CN105230496A - 荷松草的组织培养育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种荷松草的组织培养育苗方法。该方法包括对荷松草外植体的选择与灭菌处理、外植体的初代培养与无菌芽诱导、无菌芽的继代培养与增殖、无根苗的生根诱导与成苗、组培苗的驯化与移栽。通过筛选适宜的外植体消毒灭菌方法、外植体初代培养的诱导培养基、无菌芽培养增殖的继代培养基、无根苗诱导生根的生根培养基、组培苗移栽的基质处理，建立起实用、高效的荷松草的组织培养育苗技术体系。应用这一技术体系，外植体的菌污染率可控制在6％以下，芽诱导率在90％以上，芽增殖倍数每代在5倍以上，生根率达95％，组培苗移栽成活率在90％以上。本发明解决了荷松草因无种子不能有性繁殖而常规无性繁殖如扦插困难且效率低的难题。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域。具体地说，本发明涉及一种荷松草的组织培养育苗方法。
背景技术
荷松草是利用国外芦竹草原株细胞培育而成的高科技品种，是草中之王。荷松草是一种低成本、高投入的种植：种植一次，收获20年，不需每年耕种；生长周期短，产量高；热值高，纤维产出率高；适应性广，耐旱、耐涝、耐瘠薄土地。可广泛用于燃烧发电、造纸制板、环境修复、轻化工业、饲料养殖行业等。荷松草无花粉、无果实，不能有性繁殖，无性繁殖如扦插也很困难。因此，通过植物组织培养的方法，对荷松草进行离体快繁育苗，可满足生产上的迫切需要。荷松草的组织培养育苗技术在国内外还未见有研究的报道。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种荷松草的组织培养育苗方法，针对荷松草无花粉、无果实，不能有性繁殖，无性繁殖也很困难的问题，建立实用、高效的荷松草组培育苗的无性快繁技术。
本发明还有一个目的是通过对荷松草的外植体进行灭菌处理，以控制其菌污染率在7％以内。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒30-40s后，用0.1％HgCl2浸泡20-22min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养10-12天得萌发腋芽，培养温度为23-27℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，1.5-4.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.1-0.3mg/L吲哚丁酸，0.05-0.5mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养至少一个周期，所述增殖培养的一个周期为30-40天，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，4.0-6.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.2-1.0mg/LCPPU，0.15-0.3mg/L吲哚丁酸，0.05-0.1mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，所述萌发腋芽从茎段外植体上分割下后，经过3个连续周期的增殖培养。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为21-25℃，光照强度为1500-2000Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，0.5-1.5mg/L吲哚丁酸，1.0-2.0mg/L萘乙酸，0.1-1.0mg/L多效唑，0.3-0.6g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗3-5天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗，移栽基质为营养基质、珍珠岩和黄泥中的至少两种，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为50∶25-28∶10-12∶3组成。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，所述移栽基质为营养基质和珍珠岩以质量比为2∶1混合得到。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，荷松草的茎段经HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡8-10min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的喷雾剂，其中，
所述第一浸泡液的制备方法如下：先将15-17重量份生地和15-17重量份丹皮磨粉后加入其总重量的20倍的水煮沸30-35min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将1-2重量份辣椒素和3-5重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
所述喷雾剂的制备方法如下：将12-15重量份洋葱和17-20重量份蕨菜切段后磨碎，采用体积分数为55％的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提取液加入其体积的5倍的体积分数为75％的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡5-8min，所述第二浸泡液为20-30mL的过氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0.2％的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述过氧化氢银离子复合剂溶液中含有120-130ug银离子。
本发明解决了荷松草因无种子不能有性繁殖而常规无性繁殖困难且效率低的难题，为荷松草在生产上推广应用的规模化育苗提供了极其有效的方法，至少包括以下有益效果：
1)本发明采用荷松草带1个节间腋芽的茎段作外植体，诱导出芽率高，且采用酒精和氯化汞溶液进行外植体消毒灭菌，控制其菌污染率在7％以内；
2)本发明的诱导培养腋芽萌发率在90％以上，继代培养过程中芽增殖倍数每代在5倍以上，生根培养过程中生根率达95％，组培苗移栽成活率在90％以上；
3)初代培养之前，将外植体经过第一浸泡液浸泡和喷洒喷雾剂，将外植体的菌污染率控制到1.4％以内，同时也提高了诱导培养腋芽萌发率，达94％；其中，生地具有抗真菌作用和促进生长调节的作用，丹皮具有抗炎症和抑菌的作用，还能提高外植体的免疫力，促进其代谢和生长，辣椒素具有抑菌和刺激外植体生长的作用，魔芋精粉中含有天然的抗菌素，可以在外植体表面形成抗菌膜，防止细菌浸染，洋葱中含有具有抑菌作用的大蒜素，蕨菜具有抑制细菌、促进外植体生长的作用；
4)无根苗转入生根培养基之前将其置于含有过氧化氢银离子复合剂和竹醋液的溶液中浸泡，可以提高生根率和组培苗的移栽成活率，其中，过氧化氢银离子具有显著的抑菌和防感染的作用，而竹醋液既促进根的生长，又具有一定程度的抑菌作用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：
