CN115518041A

CN115518041A - 一种人参皂苷伊立替康脂质体、其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115518041A
Application number: CN202110705785.2A
Authority: CN
Inventors: 李翀; 徐宇虹; 王建新; 王丹; 陈颖江; 詹华杏
Original assignee: Xiamen Ginposome Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Xiamen Ginposome Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2021-06-24
Filing date: 2021-06-24
Publication date: 2022-12-27

Abstract

本发明公开了一种人参皂苷伊立替康脂质体、其制备方法和应用。本发明提供了一种人参皂苷伊立替康脂质体，其包括如下以重量份数计的组分：8‑15份磷脂、1‑2份人参皂苷和1份伊立替康盐；其中，所述的磷脂为氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；所述的人参皂苷为20(S)‑人参皂苷Rg3、20(S)‑人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rp1、人参皂苷伪Rg3、人参皂苷伪GQ和人参皂苷PPD中的一种或多种。本发明的人参皂苷伊立替康脂质体对肿瘤细胞的具有靶向作用和增效减毒。

Description

一种人参皂苷伊立替康脂质体、其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种人参皂苷伊立替康脂质体、其制备方法和应用；进一步公开了一种高效低毒的人参皂苷伊立替康脂质体，其制备方法和应用。

背景技术

CN201610693884.2、CN201811447245.3和CN201811447243.4等三篇申请专利都公开了以“被动载药“即”薄膜蒸发法”为主制备的一种以人参皂苷为膜材的脂质体在包载紫杉醇等化疗药物之后，其相关脂质体质量稳定、药效显著等技术优势。而水溶性药物更适合采用主动载药等方法制备。

CN200380104235.5和CN200380104175.7等专利公开了一种以磷脂和胆固醇为膜材，以硫酸铵等为梯度的脂质体主动载药制备方法。

CN201811532448.2，CN201811552395.0等专利公开了一种以磷脂和胆固醇为膜材，以蔗糖八硫酸酯三乙胺为梯度的脂质体主动载药方法。

CN201811305299.6公开了一种以磷脂和胆固醇为膜材，以甲基磺酸铵、4-羟基苯磺酸铵、甲基磺酸三乙胺、4-羟基苯磺酸三乙胺；乙二磺酸铵、丙二磺酸铵、乙二磺酸三乙胺、丙二磺酸三乙胺等为梯度的脂质体主动载药方法。

上述现有技术中，人参皂苷脂质体可采用薄膜蒸发法制备难溶性药物的共载脂质体，但水溶性药物一般采用主动载药法制备，其中，双分子膜由磷脂和胆固醇构成，以硫酸铵、蔗糖八硫酸酯三乙胺等离子型盐溶液作为内水相，以pH梯度等原理载入水溶性药物，将药物包载在脂质体内腔。

现有技术中，尚未发现用主动载药法制备的“以人参皂苷取代胆固醇作为双分子膜的共载脂质体”，因此，如何选择一个最佳的药物配伍，如何制定最佳的制备工艺，以便生产出一种药效更好、毒性更低，质量和其他指标都能符合药品要求的人参皂苷伊立替康脂质体，以便符合药品申报要求，需要大量的研究工作和技术攻关。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有常规主动载药法或常规被动载药法无法制备合格的以人参皂苷为膜材的伊立替康脂质体所存在的不足，而提供一种人参皂苷伊立替康脂质体、其制备方法和应用；其性质稳定、粒径小、药物包封率高、体内相容性良好、体内释药良好、药效更好、毒性更低、配伍合理；且其具有较好制备工艺，制备条件易于实现，利于产业化。实现了制备工艺与产品性能结合的优化。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题。

本发明提供了一种人参皂苷伊立替康脂质体(简称“Ginposome-CPT”)，其包括如下以重量份数计的组分：8-15份磷脂、1-2份人参皂苷和1份伊立替康盐；

其中，所述的磷脂为氢化磷脂(HSPC)、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；

所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rp1、人参皂苷伪Rg3、人参皂苷伪GQ和人参皂苷PPD中的一种或多种。

在本发明的某一方案中，所述的伊立替康盐可为盐酸伊立替康通过pH梯度法与盐溶液进行离子交换得到的伊立替康盐(其中伊立替康盐中的伊立替康与所述的盐溶液中的阴离子形成所述的伊立替康盐)。所述的盐溶液可为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；较佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、4-羟基苯磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、4-羟基苯磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液和丙二磺酸三乙胺水溶液；更佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或乙二磺酸铵水溶液；例如蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的盐溶液与所述的盐酸伊立替康的体积质量比可为66.7-200mL/g，例如100mL/g。

在本发明的某一方案中，所述的伊立替康盐可为硫酸伊立替康、蔗糖八硫酸酯伊立替康、甲基磺酸伊立替康、乙二磺酸伊立替康、丙二磺酸伊立替康或4-羟基苯磺酸伊立替康；更佳地，所述的伊立替康盐为硫酸伊立替康、蔗糖八硫酸酯伊立替康、乙二磺酸伊立替康或丙二磺酸伊立替康；例如蔗糖八硫酸酯伊立替康。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体中，所述的人参皂苷与所述的磷脂形成磷脂膜。

在本发明的某一方案中，较佳地，所述的磷脂膜的内侧为内水相，所述的磷脂膜的外侧为外水相，所述的伊立替康盐被包封于所述的内水相中。

在本发明的某一方案中，较佳地，所述的内水相为盐溶液，所述的外水相为生理等渗溶液；所述的生理等渗溶液例如为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的盐溶液的浓度为0.05M-0.975M；例如0.05M、0.1M、0.16M、0.2M、 0.3M、0.325M、0.65M或0.975M。

在本发明的某一方案中，当所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.05M-0.3M，例如0.05M、0.1M、0.2M或0.3M。

在本发明的某一方案中，当所述的盐溶液为乙二磺酸三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为 0.16M-0.325M，例如0.16M或0.325M。

在本发明的某一方案中，当所述的盐溶液为甲基磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.325M- 0.975M，例如0.325M、0.65M或0.975M。

在本发明的某一方案中，当所述的盐溶液为硫酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16M- 0.65M，例如0.16M、0.325M或0.65M。

在本发明的某一方案中，当所述的盐溶液为乙二磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.65M。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括PEG-DSPE；较佳地，所述的磷脂膜包括PEG-DSPE。

在本发明的某一方案中，所述的PEG-DSPE的重量份数为0.1-2份。

本发明中，PEG-DSPE的全称为聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；所述PEG-DSPE为PEG2000- DSPE。

在本发明的某一方案中，所述的盐酸伊立替康为10mg/mL的盐酸伊立替康水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的磷脂为氢化磷脂(HSPC)。

在本发明的某一方案中，所述的盐酸伊立替康与所述的磷脂的质量比可为1:(8-15)，例如1:8、 1:10、1:12或1:15，又例如1:10。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3。

在本发明的某一方案中，所述人参皂苷的HPLC纯度≥99％。

在本发明的某一方案中，所述的盐酸伊立替康与所述的人参皂苷的质量比为1:(1-2)，例如1:1 或1:2。

在本发明的某一方案中，所述的磷脂的重量份数为10份。

在本发明的某一方案中，所述的PEG-DSPE的重量份数为0.5份。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷的重量份数为1份。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括水。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体不包括胆固醇。

