CN105188685A - 用于制备脂质纳米颗粒的方法和装置 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了使用多口多支管制备脂质体、盘状脂质和其它脂质纳米颗粒的方法,其中含有有机溶剂的脂质溶液流与两股或更多股水性溶液(如缓冲液)流混合。在一些方面,至少一些脂质溶液流和水性溶液流的方向不彼此直接相反。因而,所述方法不要求稀释有机溶剂作为额外步骤。在一些实施方式中,所述溶液中的一种还可含有活性药物成分(API)。本发明提供了具有不同脂质配方和不同有效载荷的稳健的脂质体加工方法。可通过改变多支管口的口径和数量并通过选择脂质溶液和水性溶液的流量或流速来控制粒径、形态和制造规模。
Description
本申请要求于2013年3月15日递交的美国临时专利申请61/791,054的优先权,其61/791,054的全部内容并入本文作为参考。
技术领域
本发明的技术大体上涉及脂质体,更具体地,涉及封装活性药物成分的脂质体。
背景技术
脂质体技术在临床治疗和科学研究中被用于药物递送。在小规模实验室研究中大量使用目前制备脂质体的方法。示例性的方法包括干燥的脂质膜的再水合/挤出法、洗涤剂透析法和乙醇蒸发及稀释法。
并入本文作为参考的美国专利7,901,708和美国专利公开2007/0042021涉及脂质体制备的两步法:(i)使用T型连接器将脂质-有机溶剂溶液与水性溶液混合;(ii)用水性溶液将混合物稀释。
目前可行的方法具有与规模可扩展性、低可再现性和产物不均匀性有关的难题。存在对制备用于药物递送的脂质体的改进方法的需求。
发明内容
本发明提供用于制备脂质纳米颗粒(LNP)的方法。在优选的方面中,所述方法包含:
a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流,和ii)通过多支管的第二组一个或多个进口引入一股或多股水性溶液流,从而将所述脂质溶液与所述水性溶液混合以产生LNP溶液;和
b)通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液。
在上述方法中,至少一个脂质溶液进口与至少一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基本相似的角度。换句话,至少一股脂质溶液流与至少一股水性溶液流以小于约180°的角度相撞。因而,在某些方面,所述方法不包括T型连接器。
本发明还提供了通过上述方法制备的LNP溶液、使用所述LNP溶液制备的药物组合物。
本发明进一步提供用于实施所述方法的装置,如以下将详细描述的多支管系统。
本发明还提供了用于制备含有活性药物成分(“API”)的LNP的方法,其中以单一混合步骤制备该含API的LNP。
根据示例性的实施方式,本发明提供了用于制备封装API的脂质体的装置,所述装置包括多支管,所述多支管可具有混合室、与所述室相连的至少一个脂质溶液进口和与所述室相连的多个水性溶液进口。
本发明的另一个实施方式提供了用于制备封装活性药物成分(API)的脂质体的方法,所述方法可包括(i)在脂质溶液贮液器中提供可包括有机溶剂和脂质的脂质溶液、和(ii)在水性溶液贮液器中提供包含水和缓冲剂的水性溶液的步骤;和提供可包括(i)混合室;(ii)与所述室相连的至少一个脂质溶液进口;和(iii)与所述室相连的多个水性溶液进口的多支管的步骤;随着每种溶液流都被引入混合室中,将脂质溶液与水性溶液混合以产生脂质体的步骤;和将活性药物成分封装进脂质体中的步骤。
在可选择的实施方式中,本发明提供了由本发明的方法制备的脂质体。
本发明还提供了脂质体,其中所述脂质体封装API,并且所述脂质体的平均直径为约10nm至300nm。
本发明通过改变所述多支管的口径、数量和几何形状并通过选择脂质溶液和水性溶液的流量或流速能够控制LNP的尺寸、尺寸分布、形态和制造规模。当参照附图和以下描述时,本技术的这些优点和其它优点将变得显而易见。
附图说明
图1(图A和B)说明了用于制备封装API的脂质体的示例性的5口多支管。
图2显示了用于制备封装API的示例性方法的流程图。
图3为本发明的一个实施方式的示意图,其中用由5口示例性多支管制备的脂质体封装不溶性API。
图4(图A至D)显示了对于孔径(poresize)为1mm(图A和B)和1.6mm(图C和D)的多支管,流速和多支管孔径对脂质体粒径的影响。
图5是用5口示例性多支管制备并负载有多柔比星的脂质体的Cryo-TEM图像。
图6显示了流量和多支管孔径对siRNA脂质体的尺寸(图A和C)、多分散性指数(图B和D)以及脂质体的Cryo-TEM图像(图E)的影响。
图7A显示在40ml/min的流量下产生的单层脂质体的Cryo-TEM图像。
图7B显示在5ml/min的流量下产生的盘状脂质(lipiddisc)的Cryo-TEM图像。
图8A至8D显示对于在本发明的7口多支管中进口和出口的数量和方向的可替代的示例性实施方式。
具体实施方式
尽管本申请可以多种不同形式的实施方式实施,但在附图中显示并在此处详细描述几个具体的实施方式,同时能够理解本公开被认为是该技术原则的示例而非旨在将本发明限制为所说明的实施方式。
定义
术语“流量(flowrate)”是指进料到进口的脂质溶液或水性溶液的体积。
术语“流速(flowvelocity)”是指在进口中液体的流动速率,例如,所述速率按V=R/6000A计算,其中V(m/s)为流速,R(ml/min)是流量,A(cm2)为进口孔的截面积。
术语“脂质纳米颗粒”或LNP是指脂质体(如单层或多层)、固体脂质颗粒或盘状脂质。在实施例中显示了示例性的脂质体和盘状脂质。
术语“阳离子脂质”是指在约pH3至pH9下携带净正电荷的脂质。
如此处所用,术语“阴离子脂质”是指在约pH3至pH9下携带净负电荷的脂质或胆固醇衍生物。
术语“聚乙二醇化(pegylated)脂质”是指与聚乙二醇聚合物结合的脂质。
术语“中性脂质”是指在约pH3至pH9下不携带净电荷的脂质。
术语“脂质锚定分子”是指具有脂质锚或胆固醇锚并因而可以进入脂质体的分子。
术语“活性药物成分”或API是指用于治疗疾病或预防疾病(疫苗)的药物活性成分。API也可指预期用于疾病诊断的成分。
图1中的图A和B说明了本发明的实施方式。一种五口多支管被显示具有一个脂质溶液进口、三个水性溶液进口和一个脂质体出口。图1中的图A是该多支管的俯视图,而图1中的图B是该多支管的侧视图。图1显示了多支管混合室110与一个脂质溶液进口120相连,脂质溶液通过该进口120进入混合室。三个水性溶液进口130也与该混合室相连,并为水性溶液进入该室提供通道。该图表明,脂质溶液进口和水性溶液进口可具有被标为140的内径。脂质溶液150进入脂质溶液进口,同时水性溶液160进入水性溶液进口,并且LNP180通过LNP出口170流出。