一种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒30s后，用0.1％HgCl2浸泡20min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养10天得萌发腋芽，培养温度为23℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，1.5mg/L6-苄氨基嘌呤，0.1mg/L吲哚丁酸，0.05mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8，其中本发明中的GA3为赤霉素中的一种。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养一个周期，所述增殖培养的一个周期为30天，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，4.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.2mg/LCPPU，0.15mg/L吲哚丁酸，0.05mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9，其中本发明中的CPPU为细胞分裂素类的一种植物生长调节剂，其生理活性高于一般嘌呤型细胞分裂素。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为21℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，0.5mg/L吲哚丁酸，1.0mg/L萘乙酸，0.1mg/L多效唑，0.3g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗3天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗。
实施例2：
一种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒35s后，用0.1％HgCl2浸泡21min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养11天得萌发腋芽，培养温度为25℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，3.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.2mg/L吲哚丁酸，0.3mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养两个周期，所述增殖培养的一个周期为35天，每间隔一个周期更换一次培养基，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，5.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.6mg/LCPPU，0.22mg/L吲哚丁酸，0.08mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为23℃，光照强度为1800Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，1.0mg/L吲哚丁酸，1.5mg/L萘乙酸，0.5mg/L多效唑，0.45g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗4天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗。
实施例3：
一种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒40s后，用0.1％HgCl2浸泡22min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养12天得萌发腋芽，培养温度为27℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，4.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.3mg/L吲哚丁酸，0.5mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养三个周期，所述增殖培养的一个周期为40天，每间隔一个周期更换一次培养基，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，6.0mg/L6-苄氨基嘌呤，1.0mg/LCPPU，0.3mg/L吲哚丁酸，0.1mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，1.5mg/L吲哚丁酸，2.0mg/L萘乙酸，1.0mg/L多效唑，0.6g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗5天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗。
实施例4：
一种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒40s后，用0.1％HgCl2浸泡22mm，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养12天得萌发腋芽，培养温度为27℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，4.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.3mg/L吲哚丁酸，0.5mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养三个周期，所述增殖培养的一个周期为40天，每间隔一个周期更换一次培养基，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，6.0mg/L6-苄氨基嘌呤，1.0mg/LCPPU，0.2mg/L吲哚丁酸，0.1mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，1.5mg/L吲哚丁酸，2.0mg/L萘乙酸，1.0mg/L多效唑，0.6g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗5天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗。
实施例5：
在实施例4的基础上，所述移栽基质为营养基质、珍珠岩和黄泥中以质量比为3∶1∶2组成，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为50∶25∶10∶3组成。
