CN105232729A - 一种桑当总黄酮的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桑当总黄酮的制备方法及其应用，所述制备方法包括将桑当粉碎，乙醇浸泡，回流提取，提取液浓缩并加入乙醇静置，取上清液减压回收乙醇后浓缩，再将浓缩液上样，用水，体积浓度5-30％的乙醇和体积浓度40-80％的乙醇分别洗脱，取最后一次洗脱液，减压回收乙醇，浓缩干燥即得。本发明首次桑当为原料，制备桑当总黄酮，原料来源丰富，成本低，使用方便，见效快，患者痛苦小，不抗药，毒副作用小，安全系数高。本发明桑当总黄酮的制备方法简单，操作方便，所制备的桑当总黄酮能够有效用于高尿酸血症的治疗，有力推动了桑当的研究推广。

Description

一种桑当总黄酮的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种桑当总黄酮的制备方法，同时还设计该桑当总黄酮的应用，属于中药技术领域。

背景技术

高尿酸血症(hyperuricemia)是一种由于嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄障碍所致血尿酸增高，细胞外液尿酸盐呈超饱和的疾病。血尿酸超过416μmol/L时即可明确诊断为高尿酸血症。超高蛋白膳食是引起嘌呤代谢紊乱的重要原因，过量糖、脂肪、蛋白质的摄入及大量饮酒与患病率增加均有重要关系。当血尿酸浓度过高时，尿酸以钠盐的形式沉积在关节及皮下组织，导致痛风的发生，因此高尿酸血症患者中约5％～12％会发展成为痛风。痛风不仅可以侵犯骨和关节，而且还容易累及肾脏和心血管系统。高尿酸血症和痛风是当前严重危害人类健康的的代谢性疾病。

高尿酸血症可由两方面的原因引起：(1)尿酸生成增多：人体内尿酸由内源性和外源性两种途径产生，外源性尿酸来源于食物，约占人体尿酸总量的20％；内源性尿酸主要来源于核苷酸分解代谢，约占80％；因此，高嘌呤膳食和体内核酸的大量分解均可导致血尿酸的升高。其中，黄嘌呤氧化酶是尿酸生成的关键酶，它能催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤再氧化为尿酸。(2)尿酸排泄减少：尿酸主要通过肾脏排泄，肾脏对尿酸的排泄通过肾小球的滤过、分泌前的重吸收、肾小管的主动分泌及分泌后重吸收来调节，其中以肾小管对尿酸重吸收为主。尿酸盐为极性分子，需离子通道才能通过肾小管上皮细胞膜，目前发现的离子通道(尿酸盐转运蛋白)中，阴离子交换器是关键的离子通道，该通道可促进肾小管对尿酸的重吸收，决定尿酸从肾脏排出的多少。

目前西药治疗高尿酸血症主要从以下两方面：一是抑制尿酸生成的药物，如别嘌呤醇、秋水仙碱，非甾体类抗炎药(NSAIDs)，糖皮质激素等；二是促进尿酸排泄的药物，如丙璜舒，苯磺唑酮，苯溴马龙等；但上述药物都有不同程度的副作用，如过敏性皮疹，药物热，胃肠不适，白细胞及血小板减少，肝功能损害等。

高尿酸血症为理化检查发现，中医无相应的病证名，但中医对高尿酸血症所致的痛风早有认识。《金匮要略·中风历节》篇：“寸口脉沉而弱，沉即主骨，弱即主筋，沉即为肾，弱即为肝……历节黄汗出，故日历节”。从症状来看，现代医学的痛风应当属于中医的痹证、“历节”的范畴。就其病因病机，历代医家论述颇多，高尿酸血症的形成主要是由于先天禀赋不足，肾中精气有亏损，后天恣嗜膏粱肥甘，日久伤脾，脾失健运，肾失蒸腾，造成全身气化失司，津液代谢障碍，最终导致内湿滋生，湿邪弥散于营血而成。元代朱丹溪在《格致余论·痛风论》中说：“彼痛风者，大率因血受热，己自沸腾，其后或涉冷水，或立湿地，或扇取凉，或卧当风，寒凉外搏，热血得寒，汗浊凝涩，所以作痛。夜则痛甚，行于阴也。”其论将病名定为痛风，发病原因为血热与风，寒，湿相搏而成，临床以疼痛为主要特征。中医药治疗高尿酸血症的研究已经逐步受到重视和关注，并且取得了一定的成就，其疗效也已显现出诸多优越性。

