CN105163753A - 阳离子脂质疫苗组合物和使用方法 - Google Patents

阳离子脂质疫苗组合物和使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105163753A
CN105163753A CN201380043183.9A CN201380043183A CN105163753A CN 105163753 A CN105163753 A CN 105163753A CN 201380043183 A CN201380043183 A CN 201380043183A CN 105163753 A CN105163753 A CN 105163753A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antigen
seq
vaccine combination
cell
dotap
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201380043183.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105163753B (zh
Inventor
米卡耶尔·马克里提齐安
萨米尔·N·卡赫里夫
K.约翰逊
E.雅各布森
F.贝杜-阿多
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
PDS Biotechnology Corp
Original Assignee
PDS Biotechnology Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by PDS Biotechnology Corp filed Critical PDS Biotechnology Corp
Publication of CN105163753A publication Critical patent/CN105163753A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105163753B publication Critical patent/CN105163753B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本公开提供了疫苗组合物，其包含至少一种佐剂和至少一种治疗因子。本公开还提供了使用所述疫苗组合物在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法、在哺乳动物中增加免疫应答的方法和在哺乳动物中治疗疾病的方法。

Description

阳离子脂质疫苗组合物和使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求在35USC§119(e)下的于2012年6月15日提交的美国临时申请系列号61/660,172的利益，其整体公开通过引用并入本文。
政府权利
导致本发明的部分工作是在国立卫生研究院CRADANo.2644下提供的美国政府支持下实施的。因此，美国政府在本发明中并且对本发明具有某些权利。
电子提交的材料通过引用并入
通过引用以其整体并入的是计算机可读的序列表，与此同时提交并且识别如下：一个3,228比特ASCII（文本）文件，命名为“225611_ST25.txt”，创建于2013年6月12日。
技术领域
在全世界对于患者，发展安全并有效的人用免疫疗法和治疗用疫苗保持重要的医学需求。典型地，疫苗组合物包含刺激靶向免疫应答的抗原。然而，一些发展的疫苗是无效的，因为它们在广泛的哺乳动物群体中是免疫应答的弱刺激物。例如，疫苗组合物中的抗原可在哺乳动物中是较差免疫原性的。此外，一些疫苗不可有效地将抗原递送至哺乳动物免疫系统中的抗原呈递细胞（“APC”）。
骨髓源抑制细胞（Myeloid-derivedsuppressorcells，MDSC）是早期髓样前体(earlymyeloidprogenitors)的异质群体，其具有抑制患者适应性免疫应答的能力，诸如通过CD4+和CD8+T细胞介导的应答。已知MDSC分泌免疫抑制细胞因子并诱导调节性T细胞发展。此外，MDSC通过促炎细胞因子诱导并且在传染性和炎性病理状况中发现其数量增加。
MDSC在荷瘤小鼠的血液、骨髓和次级淋巴器官中积累并且它们在肿瘤微环境中的存在已暗示在促进肿瘤相关的免疫抑制中具有成因作用。重要地，已报道肿瘤抗原特异性T-细胞耐受是肿瘤逃逸的关键要素。此外，已发现MDSC在大多数癌症患者中存在。在产业中正在进行重要研究以鉴定抑制免疫抑制细胞（例如，MDSC和调节性T-细胞）的方法，作为改善T-细胞应答以攻击和杀死感染细胞的方法。目前在产业中的实践集中于探索封闭并抑制相关免疫抑制因子的封闭抗体的用途。诸如人类抗体Ipilimumab的疫苗可用于封闭细胞毒性T-淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4），已知其作为治疗黑色素瘤的治疗性疫苗在调节免疫应答中发挥作用。
发明背景和概述
疫苗同样典型地包含试图提高疫苗组合物中抗原效力的佐剂。例如，典型地使用诸如油包水乳状液、矾（例如，铝盐）和其它化学品的佐剂以提高在哺乳动物中的抗原应答。除传统的佐剂以外，可使用具有内在免疫效果的其它佐剂（例如，流感病毒体和Chiron’sMF59）。然而，这些佐剂同样是不期望的，因为来自动物模型（根据HSV和流感疫苗的临床试验报告）的证据暗示它们在动物中仅仅提高中和抗体的产生而不是提高T-细胞应答。
因此，存在对新型疫苗组合物的需求，其为了在哺乳动物中刺激免疫应答通过抗原呈递细胞有效递送抗原或促进抗原摄取，以及在哺乳动物中抑制免疫抑制细胞以改善免疫应答。此外，在哺乳动物中刺激细胞介导的免疫应答的新的并且有效的方法，可能通过在疫苗组合物中与治疗因子一同包含安全并有效的免疫学修饰剂（“immunologicmodifier”）（“免疫调谐剂”（“immunomodulator”））实现，是同样非常期望的。因此，本公开提供了疫苗组合物和使用所述组合物的方法，其展示了期望的特点并提供了改善在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群并增加免疫应答的相关优势。
本公开提供疫苗组合物，其包含至少一种佐剂和至少一种治疗因子。本公开同样提供了使用疫苗组合物在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法、在哺乳动物中增加免疫应答的方法和在哺乳动物中治疗疾病的方法。
根据本公开的疫苗组合物和方法提供了相比本领域其它组合物和方法的若干优势。第一，所述疫苗组合物包含佐剂，其在哺乳动物中提高、引导或促进合适的免疫应答的免疫调谐剂。如果免疫调谐剂包含在疫苗组合物中，其具有有效加强哺乳动物对抗原的免疫应答的潜力。例如，免疫调谐剂可有利地实现以下中一项或多项：（1）改善在APC中的抗原递送和/或加工，（2）诱导免疫调谐性细胞因子的产生，其有利于对所述抗原的免疫应答的发展，因此促进细胞介导的免疫力，包括细胞毒性T-淋巴细胞（“CTL”），（3）减少有效疫苗所需的免疫接种的数量或抗原量，（4）增加疫苗抗原的生物或免疫半衰期，和（5）通过抑制免疫抑制因子克服对抗原的免疫耐受。在一些实施方案中，在疫苗组合物中可以使用基于阳离子脂质的佐剂强化免疫修饰的佐剂并且可以引起更优的T-细胞和抗体免疫应答。
第二，本公开中的疫苗组合物包含治疗因子诸如细胞因子，其作为组合可以在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群，这可以改善哺乳动物针对疾病的免疫应答。当前鉴定对抑制免疫抑制细胞诸如MDSC和T-调节细胞的方法的研究使用复杂的封闭抗体。因此，施用包含治疗因子诸如细胞因子的强化疫苗组合物可以更容易对患者施用并改善免疫应答，特别是在肿瘤中。
第三，包含治疗因子的本公开的疫苗组合物可以在有或没有疾病特异性抗原的情况下引起MDSC减少，因此通过促进抗原特异性T-细胞的自然激活，同时减少免疫抑制细胞群产生对治疗疾病诸如癌症的独特并且强有力的方法。包含治疗因子的所述疫苗组合物引起更优的疾病特异性免疫应答的产生，这在当佐剂或治疗因子单独与抗原制备时均没有观察到。
最后，治疗因子，当与阳离子脂质佐剂组合以形成疫苗组合物时，在哺乳动物的免疫应答中产生独特的协同改善。治疗因子（例如，GM-CSF）与其它佐剂（例如，不完全Freund’s佐剂（IFA）或抗-CD40+IFA）的组合不会在免疫应答中产生相似的协同改善。因此，阳离子脂质佐剂和治疗因子的组合特异地并且显著地在免疫应答中产生协同改善，这不能使用其它常用佐剂复制。
以下编号的实施方案是可理解的并且是非限制性的：
1.疫苗组合物，其包含佐剂和治疗因子。
2.第1项的疫苗组合物，其中所述佐剂是免疫调谐剂。
3.第1项或第2项的疫苗组合物，其中所述佐剂是阳离子脂质。
4.第3项的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质是纯化的。
5.第3项或第4项的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC及其组合。
6.第3至5项中任一项的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
7.第3至5项中任一项的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质是DOMTA。
8.第3至5项中任一项的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质是DOEPC。
9.第1项或第2项的疫苗组合物，其中所述佐剂是阳离子脂质的对映异构体。
10.第9项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是纯化的。
11.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOTAP或S-DOTAP。
12.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
13.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是S-DOTAP。
14.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOTMA或S-DOTMA。
15.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOTMA。
16.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是S-DOTMA。
17.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOEPC或S-DOEPC。
18.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOEPC。
19.第9项或第10项的疫苗组合物，其中所述对映异构体是S-DOEPC。
20.第1至19项中任一项的疫苗组合物，其中所述治疗因子选自白介素1-18、干细胞因子、碱性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配体、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其组合。
21.第1至19项中任一项的疫苗组合物，其中所述治疗因子是细胞因子。
22.第20项的疫苗组合物，其中所述细胞因子是GM-CSF。
23.第1至19项中任一项的疫苗组合物，其中所述治疗因子是免疫细胞生长因子。
24.第1至23项中任一项的疫苗组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
25.第24项的免疫组合物，其中一种或多种抗原是基于蛋白质的抗原。
26.第24项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是基于肽的抗原。
27.第24至26项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原选自癌抗原、病毒抗原、细菌抗原和致病性抗原。
28.第24至26项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是癌抗原。
29.第24至26项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是病毒抗原。
30.第24至26项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是细菌抗原。
31.第24至26项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是致病性抗原。
32.第31项的疫苗组合物，其中所述致病性抗原是合成或重组抗原。
33.第24至32项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
