CN105194739A - 一种双层结构的防粘连膜及其制备方法 - Google Patents

一种双层结构的防粘连膜及其制备方法 Download PDF

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Abstract

一种双层结构的防粘连膜及其制备方法，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。制备：（1）将生物可降解的聚合物溶解在有机溶剂中得到聚合物电纺溶液，然后通过静电纺丝法得到聚合物纳米纤维膜；（2）将聚合物纳米纤维膜置于模具底部，然后将配制好的羧甲基纤维素钠CMC、透明质酸HA和聚乙烯醇PVA水溶液倒入模具内，烘干或者冷冻干燥，得具有双层结构的防粘连膜。凝胶膜接触体液瞬间形成凝胶将纤维膜粘附在手术创面，增加了纳米纤维膜的组织粘附性避免了缝合过程，同时纤维膜又保持了其独特微孔结构，在防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。这种方法不仅改变了凝胶膜防粘连效果不佳的缺陷，又增加了电纺纤维膜的组织粘附性能。

Description

一种双层结构的防粘连膜及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医用材料领域，具体涉及一种双层结构的防粘连膜及其制备方法。
背景技术
组织粘连是外科手术后的一个重要问题，也是临床医学中的常见现象。如果术后发生组织粘连有可能导致严重的并发症，如不育症、腹腔疼痛、肠梗阻等，并且会增加再次手术的难度和产生进一步并发症的潜在危险。目前而言，最有效的方法是使用屏障制剂，使手术创面与其他组织或器官隔离从而防止组织粘连。
屏障制剂主要有两种类型：防粘连膜和防粘连液。防粘连液具有操作方便，组织粘附性较好的特点，其接触体液后形成凝胶膜，从而起到防粘连的效果，但其膜厚度不均一，易被体液稀释在体内存在时间短，使其防粘连效果不佳，限制了其在临床的广泛应用。公开号为CN101011606A的中国专利采用羧甲基壳聚糖和磷酸盐缓冲充液为主要原料，水为主要溶剂制备成防粘连冲洗液，但其易被体液稀释，只能在手术后初期起到一定的防粘连作用，后期防粘连效果不佳。相对而言，防粘连膜具有更好的防粘连效果，但是其组织粘附性差一般需要缝合，增加操作难度，因此改善防粘连膜的组织粘附性，是研究的一个热点。公开号为CN203379151U的中国专利，通过独特的设计将防粘连膜制备成一面光滑一面粗糙，通过增大粗糙面与手术创面的摩擦力来防止防粘连膜的移动，然而粗糙面可能会影响创面的愈合，延长愈合时间。
静电纺丝技术制备的纳米纤维膜作为一种新型防粘连膜，其具有独特微孔结构，较大的比表面积，柔软的质地，不仅可以促进细胞的粘附和增殖而且防粘连同时又不阻碍营养物质的传输，但其也具有组织粘附性差的缺陷，一般需要缝合过程。公开号为CN104368049A的中国专利，通过采用粘性较强的氧化纤维素与高分子材料共同电纺，使氧化纤维素粉末存在于高分纤维膜的间隙从而增大膜的组织粘附性，然而氧化纤维素分布于纤维间隙中，将其溶出需要一定的时间，所以不能迅速的粘附于伤口创面。
发明内容
本发明所要解决的技术问题之一是提供一种双层结构的防粘连膜，防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。
本发明所要解决的技术问题之二是提供一种双层结构的防粘连膜的制备方法，制备出来的防粘连膜防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。
为解决上述技术问题之一，本发明的技术方案是：一种双层结构的防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。本发明将防粘连膜制成双层结构即在电纺的纳米纤维膜上覆盖一层粘性较强凝胶膜。凝胶膜接触体液瞬间形成凝胶将纤维膜粘附在手术创面，增加了纳米纤维膜的组织粘附性避免了缝合过程，同时纤维膜又保持了其独特微孔结构，在防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。这种方法不仅改变了凝胶膜防粘连效果不佳的缺陷，又增加了电纺纤维膜的组织粘附性能。
作为改进，所述聚合物纳米纤维膜的材料为聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA、聚己内酯PCL、聚乳酸-乙醇酸共聚物PLGA、聚己内酯-羟基乙酸共聚物PCGA、聚乳酸-乙二醇PELA共聚物、聚乙二醇中的一种或多种，聚合物材料分子量为5-20kDa。
作为改进，所述凝胶膜的材料为羧甲基纤维素钠CMC、透明质酸HA和聚乙烯醇PVA中的一种或多种；羧甲基纤维素钠CMC的粘度范围为300-1200mpa.s，HA的分子量为400-1000kDa，聚乙烯醇PVA的分子量为80-100kDa。
为解决上述技术问题之二，本发明的技术方案是：一种双层结构的防粘连膜的制备方法，包括以下步骤：
（1）将生物可降解的聚合物溶解在有机溶剂中得到聚合物电纺溶液，然后通过静电纺丝法得到聚合物纳米纤维膜；
（2）将聚合物纳米纤维膜置于模具底部，然后将配制好的羧甲基纤维素钠CMC、透明质酸HA和聚乙烯醇PVA水溶液倒入模具内，流延均匀，在室温下自然干燥3-5h后，放入40-80℃烘箱中烘干或者冷冻干燥，得具有双层结构的防粘连膜。本发明结合了静电纺丝技术和流延成膜技术，将防粘连膜制成双层结构即在电纺的纳米纤维膜上覆盖一层粘性较强凝胶膜。凝胶膜接触体液瞬间形成凝胶将纤维膜粘附在手术创面，增加了纳米纤维膜的组织粘附性避免了缝合过程，同时纤维膜又保持了其独特微孔结构，在防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。这种方法不仅改变了凝胶膜防粘连效果不佳的缺陷，又增加了电纺纤维膜的组织粘附性能。
