)，80.4(C-16)，78.0(C-36)，74.4(C-15)，71.4(C-24)，69.9(C-4)，61.4(C-7′)，60.1(C-11′)，54.7(C-6′)，40.6(C-12′)，37.4，34.9，33.4，32.331.9，30.9，29.8，29.6，29.5，29.4，29.3，29.2，29.0，28.1，28.0，27.3，26.2，25.6，25.4，25.1，24.2，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-5′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
化合物15的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：887[M+K]+，871[M+Na]+，849[M+H]+，负离子ESIMS：883[M+Cl]-，847[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.20(1H，m，H-35)，5.66，5.19(1H，1H，s，s，H-8′，10′)，5.06(1H，m，H-36)，4.99(1H，m，H-24)，4.51(1H，m，H-11′)，4.31(1H，m，H-7′)，3.93(1H，m，H-23)，3.81-3.87(4H，m，H-4，16，19，20)，3.38(1H，m，H-15)，3.19(1H，m，H-6′)，2.92(1H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-12′a)，2.75(1H，d，J＝12.8Hz，H-12′b)，1.44(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝7.0Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：174.6(C-1)，173.5(C-1′)，163.4(C-9′)，151.8(C-35)，131.2(C-2)，83.2(C-16)，82.8(C-20)，81.8(C-19)，80.5(C-23)，77.9(C-36)，74.9(C-24)，74.0(C-15)，69.9(C-4)，62.0(C-7′)，60.1(C-11′)，55.0(C-6′)，40.6(C-12′)，37.4，34.2，33.3，31.9，30.9，29.4-29.7，29.3，29.2，29.1，28.9，28.4，28.3，28.2，27.9，27.2，26.0，25.6，25.5，24.5，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-5′)，19.0(C-37)，14.1(C-34)。
实施例3：
称取2g生物素(Biotin)和924mg N-羟基琥珀酰亚胺于60mL二甲基甲酰胺(DMF)中，加热溶解。另称取1.854g N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)溶于15mL DMF中，逐滴加入到Biotin和N-羟基琥珀酰亚胺溶液中，室温下搅拌，反应过夜。反应完成后，过滤，滤液浓缩至10mL，逐滴加入无水乙醚至沉淀不再生成，沉淀即为N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯，将其溶于35mLDMF中待用。
称取966mg 6-氨基己酸溶于30mL NaHCO3(0.1mol/L)中，将N-羟基琥珀酰亚胺生物素酯的DMF溶液逐滴加入其中，搅拌过夜。反应完成后，减压浓缩得到粗产物，用150mL柠檬酸溶液(100g/L)溶解，60℃搅拌30min，过滤，用蒸馏水洗至中性，沉淀用体积比8∶2的异丙醇-水混合溶液加热溶解，过滤，滤液静置冰箱中析出沉淀，得到6-生物素酰胺基己酸1.455g。
按摩尔比1∶1.2∶2∶0.5称取番荔枝内酯Squamocin、6-生物素酰胺基己酸、DCC、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，加适量无水DMF溶解，通入氮气保护，室温搅拌过夜，用薄层色谱层析以体积比93∶7氯仿-甲醇展开剂检测，在薄层层析板上检测不到反应物Squamocin的存在来判断反应完成。反应完成后加少量水搅拌30min终止反应。反应液减压浓缩后乙酸乙酯溶解，过滤，滤液分别用0.5％HCl、饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，然后用无水NaSO4干燥并过滤，滤液浓缩得925mg混合粗产物，
得到的混合粗产物用200～300目硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，用薄层色谱层析检测合并相似的流份，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并90∶10洗脱部分得到流份2。流份1用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数82％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到41.2mg黄色蜡状固体(Rt＝78min)，经结构鉴定为化合物6，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝R4＝OH，和43mg黄色蜡状固体(Rt＝82min)，经结构鉴定为化合物7，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R4＝OH，和18.6mg黄色蜡状固体(Rt＝95min)，经结构鉴定为化合物8，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH；流份2用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数80％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到26mg黄色粉末状固体(Rt＝121min)，经结构鉴定为化合物9，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R4＝OH，和24.7mg黄色粉末状固体(Rt＝138min)，经结构鉴定为化合物10，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH，和18mg黄色粉末状固体(Rt＝151min)，经结构鉴定为化合物11，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R3＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH。