34.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原包含选自RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)和KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)的序列。
35.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原包含选自gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])和p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其组合的序列。
36.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])和TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
37.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)。
38.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)。
39.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)。
40.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)。
41.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)。
42.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)。
43.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)。
44.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)。
45.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)。
46.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)。
47.第24至33项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)。
48.第24至47项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原选自脂蛋白、脂肽和使用具有增加疏水性或减少疏水性的氨基酸序列修饰的蛋白质或肽。
49.第24至48项中任一项的疫苗组合物，其中一种或多种抗原是脂化抗原或经修饰以增加抗原疏水性的抗原。
50.第24至49项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原是经修饰的蛋白质或肽。
51.第50项的疫苗组合物，其中经修饰的蛋白质或肽键合于疏水基团。
52.第51项的疫苗组合物，其中所述键合于疏水基团的经修饰的蛋白质或肽进一步包含在所述抗原和所述疏水基团之间的连接序列。
53.第51或52项的疫苗组合物，其中所述疏水基团是棕榈酰基。
54.第24至53项中任一项的疫苗组合物，其中至少一种抗原是未修饰的蛋白质或肽。
55.第1至54项中任一项的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物通过激活促分裂原活化蛋白（MAP）激酶信号通路在哺乳动物中诱导免疫应答。
56.第55项的疫苗组合物，其中所述MAP激酶信号通路是通过刺激胞外信号调节激酶("ERK")-1、ERK-2和p38中至少一种激活的。
57.第1至56项中任一项的疫苗组合物，其中所述疫苗组合物在哺乳动物中提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。
58.第57项的疫苗组合物，其中所述哺乳动物是人。
59.在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法，所述方法包括对哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
60.第59项的方法，其中所述免疫抑制细胞是MDSC。
61.第59项的方法，其中所述免疫抑制细胞是T调节细胞。
62.第59至61项中任一项的方法，其中所述减少在所述哺乳动物中导致T-细胞应答的增加。
63.第62项的方法，其中所述T-细胞是肿瘤浸润T-细胞。
64.第62项或第63项的方法，其中所述T-细胞应答是CD4+T-细胞应答。
65.第64项的方法，其中所述CD4+T-细胞是肿瘤浸润CD4+T-细胞。
66.第62项或第63项的方法，其中所述T-细胞应答是CD8+T-细胞应答。
67.第66项的方法，其中所述CD8+T-细胞是肿瘤浸润CD8+T-细胞。
68.第59至67项中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。
69.第59至68项中任一项的方法，其中所述佐剂是免疫调谐剂。
70.第59至69项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质。
71.第70项的方法，其中所述阳离子脂质是纯化的。
72.第70项或第71项的方法，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC及其组合。
73.第70至72项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
74.第70至72项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTMA。
75.第70至72项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOEPC。
76.第59至69项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质的对映异构体。
77.第76项的方法，其中所述对映异构体是纯化的。
78.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP或S-DOTAP。
79.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
80.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTAP。
81.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA或S-DOTMA。
82.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA。
83.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTMA。
84.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC或S-DOEPC。
85.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC。
86.第76项或第77项的方法，其中所述对映异构体是S-DOEPC。
87.第59至86项中任一项的方法，其中所述治疗因子选自白介素1-18、干细胞因子、碱性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配体、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其组合。
88.第59至86项中任一项的方法，其中所述治疗因子是细胞因子。
89.第88项的方法，其中所述细胞因子是GM-CSF。
90.第59至86项中任一项的方法，其中所述治疗因子是免疫细胞生长因子。
91.第59至90项中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
92.第91项的方法，其中一种或多种抗原是基于蛋白质的抗原。
93.第91项的方法，其中一种或多种抗原是基于肽的抗原。
94.第91至93项中任一项的方法，其中一种或多种抗原选自癌抗原、病毒抗原、细菌抗原和致病性抗原。
95.第91至93项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是癌抗原。
96.第91至93项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是病毒抗原。
97.第91至93项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是细菌抗原。
98.第91至93项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是致病性抗原。
99.第98项的方法，其中所述致病性抗原是合成或重组抗原。
100.第91至99项中任一项的方法，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
101.第91至100项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)和KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)的序列。
102.第91至100项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])和p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其组合的序列。
103.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])和TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
104.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)。
105.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)。
106.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)。
107.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)。
108.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)。
109.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)。
110.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)。
111.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)。
112.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)。
113.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)。
114.第91至100项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)。
115.第91至114项中任一项的方法，其中至少一种抗原选自脂蛋白、脂肽和使用具有增加疏水性或减少疏水性的氨基酸序列修饰的蛋白质或肽。
116.第91至115项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是脂化抗原或经修饰以增加抗原疏水性的抗原。
117.第91至116项中任一项的方法，其中至少一种抗原是经修饰的蛋白质或肽。
118.第117项的方法，其中所述经修饰的蛋白质或肽键合于疏水基团。
119.第118项的方法，其中键合于疏水基团的经修饰的蛋白质或肽进一步包含抗原和疏水基团之间的连接序列。
120.第118或119项的方法，其中所述疏水基团是棕榈酰基。
121.第91至120项中任一项的方法，其中至少一种抗原是未修饰的蛋白质或肽。
122.第59至121项中任一项的方法，其中所述施用在所述哺乳动物免疫系统的细胞中通过MAP激酶信号通路激活免疫应答。
123.第122项的方法，其中所述MAP激酶信号通路是通过刺激ERK-1、ERK-2和p38中至少一个激活的。
124.第122项或第123项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活细胞毒性T淋巴细胞。
125.第124项的方法，其中所述细胞毒性T淋巴细胞是CD8+T细胞。
126.第122至125项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活抗体应答。
127.第122至126项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活干扰素-γ（IFN-γ）。