在本发明的某一方案中，当所述的人参皂苷伊立替康脂质体不包括水时，所述的伊立替康盐为固体；当所述的人参皂苷伊立替康脂质体包括水时，内水相中水有一个恒定数量，伊立替康离子在梯度差作用下不断进入内水相后，达到过饱和后就会析出成为伊立替康盐。

在本发明的某一方案中，所述的内水相为盐溶液；所述的盐溶液的定义如前所述。

在本发明的某一方案中，较佳地，所述的内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的外水相可为生理等渗溶液；例如生理等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下重量份数的组分：10份磷脂、0.5 份PEG-DSPE、1份人参皂苷、1份伊立替康盐或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下重量份数的组分：10份磷脂、0.5份PEG-DSPE、1份人参皂苷、1份伊立替康盐和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5 份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.5份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.5份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5 份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、2份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、2份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份 PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rh2、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rh2、1份伊立替康盐、0.5 份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

本发明还提供了一种人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法，其包括如下步骤；

步骤1：将磷脂溶解于无水乙醇中得到的混合物1与盐溶液进行水化，得到混合物2；除去所述混合物2中的乙醇，得到溶液A1；

步骤2：其为下述方案1、方案2和方案3中的任意一种，

方案1(高压均质法)，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1进行高压均质，控制粒径D90 在100nm以下，得到溶液A2a；

方案2(挤出法)，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1，依次通过孔径挤出板挤出，控制粒径D90在100nm以下，得到脂质体溶液A2b；

方案3(超声法)，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1进行超声处理，得到一澄清溶液 A2c；

步骤3：以等渗溶液为透析介质，将所述的步骤2中得到的溶液A2a、A2b或A2c在透析袋中进行透析，完全去除外水相中的盐溶液，得到溶液A3；

步骤4：将步骤3得到的溶液A3和盐酸伊立替康水溶液进行混合，得到Y1脂质体；

步骤5：将步骤4得到的Y1脂质体和人参皂苷混合，得到溶液A4，溶液A4经透析后得到Y2 脂质体；

步骤6：将PEG-DSPE溶于与步骤3相同的等渗溶液中形成混合溶液，将所述混合溶液加入至步骤5得到的Y2脂质体中，得到所述的人参皂苷伊立替康脂质体；

其中，所述磷脂、人参皂苷、盐酸伊立替康和PEG-DSPE均如前所述。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的磷脂与所述的无水乙醇的质量体积比的比值为 0.2g/mL-2g/mL，例如0.5g/mL。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的溶液A1较佳地为将所述的磷脂加热溶解于无水乙醇中得到；所述的加热可为水浴加热至55-65℃，例如60℃。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的水化的温度为55-65℃，例如55-60℃

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的水化为在旋蒸瓶中进行，转速为40-60rp/min，例如50rp/min。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的水化的终点以溶液均一即可。所述的水化的时间优选为10分钟-4小时，例如10分钟。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的盐溶液的种类如前所述。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的盐溶液的浓度为0.1-0.65M。

在本发明的某一方案中，所述的步骤1中，所述的盐溶液例如为0.1M蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液，0.325M硫酸铵水溶液(二价盐)或0.65M甲基磺酸铵水溶液(一价盐)。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的温度为0-10℃；较佳地，确保脂质体溶液的温度在5-10℃。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的压力在800-1400bar之间，例如1200bar。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的次数为3-4次，例如4次。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案2中，所述挤出的温度为35-45℃，例如40℃。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案2中，所述的孔径为800nm、400nm、200nm或 100nm。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案2中，所述挤出的压力为600-800psi；例如800psi。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案2中，所述挤出的次数为4-10次，例如4次。

在本发明的某一方案中，所述的步骤2的方案3中，所述的超声的次数为20-30次，例如25次。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的透析过程中使用的透析袋的截留分子量为8000- 15000，例如，截留分子量为10000。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的溶液A2a、A2b或A2c与所述的等渗溶液的体积比为1:1000。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的透析的温度为0-10℃，例如4℃。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的透析的时间为10-18小时，例如12小时。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述的透析中，每4小时更换1次透析介质。

在本发明的某一方案中，所述的步骤3中，所述溶液A3为由外水相为等渗溶液、内水相为盐溶液组成的空白脂质体。

在本发明的某一方案中，所述的步骤4中，所述的盐酸伊立替康的浓度为5mg/mL-20mg/mL，例如5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL或20mg/mL，又例如10mg/mL。

在本发明的某一方案中，所述的步骤4中，所述的溶液A3和盐酸伊立替康的水溶液的体积比为 1:1。

在本发明的某一方案中，所述的步骤4中还进一步包括水浴中孵育的过程，所述水浴的温度优选为50-60℃，所述孵育的时间优选为40分钟。

在本发明的某一方案中，所述的步骤4中，所述的Y1脂质体的内水相为酸根伊立替康盐，该脂质体外水相为等渗溶液。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的人参皂苷以人参皂苷的乙醇溶液的形式参与混合，所述的人参皂苷的乙醇溶液的浓度为5mg/mL-20mg/mL，例如10mg/mL。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的混合以搅拌的形式进行，所述搅拌的时间优选为30-60分钟，例如45分钟。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的透析包括下述步骤：以等渗溶液为介质，将溶液A4置于透析袋中进行透析。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的透析中使用的透析袋的截留分子量为8000- 15000，例如，截留分子量为10000。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的透析的温度为0-10℃，例如4℃。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的透析的时间为10-18小时，例如12小时。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的A4与所述的等渗溶液的体积比为1：1000。

在本发明的某一方案中，所述的步骤5中，所述的透析中，每4小时更换1次透析介质。

在本发明的某一方案中，所述的步骤6中，所述的PEG-DSPE与磷脂的质量比为(0.1-2):10，例如，0.2:10。

在本发明的某一方案中，所述的步骤6中，所述的PEG-DSPE在所述的混合溶液中的浓度为1- 20mg/mL，例如10mg/mL。

如前所述的脂质体的制备方法还可进一步包括除菌过滤和灌装步骤。所述的除菌过滤和所述的灌装的条件和操作均可为本领域该类工艺中常规的条件和操作。例如，除菌过滤步骤中，采用0.22μm 滤膜过滤所述步骤6得到的脂质体。灌装步骤中，灌装于10mL或20mL西林瓶中、压盖和包装。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法包括如下步骤：

步骤1：将磷脂溶于无水乙醇中，加入盐溶液，55-60℃水化10分钟，除去乙醇，制备得到内外水相均是盐溶液的溶液A1；

步骤2：将步骤1得到的溶液A1，依次通过孔径分别为800nm、400nm、200nm、100nm的孔径挤出板各4次，得到粒径小于100nm、内外水相均是盐溶液的脂质体溶液A2b；

步骤3：将步骤2中得到的溶液A2b置于透析袋中，以葡萄糖水溶液作为透析介质，进行透析，完全去除脂质体溶液A2b的外水相中的盐溶液，得到由外水相为葡萄糖水溶液、内水相为盐溶液组成的溶液A3；所述的透析的时间和温度如前所述；

步骤4：将步骤3得到的溶液A3与盐酸伊立替康水溶液混合，并于水浴中孵育，得到Y1脂质体，所述Y1脂质体的内水相为蔗糖八硫酸酯伊立替康盐，外水相为葡萄糖水溶液；所述水浴的温度和孵育时间如前所述；

步骤5：将人参皂苷的乙醇溶液与Y1脂质体混合，搅拌，去除乙醇，再置于透析袋中，以葡萄糖水溶液作为透析介质，进行透析，完全去除乙醇溶剂、盐溶液中的盐、未包裹的盐酸伊立替康和人参皂苷，得到Y2脂质体；所述的透析的时间和温度如前所述；