化合物6的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]-，997[M+Cl]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.01(1H，m，H-35)，6.58，6.54，5.84(1H，1H，1H，m，m，m，H-7′，15′，17′)，5.01(1H，m，H-36)，4.87(1H，m，H-15)，4.52(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，4.0(1H，m，H-16)，3.90(2H，m，H-20，23)，3.84(1H，m，H-24)，3.80(1H，m，H-19)，3.58(1H，m，H-28)，3.22(2H，m，H-6′)，3.15(1H，m，H-13′)，2.90(1H，dd，J＝12.8，4.7Hz，H-19′a)，2.75(2H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.9Hz，H-34)；13CNMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.5(C-8′)，173.2(C-1′)，164.0(C-16′)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，82.6(C-23)，82.0(C-20)，81.7(C-19)，80.1(C-16)，77.4(C-36)，75.0(C-15)，71.6(C-28)，71.5(C-24)，61.8(C-14′)，60.2(C-18′)，55.6(C-13′)，40.5(C-19′)，39.1，37.4，37.3，35.9，34.3，32.6，31.8，30.7，29.5，29.4，29.3，29.2，29.1，28.7，28.3，28.2，28.0，27.3，26.3，25.6，25.4，25.1，24.9，24.6，22.6，22.0(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
化合物7的结构鉴定如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]，997[M+Cl]。1H NMR(600MHz，CDCl3)：6.99(1H，s，H-35)，6.47，6.42，5.60(1H，1H，1H，m，m，m，H-7′，15′，17′)，4.99(1H，m，H-36)，4.94(1H，m，H-24)，4.51(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，4.01(1H，dd，J＝13.2，6.4Hz，H-23)，3.85(2H，m，H-19，20)，3.80(1H，m，H-16)，3.55(1H，m，H-28)，3.38(1H，m，H-15)，3.21(2H，m，H-6′)，3.15(1H，dd，J＝13.2，6.4Hz，H-13′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，4.8Hz，H-19′a)，2.74(2H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.4(C-8′)，173.3(C-1′)，164.0(C-16′)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，83.4(C-16)，82.3(C-20)，81.7(C-19)，80.7(C-23)，77.4(C-36)，74.9(C-24)，74.1(C-15)，71.4(C-28)，61.7(C-14′)，60.2(C-18′)，55.8(C-13′)，40.5(C-19′)，37.537.0，35.9，34.3，33.2，31.8，31.2，29.7，29.6，29.5，29.4，29.2，29.1，28.9，28.4，28.3，28.1，27.9，27.8，27.3，26.3，25.6，25.5，25.1，24.6，22.6，21.6(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′)，19.2(C-37)，14.1(C-34)。
化合物8的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]，997[M+Cl]。1H NMR(600MHz，CDCl3)：6.99(1H，s，H-35)，6.43，6.37，5.68(1H，1H，1H，m，m，m，H-7′，15′，17′)，5.00(1H，m，H-36)，4.87(1H，m，H-28)，4.51(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，3.91(2H，m，H-19，20)，3.82(3H，m，H-16，23，24)，3.39(1H，m，H-15)，3.22(2H，m，H-6′)，3.15(1H，m，H-13′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，4.9Hz，H-19′a)，2.74(2H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.87(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.5(C-8′)，173.2(C-1′)，164.1(C-16′)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，83.3(C-16)，82.8(C-19)，82.5(C-20)，82.2(C-23)，77.4(C-36)，74.1(C-28)，74.0(C-15)，71.4(C-24)，61.8(C-14′)，60.2(C-18′)，55.6(C-13′)，40.5(C-19′)，37.6，35.9，34.4，34.2，34.1，33.2，32.4，31.7，29.7，29.5，29.4，29.2，29.1，28.9，28.3，28.1，28.0，27.3，26.4，25.6，25.2，25.1，24.7，22.5，22.0(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′)，19.1(C-37)，14.0(C-34)。