作为改进，生物可降解的聚合物材料为聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA、聚己内酯PCL、聚乳酸-乙醇酸共聚物PLGA、聚己内酯-羟基乙酸共聚物PCGA、聚乳酸-乙二醇PELA共聚物、聚乙二醇中的一种或多种，聚合物材料分子量为5-20kDa。
作为改进，所述有机溶剂为氯仿、丙酮、二氯甲烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇中的一种或多种。
作为改进，所述生物可降解的聚合物浓度为5%-30%(m/v)。
作为改进，静电纺丝方法为多喷头电纺工艺，其电压为10-30KV；流速为1.0-15ml/h，接收距离为5-25cm；纺丝温度为20-50℃；其接收器为滚轴接收器，转轴速度为1.0-7.0m/min；其针头型号为17G、18G、19G、20G、21G、22G、23G，烘干温度为30-50℃。
作为改进，所述羧甲基纤维素钠CMC的浓度为2%-5%；透明质酸HA的浓度为1%-4%；聚乙烯醇PVA的浓度为4%-7%，防粘连膜的厚度为0.04-0.4mm。
作为改进，制备出防粘连膜后，采用辐射灭菌或环氧乙烷气体灭菌对其进行消毒。
本发明与现有技术相比所带来的有益效果是：
本发明结合了静电纺丝技术和流延成膜技术，将防粘连膜制成双层结构即在电纺的纳米纤维膜上覆盖一层粘性较强凝胶膜。凝胶膜接触体液瞬间形成凝胶将纤维膜粘附在手术创面，增加了纳米纤维膜的组织粘附性避免了缝合过程，同时纤维膜又保持了其独特微孔结构，在防粘连的同时又不阻碍营养物质的传输。本发明不仅改变了凝胶膜防粘连效果不佳的缺陷，又增加了电纺纤维膜的组织粘附性能。
附图说明
图1为实施例1中聚乳酸纤维膜层的SEM图。
图2为实施例1中凝胶层的SEM图。
图3为实施例1中拉伸强度图。
具体实施方式
下面结合说明书附图对本发明作进一步说明。
实施例1
PLA/CMC防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。如图1所示，聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；如图2所示，凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PLA，加入氯仿和丙酮的混合溶剂中，使PLA的浓度为0.12g/ml，氯仿和丙酮的混合比例为9:1(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLLA电纺溶液，备用；
(2)将粘度为800-1200mpa.s的CMC加入到去离子水中，使CMC浓度为0.03g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用19G针头，调节电压为20KV，流速为2.5ml/h，纺丝温度为25℃，针尖与接收板的距离为13cm，接收转速为3m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.02mm的模具下方，倒入3-4mlCMC凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，40℃下真空干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用环氧乙烷气体杀菌消毒。
得到的PLA/CMC双层结构防粘连膜厚度为0.12mm，其纤维层纤维直径为500±35nm，拉伸强度为7.87MPa，如图3所示其拉伸率为9.53%，降解周期为12周。
实施例2
PLGA/CMC防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PLGA(LA:GA=85:15)，加入氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，使PLGA的浓度为0.22g/ml，氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合比例为1:1(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLGA电纺溶液，备用；
(2)将粘度为800-1200mpa.的CMC加入到去离子水中，使CMC浓度为0.02g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLGA电纺溶液装入注射器中，静电纺丝机的5喷头装置上选用21G针头，调节电压为15KV，流速为3.5ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收器的距离为15cm，接收转速为3m/min，连续电纺2h后，40℃真空干燥，得到厚度为0.08-0.10mm的纳米纤维膜；
(4)将(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlCMC凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干7h后取下模具，40℃下真空干燥；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用环氧乙烷气体杀菌消毒后。
得到的PLGA/CMC双层结构防粘连膜厚度为0.10-0.13mm，其纤维层纤维直径为450±45nm，拉伸强度为6.77MPa，拉伸率为15.23%，降解周期为10周。
实施例3
PCL/CMC防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=120kDa的PCL，加入氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，使PCL的浓度为0.08g/ml，氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合比例为2:1(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PCL电纺溶液，备用；