图2为说明可用于实施本发明技术的实施方式的示例性方法的流程图。如图2所示,该流程图提供了包含有机溶剂和脂质的脂质溶液210以及包含水和缓冲剂的水性溶液220。脂质溶液或水性溶液可进一步包括溶解的API。脂质溶液和水性溶液可同时进入多支管230的混合室。在一些实施方式中,所述溶液的一种或另一种或者两种溶液都具有由泵装置提供的正压力。将脂质溶液和水性溶液在混合室中混合以产生LNP溶液240。本发明的方法还提供了将API封装进LNP中的步骤。当API溶于脂质溶液或水性溶液中时,封装API的步骤可在混合室中形成LNP期间发生。在其它实施方式中,可通过试剂从脂质体外部的扩散将API加入LNP中。在一些实施方式中,本发明的方法包括步骤c):将API加载于从LNP溶液中回收的LNP。
图3显示了本发明的一个实施方式的示意图,其中水不溶性API被溶于脂质溶液中。贮液器310中的水性溶液可通过导管330被转送到多支管370中。同时,可通过导管360将贮液器340中的含有溶解的API的脂质溶液转送到多支管370中。可使用泵320和350来调节并监测每种溶液的流量。此前如图1中所示,水性溶液通过水性溶液进口进入多支管,且脂质溶液通过脂质溶液进口进入多支管。水性溶液和脂质溶液在多支管中的混合导致形成脂质纳米颗粒380,其通过脂质纳米颗粒出口流出多支管,如图1中所示。
图4(图A和B)显示了使用具有直径为1mm的进口和出口的5口多支管制造的含有多柔比星HCl的脂质体的结果。在1ml/min的流量下,该脂质体具有约150nm的平均直径。随着流量的增加,脂质体的直径减小,直到其达到约50nm的平台,此时流量为20至50ml/min。图B显示了多分散性指数(“PDI”)(即颗粒尺寸分布的测量),在20至50ml/min的流量下为约0.2。当流量低于10ml/min时,PDI增加至约0.3。图4(图C和D)显示了用具有直径为1.6mm的口的5口多支管制造的脂质体的结果。图C显示在5ml/min的流量下,脂质体具有约120nm的平均直径。随着流量增加至60ml/min,直径大致为线性减小。图D显示了0.35的PDI,其相对独立于流量。
图5显示了负载有多柔比星的脂质体的Cryo-TEM图像。该脂质体通过具有1.0mm直径的口的5口多支管制备。该制剂与临床使用的抗癌脂质体药物多柔比星的Doxil制剂基本相同。如图所示,脂质形成了单层脂质体,其中多柔比星在内部形成晶体。
图6显示了由含有siRNA的脂质体获得的结果。图A和B表明了由具有1mm直径的口的5口多支管制造的脂质体的结果。在5ml/min的流量下,脂质体具有约160nm的平均直径。当流量为20ml/min时脂质体的直径减小,并且当流量进一步增加时该直径基本不变。PDI为0.008,相对独立于流量。图C和D表明了由具有1.6mm直径的口的5口多支管制造的脂质体的结果。图C显示了在5ml/min的流量下,脂质体具有约150nm的平均直径。当流量增至10ml/min时该尺寸减小至约90nm。流量的进一步增加并没有导致纳米颗粒尺寸的大幅变化。图D显示了在5至50ml/min范围内的流量下,PDI为约0.1至0.2。图E显示了siRNA脂质体的Cryo-TEM图像。如图所示,颗粒尺寸是均匀的,而其形态并非单层或多层。
图7A至7B显示了流量对脂质颗粒的形态的影响。图7A显示在40
ml/min的流量下产生的单层脂质体的Cryo-TEM图像(孔径1mm;5口多支管),其中产生直径为81.1nm和PDI为0.021的颗粒。脂质体内部的晶体为所负载的多柔比星。图7B显示了在5ml/min的流量下产生的盘状脂质的Cryo-TEM图像(孔径1mm;5口多支管),其中主要产生直径为约60nm且脂质双分子层厚度为约6nm的盘状脂质。
图8A至8D显示了就本发明的7口多支管中进口和出口的数量和方向而言的替代的示例性实施方式,将其用于实施例8中。箭头指示口中流动的方向,而钝化线指示在预制多支管中密封的未使用的口。
用于制备封装活性药物成分的脂质体的装置
本发明提供了用于进行本发明的方法的装置,如本文所述的多支管系统。
在一些方面中,本技术提供了用于制备封装API的LNP的装置,所述装置包括多支管,所述多支管可具有混合室、与混合室相连的至少一个脂质溶液进口;和与所述室相连的多个水性溶液出口。
在优选的实施方式中,该装置可包括与所述室相连的LNP溶液出口。
优选地,该装置可包括通过脂质溶液导管与脂质溶液进口相连的脂质溶液贮液器和通过水性溶液导管与水性溶液进口相连的水性溶液贮液器。
脂质溶液与水性溶液的进口以及脂质体溶液的出口可具有相同或不同的内径。优选地,进口和出口可具有约0.1mm至约10mm的内径。更优选地,所述口具有约0.15mm至约5mm的内径。
在一些实施方式中,混合室位于导管的转换点,并且其自身可由两条以上彼此穿过或相交的导管形成,而并不对导管的形状做出任何改变。例如,可通过在固体材料中钻出两条以上全部在转换点相交的贯通型导管。此外,可密封一条或多条导管,以使流体不能流过导管。该密封可位于相交点之前不远处或远离相交点。例如,在图8A、8C和8D中说明了密封的导管。
在一些实施方式中,一个多支管可含有一个或更多的混合室。例如,一组进口在一个室相交,另一组进口在另一室相交,且两室通过导管与第三混合室相连,所述第三混合室连接至出口。
优选地,使用泵以向脂质溶液和水性溶液引入正流。所述泵可为管道泵或注射泵。
典型地,混合室可连接至2至约20个水性溶液进口。优选地,可存在3至约11个该口、3至约12个该口。更优选地,存在3至约10个、或3至约7个水性溶液进入口。混合室也可连接至1至约5个脂质溶液进口。优选地,存在1至约3个脂质溶液进口。最优选地,存在1或2个脂质溶液进口。在优选的实施方式中,混合溶液连接至少1个(如1、2、3、4或5个)脂质溶液口和至少2个(如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)水性溶液进口。
混合室进一步连接至1至约3个用于控制颗粒尺寸的脂质体溶液出口,优选地,存在1个(如1、2或3个)出口。
在某些方面,脂质溶液进口和水性溶液的进口之间的角度为约18°至约180°。优选地,所述角度为约24°至约180°,更优选约30°至约180°。在一些实施方式中,至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度不是180°或基本相似的角度。例如,至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度为约120°或更小、约90°或更小,例如图8A至8D中所示。口之间的角度为将各溶液流引导到混合室中的角度。
脂质溶液和水性溶液可具有相同的穿过多支管的流量。或者,所述溶液可具有不同的流量。脂质溶液和水性溶液的流量可为1ml/min至约6,000ml/min,如约1ml/min至约1,500ml/min。优选地,流量可为约5ml/min至约1,000ml/min,如约5ml/min至约400ml/min。更优选地,所述流量可为约20ml/min至约600ml/min的流量或约10ml/min至约300ml/min的流量。在一些实施方式中,根据进口的尺寸调节流量以获得所需的LNP尺寸、形态、PDI和制造规模。
制备LNP的方法
本发明提供了一种用于制备脂质纳米颗粒(LNP)的方法,所述方法包含:
a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流,和ii)通过多支管的第二组一个或多个进口引入一股或多股水性溶液流,从而将所述脂质溶液与所述水性溶液混合以产生LNP溶液;和
b)通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液;
其中至少一个脂质溶液进口与至少一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基本相似的角度。在一些方面,至少一股脂质溶液流与至少一股水性溶液流以小于约180°的角度相撞。因而,在一些方面,所述方法不包括T型连接器。
在一些实施方式中,至少一个脂质溶液与一个水性溶液进口之间的角度为约120°或更小,如115°或更小,100°或更小,90°或更小,80°或更小,72°或更小,60°或更小,45°或更小,30°或更小,18°或更小。
在一些实施方式中,通过至少两个进口引入步骤ii)中的水性溶液,如至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个进口。在一些实施方式中,通过至少3个但不多于11个进口引入步骤ii)中的水性溶液,例如至少3个但不多于7个、至少3个但不多于5个、至少4个但不多于11个、至少5个但不多于11个、至少6个但不多于11个进口。
在一些实施方式中,至少两个(如3个、4个、5个、6个、7个等)水性溶液进口和至少一个(如2个、3个、4个、5个等)脂质溶液进口在同一平面内。
在一些实施方式中,至少一个(如2个)出口与进口的平面基本垂直。在其它实施方式中,至少一个(如2个、3个、4个、5个等)出口与进口的平面基本不垂直。
在一些实施方式中,至少两个(如3个、4个、5个、6个、7个等)水性溶液进口和至少一个(如2个、3个、4个、5个等)脂质溶液进口不在同一平面内。
在一些实施方式中,被引入至少一个进口的水性溶液与被引入另一进口的第二水性溶液不同。
在一些实施方式中,水性溶液和/或脂质溶液包含活性药物成分(API)。
在一些实施方式中,步骤a)进一步包含通过多支管的一个或多个进口引入iii)一股或多股非水性溶液流。
本发明的另一个实施方式提供了用于制备封装活性药物成分(API)的LNP的方法,所述方法可包括(i)在脂质溶液贮液器中提供可包括有机溶剂和脂质的脂质溶液、和(ii)在水性溶液贮液器中提供包含水和缓冲剂的水性溶液的步骤;和提供可包括(i)混合室;(ii)与所述室相连的至少一个脂质溶液进口;和(iii)与所述室相连的多个水性溶液进口的多支管的步骤;随着每种溶液流都被引入混合室中,将脂质溶液与水性溶液混合以产生LNP的步骤;和将活性药物成分封装进LNP中的步骤。
在该方法的一个实施方式中,脂质溶液可包括待被封装的API。在另一个实施方式中,水性溶液可包括API。
将药物封装进脂质体中的步骤可与混合步骤同时发生,此时药物被溶解于脂质溶液或水性溶液中。不受理论束缚,据信当水性溶液和脂质溶液接触时立即形成LNP。由脂质溶液或水性溶液携带的API可通过API与脂质之间的亲脂性相互作用、或静电相互作用、或两者皆有而被封装进LNP中。
或者,可通过扩散或其它负载方法将API加入空LNP中,如图2所示。
以上描述了该方法的示例性多支管,并在图1中示出。
脂质溶液和水性溶液
本发明使用了脂质溶液和水性溶液。脂质溶液可包含有机溶剂。有机溶剂可为水混溶性溶剂。优选地,水混溶性溶剂选自乙醇、甲醇、DMSO和异丙醇。最优选地,有机溶剂为乙醇。
脂质溶液可包括脂质混合物。脂质混合物优选包括胆固醇。
脂质混合物可还包括阳离子脂质。阳离子脂质可为但不限于,N,N-二油基-N,N-二甲基氯化铵(“DODAC”);N-(2,3-二油烯氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化铵(“DOTMA”);N-(2,3-二油烯氧基)丙基)-N,N-二甲基氯化铵(“DODMA”);N,N-二硬脂基-N,N-二甲基溴化铵(“DDAB”);N-(2,3-二油酰氧基)丙基)-N,N,N-三甲基氯化铵(“DOTAP”);N-(2,3-二油酰氧基)丙基)-N,N-二甲基氯化铵(“DODAP”);3-(N-(N’,N’-二甲基氨基乙烷)氨甲酰基)胆固醇(“DC-Chol”);N-(1,2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N,N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(“DMRIE”);1,2-二亚油氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(DLinDMA);1,2-二硬脂氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(DSDMA);1,2-二亚麻基氧基-N,N-二甲基-3-氨基丙烷(DLenDMA);2-{4-[(3b)-胆甾-5-烯-3-基氧基]丁氧基}-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)]-十八-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(CLinDMA)。
在一些实施方式中,脂质的混合物可包括阴离子脂质。阴离子脂质可为但不限于,二酰基甘油磷脂酸((1,2)-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(DSPA);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(DPPA);1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(DMPA);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(DLPA);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(DOPA))、二酰基甘油磷酸甘油(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(DSPG);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸(1’-rac-甘油)(DPPG);1,2-肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油)(DMPG);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(DLPG);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1’-rac-甘油)(DOPG))、磷脂酰甘油、心磷脂、二酰基磷脂酰丝氨酸、N-琥珀酰基磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰基磷脂酰乙醇胺、赖氨酰基磷脂酰甘油、以及其它与中性脂质相连的阴离子修饰基团。