化合物9的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1340[M+K]+，1323[M+Na]+，1301[M+H]+，负离子ESIMS：1336[M+Cl]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.01(1H，m，H-35)，6.97，6.93，6.78，6.87，6.09，5.92(1H，1H，1H，1H，1H，1H，s，m，s，m，s，s，H-7′，15′，17′，7″，15″，17″)，5.01(1H，m，H-36)，4.95(1H，m，H-24)，4.84(1H，m，H-15)，4.53(2H，m，H-18′，18″)，4.32(2H，m，H-14′，14″)，3.94-4.01(2H，m，H-16，23)，3.83(2H，m，H-19，20)，3.53(1H，m，H-28)，3.20(4H，m，H-6′，6″)，3.15(2H，m，H-13′，13″)，2.90(2H，m，H-19′a，19″a)，2.74(2H，m，H-19′b，19″b)，1.41(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，m，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.6(C-8′，8″)，173.4(C-1′，1″)，164.3(C-16′，16″)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，81.9(C-20)，81.2(C-19)，80.4(C-23)，80.3(C-16)，77.4(C-36)，75.1(C-15)，74.8(C-24)，71.5(C-28)，61.8(C-14′，14″)，60.2(C-18′，18″)，55.7(C-13′，13″)，40.5(C-19′，19″)，39.2，39.1，37.6，37.2，35.9，34.4，31.8，31.0，30.7，29.6，29.5，29.2，29.1，29.0，28.3，28.2，28.1，28.0，27.4，27.0，26.3，26.2，25.8，25.7，25.3，25.1，24.6，22.6，21.7(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′，2″-6″，9″-12″)，19.2(C-37)，14.1(C-34)。
化合物10的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1340[M+K]+，1323[M+Na]+，1301[M+H]+，负离子ESIMS：1336[M+Cl]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.01(1H，m，H-35)，6.91，6.88，6.78，6.38，6.02，5.94(1H，1H，1H，1H，1H，1H，s，s，m，m，m，m，H-7′，15′，17′，7″，15″，17″)，5.01(1H，m，H-36)，4.83-4.89(2H，m，H-15，28)，4.53(2H，s，H-18′，18″)，4.32(2H，m，H-14′，14″)，3.99(1H，m，H-16)，3.88(1H，m，H-23)，3.84(2H，m，H-19，24)，3.74(1H，m，H-20)，3.22(4H，m，H-6′，6″)，3.15(2H，m，H-13′，13″)，2.90(2H，m，H-19′a，19″a)，2.74(2H，m，H-19′b，19″b)，1.41(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，m，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.6(C-8′，8″)，173.4(C-1′，1″)，164.3(C-16′，16″)，148.9(C-35)，134.2(C-2)，82.7(C-23)，82.0(C-20)，81.8(C-19)，80.1(C-16)，77.4(C-36)，75.1(C-15)，74.0(C-28)，71.6(C-24)，61.8(C-14′，14″)，60.2(C-18′，18″)，55.7(C-13′，13″)，40.6(C-19′，19″)，39.2，39.1，35.9，34.5，34.3，34.2，32.6，31.7，30.7，29.5，29.4，29.2，29.1，28.7，28.2，28.1，28.0，27.4，26.3，25.7，25.3，25.1，24.7，22.5，22.1(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′，2″-6″，9″-12″)，19.2(C-37)，14.0(C-34)。
化合物11的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1340[M+K]+，1323[M+Na]+，1301[M+H]+，负离子ESIMS：1336[M+Cl]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.01(1H，s，H-35)，6.96，6.93，6.90，6.77，5.88(1H，1H，1H，1H，2H，s，s，m，m，m，H-7′，15′，17′，7″，15″，17″)，5.01(1H，m，H-36)，4.94(1H，m，H-24)，4.83(1H，m，H-28)，4.52(2H，s，H-18′，18″)，4.32(2H，m，H-14′，14″)，4.00(1H，m，H-23)，3.85(2H，m，H-19，20)，3.80(1H，m，H-16)，3.38(1H，m，H-15)，3.22(4H，m，H-6′，6″)，3.15(2H，m，H-13′，13″)，2.90(2H，m，H-19′a，19″a)，2.75(2H，m，H-19′b，19″b)，1.41(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