步骤6：将PEG-DSPE溶于葡萄糖中，并加入至步骤5得到的Y2脂质体中，得到所述的人参皂苷伊立替康脂质体；

其中，所述磷脂、人参皂苷、盐酸伊立替康和PEG-DSPE的定义均如前所述。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm，优选D90≤110nm。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的包封率≥80％，优选包封率≥90％。

在本发明的某一方案中，所述包封率的检测方法采用高速离心法+高效液相色谱法。

本发明还提供了一种人参皂苷伊立替康脂质体，其由如上所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法制备得到；较佳地，所述的人参皂苷伊立替康脂质体如前任一项所述。

本发明提供了一种人参皂苷伊立替康脂质体，所述人参皂苷伊立替康脂质体的原料包括以重量份数计的组分：8-15份磷脂、1-2份人参皂苷和1份盐酸伊立替康；

其中，所述的磷脂为氢化磷脂(HSPC)、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rp1、人参皂苷伪Rg3、人参皂苷伪GQ和人参皂苷PPD中的一种或多种。

在本发明的某一方案中，较佳地，所述的人参皂苷伊立替康脂质体由如前述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法制备得到。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括PEG-DSPE。

在本发明的某一方案中，所述的PEG-DSPE的重量份数为0.1-2份。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的原料还包括盐溶液，所述的盐溶液可为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；较佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、4-羟基苯磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、 4-羟基苯磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液和丙二磺酸三乙胺水溶液；更佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或乙二磺酸铵水溶液；例如蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的磷脂和人参皂苷的定义和重量份数如前述所述。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的原料还包括生理等渗溶液和/或盐溶液。

在本发明的某一方案中，所述的生理等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液。

在本发明的某一方案中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm，优选D90≤110nm；包封率≥80％，优选包封率≥90％。

本发明还提供了一种脂质体组合物，其包含葡萄糖水溶液和如前所述的人参皂苷伊立替康脂质体。

在本发明的某一方案中，所述的脂质体组合物中，所述的葡萄糖水溶液为5％葡萄糖水溶液。

在本发明的某一方案中，人参皂苷伊立替康脂质体中，所述的磷脂、所述的PEG-DSPE、所述的人参皂苷和所述的伊立替康的质量份数由于制备过程的损失和工艺的差别可能存在约10％的误差。

本发明还提供了一种物质A在制备用于治疗和/或预防癌症药物中的应用；所述的物质A为如前任一方案所述的人参皂苷伊立替康脂质体或脂质体的组合物。

所述应用中，所述的癌症可为结直肠癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、胰腺癌或头颈部癌。

术语“粒径D90”是指一个样品的累计粒度分布百分数达到90％时所对应的粒径。它的物理意义是粒径小于它的颗粒占90％。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明提供的人参皂苷伊立替康脂质体具有良好的稳定性、对肿瘤细胞的靶向性高、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。以实施例中人参皂苷Rg3伊立替康脂质体为例，药效显著优于不在本发明请求保护的范围内的技术方案和市售阳性对照组；说明了Rg3在人参皂苷Rg3伊立替康脂质体中起到了更好的“药物、辅料、膜材、靶头”等多种作用，具体的具有药效显著提高、Glut1靶向性显著提高以及毒副作用显著降低的效果。具体地：

(1)药效显著提高。尤其是Rg3(1.0)-CPT-PEG/Lp组、Rg3(1.5)-CPT-PEG/Lp组和Rg3(2.0)-CPT- PEG/Lp组药效最优，其中剂量(10mg/kg)的抑瘤率(29-34％)与CPT组高剂量组(20mg/kg)第28天的抑瘤率33％基本相同，所以，抑瘤效果提高了2倍。Rg3(1.0)-CPT-PEG/Lp组、Rg3(1.5)-CPT-PEG/Lp组和Rg3(2.0)-CPT-PEG/Lp的高剂量组(20mg/kg)第28天小鼠肿瘤完全消失，比普通的市售对照组 (Onivyde组)的抑瘤率16％相比，具有显著优效。

(2)Glut1靶向性显著提高。在荷瘤鼠的Glut1靶向性实验中，所述的人参皂苷脂质体的Glut1 靶向性都是比普通胆固醇脂质体的靶向性提高了4倍以上。

(3)毒副作用显著降低。按本发明的处方制备的脂质体，Rg3(1.0)-CPT-PEG/Lp组和Rg3(2.0)- CPT-PEG/Lp组的急性毒性在250mg/kg未见死亡，CPT组在150mg/kg死亡1只，Onivyde组在 200mg/kg死亡5/6，显示Rg3伊立替康脂质体的急性毒性比CPT组和Onivyde组显著性降低。同时说明：

普通伊立替康注射剂的LD50在150-200mg/kg之间；

普通伊立替康脂质体(Onivyde)的LD50在150-200mg之间，但比普通伊立替康注射液得到显著性降低；

人参皂苷Rg3伊立替康脂质体的LD50在250-300mg/kg之间，具有显著性降低。

(4)本发明的人参皂苷Rg3伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm，包封率≥80％。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实验药物和器材

实验药物：20(S)-人参皂苷Rg3(简称：Rg3)、人参皂苷伪Rg3(简称：伪Rg3)、人参皂苷Rp1(简称：Rp1)、人参皂苷Rk1(简称：Rk1)、人参皂苷Rg5(简称：Rg5)、20(S)-人参皂苷Rh2(简称：Rh2)和盐酸伊立替康等为本领域常规市售可得，例如上海本素医药科技有限公司、上海金和生物制药有限公司、上海源叶生物科技有限公司等。