(2)将粘度为800-1200mpa.的CMC，加入到去离子水中，使CMC浓度为0.03g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PCL电纺溶液装入注射器中，静电纺丝机的5喷头装置上选用18G针头，调节电压为12KV，流速为5.0ml/h，纺丝温度为30℃，针尖与接收器的距离为15cm，接收转速为3m/min，连续电纺6h后，40℃真空干燥，得到厚度为0.09-0.12mm的纳米纤维膜；
(4)将(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.02mm的模具下方，倒入3-4mlCMC凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干7h后取下模具，40℃下真空干燥；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用环氧乙烷气体杀菌消毒。
得到的PCL/CMC双层结构防粘连膜厚度为0.10-0.13mm，其纤维层纤维直径为493±55nm，拉伸强度为8.57MPa，拉伸率为17.23%，降解周期为14周。
实施例4
PLA/HA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=200kDa的PLA，加入氯仿和N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂中，使PLA的浓度为0.07g/ml，氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合比例为6:4(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLA电纺溶液，备用；
(2)将分子量为1000kDa的HA加入到去离子水中，使HA浓度为0.02g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用17G针头，调节电压为20KV，流速为4.0ml/h，纺丝温度为35℃，针尖与接收板的距离为17cm，接收转速为3m/min，连续电纺7h后，将膜从铝箔上剥离；
(4)将(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.1mm的模具下方，倒入3-4mlHA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干7h后取下模具，冷冻干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒。
得到的PLA/HA双层结构防粘连膜厚度为0.20mm，其纤维层纤维直径为600±75nm，拉伸强度为5.77MPa，拉伸率为11.47%，降解周期为16周。
实施例5
PLGA/HA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=70kDa的PLGA，加入氯仿和丙酮混合溶剂中，使PLGA的浓度为0.25g/ml，氯仿和丙酮的混合比例为1:1(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLGA电纺溶液，备用；
(2)将分子量为800kDa的HA加入到去离子水中，使HA浓度为0.03g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用21G针头，调节电压为15KV，流速为3.0ml/h，纺丝温度为35℃，针尖与接收板的距离为16cm，接收转速为3m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.15-0.2mm的纳米纤维膜；
(4)将(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.1mm的模具下方，倒入3-4mlHA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干6h后取下模具，冷冻干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒后。
得到的PLGA/HA双层结构防粘连膜厚度为0.22mm，其纤维层纤维直径为350±45nm，拉伸强度为7.25MPa，拉伸率为14.47%，降解周期为8周。
实施例6
PCL/HA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=100kDa的PCL加入丙酮溶剂中，使PCL的浓度为0.09g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLGA电纺溶液，备用；
(2)将分子量为600kDa的HA加入到去离子水中，使HA浓度为0.04g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PCL电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用19G针头，调节电压为15KV，流速为4.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为12cm，接收转速为4m/min，连续电纺3h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.14-0.16mm的纳米纤维膜；