.87(3H，m，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.7(C-8′，8″)，173.5(C-1′，1″)，164.3(C-16′，16″)，148.9(C-35)，134.3(C-2)，83.4(C-16)，82.3(C-20)，81.7(C-19)，80.5(C-23)，77.4(C-36)，74.7(C-24)，74.2(C-15)，73.9(C-28)，61.9(C-14′，14″)，60.2(C-18′，18″)，55.8(C-13′，13″)，40.6(C-19′，19″)，39.2，35.9，34.4，34.0，31.7，29.7，29.6，29.5，29.3，29.1，27.4，26.5，26.4，26.3，25.8，25.7，25.6，25.3，25.2，24.7，22.6(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-6′，9′-12′，2″-6″，9″-12″)，19.2(C-37)，14.1(C-34)。
实施例4：
制备6-生物素酰胺基己酸的步骤同实施例3。
按摩尔比1∶1.2∶2∶0.5称取番荔枝内酯Bullatacin、6-生物素酰胺基己酸、DCC、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，加适量无水DMF溶解，通入氮气保护，室温搅拌过夜，用薄层色谱层析以体积比93∶7氯仿-甲醇展开剂检测，在薄层层析板上检测不到反应物Bullatacin的存在来判断反应完成。反应完成后加少量水搅拌30min终止反应。反应液减压浓缩后乙酸乙酯溶解，过滤，滤液分别用0.5％HCl、饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，然后用无水NaSO4干燥并过滤，滤液浓缩得到混合粗产物498mg。
得到的混合粗产物用200～300目硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、92∶8的梯度进行洗脱，用薄层色谱层析检测合并相似的流份，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并92∶8洗脱部分得到流份2。流份1用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数80％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到35mg黄色蜡状固体(Rt＝134min)，经结构鉴定为化合物16，即式(1)的化合物，其中R1＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H，和16mg褐色蜡状固体(Rt＝125min)，经结构鉴定为化合物17，即式(1)的化合物，其中R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H，和26mg黄色蜡状固体(Rt＝146min)，经结构鉴定为化合物18，即式(1)的化合物，其中R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H；流份2用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数80％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到7mg白色粉末状固体(Rt＝42min)，经结构鉴定为化合物19，即式(1)的化合物，其中R1＝R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH，R4＝H，和10mg黄色粉末状固体(Rt＝52min)，经结构鉴定为化合物20，即式(1)的化合物，其中R1＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH，R4＝H。
化合物16的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.11(1H，s，H-35)，6.49，6.40，5.72(1H，1H，1H，s，m，s，H-7′，15′，17′)，5.10(1H，m，H-4)，5.02(1H，m，H-36)，4.52(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，3.93(2H，m，H-19，20)，3.85(3H，m，H-16，23，24)，3.40(1H，m，H-15)，3.21(2H，m，H-6′)，3.15(1H，m，H-13′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，4.8Hz，H-19′a)，2.74(1H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.40(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.6(C-1)，173.4(C-1′)，173.3(C-8′)，164.0(C-16′)，151.3(C-35)，130.0(C-2)，83.2(C-16)，82.8(C-19)，82.5(C-20)，82.3(C-23)，77.6(C-36)，74.1(C-15)，71.8(C-4)，71.2(C-24)，61.9(C-14′)，60.3(C-18′)，55.6(C-13′)，40.4(C-19′)，39.2，35.7，34.2，34.1，33.2，32.4，31.8，29.8，29.7，29.6，29.4，29.2，29.0，28.9，28.3，28.0，26.3，26.0，25.6，25.2，24.4，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-6′，9′-12′)，18.9(C-37)，14.1(C-34)。