脂质的混合物还可包括中性脂质。中性脂质可为但不限于,二酰基甘油磷酸胆碱(氢化的L-α-卵磷脂(大豆)(HSPC);1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC);1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DMPC);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DLPC);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC))、二酰基甘油磷酸乙醇胺(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE);1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-磷酸乙醇胺(DLPE);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE))和磷脂酰丝氨酸。
脂质的混合物还可包括聚乙二醇化脂质。聚乙二醇化脂质可为但不限于,1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](mPEG-2000-DSPE);1,2-二-十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](mPEG-2000-DOPE);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](mPEG-2000-DPPE);1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](mPEG-2000-DMPE);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](mPEG-2000-DLPE);1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](mPEG-5000-DSPE);1,2-二-十八烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](mPEG-5000-DOPE);1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](mPEG-5000-DPPE);1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](mPEG-5000-DMPE);1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](mPEG-5000-DLPE)。
脂质的混合物还可包括类脂质分子或lipidoid。脂质的混合物还可包括与脂质或胆固醇结合的分子,所述分子包括蛋白质或肽或寡核苷酸。
该方法的水性溶液优选包括水和缓冲剂。缓冲剂可为但不限于,磷酸盐、组氨酸、HEPES、Tris、醋酸盐和柠檬酸盐。
活性药物成分
优选地,API可为抗癌药物、消炎剂、抗糖尿病药物、抗真菌剂和抗生素。
API可为聚核苷酸(包括寡核苷酸)、蛋白或小分子。
在一个实施方式中,API为聚核苷酸。所述聚核苷酸可为基因组DNA片段、cDNA、mRNA、ssRNA、dsRNA、微RNA、siRNA、shRNA、sdRNA、DsiRNA、LNA和反义DNA或RNA。
或者,API可为有机小分子API。优选地,该分子具有约1500g/摩尔至约50g/摩尔的分子量。
API可为,例如,抗癌药物、抗生素、抗病毒药物、抗真菌剂或止痛剂。
示例性的抗癌药物可包括但不限于阿西维辛、阿柔比星、阿考达唑、阿美蒽醌、氨鲁米特、安曲霉素、门冬酰胺酶、阿扎胞苷、阿扎替派、比生群、博来霉素、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡铂、卡莫司汀、卡柔比星、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、柔红霉素、地扎胍宁、地吖醌、多西紫杉醇、多柔比星、依匹哌啶、厄洛替尼、依托泊苷、氯苯乙嘧胺、氟脲嘧啶脱氧核苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、fluorocitabine、羟基脲、异丙铂、醋酸亮丙瑞林、洛莫司汀、氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、巯嘌呤、甲氨蝶呤、氯苯氨啶、丝裂红素、米托洁林、丝裂霉素、米托司培、米托蒽醌、麦考酚酸、诺考达唑、诺拉霉素、奥昔舒仑、紫杉醇、培利霉素、戊氮芥、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、嘌罗霉素、吡唑呋喃菌素、利波腺苷、司莫司汀、司帕霉素、锗螺胺、螺莫司汀、螺铂、链佐星、他利霉素、替加氟、替尼泊苷、替罗昔隆、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、噻唑呋林、磷酸曲西立滨、曲他胺、三甲曲沙、乌拉莫司汀、乌瑞替派、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春匹定、长春罗定、长春利定、净司他丁和佐柔比星。
示例性的抗生素可包括但不限于氨基糖苷类;阿米卡星;庆大霉素;卡那霉素;新霉素;奈替米星;链霉素;妥布霉素;安沙霉素类;格尔德霉素;除莠霉素;碳头孢烯;氯碳头孢;碳青霉烯;厄他培南;多利培南;亚胺培南/西司他丁;美罗培南;头孢菌素;头孢羟氨苄;头孢唑林;头孢噻吩或头孢噻吩;头孢氨苄;头孢克洛;头孢孟多;头孢西丁;头孢丙烯;头孢呋辛;头孢克肟;头孢地尼;头孢托仑;头孢哌酮;头孢噻肟;头孢泊肟;头孢他啶;头孢布烯;头孢唑肟;头孢曲松;头孢吡肟;ceftobiprole;糖肽;替考拉宁;万古霉素;大环内酯类;阿奇霉素;克拉霉素;地红霉素;红霉素;罗红霉素;醋竹桃霉素;泰利霉素;大观霉素;单酰胺菌素;氨曲南;青霉素类;阿莫西林;氨苄西林;阿洛西林;羧苄西林;氯唑西林;双氯西林;氟氯西林;美洛西林;甲氧西林;萘夫西林;苯唑西林;青霉素,哌拉西林,替卡西林;杆菌肽;多粘菌素E;多粘菌素B;喹诺酮;环丙沙星;依诺沙星;加替沙星;左氧氟沙星;洛美沙星;莫西沙星;诺氟沙星;氧氟沙星;曲伐沙星;磺酰胺;磺胺米隆;偶氮磺胺(旧称);磺胺醋酰;磺胺甲二唑;sufanilimide(旧称);柳氮磺吡啶;磺胺异噁唑;甲氧苄啶;甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(复方新诺明(co-trimoxazole))(TMP-SMX);四环素;地美环素;多西环素;米诺环素;土霉素;四环素;胂凡纳明;氯霉素;克林霉素;林可霉素;乙胺丁醇;磷霉素;夫西地酸;呋喃唑酮;利福平+吡嗪酰胺+异烟肼(sioniazid);利奈唑胺;甲硝唑+克霉唑+氯己定(metronidazole);莫匹罗星;呋喃妥因(nitrofuantoin);平板霉素(platensimycin);吡嗪酰胺(purazinamide);奎奴普丁/达福普汀;利福平或利福平+吡嗪酰胺+异烟肼(rifampicin);和timidazole。在具体的实施方式中、抗癌剂选自柔红霉素、多柔比星、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂、卡铂、阿糖胞苷、氟脲嘧啶脱氧核苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、异丙铂、醋酸亮丙瑞林和甲氨蝶呤。