128.第59至127项中任一项的方法，其中所述施用提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。
129.在哺乳动物中增加免疫应答的方法，所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
130.第129项的方法，其中所述减少在所述哺乳动物中导致T-细胞应答的增加。
131.第130项的方法，其中所述T-细胞是肿瘤浸润T-细胞。
132.第130项或第131项的方法，其中所述T-细胞应答是CD4+T-细胞应答。
133.第132项的方法，其中所述CD4+T-细胞是肿瘤浸润CD4+T-细胞。
134.第129至133项中任一项的方法，其中所述T-细胞应答是CD8+T-细胞应答。
135.第134项的方法，其中所述CD8+T-细胞是肿瘤浸润CD8+T-细胞。
136.第129至135项中任一项的方法，其中所述哺乳动物是人。
137.第129至136项中任一项的方法，其中所述佐剂是免疫调谐剂。
138.第129至137项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质。
139.第138项的方法，其中所述阳离子脂质是纯化的。
140.第138项或第139项的方法，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC及其组合。
141.第138至140项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
142.第138至140项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTMA。
143.第138至140项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOEPC。
144.第129至137项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质的对映异构体。
145.第144项的方法，其中所述对映异构体是纯化的。
146.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP或S-DOTAP。
147.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
148.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTAP。
149.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA或S-DOTMA。
150.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA。
151.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTMA。
152.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC或S-DOEPC。
153.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC。
154.第144项或第145项的方法，其中所述对映异构体是S-DOEPC。
155.第129至154项中任一项的方法，其中所述治疗因子选自白介素1-18、干细胞因子、碱性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配体、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其组合。
156.第129至154项中任一项的方法，其中所述治疗因子是细胞因子。
157.第156项的方法，其中所述细胞因子是GM-CSF。
158.第129至154项中任一项的方法，其中所述治疗因子是免疫细胞生长因子。
159.第129至158项中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
160.第159项的方法，其中一种或多种抗原是基于蛋白质的抗原。
161.第159项的方法，其中一种或多种抗原是基于肽的抗原。
162.第159至161项中任一项的方法，其中一种或多种抗原选自癌抗原、病毒抗原、细菌抗原和致病性抗原。
163.第159至161项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是癌抗原。
164.第159至161项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是病毒抗原。
165.第159至161项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是细菌抗原。
166.第159至161项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是致病性抗原。
167.第166项的方法，其中所述致病性抗原是合成或重组抗原。
168.第159至167项中任一项的方法，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
169.第159至168项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)和KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)的序列。
170.第159至168项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])和p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其组合的序列
171.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])和TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
172.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)。
173.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)。
174.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)。
175.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)。
176.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)。
177.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)
178.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)。
179.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)。
180.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)。
181.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)。
182.第159至168项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)。
183.第159至182项中任一项的方法，其中至少一种抗原选自脂蛋白、脂肽和使用具有增加疏水性或减少疏水性的氨基酸序列修饰的蛋白质或肽。
184.第159至183项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是脂化抗原或经修饰以增加抗原疏水性的抗原。
185.第159至184项中任一项的方法，其中至少一种抗原是经修饰的蛋白质或肽。
186.第185项的方法，其中所述经修饰的蛋白质或肽键合于疏水基团。
187.第185项的方法，其中所述键合于疏水基团的经修饰的蛋白质或肽进一步包含在所述抗原和所述疏水基团之间的连接序列。
188.第186或187项的方法，其中所述疏水基团是棕榈酰基。
189.第159至188项中任一项的方法，其中至少一种抗原是未经修饰的蛋白质或肽。
190.第129至189项中任一项的方法，其中所述施用在哺乳动物免疫系统的细胞中通过MAP激酶信号通路激活免疫应答。
191.第190项的方法，其中所述MAP激酶信号通路是通过刺激("ERK")-1、ERK-2和p38中至少一种激活的。
192.第190项至第191项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活细胞毒性T淋巴细胞。
193.第192项的方法，其中所述细胞毒性T淋巴细胞是CD8+T细胞。
194.第190至193项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活抗体应答。
195.第190至194项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活干扰素-γ（IFN-γ）。
196.第129至195项中任一项的方法，其中所述施用提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。
197.在哺乳动物中治疗疾病的方法，所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
198.第197项的方法，其中所述方法是预防性治疗。
199.第197项或第198项的方法，其中所述疾病是癌症。
200.第197至199项中任一项的方法，其中所述佐剂是免疫调谐剂。
201.第197至200项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质。
202.第201项的方法，其中所述阳离子脂质是纯化的。
203.第201项或第202项的方法，其中所述阳离子选自DOTAP、DOTMA、DOEPC及其组合。
204.第201至203项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
205.第201至203项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOTMA。
206.第201至203项中任一项的方法，其中所述阳离子脂质是DOEPC。
207.第197至200项中任一项的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质的对映异构体。
208.第207项的方法，其中所述对映异构体是纯化的。
209.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP或S-DOTAP。
210.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
211.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTAP。
212.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA或S-DOTMA。
213.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOTMA。
214.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是S-DOTMA。
215.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC或S-DOEPC。
216.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是R-DOEPC。
217.第207项或第208项的方法，其中所述对映异构体是S-DOEPC。
218.第197至217项中任一项的方法，其中所述治疗因子选自白介素1-18、干细胞因子、碱性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配体、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其组合
219.第197至217项中任一项的方法，其中所述治疗因子是细胞因子。
220.第156项的方法，其中所述细胞因子是GM-CSF。
221.第197至217项中任一项的方法，其中所述治疗因子是免疫细胞生长因子。
222.第197至221项中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
223.第222项的方法，其中一种或多种抗原是基于蛋白质的抗原。
224.第222项的方法，其中一种或多种抗原是基于肽的抗原。
225.第222至224项中任一项的方法，其中一种或多种抗原选自癌抗原、病毒抗原、细菌抗原和致病性抗原。
