CN105165630B - 金线莲组培苗的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金线莲组培苗的培育方法，涉及组培苗的培育技术领域，包括以下步骤：A、将金线莲蒴果的种子均匀洒在诱导培养基表面培养25天～35天，种子萌发形成原球茎；B、将原球茎转接到增殖培养基进行培养，2个月后发育成小苗，小苗转接到增殖培养基上进行继代培养，每隔30天～35天继代1次，得到丛生芽；C、丛生芽长高至2.5厘米～3.5厘米时，将丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上，一个月后单株长出1厘米～3厘米的根，即得本金线莲组培苗。与现有技术相比，本发明促进种子萌发，提高种子的发芽率，小苗经过继代培养得到大量的丛生芽，将丛生芽分割成单株并接种在生根培养基上诱导生根，生根率可达99%以上。
Description
技术领域
本发明涉及组培苗的培育技术领域，尤其是一种金线莲组培苗的培育方法。
背景技术
金线莲别名金线兰、金丝草等，为兰科开唇兰属多年生草本植物，是一种珍稀名贵的中草药。金线莲以全草入药，具有清凉解毒，滋阴降火和消炎止痛的功效，对无名肿痛，发烧、止泻及蛇咬伤等均有显著的疗效，近年来治疗高血压、糖尿病等广泛运用。人们长期大量无节制的挖掘，野生的金线莲资源日渐枯竭，金线莲的人工栽培日趋广泛，需要大量的金线莲种苗；由于金线莲的种子细小，一枚蒴果含有成千上万粒种子，种子由球形胚与单层细胞构成的种皮组成，在自然条件下需与真菌共生才能萌芽生长，但其发芽率极低；而且金线莲种苗的生根率低，金线莲种苗生长繁殖慢，满足不了大规模种植的需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种金线莲组培苗的培育方法，以解决金线莲种子的发芽率极低，种苗生根率低的问题，加快金线莲种苗的生长繁殖，满足大规模种植金线莲的需要。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是：这种金线莲组培苗的培育方法，包括以下步骤：
A、将金线莲蒴果的种子均匀洒在诱导培养基表面进行培养25天～35天，种子萌发形成原球茎；所述诱导培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg/L的 a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6；
B、将原球茎转接到增殖培养基进行培养，2个月后发育成小苗，小苗转接到增殖培养基上进行继代培养，每隔30天～35天继代1次，得到丛生芽；所述增殖培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入2.0mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6；
C、丛生芽长高至2.5厘米～3.5厘米时，将丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上诱导生根，一个月后单株长出1厘米～3厘米的根，即得金线莲组培苗；所述生根培养基的配方是：在1/2MS培养基的基础上，加入0.8mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、0.5mg/L的活性炭、15g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6。
上述金线莲组培苗的培育方法技术方案中，更具体的技术方案还可以是：步骤A、步骤B和步骤C的培养环境为：培养温度（23±2）℃，光照强度1500勒克斯～2000勒克斯，光照时间为12小时/天。
进一步的，所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的制备步骤包括：
（1）按所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的配方分别配制所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基，调节pH5.4～5.6；
（2）分别将配制好的所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将分装有各种培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
进一步的，步骤A中先将金线莲蒴果进行消毒处理后，再取用种子；所述消毒处理是在超净工作台上将金线莲蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.1%HgCl2水溶液浸泡8分钟～10分钟，再用无菌水冲洗5次～6次。
由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比具有如下有益效果：
1、本发明将种子均匀洒在诱导培养基表面进行培养，促进种子萌发形成原球茎，大幅度提高种子的发芽率；原球茎转接到增殖培养基进行培养成小苗，小苗经过继代培养得到大量的丛生芽；将丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上诱导生根，生根率可达99%以上；加快金线莲种苗的生长繁殖，满足大规模种植金线莲的需要。
2、提供适宜的温度和光照，促进金线莲种子的萌芽和小苗的生长繁殖。
3、配制提高种子萌芽的诱导培养基，小苗生长繁殖的增殖培养基以及生根培养基，促进金线莲种苗的生长繁殖。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详述：
实施例1
一种金线莲组培苗的培育方法，具体步骤如下：
A、将野生的金线莲蒴果进行消毒处理后，再取用金线莲蒴果内的种子；消毒处理是在超净工作台上将金线莲蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.1%HgCl2水溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗5次；将种子均匀洒在诱导培养基表面进行培养，培养温度21℃，光照强度1500勒克斯，光照时间为12小时/天，培养25天，种子萌发形成白色的原球茎；诱导培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg/L的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节pH5.4；
B、将原球茎转接到增殖培养基进行培养，2个月后发育成小苗，小苗转接到增殖培养基上进行继代培养，培养温度21℃，光照强度1500勒克斯，光照时间为12小时/天，每隔30天继代1次，即可不断地得到大量丛生芽；增殖培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入2.0mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节pH5.4；
C、丛生芽长高至2.5厘米时，将健壮的丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上诱导生根，培养温度21℃，光照强度1500勒克斯，光照时间为12小时/天；一个月后单株长出1厘米的根，即得金线莲组培苗；生根培养基的配方是：在1/2MS培养基的基础上，加入0.8mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、0.5mg/L的活性炭、15g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节pH5.4。
诱导培养基的制备步骤：
（1）按诱导培养基的配方，在MS培养基的基础上，每升加入1.5mg的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg的 a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、30g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.4；
（2）将配制好的诱导培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有诱导培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
增殖培养基的制备步骤：