藏药桑当为无患子科植物文冠木XanthocerassorbifoliaBunge的干燥茎干，法定标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》，是藏医常用来治疗痛风的药物。《晶珠本草》记载桑当有“干黄水”之功，主要用于关节黄水增盛引起的关节红肿疼痛。但目前有关桑当的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究关于桑当的化学成分及药理作用鲜有报道，也未见桑当总黄酮的制备方法及其用于制备治疗高尿酸血症药物的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种桑当总黄酮的制备方法及其应用，能够有效用于高尿酸血症的治疗。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是提供一种桑当总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过10-80目筛的药粉，用6-10倍药粉重量的、体积浓度50-90％的乙醇浸泡0.5-2.0h，60-85℃回流提取2-4次，每次提取时间1-3h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.05–1.15，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量70-95％，静置8-24h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.2-0.5g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用6-10倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用6-10倍量柱体积的、体积浓度5-30％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用6-10倍量柱体积的、体积浓度40-80％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

优选的，一种桑当总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过60目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度60％的乙醇浸泡1.0h，80℃回流提取2次，第1次1.5h，第2次1h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.07，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量95％，静置12h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.4g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度10％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用10倍量柱体积的、体积浓度75％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

本发明的技术方案还在于提供一种桑当总黄酮在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。

本发明的桑当总黄酮可以制成片剂、颗粒剂或胶囊剂，所采用的为本领域的常规技术手段。

本发明首次以无患子科植物文冠木XanthocerassorbifoliaBunge的干燥茎干(桑当)为原料，制备桑当总黄酮，原料来源丰富，成本低，使用方便，见效快，患者痛苦小，不抗药，毒副作用小，安全系数高。本发明桑当总黄酮的制备方法简单，操作方便，所制备的桑当总黄酮能够有效用于高尿酸血症的治疗，有力推动了桑当的研究推广。实验表明，桑当总黄酮能够显著降低高尿酸血症患者血尿酸、肌酐、尿素氮含量及高尿酸血症模型组大鼠血尿酸、尿尿酸、黄嘌呤氧化酶、血肌酐、尿素氮含量。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

一种桑当总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过60目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度60％的乙醇浸泡1.0h，80℃回流提取2次，第1次1.5h，第2次1h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.07，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量95％，静置12h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.4g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度10％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用10倍量柱体积的、体积浓度75％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

实施例2

一种桑当总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过10目筛的药粉，用6倍药粉重量的、体积浓度90％的乙醇浸泡2.0h，60℃回流提取4次，第1次2h，第2次1h，第3次1.5h，第4次2h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.05，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量70％，静置8h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.2g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用6倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用6倍量柱体积的、体积浓度5％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用8倍量柱体积的、体积浓度40％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

实施例3

一种桑当总黄酮的制备方法，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过80目筛的药粉，用10倍药粉重量的、体积浓度50％的乙醇浸泡0.5h，85℃回流提取3次，第1次3h，第2次2h，第3次1h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.15，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量80％，静置24h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.5g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用10倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用10倍量柱体积的、体积浓度30％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用6倍量柱体积的、体积浓度80％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

实验例1桑当总黄酮治疗高尿酸血症的临床疗效观察

本发明桑当总黄酮在2013年3月至2014年10月临床观察高尿酸血症患者58例，报告如下：

1、一般资料

58例患者中，男性31例，女性27例，年龄最小37岁，最大65岁，平均年龄51.3岁，病程6个月到9年。

2、诊断标准

参照《中药新药临床研究指导原则》：

(1)高尿酸血症的诊断标准为：血尿酸(UA)≥416μmol/L；

3、纳入及排除标准

纳入标准：①符合诊断标准者；②年龄20-70岁者；③所有患者发病前2月内未做任何治疗；④签署知情同意书，同意接受治疗方法服从安排者。排除标准：①不符合上述纳入标准者；②合并感染性疾病、免疫性疾病、癌症、严重肝肾疾病者；③12个月内应用过皮质类固醇激素或免疫抑制剂者。

4、治疗方案

将符合上述标准的58例高尿酸血症患者给予药物：将实施例1的桑当总黄酮制成胶囊，每次4粒，每日2次，连服4周。

5、治疗结果

用药4周后，进行血尿酸、血肌酐、尿素氮检测，评价疗效。

(1)检测数据比较

分别测定患者服药前后血尿酸、血肌酐、尿素氮，详见表1：

表1患者治疗前后血尿酸、血肌酐、尿素氮变化()