伊立替康脂质体注射剂，Onivyde，美国Merrimack公司，采购自SPG PharmaCompany(中国香港)。

注射用盐酸拓扑替康，英国Smithkline Beecham公司，采购自上海雷氏大药房。

PEG-DSPE采购自艾伟拓(上海)医药科技有限公司。

本发明所述的人参皂苷分子结构式如下：

试验仪器：下述实施例中所使用的仪器为上海本素医药科技有限公司、复旦大学药学院自有仪器设备，其设备型号和来源信息如下：

安捷伦液相色谱：安捷伦1100一套，奥泰3300ELSD，安捷伦科技(中国)有限公司；

旋蒸蒸发仪：ZX98-1 5L，上海鲁伊工贸有限公司；

超声波清洗机(SB3200DT，宁波新芝生物科技股份有限公司)；

氮吹仪(HGC-12A，天津市恒奥科技发展有限公司)；

探头超声仪(JYD-650，上海智信仪器有限公司，中国)；

高压均质机(B15，加拿大AVESTIN)；

微型挤出器(Mini-extruder，Avanti Polar Lipids Inc)；

激光粒度分析仪(Nano ZS,英国马尔文公司)；

马尔文粒度仪Malvern Nanosizer ZS90(英国马尔文公司)；

酶标仪(Thermo Scientific，Waltham，MA，USA)；

酶标仪(Infinitie 200，瑞士Tecan Trading Co.，Ltd)；

流式细胞仪(BD Biosciences，USA)；

流式细胞仪(CytoFlex S，Beckman Coulter，Inc.，USA)；

倒置荧光显微镜(Leica，DMI 4000D，Germany)；

荧光显微镜观察(Zeiss LSM 710，Oberkochen，Germany)；

激光共聚焦显微镜(Leica，DMI 4000D，Germany)；

共聚焦活体显微镜(Confocal intravital microscopy,IVM)；

正置双光子显微镜(DM5500 Q；Nikon)；

小动物活体光学成像系统(in vivo imaging system,IVIS)(PerkinElmer，USA)；

生物大分子相互作用仪BiaCore T 200仪器(GE，USA)；

洁净工作台(SW-CJ-1FD，苏州安泰空气技术有限公司)；

20L旋转蒸发仪：R5002K，上海夏丰实业有限公司；

冷冻干燥机：FD-1D-80，上海比朗仪器制造有限公司；

冷冻干燥机：PDFD GLZ-1B，上海浦东冷冻干燥设备有限公司；

电子天平：CPA2250(精度0.00001g)，赛多利斯(上海)贸易有限公司；

电子天平：JY3003(精度0.001g)，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；

光电显微镜(XDS-1B，重庆光电仪器有限公司)；

细胞培养箱(CCL-170B-8，新加坡ESCO)。

动物和细胞株

动物：BALB/c裸小鼠，鼠龄3-4周，中科院上海药物研究所生产。

肿瘤细胞株：

乳腺癌原位瘤4T1细胞株，复旦大学药学院提供

人结肠癌C-26细胞株，购自江苏凯基生物技术股份有限公司

人胰腺癌Capan-1细胞株，购自江苏凯基生物技术股份有限公司

乳腺癌MCF-7细胞株，购自江苏凯基生物技术股份有限公司

伊立替康含量检测方法：

1)色谱条件：C18色谱柱(Diamonsil Plus C18，250×4.6mm，5μm)

2)流动相：乙腈：水＝32：68(体积比)，磷酸调pH＝3.0

3)检测波长：258nm，流速0.8mL/min，柱温40℃，进样量20μL。

4)计算：记录色谱图，以外标法计算供试品溶液中盐酸伊立替康的含量。

人参皂苷Rg3含量检测方法：

1)色谱条件：Kromasil 100-3.5C4 150mm×4.6mm色谱柱。

2)流动相：乙腈：水＝55:45。

3)检测波长：203nm，流速1mL/min，柱温35℃，进样量10μL。

4)计算：记录色谱图，以外标法计算供试品溶液中Rg3的含量。

伊立替康(或人参皂苷)包封率检测方法：

取2份待检测脂质体样品各1mL，离心(18000r/min，30min，3次，每次间隔30分钟)，分别取上清液和脂质体沉淀，沉淀脂质体用蒸馏水洗涤3次，每次1ml蒸馏水，合并上清液，于25mL容量瓶中，去离子水定容，HPLC检测得到药物浓度(伊立替康脂质体中的游离的伊立替康或人参皂苷的浓度)为V1；另一份于25mL容量瓶中，去离子水定容，HPLC法检测药物浓度为V0。包封率＝(V0- V1)/V0×100％。

简称：盐酸伊立替康(CPT)，氢化磷脂(HSPC)，胆固醇(Cho)，20(S)-人参皂苷Rg3(Rg3)，20(S)-人参皂苷Rh2(Rh2)。

实施例1：人参皂苷空白脂质体在各种离子型水溶液中的稳定性研究

称取处方量的HSPC、人参皂苷，超声溶解于1mL氯仿中，减压浓缩至干，加入10mL水化溶液，水化10分钟，然后超声25次(600W，开5秒，停5秒)，得到各实验组的空白脂质体，检测外观和包封率。

3)实验结果：

结果分析：人参皂苷脂质体在纯化水、糖类等中性溶液中稳定，但在离子型水溶液中不稳定，即：传统被动载药法制备的空白人参皂苷脂质体不适用于传统主动载药法制备离子型药物脂质体，例如，盐酸伊立替康、盐酸阿霉素等。

实施例2传统主动载药法中磷脂用量对伊立替康包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，药脂比(HSPC/药物)对包封率具有较大影响，当药脂比≥10时，包封率没有显著差异。根据上表，本发明处方优选药脂比为8-15。

实施例3传统主动载药法中胆固醇用量对伊立替康包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，胆固醇可提高脂质体稳定性并提高伊立替康的包封率。当胆固醇/药物≥0.5时，改善显著；当胆固醇/药物≥1时，胆固醇的数量对包封率无显著差异。

实施例4传统主动载药法中Rg3用量对伊立替康包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，HSPC和Rg3同步成膜，然后离子型水溶液水化、5％葡萄糖水透析和载药，无法制备合格的Rg3伊立替康共载脂质体。

实施例5传统主动载药法中胆固醇用量对Rg3脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，HSPC、Rg3和胆固醇先同步成膜，然后离子型水溶液水化、5％葡萄糖透析，得到Rg3脂质体，该工艺制备的脂质体的Rg3包封率低，离子型水溶液造成了Rg3泄漏。

实施例6传统主动载药法中胆固醇用量对Rg3脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，在透析之后外水相为5％葡萄糖时，Rg3作为药物载入脂质体，Rg3的包封率合格，其中胆固醇的用量对Rg3包封率的影响不大。通过效果实施例 1：Glut1的细胞摄取实验中的C6-C-Rg3(后)/Lp组的靶向性实验结果显示：该组的Glut1介导的靶向性差，显示Rg3的葡萄糖基未暴露在脂质体表面，因此Rg3应被包裹于脂质体的内腔中。

实施例7传统主动载药法中Rg3和伊立替康同步载入实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，在不同比例的Rg3和胆固醇用量下，所述的空白脂质体的内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液，外水相为5％葡萄糖溶液，Rg3和伊立替康作为药物，同步载入，伊立替康和Rg3的包封率都不合格。离子型水溶液同时影响了Rg3和盐酸伊立替康的包封率。

实施例8传统主动载药法中先载Rg3再载伊立替康对包封率的影响实验

结果分析：采用传统主动载药法中的乙醇注入法，采用了不同比例的Rg3和胆固醇比例，在透析之后，所述的空白脂质体的内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液，外水相为5％葡萄糖溶液，先载入Rg3，再载入盐酸伊立替康，所制备的Rg3伊立替康共载脂质体的包封率都不合格。

实施例9不同制备方法对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：

1)被动载药(薄膜法)无法制备合格的Rg3伊立替康共载脂质体；

2)普通主动载药法无法制备合格的Rg3伊立替康共载脂质体；

3)普通主动载药法，先载Rg3再载伊立替康，或Rg3与伊立替康同步载入，无法制备合格的Rg3 伊立替康共载脂质体；

4)普通主动载药法，先载伊立替康再Rg3，可制备得到合格的Rg3伊立替康共载脂质体。利用该方法制备的脂质体，经本发明应用实施1：Glut1的细胞摄取实验，C6-Rg3(后)-CPT/Lp组实验结果表明：利用该方法制备的Rg3脂质体具有显著的Glut1介导的主动靶向作用，证明Rg3是嵌入在磷脂双分子膜中，其中Rg3分子中的葡萄糖基(Glc)裸露在脂质体外表面。

实施例10Rg3用量对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：

1)采用上述的乙醇注入法，可制备合格的Rg3伊立替康共载脂质体，具体地，该脂质体的内水相为蔗糖八硫酸酯伊立替康盐，该脂质体的外水相为5％葡萄糖等渗溶液，该脂质体的双分子膜为氢化磷脂和Rg3，其中Rg3分子中的葡萄糖基(Glc)裸露在脂质体外表面，该脂质体膜材中不含胆固醇。