实施例6：
在实施例4的基础上，所述移栽基质为营养基质和珍珠岩以质量比为2∶1混合得到，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为50∶26∶11∶3组成。
实施例7：
在实施例4的基础上，所述移栽基质为营养基质和珍珠岩以质量比为2∶1混合得到，，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为50∶28∶12∶3组成。
实施例8：
在实施例6的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，诱导培养之前还包括：荷松草的茎段经0.1％HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡8min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的喷雾剂，其中，
所述第一浸泡液的制备方法如下：先将15重量份生地和15重量份丹皮磨粉后加入其总重量的20倍的水煮沸30min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将1重量份辣椒素和3重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
所述喷雾剂的制备方法如下：将12重量份洋葱和17重量份蕨菜切段后磨碎，采用体积分数为55％的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提取液加入其体积的5倍的体积分数为75％的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
实施例9：
在实施例6的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，诱导培养之前还包括：荷松草的茎段经0.1％HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡9min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的喷雾剂，其中，
所述第一浸泡液的制备方法如下：先将16重量份生地和16重量份丹皮磨粉后加入其总重量的20倍的水煮沸32min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将1.5重量份辣椒素和4重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
所述喷雾剂的制备方法如下：将12重量份洋葱和18重量份蕨菜切段后磨碎，采用体积分数为55％的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提取液加入其体积的5倍的体积分数为75％的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
实施例10：
在实施例6的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，诱导培养之前还包括：荷松草的茎段经0.1％HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡10min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的喷雾剂，其中，
所述第一浸泡液的制备方法如下：先将17重量份生地和17重量份丹皮磨粉后加入其总重量的20倍的水煮沸35min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将2重量份辣椒素和5重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
所述喷雾剂的制备方法如下：将15重量份洋葱和20重量份蕨菜切段后磨碎，采用体积分数为55％的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提取液加入其体积的5倍的体积分数为75％的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
实施例11：
在实施例9的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，还包括：将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡5min，所述第二浸泡液为20mL的过氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0.2％的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述过氧化氢银离子复合剂溶液中含有120ug银离子。
实施例12：
在实施例9的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，还包括：将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡6.5min，所述第二浸泡液为25mL的过氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0.2％的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述过氧化氢银离子复合剂溶液中含有125ug银离子。
实施例13：
在实施例9的基础上，所述的荷松草的组织培养育苗方法，还包括：将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡8min，所述第二浸泡液为30mL的过氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0.2％的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述过氧化氢银离子复合剂溶液中含有130ug银离子。
对比例1：
以荷松草带1个节间腋芽的茎段作外植体，先用75％酒精浸泡消毒30-40S，再用0.1％HgCl2灭菌12min，茎段外植体的菌污染率为33.33％，出芽成活率为66.34％；在同样的灭菌处理条件下，叶片外植体的菌污染率为44.0％，因愈伤组织诱导率为0，故没有诱导出芽。说明荷松草组织培养的适宜外植体为带腋芽的茎段。
对比例2：
在对荷松草外植体(茎段)的消毒灭菌中，研究0.1％HgCl2对荷松草外植体处理不同时间的影响，结果见表1。
表10.1％HgCl2不同处理时间对荷松草外植体灭菌效果的影响
对比例：3：
在对荷松草的组培无菌芽进行增殖培养时，采用4.0-6.0mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.2mg/LIBA(吲哚丁酸)和0.1mg/LNAA(萘乙酸)的激素种类、浓度及组合有不同的效果。在继代培养的激素组合中，6-BA的浓度有着重要的影响。
表26-BA不同浓度对荷松草无菌芽的继代增殖效果