示例性的抗病毒药物可包括但不限于,氨硫脲;美替沙腙;核苷和/或核苷酸;阿昔洛韦;碘苷;阿糖腺苷;利巴韦林;更昔洛韦;泛昔洛韦;伐昔洛韦;西多福韦;喷昔洛韦;缬更昔洛韦;溴夫定;利巴韦林,环胺;金刚乙胺;曲金刚胺;磷酸衍生物;膦甲酸;膦乙醇;蛋白酶抑制剂;沙奎那韦;茚地那韦;利托那韦;那非那韦;安泼那韦;洛匹那韦;福沙那韦;阿扎那韦;替拉那韦;核苷和核苷酸反转录酶抑制剂;齐多夫定;去羟肌苷;扎西他滨;司他夫定;拉米夫定;阿巴卡韦;替诺福韦;阿德福韦酯;恩曲他滨;恩替卡韦;非-核苷反转录酶抑制剂;奈韦拉平;地拉韦啶;依法韦仑;神经氨酸酶抑制剂;扎那米韦;奥塞米韦;吗啉胍;异丙肌苷;普来可那立;和恩夫韦地。
示例性的抗真菌剂可包括但不限于,烯丙胺;特比萘芬;抗代谢物;氟胞嘧啶;氮杂茂(azole);氟康唑;伊曲康唑;酮康唑;雷夫康唑;泊沙康唑;伏立康唑;葡聚糖合成抑制剂;卡泊芬净;米卡芬净;阿尼芬净;多烯;两性霉素B;两性霉素B胶体分散(ABCD);和灰黄霉素。
示例性的止痛剂可包括但不限于,阿片衍生物、可待因、哌替啶、美沙酮和吗啡。
LNP
本发明还提供了由以下方法制备的LNP,其中所述LNP封装API。
优选地,超过70%的API被封装在LNP中。更优选地,超过80%的API被封装在LNP中,最优选地,超过90%的API被封装在LNP中。
可选地,脂质体可为单层。或者脂质体可为多层,或具有倒六边形或立方体的形态,或为盘状脂质、中空脂质体或固体脂质颗粒。
由该方法制备的LNP的平均粒径为约10nm至约2,000nm,优选小于300nm,更优选地,平均粒径可为约10nm至300nm或约20nm至约300nm。最优选地,平均粒径为约20nm至120nm,或约30nm至约200nm,最优选在约30nm和约120nm之间、约10nm和120nm之间、约60nm和约100nm之间或20nm至约80nm之间。
在一些实施方式中,LNP溶液主要包含盘状脂质。在其它实施方式中,LNP溶液主要包含脂质体。
在一些实施方式中,LNP具有约0.005至约0.8的多分散性指数,例如0.005至约0.5、0.01至约0.5、0.01至约0.4、0.01至0.2。
用于制备脂质体溶液的方法
脂质溶液
可由混合在一起的各脂质的储备溶液制备脂质溶液。优选将脂质溶解在有机溶剂中以制备脂质溶液。用于制备脂质溶液的有机溶剂可与水混溶。优选地,所述溶剂可为乙醇、甲醇、DMSO、丙醇、DMF、THF、丙酮、二氧六环、乙二醇、聚乙二醇和异丙醇。更优选地,所述溶剂为聚乙二醇、异丙醇和乙醇。优选地,溶剂包括低于10%的水。在一些情况中,可由脂质的混合物制备脂质溶液,随即将混合物溶于有机溶剂中。全部脂质在溶液中的浓度可在约1mg/ml至约200mg/ml的范围内,如约1mg/ml至约100mg/ml。更优选地,全部脂质在溶液中的浓度可在约5mg/ml至约80mg/ml的范围内或在约10mg/ml至100mg/ml的范围内。在一些实施方式中,有机溶剂为乙醇,浓度为约70%或更大(如75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、100%)。
可根据为了实现API的最佳递送所需而优化脂质的混合物,并且可以由本领域普通技术人员通过常规实验很容易地优化。在以下实施例2中,脂质溶液的总脂质浓度为29mg/ml;脂质被溶解在无水乙醇中。
在某些实施方式中,可将水不溶性API溶解在脂质溶液中。API在脂质溶液中的浓度将取决于该药剂的效力,并且能够被本领域普通技术人员容易地确定。根据LNP对API的封装能力确定脂质/API比。
制备具有API的水性溶液(S1)
可将水溶性API溶于第一水性溶液(S1)中。可优化溶液的pH和盐度以符合API与要形成脂质体的脂质之间的相互作用的要求。本领域技术人员能够容易地确定这些条件。如以下实施例中所示,实施例6中的S1包含20mM的柠檬酸盐、0.5mg/ml的siRNA,pH为5.0。酸性pH使脂质DLinDMA离子化,并且带正电荷的脂质与带负电荷的siRNA相互作用以将siRNA封装进脂质体中。在实施例1中,溶液1、2和3为250mM(NH4)2SO4溶液,pH6.5。
制备不含API的水性溶液(S2)
如对本领域技术人员显而易见的是,被称为(S2)的缺少API的水性溶液可与具有该药剂的溶液类似。或者,S1和S2可不同。如实施例6中所示,S2为20mM柠檬酸盐的溶液和100mMNaCl的溶液,pH5.0,而S1为20mM柠檬酸盐的溶液,pH5.0。
脂质体制备
混合溶液
脂质溶液和水性溶液优选从不同的口进入多支管,其各自流量为约1ml/min至约6000ml/min。优选地,流量可为约5ml/min至约1000ml/min。更优选地,流量可为约20ml/min至约60ml/min。在一些实施方式中,根据进口的尺寸调节流量以获得所需的LNP尺寸、形态、PDI和制造规模。
在一些实施方式中,以约1ml/min至约2,500ml/min的流量通过0.1mm至0.5mm的口径引入脂质溶液和/或水性溶液。
在一些实施方式中,脂质溶液和/或水性溶液的流速为约0.002m/s至约10m/s,如0.02m/s至8m/s,0.2m/s至6m/s。根据进口的尺寸调节流速以获得所需的LNP尺寸、形态、PDI和制造规模。
将API载入LNP
通过溶液混合
在混合室中,据信脂质立刻组装成为脂质体颗粒。当通过脂质溶液或水性溶液携带药物API时,其通过API与脂质之间的亲脂性相互作用或静电相互作用或两者被封装进脂质体中。
通过扩散
本发明还提供了制备不含API的LNP(所谓的“空”LNP)的方法。在该实施方式中,在多支管中混合的脂质溶液和水性溶液都不含API。可通过扩散的方法或其它方法将API载入脂质体中。例如,多柔比星可随pH梯度被载入脂质体中。参见美国专利申请10/019,200、PCT公开WO2001/005373、美国专利5,785,987、5,380,531、5,316,771和5,192,549,其全部内容并入本文作为参考。
优选地,将API与LNP溶液混合以通过扩散将API载入脂质体中。在一个方面,API被溶解于水性溶液中,并将所述溶液与空LNP混合。在另一方面中,API可容易地溶于空LNP的溶液中,并因此,该API可直接与空LNP的溶液混合。