2)所述的Rg3伊立替康脂质体，当HSPC:Rg3＝10:0.1-3:1时，Rg3和伊立替康的包封率良好。随着Rg3用量上升，Rg3和伊立替康的包封率急剧下降。

3)本实施例Rg3的使用范围为HSPC:Rg3＝10:0.1-3:1，其中Rg3为0.1-3份，本发明人参皂苷保护范围为1-2份。

实施例11不同盐对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，蔗糖八硫酸酯三乙胺、硫酸铵、甲基磺酸铵、4-羟基苯磺酸铵、甲基磺酸三乙胺、4-羟基苯磺酸三乙胺、乙二磺酸铵、丙二磺酸铵、乙二磺酸三乙胺和丙二磺酸三乙胺均能满足Rg3伊立替康脂质体的制备，包封率合格。实验同时显示，蔗糖八硫酸酯三乙胺和二价盐的效果最佳，包封率最高。

实施例12不同盐浓度对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，1)蔗糖八硫酸酯三乙胺浓度低于0.05M时，将包封率不能满足的工艺要求；当浓度≥0.1M时，包封率无显著差别。2)硫酸铵和乙二磺酸三乙胺浓度低于0.16M 时，包封率无法满足工艺要求；浓度在0.32M和0.65M时，包封率无显著差别。3)甲基磺酸铵浓度低于0.325M时，包封率无法满足工艺要求；浓度在0.65M和0.975M时，包封率无显著差别。

实施例13不同人参皂苷对皂苷伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，20(S)-Rg3、20(S)-Rh2、Rg5、Rk1、Rp1、伪Rg3、伪GQ 和PPD等皂苷制备的共载脂质体，其包封率符合质量要求；而20(R)-Rg3和PPT等皂苷制备的共载脂质体，其包封率不符合质量要求。

实施例14不同均质方法对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，在粒径控制的三个常用方法(超声法、高压均质法、推挤过膜法)，均能符合工艺要求。

实施例15不同磷脂对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱所制备的Rg3伊立替康共载脂质体的包封率符合药品申报要求，PEG-DSPE不符合要求。

实施例16不同伊立替康浓度对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，在药物浓度为5-15mg/mL时，包封率最佳，特别是药物浓度为10mg/mL时最佳。当药物浓度低于5mg/mL或高于20mg/mL时，包封率不符合药品质量要求。

经过本发明实验证实(实施例1)：以磷脂和胆固醇为膜材构成的脂质体，在离子型盐溶液中稳定；而以磷脂和人参皂苷(例如Rg3)为膜材构成的脂质体，在离子型盐溶液中不稳定。因此，采用常规的主动载药法，无法制备以人参皂苷为膜材的载药脂质体。

采用了改进的主动载药法，处方比例、药物加入顺序和数量，都会影响Rg3在脂质体中所处的位置。例如：

情形1(人参皂苷位于脂质体纳米粒的内腔)：在胆固醇参与下，因胆固醇和磷脂的亲和性强于人参皂苷与磷脂的亲和性，在此制备条件下，人参皂苷将被包载于脂质体内腔，使得脂质体外表面失去了由葡萄糖基构成靶头(应用实施例1，C6-C-Rg3-VCR/Lp组实验证明)；

情形2(人参皂苷位于脂质体纳米粒的内腔)：虽然采用主动载药法，在外水相为5％葡萄糖水溶液时，先加入人参皂苷并构成了以人参皂苷为膜材的脂质体，但随后加入的离子型药物(例如，盐酸伊立替康，硫酸长春新碱)水溶液，药物带入的离子(例如，盐酸、硫酸)不仅破坏了Rg3和磷脂构成的双分子膜，并进一步影响了水溶性药物的载入，造成Rg3和水溶性药物共载脂质体的失败(实施例9证明)；

情形3(本发明，人参皂苷位于脂质体膜上，不在内腔)：在内水相为梯度盐溶液(例如，蔗糖八硫酸酯三乙胺)，外水相为等渗溶液(例如，5％葡萄糖)时，先载入水溶性药物(例如，盐酸伊立替康，硫酸长春新碱)，在内水相形成药物不溶物(例如，蔗糖八硫酸酯伊立替康等)，然后再载入人参皂苷，即得本发明所述的Rg3水溶性药物共载脂质体。虽然该方法中，外水相也含有由水溶性药物带入的离子，与上述情形2相同，但实验结果不同，机理尚不明确。

实施例17不同生理等渗溶液对Rg3伊立替康共载脂质体包封率的影响实验

结果分析：采用本发明的乙醇注入法，5％葡萄糖和10％蔗糖水溶液对Rg3和伊立替康的包封率无显著差别，0.9％生理盐水不适用。

实施例18Rg3伊立替康脂质体的制备

1.处方：HSPC 10g，Rg3 1g，盐酸伊立替康1g，无水乙醇适量，5％葡萄糖注射液适量，注射用水适量，0.1M蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液适量。

2.操作方法：

步骤(1)：成膜和水化

称取处方量的HSPC，溶于20mL无水乙醇中，加入100mL 0.1M的蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液， 55-60℃水化10分钟，挥发除去大部分乙醇，制备得到内外水相均是蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液，磷脂浓度在80-120mg/mL的空白脂质体粗品；

步骤(2)：推挤过膜

将步骤(1)的空白脂质体溶液在压力600-800psi，依次通过孔径分别为800nm、400nm、200nm、 100nm的聚碳酯膜过滤板各4次，最终得到粒径小于100nm内外水相均是蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液的空白脂质体。

步骤(3)：透析

将步骤(2)的空白脂质体置于截留分子量为10000的透析袋中，以5％葡萄糖水溶液作为透析介质， 4℃透析12小时，样品与透析介质体积比为1：1000，透析期间每4小时更换1次透析液，完全去除空白脂质体外水相中的蔗糖八硫酸酯三乙胺，得到由5％葡萄糖组成的外水相由蔗糖八硫酸酯三乙胺为内水相的空白脂质体。

步骤(4)：载入伊立替康

将步骤(3)中的空白脂质体与浓度为10mg/ml的盐酸伊立替康水溶液，按照体积比为1：1混合，并于50-60℃水浴中孵育40分钟，即得伊立替康脂质体。具体地，该脂质体内水相为蔗糖八硫酸酯伊立替康不溶盐，该脂质体外水相为5％葡萄糖水溶液。

步骤(5)：嵌入Rg3

将100mL 10mg/mL的Rg3乙醇溶液于20-30℃下，缓慢加入到步骤(4)的伊立替康脂质体溶液，搅拌45分钟，挥发除去大部分乙醇，然后再置于截留分子量为10000的透析袋中，以5％葡萄糖水溶液作为透析介质，4℃透析12小时，样品与透析介质体积比为1：1000，透析期间每4小时更换1次透析液，完全去除乙醇溶剂、无机盐、未包裹的盐酸伊立替康和Rg3，即得Rg3伊立替康脂质体。

步骤(6)：添加PEG-DSPE

准确称取0.2g PEG-DSPE，溶于10mL5％葡萄糖中，然后加入到步骤(5)的Rg3伊立替康脂质体溶液，得到伊立替康和Rg3浓度都是约5mg/mL的Rg3伊立替康脂质体溶液。

步骤(7)：除菌过滤

将步骤(6)的Rg3伊立替康脂质体过0.22μm滤膜。

步骤(8)：灌装

将步骤(7)溶液灌装于10mL或20mL西林瓶中，压盖，包装，即得。

经检测，上述脂质体，伊立替康浓度＝4.68mg/mL，Rg3浓度＝5.02mg/mL，粒径D90＝106nm，Rg3 包封率＝95.67％，伊立替康包封率＝93.52％。