（1）按增殖培养基的配方，在MS培养基的基础上，每升加入2.0mg的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg 的a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、100g的土豆汁、30g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.4；
（2）将配制好的增殖培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有增殖培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
生根培养基的制备步骤：
（1）按生根培养基的配方，在1/2MS培养基的基础上，每升加入0.8mg 的a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、0.5mg的活性炭、15g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.4；
（2）将配制好的生根培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有生根培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
实施例2
一种金线莲组培苗的培育方法，具体步骤如下：
A、将野生的金线莲蒴果进行消毒处理后，再取用金线莲蒴果内的种子；消毒处理是在超净工作台上将金线莲蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.1%HgCl2水溶液浸泡10分钟，再用无菌水冲洗6次；将种子均匀洒在诱导培养基表面进行培养，培养温度25℃，光照强度2000勒克斯，光照时间为12小时/天，培养35天，种子萌发形成白色的原球茎；诱导培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg/L的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节5.6；
B、将原球茎转接到增殖培养基进行培养，2个月后发育成小苗，小苗转接到增殖培养基上进行继代培养，培养温度25℃，光照强度2000勒克斯，光照时间为12小时/天，每隔35天继代1次，即可不断地得到大量丛生芽；增殖培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入2.0mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节pH5.6；
C、丛生芽长高至3.5厘米时，将健壮的丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上诱导生根，培养温度25℃，光照强度2000勒克斯，光照时间为12小时/天；一个月后单株长出3厘米的根，即得金线莲组培苗；生根培养基的配方是：在1/2MS培养基的基础上，加入0.8mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、0.5mg/L的活性炭、15g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，调节pH5.6。
诱导培养基的制备步骤：
（1）按诱导培养基的配方，在MS培养基的基础上，每升加入1.5mg的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg的 a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、30g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.6；
（2）将配制好的诱导培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有诱导培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
增殖培养基的制备步骤：
（1）按增殖培养基的配方，在MS培养基的基础上，每升加入2.0mg的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg 的a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、100g的土豆汁、30g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.6；
（2）将配制好的增殖培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有增殖培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
生根培养基的制备步骤：
（1）按生根培养基的配方，在1/2MS培养基的基础上，每升加入0.8mg 的a-萘乙酸（NAA）、200mg的水解酪蛋白（CH）、0.5mg的活性炭、15g的蔗糖、4.5g的琼脂，混合后调节pH5.6；
（2）将配制好的生根培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将装有生根培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
Claims (3)
1.一种金线莲组培苗的培育方法，其特征在于包括以下步骤：
A、先将金线莲蒴果进行消毒处理后，再取用种子；所述消毒处理是在超净工作台上将金线莲蒴果放置于75%的酒精中消毒30秒，然后用0.1%HgCl2水溶液浸泡8分钟～10分钟，再用无菌水冲洗5次～6次；将金线莲蒴果的种子均匀洒在诱导培养基表面进行培养25天～35天，种子萌发形成原球茎；所述诱导培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、 0.1mg/L的 a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6；
B、将原球茎转接到增殖培养基进行培养，2个月后发育成小苗，小苗转接到增殖培养基上进行继代培养，每隔30天～35天继代1次，得到丛生芽；所述增殖培养基的配方是：在MS培养基的基础上，加入2.0mg/L的6-苄氨基嘌呤（6-BA）、0.1mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、100g/L的土豆汁、30g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6；
C、丛生芽长高至2.5厘米～3.5厘米时，将丛生芽分割成单株并转接在生根培养基上诱导生根，一个月后单株长出1厘米～3厘米的根，即得金线莲组培苗；所述生根培养基的配方是：在1/2MS培养基的基础上，加入0.8mg/L 的a-萘乙酸（NAA）、200mg/L的水解酪蛋白（CH）、0.5mg/L的活性炭、15g/L的蔗糖、4.5g/L的琼脂，pH5.4～5.6。
2.根据权利要求1所述的金线莲组培苗的培育方法，其特征在于：步骤A、步骤B和步骤C的培养环境为：培养温度（23±2）℃，光照强度1500勒克斯～2000勒克斯，光照时间为12小时/天。
3.根据权利要求1或2所述的金线莲组培苗的培育方法，其特征在于：
所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的制备步骤包括：
（1）按所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基的配方分别配制所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基，调节pH5.4～5.6；
（2）分别将配制好的所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基进行加热，至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；
（3）将分装有各种培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅中，在温度121℃、压力105KPa下灭菌21分钟。
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