(4)将(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.1mm的模具下方，倒入3-4mlHA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，冷冻干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒。
得到的PCL/HA双层结构防粘连膜厚度为0.20mm，其纤维层纤维直径为440±65nm，拉伸强度为9.25MPa，拉伸率为17.47%，降解周期为8周。
实施例7
PCL-PEG/HA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=80kDa的PCL和Mw=6kDa的PEG加入体积比为4:1的二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，使PCL的浓度为0.12g/ml，PEG的浓度为0.03g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PCL-PEG电纺溶液，备用；
(2)将分子量为400kDa的HA加入到去离子水中，使HA浓度为0.03g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PCL-PEG电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用18G针头，调节电压为20KV，流速为4.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为15cm，接收转速为4m/min，连续电纺4h后，将膜从铝箔上；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlHA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，冷冻干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒后。
得到的PCL-PEG/HA双层结构防粘连膜厚度为0.22mm，其纤维层纤维直径为537±75nm，拉伸强度为8.45MPa，拉伸率为20.55%，降解周期为9周。
实施例8
PCL-PEG/CMC防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PCL和Mw=6kDa的PEG加入体积比为4:1的二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，使PCL的浓度为0.09g/ml，PEG的浓度为0.06g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PCL-PEG电纺溶液，备用；
(2)将粘度为800-1200mpa的CMC加入到去离子水中，使CMC浓度为0.04g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中PCL-PEG电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用18G针头，调节电压为18KV，流速为4.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为15cm，接收转速为4m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.15-0.17mm的纳米纤维膜；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlCMC凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，40℃真空干燥得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒后。
得到的PCL-PEG/CMC双层结构防粘连膜厚度为0.23mm，其纤维层纤维直径为547±65nm，拉伸强度为7.45MPa，拉伸率为14.55%，降解周期为10周。
实施例9
PLA-PEG/HA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PLA和Mw=6kDa的PEG加入体积比为2:1的氯仿和N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂中，使PLA的浓度为0.10g/ml，PEG的浓度为0.06g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLA-PEG电纺溶液，备用；
(2)将分子量为800kDa的HA加入到去离子水中，使HA浓度为0.04g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA-PEG电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用18G针头，调节电压为16KV，流速为5.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为17cm，接收转速为3m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.14-0.18mm的纳米纤维膜；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlHA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，冷冻干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒。