API溶液与该API的空脂质体溶液的体积比优选在约1:50至约1:5的范围内。优选更低的溶液体积,因为这防止对最终脂质体溶液的显著稀释。
药物封装效率优选高于70%。更优选地,该效率高于80%。最优选地,该效率高于90%。
脂质体浓度调整
可使用切线流来过滤浓缩脂质体溶液。
改变缓冲液
可通过改变缓冲液而除去LNP溶液中残留的有机溶剂。优选地,通过切线流过滤进行缓冲液改变。在其它实施方式中,可通过透析进行缓冲液改变。
除菌过滤
优选通过使其经过0.22微米的除菌过滤器而对脂质体溶液进行除菌。
描述了LNP的用途的美国专利、专利申请、PCT公开为:美国专利8,067,390、PCT公开WO02/100435A1、PCT公开No.WO03/015757A1、PCT公开WO04/029213A2;美国专利5,962,016、美国专利5,891,467、美国专利5,030,453和美国专利6,680,068;和美国专利申请公开2004/0208921,其全部内容并入本文作为参考。
以下实施例为示例性的而非限制性的。在了解该公开后,该技术的很多变化对本领域技术人员来说将变得显而易见。因此该技术的范围不应由实施例确定,而是由所附权利要求以及其全部范围的等价方案确定。
实施例
材料
实施例中所用的所有多支管由PEEKpolymer制造并购自商业来源。
方法
实施例1:制备具有Doxil脂质组成的脂质体
将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸铵,pH6.5。在实施例1的表中说明了脂质溶液的组成。脂质的摩尔比与Doxil制剂基本相同,所述Doxil制剂为临床使用的多柔比星抗癌脂质体制剂。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注射器中;通过导管将每支注射器与5口多支管的进口相连。通过注射器泵,将注射器中的溶液经由导管泵入多支管的混合室中。多支管的孔径(直径)为1.0mm或1.6mm。混合的流量为5ml/min、10ml/min、或20ml/min、或30ml/min、或40ml/min或50ml/min。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。
在HEPES缓冲盐水(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)中通过MalvernZetasizerNanoZS确定粒径和多分散性指数。结果示于图4中。
实施例1的脂质组成
脂质 | %(摩尔) | mg/ml |
氢化的大豆PC | 56.5 | 17.24 |
胆固醇 | 38.0 | 5.76 |
mPEG2000-DSPE | 5.3 | 5.76 |
实施例2:制备负载有多柔比星的脂质体
将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸铵,pH6.5。在实施例2的表中说明了脂质溶液的组成。脂质的摩尔比与Doxil制剂基本相同,所述Doxil制剂为多柔比星的抗癌脂质体制剂。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注射器中;通过导管将每支注射器与5口多支管的进口相连。通过注射器泵,将注射器中的溶液经由导管泵入多支管的混合室中。混合器的孔径(直径)为0.5mm,且流量为40ml/min。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。通过透析将缓冲液改变为组氨酸/蔗糖缓冲液(12.5mM组氨酸,9.2%蔗糖,pH6.5)。Z-平均粒径为86.1nm,PDI为0.021。
将两毫升的空脂质体与0.198ml的于组氨酸/蔗糖缓冲液中的浓度为10mg/ml的多柔比星溶液混合,并在42℃孵育2小时。脂质/多柔比星比(w/w)为7.99,99.5%的多柔比星被载入脂质体中。负载的脂质体的Z-平均粒径为87.3nm,多分散性指数为0.032。图5中显示了由该方法制备的负载多柔比星的脂质体的Cryo-TEM图像。
实施例2的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.5 | 17.24 |
胆固醇 | 38.0 | 5.76 |
mPEG2000-DSPE | 5.3 | 5.76 |
实施例3:用6口多支管制备脂质体
将脂质溶于无水乙醇中。将一毫升的脂质溶液中载入5ml的注射器中,将硫酸铵溶液(250mM,pH6.5)载入四支5ml的注射器中,每支注射器1ml。通过导管将每支注射器与6口多支管(IDEXHealth&Sciences,part#P-152)的进口相连。通过注射器泵,将注射器中装载的脂质溶液和硫酸铵溶液泵入多支管的混合室中。6口多支管的孔径(直径)为1.0mm,且流量为20ml/min。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。
在HEPES缓冲盐水(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)中通过MalvernZetasizerNanoZS确定Z-平均粒径和多分散性指数分别为80.2nm和0.207。
实施例3的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.5 | 17.24 |
胆固醇 | 38.0 | 5.76 |
mPEG2000-DSPE | 5.3 | 5.76 |
实施例4:用7口多支管制备脂质体
将脂质溶于无水乙醇中。将一毫升的脂质溶液中载入5ml的注射器中,将硫酸铵溶液(250mM,pH6.5)载入五支5ml的注射器中,每支注射器1ml。通过导管将每支注射器与7口多支管(IDEXHealth&Sciences,part#P-150)的进口相连。通过注射器泵,将注射器中装载的脂质溶液和硫酸铵溶液泵入多支管的混合室中。7口多支管的孔径(直径)为1.0mm,且流量为20ml/min。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。
在HEPES缓冲盐水(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)中通过MalvernZetasizerNanoZS确定Z-平均粒径和多分散性指数分别为60.1nm和0.120。
实施例4的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.5 | 17.24 |
胆固醇 | 38.0 | 5.76 |
mPEG2000-DSPE | 5.3 | 5.76 |
实施例5:用9口多支管制备脂质体