226.第222至224项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是癌抗原。
227.第222至224项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是病毒抗原。
228.第222至224项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是细菌抗原。
229.第222至224项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是致病性抗原。
230.第166项的方法，其中所述致病性抗原是合成或重组抗原。
231.第222至230项中任一项的方法，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
232.第222至231项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)和KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)的序列。
233.第222至231项中任一项的方法，其中至少一种抗原包含选自gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])和p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])的序列。
234.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])和TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
235.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)。
236.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)。
237.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)。
238.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)。
239.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)。
240.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)。
241.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)。
242.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)。
243.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)。
244.第222至231项中任一项的方法，中所述抗原包含所述KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)。
245.第222至231项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)。
246.第222至231项中任一项的方法，其中至少一种抗原选自脂蛋白、脂肽和使用具有增加疏水性或减少疏水性的氨基酸序列修饰的蛋白质或肽。
247.第222至246项中任一项的方法，其中一种或多种抗原是脂化抗原或经修饰以增加抗原疏水性的抗原。
248.第222至247项中任一项的方法，其中至少一种抗原是经修饰的蛋白质或肽。
249.第248项的方法，其中所述经修饰的蛋白质或肽键合于疏水基团。
250.第248项的方法，其中所述键合于疏水基团的经修饰的蛋白质或肽进一步包含在所述抗原和所述疏水基团之间的连接序列。
251.第249或250项的方法，其中所述疏水基团是棕榈酰基。
252.第222至251项中任一项的方法，其中至少一种抗原是未经修饰的蛋白质或肽。
253.第197至252项中任一项的方法，其中所述施用在所述哺乳动物免疫系统的细胞中通过MAP激酶信号通路激活免疫应答。
254.第253项的方法，其中所述MAP激酶信号通路是通过刺激("ERK")-1、ERK-2和p38中至少一种激活的。
255.第253项或第254项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活细胞毒性T淋巴细胞。
256.第255项的方法，其中所述细胞毒性T淋巴细胞是CD8+T细胞。
257.第253至256项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活抗体应答。
258.第253至257项中任一项的方法，其中所述免疫应答在所述哺乳动物中激活干扰素-γ（IFN-γ）。
259.第197至258项中任一项的方法，其中所述施用提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。
260.第24至34项或第48至58项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含所述KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)。
261.第24至34项或第48至58项中任一项的疫苗组合物，其中所述抗原包含所述KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)。
262.第91至100项或第115至128项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)。
263.第91至100项或第115至128项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)。
264.第159至168项或第183至196项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)。
265.第159至168项或183至196项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)。
266.第222至231项或第246至259项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)。
267.第222至231项或第246至259项中任一项的方法，其中所述抗原包含所述KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)。
附图简述
图1显示了多种疫苗组合物在荷瘤小鼠中的抗原特异性免疫应答上的效果。每106来自小鼠的脾细胞中观察到的IFN-γ斑点数量以每百万脾细胞来自E749-57再刺激培养的斑点数量减去对照抗原再刺激培养的斑点数量±SD呈现。图中E7肽指的是GM-CSF-E7+Cd40+IFA。(***P<0.001)。
图2显示了使用流式细胞检测多种疫苗组合物在肿瘤浸润MDSC数量（定义为在CD44+细胞群中的CD11b+Gr-1+细胞）上的效果。将肿瘤浸润细胞的数量标准化为每1x106全部肿瘤细胞，并且以平均值±SD呈现。（*P<0.05，相比于未处理的和只有GM-CSF的组）。
图3显示了对小鼠施用后多种疫苗组合物在肿瘤浸润CD8+T-细胞数量上的效果。使用流式细胞检测在CD44+细胞群中分析肿瘤浸润CD8+T-细胞的数量。将肿瘤浸润细胞的数量标准化为每1x106全部肿瘤细胞，并以平均值±SD呈现。(*P<0.05)。
图4显示了多种疫苗组合物在抗原特异性免疫应答上的效果。通过ELISPOT测定在黑色素瘤抗原TRP-2和gp-100肽存在下对比肽对照(每个10μg/ml)的IFNγ活性。数值以每百万脾细胞来自TRP-2和gp100再刺激培养的斑点数量减去对照抗原再刺激培养的斑点数量呈现。（*P<0.01）。
多个本发明的实施方案在下文描述。在本文描述的一个实施方案中，提供了疫苗组合物。所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
在另一个实施方案中，提供了在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法。所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
在还另一个实施方案中，提供了在哺乳动物中增加免疫应答的方法。所述方法包括对哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
在还另一个实施方案中，提供了在哺乳动物中治疗疾病的方法。所述方法包括对哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。
在多个实施方案中，所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。如本文所用的，术语“佐剂”指的是提高、增加和/或加强哺乳动物对抗原的免疫应答的物质。如本文所用的，术语“治疗因子”指的是通过诱导、提高或抑制免疫应答与疾病治疗相关的任何药剂。如本文所用的，治疗因子包括但不限于免疫系统兴奋剂、细胞杀伤剂、肿瘤渗透增强剂、化学治疗剂或细胞毒性免疫细胞。理解的是疫苗组合物包含佐剂和治疗因子一同施用的制剂，以及包括佐剂和治疗因子分别施用的制剂。佐剂和治疗因子的剂量对本领域普通技术人员是知晓的。
在本文描述的一些实施方案中，所述佐剂是免疫调谐剂。如本文所用的，术语“免疫调谐剂”指的是在哺乳动物中提高、引导和/或促进免疫应答的免疫学修饰剂（“immunologicmodifier”）。
在本文描述的一些实施方案中，所述佐剂是纳米颗粒。如本文所用的，术语“纳米颗粒”指的是具有在纳米级测量大小的颗粒。如本文所用的，“纳米颗粒”指的是具有大小小于约1,000纳米结构的颗粒。在一些实施方案中，所述纳米颗粒是脂质体。
在本文描述的一些实施方案中，所述佐剂是阳离子脂质。如本文所用的，术语“阳离子脂质”指的是大量脂质种类的任意种，其在生理pH带有净正电荷或具有可质子化基团并且在低于pKa的pH带正电。
根据本公开的合适的阳离子脂质包括，但不限于：3-β[4N-(1N,8-双胍基亚精胺)-氨基甲酰基]胆固醇(BGSC)；3-β[N,N-双胍基乙基-氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇(BGTC)；N,N1N2N3四-甲基四棕榈酰基精胺(cellfectin)；N-叔丁基-N'-十四烷基-3-十四烷基-氨基丙脒(CLONfectin)；二甲基双十八烷基溴化铵(DDAB)；1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DMRIE)；2,3-二油酰基氧基-N-[2(精胺甲酰胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-三氟乙酸丙铵)(DOSPA)；1,3-二油酰基氧基-2-(6-羧基精胺基)-丙酰胺(DOSPER)；4-(2,3-双-棕榈酰基氧基-丙基)-1-甲基-1H-咪唑(DPIM)；N,N,N',N'-四甲基-N,N'-双(2-羟乙基)-2,3-二油酰基氧基-1,4-丁烷二碘化铵)(Tfx-50)；N-1-(2,3-二油酰基氧基)丙基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)或其它N-(N,N-1-二烷氧基)-烷基-N,N,N-三取代的铵表面活性剂；1,2二油酰基-3-(4'-三甲基铵)丁醇-sn-甘油(DOBT)或胆甾醇基(4'三甲铵)丁酸酯(ChOTB)，其中三甲铵基经丁醇间隔臂连接至双链(对于DOTB)或胆甾醇基(对于ChOTB)；DORI(DL-1,2-二油酰基-3-二甲基氨基丙基-β-羟乙基铵)或DORIE(DL-1,2-O-二油酰基-3-二甲基氨基丙基-β-羟乙基铵)(DORIE)或如在WO93/03709中公开的其类似物；1,2-二油酰基-3-琥珀酰基-sn-甘油胆碱酯(DOSC)；胆甾醇基半琥珀酸酯(ChOSC)；脂聚胺，例如双十八烷基酰氨基甘氨酰基精胺(DOGS)和二棕榈酰基磷脂酰乙醇戊基精胺(DPPES)、胆甾醇基-3β-羧基-酰氨基-亚乙基三甲基碘化铵、1-二甲基氨基-3-三甲铵基-DL-2-丙基-胆甾醇基碘化甲酸酯、胆甾醇基-3-O-羧酰氨基亚乙基胺、胆甾醇基-3-β-氧基琥珀酰氨基-亚乙基三甲基碘化铵、1-二甲基氨基-3-三甲铵基-DL-2-丙基-胆甾醇基-3-β-氧基碘化琥珀酸酯、2-(2-三甲铵基)-乙基甲基氨基乙基-胆甾醇基-3-β-氧基碘化琥珀酸酯、3-β-N-(N',N'-二甲基氨基乙烷)氨甲酰基胆固醇(DC-chol)和3-β-N-(聚乙烯亚胺)-氨甲酰基胆固醇；O,O'-二肉豆蔻基-N-赖氨酰天冬氨酸化物(DMKE)；O,O'-二肉豆蔻基-N-赖氨酰-谷氨酸化物(DMKD)；1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DMRIE)；1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(DLEPC)；1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(DMEPC)；1,2-二油酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(DOEPC)；1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(DPEPC)；1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(DSEPC)；1,2-二油酰基-3-三甲铵丙烷(DOTAP)；二油酰基二甲基氨基丙烷(DODAP)；1,2-棕榈酰基-3-三甲铵丙烷(DPTAP)；1,2-二硬脂酰-3-三甲铵丙烷(DSTAP)、1,2-肉豆蔻酰-3-三甲铵丙烷(DMTAP)；和十二烷基硫酸钠(SDS)。此外，同样理解的是任何描述的阳离子脂质的结构变体和衍生物。