得到的PCL-PEG/HA双层结构防粘连膜厚度为0.24mm，其纤维层纤维直径为577±75nm，拉伸强度为7.93MPa，拉伸率为14.33%，降解周期为10周。
实施例10
PLA-PEG/CMC防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PLA和Mw=6kDa的PEG加入体积比为2:1的氯仿和N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，使PLA的浓度为0.12g/ml，PEG的浓度为0.04g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLA-PEG电纺溶液，备用；
(2)将粘度为800-1200mpa的CMC加入到去离子水中，使CMC浓度为0.03g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中PLA-PEG电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用18G针头，调节电压为17KV，流速为4.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为15cm，接收转速为4m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.14-0.16mm的纳米纤维膜；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlCMC凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，40℃真空干燥得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒。
得到的PLA-PEG/CMC双层结构防粘连膜厚度为0.27mm，其纤维层纤维直径为547±65nm，拉伸强度为6.33MPa，拉伸率为12.41%，降解周期为10周。
实施例11
PLA/PVA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=80kDaPLA，加入氯仿和丙酮的混合溶剂中，使PLA的浓度为0.12g/ml，氯仿和丙酮的混合比例为9:1(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLA电纺溶液，备用；
(2)将分子量为80kDa的PVA加入到去离子水中，使PVA浓度为0.05g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用19G针头，调节电压为18KV，流速为5.0ml/h，纺丝温度为25℃，针尖与接收板的距离为17cm，接收转速为2m/min，连续电纺2h后，将膜从铝箔上剥离；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.02mm的模具下方，倒入3-4mlPVA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，40℃下真空干燥，得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用环氧乙烷气体杀菌消毒。
得到的PLA/PVA双层结构防粘连膜厚度为0.14mm，其纤维层纤维直径为635±75nm，拉伸强度为6.947MPa，拉伸率为11.8%，降解周期为20周。
实施例12
PLA-PEG/PVA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=90kDa的PLA和Mw=6kDa的PEG加入体积比为1:1的氯仿和N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，使PLA的浓度为0.10g/ml，PEG的浓度为0.04g/ml，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLA-PEG电纺溶液，备用；
(2)/将分子量为90kDa的PVA加入到去离子水中，使PVA浓度为0.07g/ml，室温下搅拌溶解，并静置过夜消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLA-PEG电纺溶液装入注射器中，并将其连接在5喷头装置上选用18G针头，调节电压为15KV，流速为4.5ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收板的距离为15cm，接收转速为3m/min，连续电纺5h后，将膜从铝箔上剥离，40℃真空干燥，得到厚度为0.15mm的纳米纤维膜；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlPVA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干5h后取下模具，40℃真空干燥得到具有双层结构的防粘连膜；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用紫外辐射杀菌消毒。
得到的PLA-PEG/PVA双层结构防粘连膜厚度为0.20mm，其纤维层纤维直径为653±65nm，拉伸强度为7.945MPa，拉伸率为11.41%，降解周期为14周。
实施例13
PLGA/PVA防粘连膜，包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。聚合物纳米纤维膜具有较大的比表面积、机械强度以及较好的防粘连效果；凝胶膜可以增加防粘连膜组织粘附性能。包括以下制备方法：