将脂质溶于无水乙醇中。将一毫升的脂质溶液中载入5ml的注射器中,将硫酸铵溶液(250mM,pH6.5)载入七支5ml的注射器中,每支注射器1ml。通过导管将每支注射器与9口多支管(IDEXHealth&Sciences,part#P-191)的进口相连。通过注射器泵,将注射器中装载的脂质溶液和硫酸铵溶液泵入多支管的混合室中。9口多支管的孔径为1.0mm,且流量为20ml/min。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。
在HEPES缓冲盐水(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)中通过MalvernZetasizerNanoZS确定Z-平均粒径和多分散性指数分别为63.1nm和0.133。
实施例5的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.5 | 17.24 |
胆固醇 | 38.0 | 5.76 |
mPEG2000-DSPE | 5.3 | 5.76 |
实施例6:制备siRNA脂质体
脂质溶液:脂质溶液的组分如实施例6的表中所示。
RNA为61/791,054实施例6中所述的siApoB-1序列。
水性溶液1:siRNA:在柠檬酸盐缓冲液(20mM,pH5.0)中0.5mg/ml;水性溶液2:20mM柠檬酸盐,pH5.0,100mMNaCl;水性溶液3:与水性溶液2相同。
将一毫升的上述四种溶液中的每种载入20ml注射器中;通过导管将每支注射器与5口多支管的进口相连。通过注射器泵将载入注射器中的脂质溶液、siRNA溶液和缓冲水性溶液泵入多支管的混合室中。脂质体溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。5口多支管混合器的孔径为1mm或1.6mm。流量为5ml/min、或10ml/min、或30ml/min、或40ml/min、或50ml/min。
在HEPES缓冲盐水(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)中通过MalvernZetasizerNanoZS确定siRNA脂质体的粒径和PDI。通过Cryo-TEM使颗粒形态成像。结果示于图6中。如图所示,脂质形成单层脂质体,其中多柔比星形成晶体。
实施例6的于无水乙醇中的脂质溶液
实施例7:通过改变流量由相同制剂制备脂质体和盘状脂质
将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸铵,pH6.5。在实施例7的表中说明了脂质溶液的组成。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注射器中;通过导管将每支注射器与5口多支管的进口相连。通过注射器泵,将注射器中的溶液经由导管泵入多支管的混合室中。多支管的孔径(直径)为1.0mm,且流量为40ml/min或5ml/min。脂质体溶液或盘状脂质溶液经由出口流出,并被收集到玻璃瓶中。通过透析将缓冲液改变为HEPES缓冲液(10mMHEPES,pH7.4,138mMNaCl)。使脂质体载入多柔比星。Cryo-TEM图像确认40ml/min的流量产生具有86.1nm的Z-平均粒径和0.021的PDI的单层脂质体(图7A)。5.0ml/min的流量主要产生直径为约60nm、脂质双层厚度为约6nm的盘状脂质(图7B)。
实施例7的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.6 | 21.9 |
胆固醇 | 38.4 | 7.3 |
mPEG2000-DSPE | 5.0 | 7.3 |
实施例8:出口的数量和位置对脂质体粒径的影响
将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸铵,pH6.5。在实施例7的表中说明了脂质溶液的组成。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注射器中;通过导管将每支注射器与7口多支管的进口相连(分别如图8A至8D中所示)。通过注射器泵,将注射器中的溶液经由导管泵入多支管的混合室中。多支管的孔径(直径)为0.5mm,且流量为35ml/min。剩余3个口(中间的一个与其他口和两个侧口垂直,参见图8)中的一个(1)、或两个(2)或三个(3)被用作脂质体溶液的出口。脂质体溶液经由一个或多个出口流出,并被收集到玻璃瓶中。出口的不同数量导致不同的脂质体粒径:3个出口时为91nm(PDI0.146)(图8A),2个出口时为81nm(PDI0.089)(图8B);且1个出口时为74nm至75nm(PDI0.052至0.088)(图8C和8D)。出口的位置对粒径无显著影响(图8C和8D)。因此,可通过出口的数量控制脂质体粒径。
实施例8的脂质组成
%(摩尔) | mg/ml | |
氢化的大豆PC | 56.6 | 30.8 |
胆固醇 | 38.4 | 10.3 |
mPEG2000-DSPE | 5.0 | 10.3 |
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种用于制备脂质纳米颗粒(LNP)的方法,所述方法包含:
a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流,和ii)通过多支管的第二组两个或更多个进口引入一股或多股水性溶液流,从而将所述脂质溶液与所述水性溶液混合以产生LNP溶液;和
b)通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液;
其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基本相似的角度并且其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口不在同一平面内。
2.根据权利要求1所述的方法,其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度为约120°或更小。
3.根据权利要求1所述的方法,其中通过至少两个进口引入步骤ii)中的所述水性溶液。
4.根据权利要求3所述的方法,其中通过至少3个但不多于11个进口引入步骤ii)中的所述水性溶液。
5.根据权利要求3所述的方法,其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口在同一平面内。
6.根据权利要求5所述的方法,其中至少一个出口与进口的平面基本垂直。
7.根据权利要求5所述的方法,其中至少一个出口与进口的平面基本不垂直。
8.根据权利要求3所述的方法,其中至少两个水性溶液进口和至少两个脂质溶液进口不在同一平面内。
9.根据权利要求1所述的方法,其中以约1ml/min至6,000ml/min的流量引入所述脂质溶液和/或所述水性溶液。
10.根据权利要求9所述的方法,其中以约1ml/min至约2,500ml/min的流量通过0.1mm至5mm的口径引入所述脂质溶液和/或所述水性溶液。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液和/或所述水性溶液的流速为约0.002m/s至约10m/s。