化合物17的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.22(1H，m，H-35)，6.44，6.39，5.68(1H，1H，1H，s，m，s，H-7′，15′，17′)，5.06(1H，m，H-36)，4.88(1H，dd，J＝12.2，6.1Hz，H-15)，4.52(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，4.03(1H，m，H-16)，3.82-3.93(5H，m，H-4，19，20，23，24)，3.22(2H，m，H-6′)，3.15(1H，m，H-13′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，4.8Hz，H-19′a)，2.72(1H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.43(3H，d，J＝6.7Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：174.7(C-1)，173.5(C-8′)，173.3(C-1′)，164.0(C-16′)，151.9(C-35)，131.0(C-2)，82.6(C-23)，82.2(C-20)，81.9(C-19)，80.0(C-16)，78.0(C-36)，75.0(C-15)，71.4(C-24)，69.8(C-4)，61.8(C-14′)，60.3(C-18′)，55.6(C-13′)，40.5(C-19′)，39.2，37.3，35.8，34.3，33.2，32.5，31.8，30.6，29.7，29.6，29.3，29.1，28.7，28.3，28.1，27.9，26.3，26.0，25.6，25.3，24.6，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-6′，9′-12′)，19.0(C-37)，14.1(C-34)。
化合物18的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1001[M+K]+，985[M+Na]+，963[M+H]+，负离子ESIMS：961[M-H]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.22(1H，m，H-35)，6.46，5.66(2H，1H，m，s，H-7′，15′，17′)，5.06(1H，m，H-36)，4.99(1H，m，H-24)，4.51(1H，m，H-18′)，4.32(1H，m，H-14′)，4.03(1H，m，H-23)，3.84(4H，m，H-4，16，19，20)，3.38(1H，m，H-15)，3.21(2H，m，H-6′)，3.15(1H，m，H-13′)，2.91(1H，dd，J＝12.8，5.0Hz，H-19′a)，2.75(1H，d，J＝12.8Hz，H-19′b)，1.43(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：174.7(C-1)，173.6(C-8′)，173.4(C-1′)，164.0(C-16′)，151.9(C-35)，131.1(C-2)，83.2(C-16)，82.3(C-20)，81.7(C-19)，80.5(C-23)，78.0(C-36)，74.7(C-24)，74.1(C-15)，69.8(C-4)，61.9(C-14′)，60.3(C-18′)，55.6(C-13′)，40.4(C-19′)，39.3，37.3，35.7，34.3，33.2，31.8，30.8，29.5，29.3，29.0，28.8，28.3，28.1，27.9，27.1，26.3，25.6，25.5，24.6，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-6′，9′-12′)，19.0(C-37)，14.1(C-34)。
化合物19的结构鉴定如下：正离子ESIMS：1340[M+K]+，1324[M+Na]+，负离子ESIMS：1337[M+Cl]。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.11(1H，m，H-35)，5.11(1H，m，H-4)，5.01(1H，m，H-36)，4.89(1H，m，H-15)，4.52(2H，m，H-18′，18″)，4.32(2H，m，H-14′，14″)，4.03(1H，m，H-16)，3.79-3.94(4H，m，H-19，20，23，24)，3.20(4H，m，H-6′，6″)，3.14(2H，m，H-13′，13″)，2.91(2H，dd，J＝12.8，4.6Hz，H-19′a，19″a)，2.75(2H，d，J＝12.8Hz，H-19′b，19″b)，1.40(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.6(C-1)，173.4-173.5(C-1′，1″，8′，8″)，164.2(C-16′，16″)，151.3(C-35)，130.0(C-2)，82.7(C-19)，82.2(C-23)，82.0(C-20)，80.0(C-16)，77.7(C-36)，75.0(C-15)，71.8(C-4)，71.4(C-24)，61.8(C-14′，14″)，60.2(C-18′，18″)，55.7(C-13′，13″)，40.5(C-19′，19″)，39.2，35.9，34.3，34.1，33.3，32.5，31.9，30.7，29.9，29.1-29.7，28.8，28.3，28.2，28.0，26.3，26.1，25.7，25.4，25.2，24.6，24.5，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-6′，9′-12′，2″-6″，9″-12″)，18.9(C-37)，14.1(C-34)。