(1)将Mw=70kDa的PLGA(LA:GA=50:50)加入氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，使PLGA的浓度为0.24g/ml，氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合比例为3:2(体积比)，室温下磁力搅拌使其完全溶解，得到均一透明的PLGA电纺溶液，备用；
(2)将分子量为100kDa的PVA加入到去离子水中，使CMC浓度为0.06g/ml，室温下搅拌溶解，并静置5h消泡，得到透明粘稠的凝胶溶液；
(3)将步骤(1)中的PLGA电纺溶液装入注射器中，静电纺丝机的5喷头装置上选用21G针头，调节电压为18KV，流速为3.0ml/h，纺丝温度为40℃，针尖与接收器的距离为16cm，接收转速为2.5m/min，连续电纺2h后，40℃真空干燥，得到厚度为0.08-0.10mm的纳米纤维膜；
(4)将步骤(3)中的纳米纤维膜置于厚度为0.04mm的模具下方，倒入3-4mlPVA凝胶溶液，用刮刀将凝胶刮均匀，自然晾干7h后取下模具，40℃下真空干燥；
(5)将双层结构的防粘连膜封装后，用环氧乙烷气体杀菌消毒后。
得到的PLGA/PVA双层结构防粘连膜厚度为0.12-0.15mm，其纤维层纤维直径为459±74nm，拉伸强度为7.45MPa，拉伸率为17.23%，降解周期为12周。
防粘连效果评价：
采用SD大鼠作为动物模型，将88只SD大鼠随机分为4组，分别设计为正常对照组，模型对照组，PLA/HA防粘连膜组和PLGA/CMC防粘连膜组，除正常对照组外，其余各组均采用多因素法制作大鼠腹腔术后粘连模型，PLGA/CMC膜组的CMC凝胶面和PLA/HA防粘连膜的HA凝胶面贴覆于创面，模型对照组创面不处理，并在不同时间点测定血常规、血浆肝肾功能和纤维蛋白原含量，分别在术后1、2、4、6、12周时，处死动物并评定腹腔粘连程度以及膜的降解情况，并按Hobson分级法进行观察分级(Ⅰ级：无粘连形成；Ⅱ级：1-2处局限性粘连；Ⅲ级：弥漫性粘连，但不广泛；IV级：弥漫性广泛性粘连，但较易松解；V级：弥漫广泛致密的粘连，难于松解)。
结果表明：PLGA/CMC防粘连组能紧粘于创面，起到很好的防粘连效果，无粘连产生，属于I级，且膜从第1周后开始有降解趋势，12周内完全降解。PLA/HA防粘连组能粘附与创面，但有位移出现，防粘连效果较好，无粘连产生，属于I级，膜从第2周后有开始降解，12周内未完全降解。根据对纤维蛋白原含量的检测，发现防粘连膜组能够减少纤维蛋白原的渗出，抑制胶原纤维组织的增生，从而有有效的防止粘连的产生。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种双层结构的防粘连膜，其特征在于：包括位于底层的可生物降解的聚合物纳米纤维膜和位于表层的凝胶膜。
2.根据权利要求1所述的一种双层结构的防粘连膜，其特征在于：所述聚合物纳米纤维膜的材料为聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA、聚己内酯PCL、聚乳酸-乙醇酸共聚物PLGA、聚己内酯-羟基乙酸共聚物PCGA、聚乳酸-乙二醇PELA共聚物、聚乙二醇中的一种或多种，聚合物材料分子量为5-20kDa。
3.根据权利要求1所述的一种双层结构的防粘连膜，其特征在于：所述凝胶膜的材料为羧甲基纤维素钠CMC、透明质酸HA和聚乙烯醇PVA中的一种或多种；羧甲基纤维素钠CMC的粘度范围为300-1200mpa.s，HA的分子量为400-1000kDa，聚乙烯醇PVA的分子量为80-100kDa。
4.一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将生物可降解的聚合物溶解在有机溶剂中得到聚合物电纺溶液，然后通过静电纺丝法得到聚合物纳米纤维膜；
（2）将聚合物纳米纤维膜置于模具底部，然后将配制好的羧甲基纤维素钠CMC、透明质酸HA和聚乙烯醇PVA水溶液倒入模具内，流延均匀，在室温下自然干燥3-5h后，放入40-80℃烘箱中烘干或者冷冻干燥，得具有双层结构的防粘连膜。
5.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：生物可降解的聚合物材料为聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA、聚己内酯PCL、聚乳酸-乙醇酸共聚物PLGA、聚己内酯-羟基乙酸共聚物PCGA、聚乳酸-乙二醇PELA共聚物、聚乙二醇中的一种或多种，聚合物材料分子量为5-20kDa。
6.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为氯仿、丙酮、二氯甲烷、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇中的一种或多种。
7.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：所述生物可降解的聚合物浓度为5%-30%(m/v)。
8.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：静电纺丝方法为多喷头电纺工艺，其电压为10-30KV；流速为1.0-15ml/h，接收距离为5-25cm；纺丝温度为20-50℃；其接收器为滚轴接收器，转轴速度为1.0-7.0m/min；其针头型号为17G、18G、19G、20G、21G、22G、23G，烘干温度为30-50℃。
9.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：所述羧甲基纤维素钠CMC的浓度为2%-5%；透明质酸HA的浓度为1%-4%；聚乙烯醇PVA的浓度为4%-7%，防粘连膜的厚度为0.04-0.4mm。
10.根据权利要求4所述的一种双层结构的防粘连膜的制备方法，其特征在于：制备出防粘连膜后，采用辐射灭菌或环氧乙烷气体灭菌对其进行消毒。
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