在一些实施方案中，所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC及其组合。在其它实施方案中，所述阳离子脂质是DOTAP。在还其它实施方案中，所述阳离子脂质是DOTMA。在其它实施方案中，所述阳离子脂质是DOEPC。在一些实施方案中，所述阳离子脂质是纯化的。
在一些实施方案中，所述阳离子脂质是阳离子脂质的对映异构体。术语“对映异构体”指的是阳离子脂质的立体异构体，它是对应的立体异构体不能重叠的镜像，例如R和S对映异构体。在多个实例中，所述对映异构体是R-DOTAP或S-DOTAP。在一个实例中，所述对映异构体是R-DOTAP。在另一个实例中，所述对映异构体是S-DOTAP。在一些实施方案中，所述对映异构体是纯化的。在多个实例中，所述对映异构体是R-DOTMA或S-DOTMA。在一个实例中，所述对映异构体是R-DOTMA。在另一个实例中，所述对映异构体是S-DOTMA。在一些实施方案中，所述对映异构体是纯化的。在多个实例中，所述对映异构体是R-DOPEC或S-DOPEC。在一个实例中，所述对映异构体是R-DOPEC。在另一个实例中，所述对映异构体是S-DOPEC。在一些实施方案中，所述对映异构体是纯化的。
在本文描述的多个实施方案中，所述治疗因子选自白介素1-18、干细胞因子、碱性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配体、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其组合。其它治疗因子对本领域普通技术人员是知晓的并且可以同样用于本公开的疫苗组合物中。
在本文描述的多个实施方案中，所述治疗因子是细胞因子。在一些实施方案中，所述细胞因子是GM-CSF。在本文描述的其它实施方案中，所述治疗因子是免疫细胞生长因子。
在本文描述的多个实施方案中，所述组合物进一步包含一种或多种抗原。如本文所用的，术语“抗原”指的是当导入至具有免疫系统的哺乳动物中时（直接或基于如在例如DNA疫苗中表达），通过所述哺乳动物的免疫系统识别并且能够诱发免疫应答的任何物质（例如，蛋白质、肽、多糖、糖蛋白、糖脂、核酸或其组合）。如本文定义的，所述抗原诱导的免疫应答可以是体液或细胞介导的，或两者介导的。当物质能够特异性地与免疫系统的抗原识别分子相互作用时，诸如免疫球蛋白（抗体）或T细胞抗原受体（TCR），把所述物质称为“抗原性的”。
在一些实施方案中，一种或多种抗原是基于蛋白质的抗原。在其它实施方案中，一种或多种抗原是基于肽的抗原。在多个实施方案中，一种或多种抗原选自癌抗原、病毒抗原、细菌抗原和致病性抗原。如本文所用，“微生物抗原”是微生物的抗原并且包括，但不限于，传染性病毒、传染性细菌、传染性寄生虫和传染性真菌。微生物抗原可以是完整的微生物，和天然分离物、片段或其衍生物、与天然产生的微生物抗原相同或相似的合成化合物，并且优选地，诱导对相应微生物（从其来源的天然生成的微生物抗原）特异的免疫应答。在一个实施方案中，所述抗原是癌抗原。在一个实施方案中，所述抗原是病毒抗原。在另一个实施方案中，所述抗原是细菌抗原。在多个实施方案中，所述抗原是致病性抗原。在一些实施方案中，所述致病性抗原是合成或重组抗原。
在一些实施方案中，所述抗原是癌抗原。如本文所用的，“癌抗原”是这样的分子或化合物（例如，蛋白质、肽、多肽、脂蛋白、脂肽、糖蛋白、糖肽、脂质、糖脂、糖类、RNA和/或DNA），其与肿瘤或癌症有关的，并且在MHC分子情况下，当在抗原呈递细胞表面表达时，能够诱发免疫应答（体液的和/或细胞的）。例如，癌抗原可以是肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原包括自身抗原，以及可以不与癌症特异性相关，但是尽管如此当对哺乳动物施用时增加免疫应答和/或减少肿瘤或癌症细胞生长的其它抗原。在一个实施方案中，至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
在本公开的一些实施方案中，至少一种抗原包含选自RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4),KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:12)和KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:13)的序列。在一个实施方案中，至少一种抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:1)。在另一个实施方案中，至少一种抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:2)。在还另一个实施方案中，至少一种抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)。在一些实施方案中，KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO:3)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:4)。在另一个实施方案中，至少一种抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)。在还另一个实施方案中，KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:5)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)。在另一个实施方案中，MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO:6)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)。在一些实施方案中，LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO:7)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在一些实施方案中，至少一种抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:8)。在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO:9)。在还其它实施方案中，至少一种抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO:10)。在另一个实施方案中，至少一种抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)。在一些实施方案中，KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO:11)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ。ID。NO:12)。在另一个实施方案中，KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ。ID。NO:12)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在其它实施方案中，至少一种抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ。ID。NO:13)。在一些实施方案中，KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ。ID。NO:13)是经修饰的以进一步包含疏水基团。在一个实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。
在一个实施方案中，所述抗原包含选自gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])和p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其组合的序列。
在一个实施方案中，所述抗体包含一个或多个所述gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])和所述TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
在多个实施方案中，至少一种抗原选自脂蛋白、脂肽和使用具有增加疏水性或减少疏水性的氨基酸序列修饰的蛋白质或肽。在一些实施方案中，一种或多种抗原是经修饰的抗原以增加所述抗原的疏水性。在一个实施方案中，至少一种抗原是经修饰的蛋白质或肽。在一些实施方案中，经修饰的蛋白质或肽键合于疏水基团。在其它实施方案中，键合于疏水基团的经修饰的蛋白质或肽在抗原和疏水基团之间进一步包含连接序列。在一些实施方案中，所述疏水基团是棕榈酰基。在还其它的实施方案中，至少一种抗原是未经修饰的蛋白质或肽。
在本文描述的多个实施方案中，所述疫苗组合物通过激活促分裂原活化蛋白（MAP）激酶信号通路在哺乳动物中诱导免疫应答。通过佐剂诸如阳离子脂质的免疫应答诱导描述在例如在PCT/US2008/057678(WO/2008/116078;“StimulationofanImmuneResponsebyCationicLipids”)和PCT/US2009/040500(WO/2009/129227;“StimulationofanImmuneResponsebyEnantiomersofCationicLipids”)中，二者以其整体公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，所述MAP激酶信号通路是通过刺激胞外信号调节激酶("ERK")-1、ERK-2和p38中至少一种激活的。在其它实施方案中，所述组合物提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。术语“哺乳动物”对本领域技术人员是熟知的。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
在本文描述的一个实施方案中，提供了在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法。所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。所述疫苗组合物的先前描述的实施方案适用于本文描述的在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法。
在一些实施方案中，所述免疫抑制细胞是骨髓源抑制细胞（MDSC）。在其它实施方案中，所述免疫抑制细胞是T调节细胞。
在多个实施方案中，所述减少在所述哺乳动物中引起T-细胞应答的增加。在一些实施方案中，所述T-细胞是肿瘤浸润T-细胞。在一些实施方案中，所述T-细胞应答是CD4+T-细胞应答。在某些实施方案中，所述CD4+T-细胞是肿瘤浸润CD4+T-细胞。在一些实施方案中，所述T-细胞应答是CD8+T-细胞应答。在某些实施方案中，所述CD8+T-细胞是肿瘤浸润CD8+T-细胞。
在多个实施方案中，所述哺乳动物是人。在一些实施方案中，所述施用在哺乳动物免疫系统细胞中通过MAP激酶信号通路激活免疫应答。在多个实施方案中，所述MAP激酶信号通路通过刺激ERK-1、ERK-2和p38中至少一个来激活。
在其它实施方案中，所述免疫应答在哺乳动物中激活细胞毒性T淋巴细胞。在一个实施方案中，所述细胞毒性T淋巴细胞是CD8+T细胞。在另一个实施方案中，所述施用提高功能性抗体特异性CD8+T淋巴细胞应答。在还另一个实施方案中，所述免疫应答在哺乳动物中激活抗体应答。在其它实施方案中，所述免疫应答在哺乳动物中激活干扰素-γ（IFN-γ）。
在本文描述的一个实施方案中，提供了在哺乳动物中增加免疫应答的方法。所述方法包括对哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。所述疫苗组合物和在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法的先前描述的实施方案适用于本文描述的在哺乳动物中增加免疫应答的方法。