化合物20的结构鉴定如下：正离子ESIMS：1340[M+K]+，1324[M+Na]+，负离子ESIMS：1337[M+Cl]-。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.11(1H，m，H-35)，5.11(1H，m，H-4)，5.01(1H，m，H-36)，4.99(1H，m，H-24)，4.52(2H，m，H-18′，18″)，4.32(2H，m，H-14′，14″)，4.03(1H，m，H-23)，3.83(3H，m，H-16，19，20)，3.39(1H，m，H-15)，3.20(4H，m，H-6′，6″)，3.15(2H，m，H-13′，13″)，2.90(2H，dd，J＝12.8，4.6Hz，H-19′a，19″a)，2.75(2H，d，J＝12.1Hz，H-19′b，19″b)，1.40(3H，d，J＝6.8Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.8Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.3-173.7(C-1，1′，1″，8′，8″)，164.2(C-16′，16″)，151.3(C-35)，130.1(C-2)，83.3(C-16)，82.5(C-20)，81.9(C-19)，80.5(C-23)，77.7(C-36)，74.6(C-15)，74.0(C-24)，71.8(C-4)，61.9(C-14′，14″)，60.3(C-18′，18″)，55.7(C-13′，13″)，40.5(C-19′，19″)，39.2，35.8，34.3，34.2，33.3，31.9，30.6，30.0，28.9-29.9，28.0-28.4，26.9，26.3，25.8，25.6，25.2，24.7，24.5，22.6(C-2，3，5-14，17，18，21，22，25-33，2′-6′，9′-12′，2″-6″，9″-12″)，18.9(C-37)，14.1(C-34)。
实施例5：
称取生物素500mg于两口烧瓶中，通入氮气保护，加入5mL甲醇，再缓慢加入1mL亚硫酰氯(SOCl2)，室温下搅拌过夜。反应完成后减压浓缩除去SOCl2，称取941mg己二胺加入其中，用10mL甲醇溶解，80℃回流反应过夜。反应完成后用乙醚洗并过滤，沉淀为778mg6-生物素酰氨基己胺。
按摩尔比1∶1.2∶1称取番荔枝内酯Squamocin、丁二酸酐、DMAP溶于适量无水吡啶中，室温搅拌过夜。反应完成后减压浓缩，然后用硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂按体积比97∶3、95∶5、93∶7、92∶8梯度洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97∶3洗脱部分，得到Squamocin 28-丁二酸酯329mg。
称取Squamocin 28-丁二酸酯283mg、6-生物素酰氨基己胺142mg、DMAP 4.27mg、DCC144mg和对甲苯磺酸6.7mg溶于5mL无水DMF中，通入氮气保护，室温搅拌过夜，加0.5mL水搅拌30min停止反应。用氯仿溶解后过滤，氯仿部分减压浓缩得到粗产物，用硅胶柱层析以氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7的梯度进行洗脱，用薄层色谱层析检测合并相似的流份，合并氯仿-甲醇体积比95∶5、93∶7洗脱部分，用高效液相色谱(仪器同实施例1)分离，以体积分数79％的甲醇为流动相(流速为5mL/min)，得到13mg浅黄色蜡状固体(Rt＝17min)，经结构鉴定为化合物12，即式(1)的化合物，其中R1＝H，R2＝式(4)表示的4-氧-4-(6-生物素酰氨基己胺)丁酰氧基，R3＝R4＝OH。
化合物12的结构鉴定数据如下：正离子ESIMS：1085[M+K]+，1069[M+Na]+，1047[M+H]+。1H NMR(600MHz，CDCl3)：7.00(1H，m，H-35)，6.57，6.31，5.70(2H，1H，1H，m，s，s，H-5′，12′，20′，22′)，5.00(1H，m，H-36)，4.87(1H，m，H-15)，4.51(1H，m，H-23′)，4.31(1H，m，H-19′)，4.00(1H，m，H-16)，3.80-3.95(4H，m，H-19，20，23，24)，3.59(1H，m，H-28)，3.21(4H，m，H-6′，11′)，3.16(1H，m，H-18′)，2.92(1H，dd，J＝12.8，4.8Hz，H-24′a)，2.75(2H，d，J＝12.8Hz，H-24′b)，1.41(3H，d，J＝6Hz，H-37)，0.88(3H，t，J＝6.7Hz，H-34)；13C NMR(150MHz，CDCl3)：173.9(C-1)，173.3，173.0，171.8(C-1′，4′，13′)，163.9(C-22′)，149.0(C-35)，134.2(C-2)，82.6(C-23)，82.2(C-20)，82.0(C-19)，80.1(C-16)，77.4(C-36)，75.7(C-15)，71.6(C-28)，71.5(C-24)，61.7(C-19′)，60.2(C-23′)，55.6(C-18′)，40.5(C-24′)，39.1，38.9，37.4，37.3，35.7，32.5，31.8，31.4，30.6，30.3，29.5-29.2，28.7，28.4，28.0，27.9，27.3，26.0，25.7-25.1，22.6，22.0(C-3-14，17，18，21，22，25-27，29-33，2′-3′，7′-11′，14′-17′)，19.2(C-37)，14.1(C-34)。
实施例6：
取对数生长的小鼠白血病细胞L1210、L1210FR、乳腺癌细胞4T1和肥大细胞瘤细胞P815加入96孔板中，每孔100μL含有约1000个细胞。再分别加入以上实施例1～6得到的化合物，并以加入番荔枝内酯Squamocin和Bullatacin作为对照，每组设3个平行孔，置二氧化碳培养箱中37℃培养72小时，实验终止前4h加入20μL MTT(5mg/mL)溶液，再培养4h，弃去培养液加入0.15mL DMSO，待结晶溶解后在酶联检测仪上检测570nm波长下每孔的OD值。按下列公式求出生长抑制率，再由SPSS(13.0)软件求出半数抑制浓度(IC50值)。
结果见表1，其中IC50用Mean±S.E.M表示。
表1番荔枝内酯衍生物对小鼠L1210、L1210FR、4T1、P815细胞体外生长抑制作用的IC50
Claims (7)
1.以下通式(1)表示的化合物：
其中
化合物1：R1＝H，R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物2：R1＝H，R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R4＝OH；
或化合物3：R1＝H，R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH；
或化合物4：R1＝H，R2＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R3＝OH；
或化合物5：R1＝H，R3＝R4＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝OH；
或化合物6：R1＝H，R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物7：R1＝H，R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R4＝OH；
或化合物8：R1＝H，R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH；
或化合物9：R1＝H，R2＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R4＝OH；
或化合物10：R1＝H，R2＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH；
或化合物11：R1＝H，R3＝R4＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH；
或化合物12：R1＝H，R2＝式(4)表示的4-氧-4-(6-生物素酰氨基己胺)丁酰氧基，R3＝R4＝OH；
或化合物13：R1＝式(2)表示的生物素酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物14：R2＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物15：R3＝式(2)表示的生物素酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H；
或化合物16：R1＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物17：R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R3＝OH，R4＝H；
或化合物18：R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R1＝R2＝OH，R4＝H；
或化合物19：R1＝R2＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R3＝OH，R4＝H；
或化合物20：R1＝R3＝式(3)表示的6-生物素酰氨基己酰氧基，R2＝OH，R4＝H；
2.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
将番荔枝内酯Squamocin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4、95∶5洗脱部分得到流份1，合并氯仿-甲醇体积比93∶7、90∶10洗脱部分得到流份2，将流份1用高效液相色谱仪分离纯化，按保留时间依次得到流份3和权利要求1所述的化合物3；将流份3再用高效液相色谱分离纯化，按保留时间依次得到权利要求1所述的化合物1、化合物2；将流份2静置，析出的沉淀为权利要求1所述的化合物5，流份2滤去沉淀的母液用高效液相色谱纯化得到权利要求1所述的化合物4。
3.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
将番荔枝内酯Bullatacin与生物素进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比98∶2、97∶3、96∶4、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比97∶3、96∶4洗脱部分得流份1，用高效液相色谱分离，按保留时间依次得到权利要求1所述的化合物15和流份2，流份2再用硅胶柱层析，用体积比4∶1的石油醚-异丙醇混合溶剂作为洗脱剂，将薄层层析板上石油醚-异丙醇体积比2∶1展开时比移值为0.35的流份合并为权利要求1所述的化合物13，比移值为0.47的流份合并为权利要求1所述的化合物14。
4.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Squamocin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7、90∶10的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并90∶10洗脱部分得到流份2，流份1和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份1依次得到权利要求1所述的化合物6、化合物7和化合物8；流份2依次得到权利要求1所述的化合物9、化合物10和化合物11。
5.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素、N-羟基琥珀酰亚胺和6-氨基己酸进行酰化反应得到6-生物素酰胺基己酸；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰胺基己酸与番荔枝内酯Bullatacin进行酯化反应得到粗产物，粗产物先通过硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、92∶8的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5洗脱部分得到流份1，合并92∶8洗脱部分得到流份2，流份1和流份2再分别用高效液相色谱分离，按保留时间流份1依次得到权利要求1所述的化合物16，化合物17和化合物18；流份2依次得到权利要求1所述的化合物19和化合物20。
6.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征是包括以下的步骤：
(1)将生物素与己二胺进行酰化反应得到6-生物素酰氨基己胺；将番荔枝内酯Squamocin和丁二酸酐进行酯化反应得到粗产物，粗产物用硅胶柱层析得到Squamocin 28-丁二酸酯；
(2)将步骤(1)得到的6-生物素酰氨基己胺与Squamocin 28-丁二酸酯进行酰化反应得到粗产物，粗产物先用硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂作为洗脱剂，以体积比97∶3、95∶5、93∶7的梯度进行洗脱，合并氯仿-甲醇体积比95∶5、93∶7洗脱部分，再用高效液相色谱分离，得到权利要求1所述的化合物12。
7.权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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