在IBA0.2mg/L+NAA0.1mg/L的生长素组合的条件下，6-BA的适宜浓度为6.0mg/L，此时对荷松草组培无菌芽的增殖效果明显。
对比例4：
将经生根诱导的荷松草组培苗在室内自然光、温条件下炼苗5d，然后移栽入不同的基质组合，每组分别移栽15株，结果如下表3：
表3不同基质组合处理对荷松草组培苗的移栽成活率的影响
这里的普通基质是指细河沙。
为了说明本发明的实施例的技术效果，特别按照实施例4、实施例6、实施例9和实施例12的方案进行荷松草的组织培养育苗，得出外植体的菌污染率、诱导培养的腋芽萌发率、生根培养的生根率、组培苗的移栽成活率情况见表4。其中，实施例4的移栽基质为对比例4中所用的普通基质、珍珠岩和黄泥以1∶1∶1组合的基质。
表4实施例的技术效果比较
| 菌污染率/％ | 腋芽萌发率/％ | 生根率/％ | 移栽成活率/％ | |
| 实施例4 | 6.28 | 90.7 | 93.1 | 60.7 |
| 实施例6 | 6.25 | 91.2 | 93.1 | 93.4 |
| 实施例9 | 1.40 | 94.5 | 96.2 | 94.6 |
| 实施例12 | 1.39 | 94.2 | 99.4 | 97.3 |
由表4可以看出，实施例6与实施例4只是移栽基质不同，但移栽成活率却从60.7％提高到93.4％；实施例9与实施例6的区别在于，在诱导培养之前，荷松草的茎段经0.1％HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡9min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的所述喷雾剂，而外植体的平均污染率从6.25％降低到1.40％，腋芽萌发率从91.2％提高到94.5％，生根率从93.1％提高到96.2％，移栽成活率也有所提高；实施例12在实施例9的基础上，在生根培养之前将无根苗置于第二浸泡液中浸泡，从结果可以看出，实施例12比实施例9的方案其生根率从96.2％提高到99.4％，移栽成活率从94.6％提高到97.3％。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (9)
1.一种荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75％酒精浸泡消毒30-40s后，用0.1％HgCl2浸泡20-22min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
2.如权利要求1所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培养基中诱导培养10-12天得萌发腋芽，培养温度为23-27℃，光照强度为1200Lux，光照时间为10小时/天，其中，
所述诱导培养基的配方为：MS，1.5-4.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.1-0.3mg/L吲哚丁酸，0.05-0.5mg/LGA3，5.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.8。
3.如权利要求2所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养至少一个周期，所述增殖培养的一个周期为30-40天，培养温度为25℃，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述继代培养基的配方为：MS，4.0-6.0mg/L6-苄氨基嘌呤，0.2-1.0mg/LCPPU，0.15-0.3mg/L吲哚丁酸，0.05-0.1mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5.9。
4.如权利要求3所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，所述萌发腋芽从茎段外植体上分割下后，经过3个连续周期的增殖培养。
5.如权利要求3或4中任一所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为21-25℃，光照强度为1500-2000Lux，光照时间为12小时/天，其中，
所述生根培养基的配方为：1/2MS，0.5-1.5mg/L吲哚丁酸，1.0-2.0mg/L萘乙酸，0.1-1.0mg/L多效唑，0.3-0.6g/L活性炭，6.5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6.0。
6.如权利要求5所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗3-5天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗，移栽基质为营养基质、珍珠岩和黄泥中的至少两种，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为50∶25-28∶10-12∶3组成。
7.如权利要求6所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，所述移栽基质为营养基质和珍珠岩以质量比为2∶1混合得到。
8.如权利要求1所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，荷松草的茎段经HgCl2浸泡洗净后在温度为32℃的第一浸泡液中浸泡8-10min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0.5mL的喷雾剂，其中，
所述第一浸泡液的制备方法如下：先将15-17重量份生地和15-17重量份丹皮磨粉后加入其总重量的20倍的水煮沸30-35min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将1-2重量份辣椒素和3-5重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
所述喷雾剂的制备方法如下：将12-15重量份洋葱和17-20重量份蕨菜切段后磨碎，采用体积分数为55％的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提取液加入其体积的5倍的体积分数为75％的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
9.如权利要求5所述的荷松草的组织培养育苗方法，其特征在于，将增殖培养后所得无根苗转入生根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡5-8min，所述第二浸泡液为20-30mL的过氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0.2％的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述过氧化氢银离子复合剂溶液中含有120-130ug银离子。
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