在本文描述的一个实施方案中，提供了在哺乳动物中治疗疾病的方法。所述方法包括对哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子。疫苗组合物和在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法的先前描述的实施方案适用于本文描述的在哺乳动物中治疗疾病的方法。
在一些实施方案中，如本文使用的关于传染性病原体的“治疗”（“treatment”、“treat”和“treating”），指的是预防性治疗，其增加个体对病原体感染的抵抗力或降低个体会感染所述病原体的可能性；和/或为对抗感染在个体感染后治疗，例如，减少或消除感染或防止其恶化。在一个实施方案中，所述方法是预防性治疗。在一些实施方案中，所述疾病是癌症。
实施例1
佐剂和并入抗原的佐剂的制备
佐剂可以单独使用阳离子脂质制备。可选地，佐剂可以使用阳离子脂质和其它免疫调谐剂的混合物制备。疫苗组合物可以使用并入抗原的基于阳离子脂质的组合物制备。在本实施例中，使用DOTAP作为示例性阳离子脂质并且使用HPV蛋白质E7肽抗原作为示例性抗原。
在阳离子脂质制备脂质体的全部步骤中使用用于注射的无菌水（WFI）或缓冲液。在本实施例中，使用脂质膜制备脂质体。用于并入脂质体中的E7抗原是源于HPV16E7蛋白质的H-2Db限制性CTL表位（氨基酸49-57,RAHYNIVTF[SEQ.ID.NO.1]）。通过（1）将脂质溶解于有机溶剂诸如氯仿中，和（2）在干燥氮气的稳定流下蒸发氯仿溶液，将脂质膜在玻璃小瓶中制成。痕量有机溶剂通过将膜维持在真空下过夜移除。脂质膜随后通过添加要求量的WFI或缓冲液水合以制成终浓度4-10mg/mL。随后挤出悬浮液至200nm的大小并在4oC储存。
为制备并入抗原的阳离子脂质，所述DOTAP脂质膜通过E7肽的水溶液再水合。可以同样使用本领域技术人员熟知的用于一般脂质体制备的其它方法。
实施例2
疫苗组合物在荷瘤小鼠中抗原特异性免疫应答上的效果
多种疫苗组合物可以根据本公开进行比较并且评估它们在荷瘤小鼠中抗原特异性免疫应答上的效果。在本实施例中，使用R-DOTAP作为示例性阳离子脂质，使用E7肽作为示例性抗原，并且使用细胞因子GM-CSF作为示例性治疗因子。此外，使用抗-CD40Ab和不完全Freund’s佐剂（IFA）作为比较佐剂。
在本实施例中，疫苗组合物根据本公开制备并且对以下组进行评估：
组1:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)和GM-CSF(5μg/小鼠)
组2:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
组3:GM-CSF(5μg/小鼠)、E7肽(100ug/小鼠)、抗-CD40Ab(20μg/小鼠)和IFA(50μg/小鼠)
组4:单独的R-DOTAP
组5:单独的GM-CSF
组6:R-DOTAP和GM-CSF
组7:未处理对照
在第0天对6-8周龄雌性C57BL6小鼠（每组5只小鼠）使用50,000TC-1细胞/小鼠进行右侧皮下植入。在第8天，当全部小鼠具有直径约3-4mm的肿瘤时，每个组的个体使用适当组的疫苗组合物处理。
在第15天重复处理。6天后（即，肿瘤植入后第21天），处死小鼠。收集小鼠脾脏并处理以获得全部淋巴细胞。通过ELISPOT测定在E749-57肽存在下对比不相关肽对照（每个10μg/ml）中的IFNγ活性。评估每百万脾细胞来自E749-57再刺激培养减去不相关抗原再刺激培养的斑点数。
如图1显示的，相比于其它组，组1（即，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF）展示了在荷瘤小鼠中抗原特异性免疫应答在统计学上的显著增加。相比于单独组分，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF的组合展示了对抗原特异性免疫应答的协同效果。对组3（即，GM-CSF、E7肽、抗-CD40Ab和IFA）施用生长因子和非阳离子脂质佐剂，但是没有展示出如组1中观察到的对免疫应答的协同效应。
实施例3
疫苗组合物在荷瘤小鼠的肿瘤微环境中MDSC上的效果
多种疫苗组合物可以根据本公开进行比较并且评估它们在荷瘤小鼠的肿瘤微环境中MDSC数量上的效果。在本实施例中，使用R-DOTAP作为示例性阳离子脂质，使用E7肽作为示例性抗原，并且使用细胞因子GM-CSF作为示例性治疗因子。
在本实施例中，疫苗组合物根据本公开制备并且对以下组进行评估：
组1:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)和GM-CSF(5μg/小鼠)
组2:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
组3:单独的R-DOTAP
组4:单独的GM-CSF
组5:R-DOTAP和GM-CSF
组6:未处理对照
在第0天对6-8周龄雌性C57BL6小鼠（每组5只小鼠）使用50,000TC-1细胞/小鼠进行右侧皮下植入。在第8天，当全部小鼠具有直径约3-4mm的肿瘤时，每个组的个体使用适当组的疫苗组合物处理。
在第15天重复处理。6天后（即，肿瘤植入后第21天），从小鼠收集肿瘤组织。如生产商建议的，使用GentleMACS分离仪(MiltenyiBiotec，Auburn，CA)和实体肿瘤均质化方案处理肿瘤样品。
使用流式细胞检测在CD44+细胞群中（造血细胞的标记物）分析肿瘤浸润MDSC（定义为CD11b+Gr-1+细胞）的数量。肿瘤浸润细胞的数量标准化为每1x106全部肿瘤细胞并且以平均值呈现。
如图2显示的，相比于未处理小鼠和只使用GM-CSF处理的小鼠，组1（即，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF）和组5（即，R-DOTAP-E7和GM-CSF）均展示荷瘤小鼠MDSC数量在统计学上的显著减少。相比于单独组分，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF的组合展示出对减少MDSC数量的协同效应。此外，相比于单独组分，R-DOTAP和GM-CSF的组合（即，不施用抗原）展示出对减少MDSC数量的相似协同效应。
实施例4
疫苗组合物在荷瘤小鼠的肿瘤浸润CD8+T-细胞上的效果
多种疫苗组合物可以根据本公开进行比较并且评估它们在荷瘤小鼠的肿瘤浸润CD8+T-细胞数量上的效果。在本实施例中，使用R-DOTAP作为示例性阳离子脂质，使用E7肽作为示例性抗原，并且使用细胞因子GM-CSF作为示例性治疗因子。
在本实施例中，疫苗组合物根据本公开制备并且对以下组进行评估：
组1:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)和GM-CSF(5μg/小鼠)
组2:R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
组3:单独的R-DOTAP
组4:单独的GM-CSF
组5:R-DOTAP和GM-CSF
组6:未处理对照
在第0天对6-8周龄雌性C57BL6小鼠（每组5只小鼠）使用50,000TC-1细胞/小鼠进行右侧皮下植入。在第8天，当全部小鼠具有直径约3-4mm的肿瘤时，每个组的个体使用适当组的疫苗组合物处理。
在第15天重复处理。6天后（即，肿瘤植入后第21天），从小鼠收集肿瘤组织。如生产商建议的，使用GentleMACS分离仪(MiltenyiBiotec，Auburn，CA)和实体肿瘤均质化方案处理肿瘤样品。
使用流式细胞检测在CD44+细胞（造血细胞标记物）群中分析肿瘤浸润CD8+T-细胞的数量。肿瘤浸润细胞的数量标准化为每1x106全部肿瘤细胞并且以平均值呈现。
如图3显示的，相比于其它组，组1（即，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF）和组2（即，R-DOTAP-E7）均展示出荷瘤小鼠的肿瘤浸润CD8+T-细胞数量在统计学上的显著增加。相比于单独组分，R-DOTAP-E7肽和GM-CSF的组合展示出对增加肿瘤浸润CD8+T-细胞数量的协同效应。
实施例5
疫苗组合物在小鼠的抗原特异性免疫应答上的效果
多种疫苗组合物可以根据本公开比较并且评估它们在小鼠的抗原特异性免疫应答上的效果。在本实施例中，使用R-DOTAP作为示例性阳离子脂质，使用TRP-2和gp100肽作为示例性抗原，并且使用细胞因子GM-CSF作为示例性治疗因子。
在本实施例中，疫苗组合物根据本公开制备并且对以下组进行评估：
组1:R-DOTAP/TRP-2/gp100肽(190ug/160ug)
组2:R-DOTAP/TRP-2/gp100肽/GM-CSF(190ug/160ug/0.5ug)
年龄为6-8周的雌性C57BL6小鼠（每组4只小鼠）用于研究。在第0天和第8天，每个组的个体使用适当组的疫苗组合物处理。
7天后（即，第一次施用后第14天），处死小鼠并且收集它们的脾脏并处理以获得全部淋巴细胞。通过ELISPOT测定在TRP-2和gp-100肽存在下对比不相关肽对照（每个10μg/ml）中的IFNγ活性。数值以每百万脾细胞来自TRP-2和gp-100再刺激培养减去不相关抗原再刺激培养的斑点数呈现。
如图4显示的，相比于组1，组2（即，R-DOTAP/TRP-2/gp100肽/GM-CSF）展示出抗原特异性免疫应答在统计学上的显著增加，所述组1不包含GM-CSF。
虽然已在前述描述中对本发明进行了说明和描述，但这样的说明和描述应理解为在特征上是示例性并且非限制的，应理解为只描述了说明性的实施方案并且在本发明范围内的全部变化和修改应期望被保护的。本领域的普通技术人员可以容易地设想出他们自己的并入本文描述的一个或多个特征的实施，并因此落入本公开的范围。
序列表
<110>JOHNSON,Kenya
JACOBSON,Eric
BEDU-ADDO,Frank
MKRTICHYAN,Mikayel
KHLEIF,SamirN
<120>阳离子脂质疫苗组合物和使用方法
<130>50165-225611
<150>61/660172
<151>2012-06-15
<160>13
<170>PatentInversion3.5
<210>1
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>1
ArgAlaHisTyrAsnIleValThrPhe
15
<210>2
<211>15
<212>PRT
<213>智人
<400>2
GlyGlnAlaGluProAspArgAlaHisTyrAsnIleValThrPhe
151015
<210>3
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>3
LysSerSerGlyGlnAlaGluProAspArgAlaHisTyrAsnIleVal
151015
ThrPhe
<210>4
<211>10
<212>PRT
<213>智人
<400>4
TyrMetLeuAspLeuGlnProGluThrThr
1510
<210>5
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>5
LysSerSerTyrMetLeuAspLeuGlnProGluThrThr
1510
<210>6
<211>20
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>6
MetHisGlyAspThrProThrLeuHisGluTyrMetLeuAspLeuGln
151015
ProGluThrThr
20
<210>7
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>7
LeuLeuMetGlyThrLeuGlyIleValCysProIleCysSerGlnLys
151015
Pro
<210>8
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>8
LysValProArgAsnGlnAspTrpLeu
15
<210>9
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>9
SerTyrValAspPhePheValTrpLeu
15
<210>10
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>10
LysTyrIleCysAsnSerSerCysMet
15
<210>11
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>11
LysSerSerLysValProArgAsnGlnAspTrpLeu
1510
<210>12
<211>23
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>12
LysSerSerMetHisGlyAspThrProThrLeuHisGluTyrMetLeu
151015
AspLeuGlnProGluThrThr
20
<210>13
<211>20
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>延长的肽
<400>13
LysSerSerLeuLeuMetGlyThrLeuGlyIleValCysProIleCys
151015
SerGlnLysPro
20