注：与治疗前比较，^*P<0.05

(2)疗效评价：

疗效判定标准：显效：血尿酸降低≥15％；有效：血尿酸降低<15％；无效：血尿酸水平与治疗前相比无变化或升高。总有效率＝显效率+有效率。

疗效评价：58例患者中，显效37例(63.8％)，有效19例(32.8％)，无效2例(3.4％)，总有效率为96.6％。

实验例2桑当总黄酮对高尿酸血症大鼠的影响

1、实验动物

SD大鼠，60只，雄性，体重200g～220g，购自河南省实验动物中心，合格证号SCXK(豫)2010-0001。

2、药物与仪器

本发明桑当总黄酮；别嘌醇片(上海信谊万象药业股份有限公司，批号20130116)；氧嗪酸钾盐(Sigma公司，批号STBC6418V)；腺嘌呤(Amresco公司，批号130410)，尿酸(批号20130519)、肌酐(批号20130424)、尿素氮(批号20130509)、黄嘌呤氧化酶(批号20130521)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；SynergyNEO型酶标仪(美国Bio-Tek公司)；2K15型冷冻离心机(德国Sigma公司)。

3、实验方法

雄性SD大鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、桑当总黄酮高、中、低剂量组(120、60、30mg/kg)、阳性对照别嘌醇组(30mg/kg)组。除正常组外，各组大鼠灌胃腺嘌呤(250mg/kg，每天1次)并腹腔注射氧嗪酸钾(200mg/kg，每周1次)，共4周，构建大鼠高尿酸模型。于造模第3周开始灌胃给予相应药物，每天1次，连续4周，正常组、模型组灌胃给予同体积蒸馏水。

于给药第27天清晨将大鼠放入代谢笼，次日晨收取24h尿，记尿量，尿液3000r/min离心15min，取上清，通过全自动生化分析仪检测尿中尿酸。第28天禁食12h后，大鼠腹腔注射质量分数10％水合氯醛0.3mL/kg麻醉，腹主动脉采血，分离血清，测定血清中尿酸(UA)，尿素氮(BUN)，血肌酐(SCr)，黄嘌呤氧化酶(XOD)含量。

4、统计学分析

采用SPSS17.0软件对结果进行统计分析，数据以表示，采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD检验，P<0.05为有统计学意义(结果见表2、3)。

表2桑当总黄酮对高尿酸血症大鼠血尿酸、黄嘌呤氧化酶及尿尿酸的影响()

注：与模型组比较，^*P<0.05

从表2可以看出，与正常组相比，模型组大鼠的尿尿酸显著降低，血尿酸，黄嘌呤氧化酶明显升高，差异有显著性(P＜0.05)，证明模型构建成功。与模型组相比，桑当总黄酮各剂量可显著升高高尿酸血症大鼠尿尿酸含量(P＜0.05)，显著降低大鼠血尿酸、黄嘌呤氧化酶含量(P＜0.05)。

表3桑当总黄酮对高尿酸血症大鼠血肌酐、尿素氮的影响()

注：与模型组比较，^*P<0.05

从表3可以看出，与正常组相比，模型组大鼠的肌酐，尿素氮的含量明显升高，差异有显著性(P＜0.05)。与模型组相比，桑当总黄酮组低、中、高剂量均可显著降低高尿酸血症大鼠的血肌酐、尿素氮含量(P＜0.05)。

结论：桑当总黄酮能够显著降低高尿酸血症大鼠血尿酸、黄嘌呤氧化酶、血肌酐、尿素氮含量，升高尿中尿酸含量，因此，可以用来对高尿酸血症进行治疗。

Claims (3)

1.一种桑当总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过10-80目筛的药粉，用6-10倍药粉重量的、体积浓度50-90％的乙醇浸泡0.5-2.0h，60-85℃回流提取2-4次，每次提取时间1-3h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.05–1.15，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量70-95％，静置8-24h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.2-0.5g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用6-10倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用6-10倍量柱体积的、体积浓度5-30％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用6-10倍量柱体积的、体积浓度40-80％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

2.根据权利要求1所述的桑当总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将桑当粉碎成过60目筛的药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度60％的乙醇浸泡1.0h，80℃回流提取2次，第1次1.5h，第2次1h，弃去滤渣，合并提取液；将提取液减压浓缩至相对密度为1.07，加入体积浓度99％的乙醇至醇含量95％，静置12h，弃去沉淀，上清液减压回收乙醇，浓缩至药液中桑当生药质量浓度为0.4g/ml，得样品液；将样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，树脂与上样量体积的比例为10:1，树脂柱径高比为1:10；先用8倍柱体积的水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用8倍量柱体积的、体积浓度10％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用10倍量柱体积的、体积浓度75％的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得桑当总黄酮。

3.一种如权利要求1所述方法制备的桑当总黄酮在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。