12.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP溶液主要包含盘状脂质。
13.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP溶液主要包含脂质体。
14.根据权利要求1所述的方法,其中LNP的平均粒径为约10nm至约2,000nm。
15.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP具有约0.0005至约0.5的多分散性指数。
16.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液包含溶于有机溶剂中的脂质体。
17.根据权利要求1所述的方法,其中所述有机溶剂为浓度为约70%或更大的乙醇。
18.根据权利要求16所述的方法,其中全部脂质在所述脂质溶液中的浓度在约1mg/ml至约200mg/ml的范围内。
19.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液中的一种脂质选自阴离子脂质、阳离子脂质或中性脂质。
20.根据权利要求3所述的方法,其中被引入至少一个所述进口的所述水性溶液与被引入另一个进口的第二水性溶液不同。
21.根据权利要求1所述的方法,其中所述水性溶液和/或所述脂质溶液包含活性药物成分(API)。
22.根据权利要求1所述的方法,其中步骤a)进一步包含iii)通过所述多支管的一个或多个进口引入一股或多股非水性溶液流。
23.根据权利要求1所述的方法,进一步包含步骤c)将API载入到从LNP溶液中回收的LNP。
24.根据权利要求21或23所述的方法,其中所述API为小分子、肽、蛋白质、RNA或DNA。
25.根据权利要求21或23所述的方法,其中所述API为抗癌药物、抗生素、抗病毒药物、抗真菌剂或止痛剂。
26.根据权利要求25所述的方法,其中所述抗癌药物选自柔红霉素、多柔比星、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂、卡铂、阿糖胞苷、氟脲嘧啶脱氧核苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、异丙铂、醋酸亮丙瑞林和甲氨蝶呤。
27.由权利要求1所述的方法制备的LNP溶液。
28.使用权利要求26所述的LNP溶液制备的药物组合物。
29.用于进行权利要求1所述的方法的装置。
Claims (29)
1.一种用于制备脂质纳米颗粒(LNP)的方法,所述方法包含:
a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流,和ii)通过多支管的第二组一个或多个进口引入一股或多股水性溶液流,从而将所述脂质溶液与所述水性溶液混合以产生LNP溶液;和
b)通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液;
其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基本相似的角度。
2.根据权利要求1所述的方法,其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度为约120°或更小。
3.根据权利要求1所述的方法,其中通过至少两个进口引入步骤ii)中的所述水性溶液。
4.根据权利要求3所述的方法,其中通过至少3个但不多于11个进口引入步骤ii)中的所述水性溶液。
5.根据权利要求3所述的方法,其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口在同一平面内。
6.根据权利要求5所述的方法,其中至少一个出口与进口的平面基本垂直。
7.根据权利要求5所述的方法,其中至少一个出口与进口的平面基本不垂直。
8.根据权利要求3所述的方法,其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口不在同一平面内。
9.根据权利要求1所述的方法,其中以约1ml/min至6,000ml/min的流量引入所述脂质溶液和/或所述水性溶液。
10.根据权利要求9所述的方法,其中以约1ml/min至约2,500ml/min的流量通过0.1mm至5mm的口径引入所述脂质溶液和/或所述水性溶液。
11.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液和/或所述水性溶液的流速为约0.002m/s至约10m/s。
12.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP溶液主要包含盘状脂质。
13.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP溶液主要包含脂质体。
14.根据权利要求1所述的方法,其中LNP的平均粒径为约10nm至约2,000nm。
15.根据权利要求1所述的方法,其中所述LNP具有约0.0005至约0.5的多分散性指数。
16.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液包含溶于有机溶剂中的脂质体。
17.根据权利要求1所述的方法,其中所述有机溶剂为浓度为约70%或更大的乙醇。
18.根据权利要求16所述的方法,其中全部脂质在所述脂质溶液中的浓度在约1mg/ml至约200mg/ml的范围内。
19.根据权利要求1所述的方法,其中所述脂质溶液中的一种脂质选自阴离子脂质、阳离子脂质或中性脂质。
20.根据权利要求3所述的方法,其中被引入至少一个所述进口的所述水性溶液与被引入另一个进口的第二水性溶液不同。
21.根据权利要求1所述的方法,其中所述水性溶液和/或所述脂质溶液包含活性药物成分(API)。
22.根据权利要求1所述的方法,其中步骤a)进一步包含iii)通过所述多支管的一个或多个进口引入一股或多股非水性溶液流。
23.根据权利要求1所述的方法,进一步包含步骤c)将API载入到从LNP溶液中回收的LNP。
24.根据权利要求21或23所述的方法,其中所述API为小分子、肽、蛋白质、RNA或DNA。
25.根据权利要求21或23所述的方法,其中所述API为抗癌药物、抗生素、抗病毒药物、抗真菌剂或止痛剂。
26.根据权利要求25所述的方法,其中所述抗癌药物选自柔红霉素、多柔比星、紫杉醇、多西紫杉醇、顺铂、卡铂、阿糖胞苷、氟脲嘧啶脱氧核苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、异丙铂、醋酸亮丙瑞林和甲氨蝶呤。
27.由权利要求1所述的方法制备的LNP溶液。
28.使用权利要求26所述的LNP溶液制备的药物组合物。
29.用于进行权利要求1所述的方法的装置。
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