Claims (30)

1.疫苗组合物，其包含佐剂和治疗因子，其中所述佐剂是阳离子脂质。
2.权利要求1的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC和其组合。
3.权利要求1的疫苗组合物，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
4.权利要求1的疫苗组合物，其中所述佐剂是所述阳离子脂质的对映异构体。
5.权利要求4的疫苗组合物，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
6.权利要求1的疫苗组合物，其中所述治疗因子是细胞因子，并且其中所述细胞因子是GM-CSF。
7.权利要求1的疫苗组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
8.权利要求7的疫苗组合物，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
9.权利要求7的疫苗组合物，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列（KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8]）和TRP2序列（SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9]）。
10.在哺乳动物中减少免疫抑制细胞群的方法，所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子，并且其中所述佐剂是阳离子脂质。
11.权利要求10的方法，其中所述免疫抑制细胞是MDSC。
12.权利要求10的方法，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC和其组合。
13.权利要求10的方法，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
14.权利要求10的方法，其中所述佐剂是阳离子脂质的对映异构体。
15.权利要求14的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
16.权利要求10的方法，其中所述治疗因子是细胞因子，并且其中所述细胞因子是GM-CSF。
17.权利要求10的方法，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
18.权利要求17的方法，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
19.权利要求17的方法，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列（KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8]）和TRP2序列（SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9]）。
20.在哺乳动物中增加免疫应答的方法，所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的疫苗组合物的步骤，其中所述疫苗组合物包含佐剂和治疗因子，并且其中所述佐剂是阳离子脂质。
21.权利要求20的方法，其中所述减少导致在所述哺乳动物中T-细胞应答的增加。
22.权利要求21的方法，其中所述T-细胞应答是CD8+T-细胞应答。
23.权利要求20的方法，其中所述阳离子脂质选自DOTAP、DOTMA、DOEPC和其组合。
24.权利要求20的方法，其中所述阳离子脂质是DOTAP。
25.权利要求20的方法，其中所述佐剂是所述阳离子脂质的对映异构体。
26.权利要求25的方法，其中所述对映异构体是R-DOTAP。
27.权利要求20的方法，其中所述治疗因子是细胞因子，并且其中所述细胞因子是GM-CSF。
28.权利要求20的方法，其中所述组合物进一步包含一种或多种抗原。
29.权利要求28的方法，其中至少一种抗原是HPV蛋白质或肽。
30.权利要求28的方法，其中所述抗原包含一个或多个gp100序列（KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8]）和TRP2序列（SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9]）。
CN201380043183.9A 2012-06-15 2013-06-13 阳离子脂质疫苗组合物和使用方法 Active CN105163753B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261660172P 2012-06-15 2012-06-15
US61/660172 2012-06-15
PCT/US2013/045578 WO2013188627A2 (en) 2012-06-15 2013-06-13 Cationic lipid vaccine compositions and methods of use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105163753A true CN105163753A (zh) 2015-12-16
CN105163753B CN105163753B (zh) 2018-12-21