实施例19PEG-DSPE用量对Rg3伊立替康共载脂质体稳定性的影响

制备方法：取上述实施例18步骤(5)的Rg3伊立替康脂质体溶液，然后按本实施例处方加入不同浓度的PEG-DSPE水溶液，其他后续步骤同实施例18，然后将各处方制剂置于2-8℃冰箱，考察脂质体溶液的稳定性。

结果分析：

1)未添加PEG-DSPE，Rg3伊立替康脂质体在2-8℃保存3个月后，粒径快速上升，Rg3和伊立替康的泄漏率明显上升；

2)当PEG-DSPE/HSPC≤0.025时，在2-8℃保存3个月后，Rg3伊立替康脂质体的粒径显著上升，包封率显著下降，不合格稳定性质量要求。其中，PEG-DSPE/HSPC＝0.025，3个月的稳定性数据可接受。

3)当PEG-DSPE/HSPC≥0.025时，在2-8℃保存3个月后，Rg3伊立替康脂质体的粒径稳定、Rg3 和伊立替康的包封率较稳定，符合药品申报要求。

4)当PEG-DSPE/HSPC≥0.05时，粒径和包封率没有显著差别。

5)本发明PEG-DSPE的保护范围为0.1-2。

应用实施例1：Glut1的细胞摄取实验

1)实验目的：通过对比载荧光素的Rg3脂质体和胆固醇脂质体在4T1细胞上的摄取来观察Rg3 脂质体是否在肿瘤细胞上有更多的摄取；通过添加葡萄糖抑制剂等证明Glut1靶向机制；通过Glut1 靶向验证本发明的人参皂苷位于磷脂双分子膜中，并且葡萄糖基裸露在脂质体外表面。

2)实验方法：为了比较4T1对各实验组的摄取，探讨脂质体的摄取机制，将4T1细胞按2×10⁵的细胞密度接种于12孔板中，对于实验组+葡萄糖、实验组+根皮苷和实验组+槲皮素组，12小时后分别用20mM的葡萄糖溶液、根皮苷溶液和槲皮素溶液代替培养基。这三种溶质应在无葡萄糖培养基中溶解，孵育1小时后，加入各实验组药物(紫外荧光显色剂(C6)的浓度为100ng/ml)，孵育4小时后，消化，用新鲜PBS溶液洗涤，采用流式细胞仪进行分析。

为了研究Rg3脂质体的摄取机制，将底物(葡萄糖)，Glut1竞争性抑制剂根皮苷和槲皮素预先孵育1小时将Glut1先饱和后，再加入制剂，Rg3-Lp/C6的荧光强度分别降低了31％，43％和74％。由此可见Glut1底物和抑制剂的加入，阻止了Rg3-Lp/C6的细胞摄取，证明人参皂苷Rg3脂质体可通过与Glut1相互作用增强其摄取效率。

3)实验组制备方法：所述操作条件同本发明实施例的操作条件。

方法1(被动载药)：将处方量的HSPC、人参皂苷和/或胆固醇、荧光探针(香豆素)和/或药物，溶于适量乙醇和氯仿的混合溶剂中(体积比1：1)，减压浓缩至干，纯化水水化，超声，然后按本应用实施例的实验方法检测荧光强度。

方法2(主动载药)：将处方量的HSPC、Rg3和荧光探针，超声溶解于适量乙醇中，加入0.1M蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液水化10分钟，然后超声25次(开5秒停5秒)，用5％葡萄糖溶液透析，再依次载入(和/或)药物，再次透析除去游离药物，(和/或)适量PEG-DSPE，得到各实验组的脂质体溶液，然后按本应用实施例的实验方法检测荧光强度。

方法3(主动载药)：将处方量的HSPC和荧光探针，超声溶解于适量乙醇中，加入0.1M蔗糖八硫酸酯三乙胺溶液水化10分钟，然后超声25次(开5秒停5秒)，用5％葡萄糖溶液透析，再依次载入药物或Rg3，再次透析除去游离药物，(和/或)加入适量PEG-DSPE，得到各实验组的脂质体溶液，然后按本应用实施例的实验方法检测荧光强度。

实验结果1：

实验结论：

1)采用传统被动载药法(薄膜蒸发法)，靶向性实验数据证明：无法制备合格的Rg3伊立替康共载脂质体。

2)采用传统的主动载药法，具体地：

i.在透析之前加入Rg3，会造成Rg3在脂质体中发生泄漏，从而造成脂质体制备失败。

ii.在透析之后加入Rg3，可分两种情况：

a)Rg3在盐酸伊立替康之前加入，会导致脂质体中的Rg3严重泄漏，从而脂质体制备失败；

b)Rg3在盐酸伊立替康之后加入，脂质体制备成功。

上述两个条件基本相同，两者先后顺序虽然不同，但都存在离子型溶液，却产生了不同的结果，机制尚不明确。

3)适量加入PEG-DSPE影响了Glut1介导的靶向性，提示PEG-DSPE的用量有限制。

4)本实验提示，本发明所述的Rg3伊立替康共载脂质体，须按实施例18相同或相似的方法制备。

实验结果2如下：

由上述结果此可见，随着Glut1底物和抑制剂的加入，C6-C/Lp的荧光强度无显著改变，但阻止了C6-Rg3/Lp的细胞摄取，证明人参皂苷Rg3脂质体通过与Glut1相互作用增强其摄取效率，从而证明Rg3位于脂质体的膜上，Rg3的葡萄糖基(Glc)裸露在脂质体表面。

应用实施例2：人乳腺癌(MCF-7)体内药效学研究

1)试验方法：将肿瘤细胞株(MCF-7)注入小鼠皮下，建立皮下肿瘤模型。当肿瘤体积达到100mm³ (接种后7d)时，将小鼠随机分组(n＝8每组)治疗，每组尾静脉注射空白溶剂(5％葡萄糖，Blank)、盐酸伊立替康注射剂(开普拓，CPT组)、伊立替康脂质体注射剂(Onivyde组)和各实验组，剂量按伊立替康计高中低三组(20mg、10mg、5mg)，每7天给一次药，持续到第28天，给药的同时测量肿瘤的长度、宽度和记录体重。计算肿瘤体积(V)的公式为：V＝(W²×L)/2。长度(L)为实体瘤的最长直径，宽度(W) 是垂直于长度的最短直径。在第28天实验结束，所有动物均处死，取出肿瘤进行影像学和组织学检测。

备注：伊立替康+Rg3＝20mg/kg+20mg/kg，表示药物浓度，下同。

2)实验组如下：

3)试验结果如下：

结论：

1)Rg3伊立替康脂质体的体内药效学比CPT组、Onivyde组和Rg3胆固醇伊立替康脂质体组显著优效。

2)Rg3/CPT＝1.0、1.5和2.0，在药效学上，无显著差别。

3)Rg3伊立替康脂质体组中剂量组(10mg/kg)第28天的抑瘤率在29％-34％，与CPT组高剂量组 (20mg/kg)第28天的抑瘤率33％基本相同，显示Rg3伊立替康脂质体的药效学是普通伊立替康注射剂提高2倍。

人结肠癌C-26细胞株：根据体内药效学实验方法，针对人结肠癌(C-26)细胞体内药效学的研究数据如下。

结果显示：

1)Rg3伊立替康脂质体和Rh2伊立替康脂质体的药效学无显著差别；

2)Rg3伊立替康脂质体和Rh2伊立替康脂质体的药效学比普通伊立替康脂质体(Onivyde组)具有显著性差异。

人胰腺癌Capan-1：根据体内药效学实验方法，针对人胰腺癌(Capan-1)细胞体内药效学的研究数据如下。

结果显示：

应用实施例3：急性毒性(LD50)研究(SD大鼠)

1)实验方法：大鼠160-260g，6-9周龄，每组6只，给药方式：缓慢静推(约1mL/min)，给药频率：3次/天。

本试验供试品伊立替康剂量设置为25，50，100和150mg/kg/天，供试品中含Rg3根据处方剂量计算。同时设置溶媒对照组(5％葡萄糖注射液)、市售阳性对照组(CPT组、Onivyde组)、Rg3(1.0)-CPT- PEG/Lp、Rg3(2.0)-CPT-PEG/Lp，缓慢静推(约1mL/min)，3次/天，每次给药间隔至少4h。

2)实验组制备方法：根据处方要求，依实施例1方法制备。

3)实验结果如下表：

通过以上实验显示，

1)Rg3伊立替康脂质体和Rh2伊立替康脂质体的急性毒性无显著差别；

2)Rg3伊立替康脂质体和Rh2伊立替康脂质体的急性毒性比普通伊立替康脂质体的低；

3)Rg3(1.0)-CPT-PEG/Lp组和Rg3(2.0)-CPT-PEG/Lp组的急性毒性在250mg/kg未见死亡，CPT 组在150mg/kg死亡1只，Onivyde组在200mg/kg死亡5/6，显示Rg3伊立替康脂质体的急性毒性比 CPT组和Onivyde组显著性降低。

同时说明：

普通伊立替康注射剂的LD50在150-200mg/kg之间；

普通伊立替康脂质体(Onivyde)的LD50在150-200mg之间，但比普通伊立替康注射液得到显著性降低。

Claims

1.一种人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，其包括如下以重量份数计的组分：8-15份磷脂、1-2份人参皂苷和1份伊立替康盐；其中，所述的磷脂为氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rp1、人参皂苷伪Rg3、人参皂苷伪GQ和人参皂苷PPD中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足如下一个或多个条件：

(1)所述的伊立替康盐为盐酸伊立替康通过pH梯度法与盐溶液进行离子交换得到的伊立替康盐；

(2)所述的伊立替康盐为硫酸伊立替康、蔗糖八硫酸酯伊立替康、甲基磺酸伊立替康、乙二磺酸伊立替康、丙二磺酸伊立替康或4-羟基苯磺酸伊立替康；

(3)所述的人参皂苷伊立替康脂质体中，所述的人参皂苷与所述的磷脂形成磷脂膜；

(4)所述的人参皂苷伊立替康脂质体中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括PEG-DSPE；较佳地，所述PEG-DSPE为PEG2000-DSPE；

(5)所述的磷脂为氢化磷脂；

(6)所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3；

(7)所述人参皂苷的HPLC纯度≥99％；

(8)所述的磷脂的重量份数为10份；

(9)所述的人参皂苷的重量份数为1份；

(10)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm；

(11)所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括水；

(12)所述的人参皂苷伊立替康脂质体不包括胆固醇。

3.如权利要求2所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足如下一个或多个条件：

(1)所述的盐溶液为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；

(2)所述的盐溶液与所述的盐酸伊立替康的体积质量比为66.7-200mL/g；

(3)所述的伊立替康盐为硫酸伊立替康、蔗糖八硫酸酯伊立替康、乙二磺酸伊立替康或丙二磺酸伊立替康；

(4)所述的磷脂膜包括PEG-DSPE；

(5)所述的磷脂膜的内侧为内水相，所述的磷脂膜的外侧为外水相，所述的伊立替康盐被包封于所述的内水相中；

(6)所述的盐溶液的浓度为0.05M-0.975M；

(7)所述的PEG-DSPE的重量份数为0.1-2份；

(8)所述的盐酸伊立替康为10mg/mL的盐酸伊立替康水溶液；

(9)所述的盐酸伊立替康与所述的磷脂的质量比为1:(8-15)；

(10)所述的盐酸伊立替康与所述的人参皂苷的质量比为1:(1-2)。

4.如权利要求3所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足如下一个或多个条件：

(1)所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、4-羟基苯磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、4-羟基苯磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液和丙二磺酸三乙胺水溶液；

(2)所述的盐溶液与所述的盐酸伊立替康的体积质量比为100mL/g；

(3)所述的伊立替康盐为蔗糖八硫酸酯伊立替康；

(4)所述的内水相为盐溶液，所述的外水相为生理等渗溶液；所述的生理等渗溶液例如为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液；

(5)所述的盐溶液的浓度为0.05M、0.1M、0.16M、0.2M、0.3M、0.325M、0.65M或0.975M；

(6)所述的盐酸伊立替康与所述的磷脂的质量比为1:8、1:10、1:12或1:15；

(7)所述的盐酸伊立替康与所述的人参皂苷的质量比为1:1或1:2；

(8)所述的PEG-DSPE的重量份数为0.5份。

5.如权利要求4所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足如下一个或多个条件：

(1)所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或乙二磺酸铵水溶液；

(2)当所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.05M-0.3M，例如0.05M、0.1M、0.2M或0.3M；

(3)当所述的盐溶液为乙二磺酸三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16M-0.325M，例如0.16M或0.325M；

(4)当所述的盐溶液为甲基磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.325M-0.975M，例如0.325M、0.65M或0.975M；

(5)当所述的盐溶液为硫酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16M-0.65M，例如0.16M、0.325M或0.65M；

(6)当所述的盐溶液为乙二磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.65M；

(7)所述的盐酸伊立替康与所述的磷脂的质量比为1:10；

(8)所述的内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液。

6.如权利要求1所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足以下一个或多个条件：

(1)所述的人参皂苷伊立替康脂质体为下述任一方案：

方案1：所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下重量份数的组分：10份磷脂、0.5份PEG-DSPE、1份人参皂苷、1份伊立替康盐，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下重量份数的组分：10份磷脂、0.5份PEG-DSPE、1份人参皂苷、1份伊立替康盐和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

方案2：所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

方案3：所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.5份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.5份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

方案4：所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、2份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、2份20(S)-人参皂苷Rg3、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

方案5：所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rh2、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE，或者，所述的人参皂苷伊立替康脂质体为如下质量分数的组分：10份氢化磷脂、1.0份20(S)-人参皂苷Rh2、1份伊立替康盐、0.5份PEG-DSPE和内水相，所述内水相为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

(2)所述的盐溶液为0.1M蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液，0.325M硫酸铵水溶液或0.65M甲基磺酸铵水溶液。

7.一种人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤；

步骤2：其为下述方案1、方案2和方案3中的任意一种，

方案1，高压均质法，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1进行高压均质，控制粒径D90在100nm以下，得到溶液A2a；

方案2，挤出法，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1，依次通过孔径挤出板挤出，控制粒径D90在100nm以下，得到脂质体溶液A2b；

方案3，超声法，其包括如下步骤：将步骤1得到的溶液A1进行超声处理，得到一澄清溶液A2c；

步骤5：将步骤4得到的Y1脂质体和人参皂苷混合，得到溶液A4，溶液A4经透析后得到Y2脂质体；

其中，所述磷脂、人参皂苷、盐酸伊立替康和PEG-DSPE的定义均如权利要求1-6中任一项中所述。

8.如权利要求7所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法满足如下一个或多个条件：

(1)所述的步骤1中，所述的磷脂与所述的无水乙醇的质量体积比的比值为0.2g/mL-2g/mL，例如0.5g/mL；

(2)所述的步骤1中，所述的溶液A1为将所述的磷脂加热溶解于无水乙醇中得到；所述的加热可为水浴加热至55-65℃，例如60℃；

(3)所述的步骤1中，所述的水化的温度为55-65℃，例如55-60℃；

(4)所述的步骤1中，所述的水化为在旋蒸瓶中进行，转速为40-60rp/min，例如50rp/min；

(5)所述的步骤1中，所述的水化的终点以溶液均一即可；所述的水化的时间为10分钟-4小时，例如10分钟；

(6)所述的步骤1中，所述的盐溶液的定义如权利要求2-5中任一项所述；

(7)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的温度为0-10℃；较佳地，确保脂质体溶液的温度在5-10℃；

(8)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的压力在800-1400bar之间，例如1200bar；

(9)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的次数为3-4次，例如4次；

(10)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的温度为35-45℃，例如40℃；

(11)所述的步骤2的方案2中，所述的孔径为800nm、400nm、200nm或100nm；

(12)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的压力为600-800psi；例如800psi；

(13)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的次数为4-10次，例如4次；

(14)所述的步骤2的方案3中，所述的超声的次数为20-30次，例如25次；

(15)所述的步骤3中，所述的透析过程中使用的透析袋的截留分子量为8000-15000，例如截留分子量为10000；

(16)所述的步骤3中，所述的等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液；

(17)所述的步骤3中，所述的溶液A2a、A2b或A2c与所述的等渗溶液的体积比为1:1000；

(18)所述的步骤3中，所述的透析的温度为0-10℃，例如4℃；

(19)所述的步骤3中，所述的透析的时间为10-18小时，例如12小时；

(20)所述的步骤3中，所述的透析中，每4小时更换1次透析介质；

(21)所述的步骤3中，所述溶液A3为由外水相为等渗溶液、内水相为盐溶液组成的空白脂质体；

(22)所述的步骤4中，所述的盐酸伊立替康的浓度为5mg/mL-20mg/mL，例如5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL或20mg/mL，又例如10mg/mL；

(23)所述的步骤4中，所述的溶液A3和盐酸伊立替康的水溶液的体积比为1:1；

(24)所述的步骤4中还进一步包括水浴中孵育的过程，所述水浴的温度为50-60℃，所述孵育的时间为40分钟；

(25)所述的步骤4中，所述的Y1脂质体的内水相为酸根伊立替康盐，该脂质体外水相为等渗溶液；

(26)所述的步骤5中，所述的人参皂苷以人参皂苷的乙醇溶液的形式参与混合，所述的人参皂苷的乙醇溶液的浓度为5mg/mL-20mg/mL，例如10mg/mL；

(27)所述的步骤5中，所述的混合以搅拌的形式进行，所述搅拌的时间为30-60分钟，例如45分钟；

(28)所述的步骤5中，所述的透析包括下述步骤：以等渗溶液为介质，将溶液A4置于透析袋中进行透析；所述的透析中使用的透析袋的截留分子量可为8000-15000，例如截留分子量为10000；所述的等渗溶液可为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液；所述的透析的温度可为0-10℃，例如4℃；所述的透析的时间可为10-18小时，例如12小时；所述的A4与所述的等渗溶液的体积比可为1:1000；所述的透析中，可每4小时更换1次透析介质；

(29)所述的步骤6中，所述的PEG-DSPE与磷脂的质量比为(0.1-2):10，例如0.2:10；

(30)所述的步骤6中，所述的PEG-DSPE在所述的混合溶液中的浓度为1-20mg/mL，例如10mg/mL；

(31)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法还进一步包括除菌过滤和灌装步骤；较佳地，所述除菌过滤步骤中，采用0.22μm滤膜过滤所述步骤6得到的脂质体，所述灌装步骤中，灌装于10mL或20mL西林瓶中、压盖和包装；

(32)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm，优选D90≤110nm。

(33)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的包封率≥80％，优选包封率≥90％。

9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤；

步骤3：将步骤2中得到的溶液A2b置于透析袋中，以葡萄糖水溶液作为透析介质，进行透析，完全去除脂质体溶液A2b的外水相中的盐溶液，得到由外水相为葡萄糖水溶液、内水相为盐溶液组成的溶液A3；所述的透析的时间和温度如权利要求8所述；

步骤4：将步骤3得到的溶液A3与盐酸伊立替康水溶液混合，并于水浴中孵育，得到Y1脂质体，所述Y1脂质体的内水相为蔗糖八硫酸酯伊立替康盐，外水相为葡萄糖水溶液；所述水浴的温度和孵育时间如权利要求8所述；

步骤5：将人参皂苷的乙醇溶液与Y1脂质体混合，搅拌，去除乙醇，再置于透析袋中，以葡萄糖水溶液作为透析介质，进行透析，完全去除乙醇溶剂、盐溶液中的盐、未包裹的盐酸伊立替康和人参皂苷，得到Y2脂质体；所述的透析的时间和温度如权利要求8所述；

10.一种人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，其由如权利要求7或8所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法制备得到；较佳地，所述的人参皂苷伊立替康脂质体如权利要求1-6中任一项所述。

11.一种人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述人参皂苷伊立替康脂质体的原料包括以重量份数计的组分：8-15份磷脂、1-2份人参皂苷和1份盐酸伊立替康；其中，所述的磷脂为氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；所述的人参皂苷为20(S)-人参皂苷Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rk1、人参皂苷Rp1、人参皂苷伪Rg3、人参皂苷伪GQ和人参皂苷PPD中的一种或多种。

12.如权利要求11所述的人参皂苷伊立替康脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷伊立替康脂质体满足如下一个或多个条件：

(1)所述的人参皂苷伊立替康脂质体由如权利要求7-10所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法制备得到；

(2)所述的人参皂苷伊立替康脂质体还包括PEG-DSPE；

(3)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的原料还包括盐溶液，所述的盐溶液可为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；较佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、4-羟基苯磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、4-羟基苯磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液和丙二磺酸三乙胺水溶液；更佳地，所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、硫酸铵水溶液、甲基磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或乙二磺酸铵水溶液；例如蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液；

(4)所述的磷脂、PEG-DSPE和人参皂苷的定义如权利要求1-6中任一项所述；

(5)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的原料还包括生理等渗溶液和/或盐溶液，较佳地，所述的生理等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液；

(6)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的粒径D90≤150nm，优选D90≤110nm；

(7)所述的人参皂苷伊立替康脂质体的制备方法中，所述的人参皂苷伊立替康脂质体的包封率≥80％，优选包封率≥90％。

13.一种脂质体组合物，其特征在于，其包含葡萄糖水溶液和物质A，所述的物质A为权利要求1-6、10-12中任一项所述的人参皂苷伊立替康脂质体；较佳地所述的葡萄糖水溶液为5％葡萄糖水溶液。

14.一种物质A在制备用于治疗和/或预防癌症药物中的应用；所述的物质A为如权利要求1-6、10-12中任一项所述的人参皂苷伊立替康脂质体或如权利要求13所述的脂质体组合物。

15.如权利要求14所述的应用中，所述的癌症可为结直肠癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、胰腺癌或头颈部癌。