Family

ID=49758890

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380043183.9A Active CN105163753B (zh) 2012-06-15 2013-06-13 阳离子脂质疫苗组合物和使用方法

Country Status (12)

Country Link
US (4) US10286064B2 (zh)
EP (2) EP2861245B1 (zh)
JP (1) JP6348489B2 (zh)
KR (1) KR20150058139A (zh)
CN (1) CN105163753B (zh)
AU (1) AU2013274235B2 (zh)
CA (1) CA2876656C (zh)
ES (1) ES2777935T3 (zh)
IL (1) IL236270B (zh)
RU (1) RU2649365C2 (zh)
TW (2) TW201737939A (zh)
WO (1) WO2013188627A2 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110035765A (zh) * 2016-10-05 2019-07-19 Pds生物科技公司 新型hpv16非hla限制性t细胞疫苗、组合物及其使用方法
CN111655238A (zh) * 2017-12-05 2020-09-11 Pds生物科技公司 用于刺激i型干扰素基因的包括阳离子脂质的方法和组合物
US11612652B2 (en) 2015-11-13 2023-03-28 Pds Biotechnology Corporation Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy
US11801257B2 (en) 2008-04-17 2023-10-31 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids
US11904015B2 (en) 2012-09-21 2024-02-20 Pds Biotechnology Corporation Vaccine compositions and methods of use
US11911359B2 (en) 2007-03-22 2024-02-27 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by cationic lipids

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2861245B1 (en) 2012-06-15 2019-10-16 PDS Biotechnology Corporation Cationic lipid vaccine compositions and methods of use
US20180221475A1 (en) * 2016-10-05 2018-08-09 Pds Biotechnology Corporation Methods to alter the tumor microenvironment for effective cancer immunotherapy
CN111423504B (zh) * 2020-04-17 2021-03-26 安徽高安生物医学科技有限公司 黑色素瘤特异性抗原肽、肽复合物以及人工抗原呈递细胞
EP4247493A1 (en) * 2020-11-20 2023-09-27 PDS Biotechnology Corporation Methods and compositions comprising cationic lipids for immunotherapy by direct tumor injection

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080152665A1 (en) * 2006-09-01 2008-06-26 Claude Leclerc Therapy of cancer based on targeting adaptive, innate and/or regulatory component of the immune response
US20110110972A1 (en) * 2008-04-17 2011-05-12 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2167480A (en) 1927-11-02 1939-07-25 Rca Corp Signaling
WO1993003709A1 (en) 1991-08-16 1993-03-04 Vical, Inc. Composition and method for treating cystic fibrosis
IL105554A (en) * 1992-05-05 1999-08-17 Univ Leiden Peptides of human papillomavirus for use in preparations elicit a human T cell response
AU2875700A (en) * 1999-02-26 2000-09-14 Chiron Corporation Microemulsions with adsorbed macromoelecules and microparticles
CZ20014392A3 (cs) * 1999-06-10 2002-06-12 Merial Vakcína AND pro domácí a sportovní zvířata
DE60310562T2 (de) * 2002-07-05 2007-10-11 Lipoxen Technologies Ltd. Verfahren zur verstärkung einer immunantwort von nukleinsäureimpfungen
NZ583157A (en) * 2004-12-13 2011-12-22 Leo Lab Ltd Treatment of solid cancers with angeloyl substituted ingenanes
CA2595704A1 (en) * 2005-01-21 2006-07-27 Introgen Therapeutics, Inc. Topical administration permitting prolonged exposure of target cells to therapeutic and prophylactic nucleic acids
US20110305713A1 (en) * 2005-10-21 2011-12-15 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc Methods and compositions to enhance vaccine efficacy by reprogramming regulatory t cells
KR100817024B1 (ko) * 2006-11-09 2008-03-26 재단법인 목암생명공학연구소 핵산 또는 약물을 간에 특이적으로 전달하는 복합체 및이를 포함하는 약학적 조성물
US8877206B2 (en) 2007-03-22 2014-11-04 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by cationic lipids
WO2008148057A2 (en) 2007-05-23 2008-12-04 Vical Incorporated Cationic lipids compositions and methods for enhancing immune responses to vaccines
WO2010101663A2 (en) * 2009-03-06 2010-09-10 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Live attenuated influenza virus vaccines comprising microrna response elements
EP2861245B1 (en) 2012-06-15 2019-10-16 PDS Biotechnology Corporation Cationic lipid vaccine compositions and methods of use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080152665A1 (en) * 2006-09-01 2008-06-26 Claude Leclerc Therapy of cancer based on targeting adaptive, innate and/or regulatory component of the immune response
US20110110972A1 (en) * 2008-04-17 2011-05-12 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids
CN102137675A (zh) * 2008-04-17 2011-07-27 Pds生物科技公司 通过阳离子脂质的对映体刺激免疫应答

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11911359B2 (en) 2007-03-22 2024-02-27 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by cationic lipids
US11801257B2 (en) 2008-04-17 2023-10-31 Pds Biotechnology Corporation Stimulation of an immune response by enantiomers of cationic lipids
US11904015B2 (en) 2012-09-21 2024-02-20 Pds Biotechnology Corporation Vaccine compositions and methods of use
US11911465B2 (en) 2012-09-21 2024-02-27 Pds Biotechnology Corporation Vaccine compositions and methods of use
US11612652B2 (en) 2015-11-13 2023-03-28 Pds Biotechnology Corporation Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy
US11638753B2 (en) 2015-11-13 2023-05-02 PDS Biotechnology Corporalion Lipids as synthetic vectors to enhance antigen processing and presentation ex-vivo in dendritic cell therapy
CN110035765A (zh) * 2016-10-05 2019-07-19 Pds生物科技公司 新型hpv16非hla限制性t细胞疫苗、组合物及其使用方法
CN110035765B (zh) * 2016-10-05 2024-04-02 Pds生物科技公司 新型hpv16非hla限制性t细胞疫苗、组合物及其使用方法
CN111655238A (zh) * 2017-12-05 2020-09-11 Pds生物科技公司 用于刺激i型干扰素基因的包括阳离子脂质的方法和组合物

Also Published As

Publication number Publication date
US10828364B2 (en) 2020-11-10
WO2013188627A3 (en) 2014-02-06
EP2861245A2 (en) 2015-04-22
KR20150058139A (ko) 2015-05-28
JP6348489B2 (ja) 2018-07-04
US20190374635A1 (en) 2019-12-12
TW201737939A (zh) 2017-11-01
US10286064B2 (en) 2019-05-14
EP2861245B1 (en) 2019-10-16
EP3632464A1 (en) 2020-04-08
CN105163753B (zh) 2018-12-21
WO2013188627A2 (en) 2013-12-19
US20210100898A1 (en) 2021-04-08
US20210346496A1 (en) 2021-11-11
CA2876656C (en) 2023-09-26
AU2013274235A1 (en) 2015-02-12
US20150132340A1 (en) 2015-05-14
ES2777935T3 (es) 2020-08-06
EP2861245A4 (en) 2016-01-27
TW201412330A (zh) 2014-04-01
CA2876656A1 (en) 2013-12-19
JP2015521601A (ja) 2015-07-30
TWI589298B (zh) 2017-07-01
AU2013274235B2 (en) 2018-01-18
RU2649365C2 (ru) 2018-04-02
IL236270A0 (en) 2015-02-26
IL236270B (en) 2019-11-28
RU2015101110A (ru) 2016-08-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105163753A (zh) 阳离子脂质疫苗组合物和使用方法
US20190275145A1 (en) Particulate vaccine formulations
CN101282742B (zh) 脂质体在含连续疏水相的载体中作为癌症治疗媒介物的应用
Lin et al. A novel adjuvant Ling Zhi-8 enhances the efficacy of DNA cancer vaccine by activating dendritic cells
JP2018526321A (ja) 適応免疫応答を誘導するためのヌクレオシド修飾ｒｎａ
CN110381994A (zh) 用于诱导针对寨卡病毒的免疫应答的核苷修饰的rna
CN1156966A (zh) 用于乳头状瘤病毒的多核苷酸疫苗
CN105101991A (zh) 改进的疫苗组合物和使用方法
BR112020017778A2 (pt) Anfifilos de cpg e usos dos mesmos
EP2464379B1 (en) Vaccine having a peptide adjuvant for eliciting a specific immune response to treat influenza viral infection
EP2059262A1 (en) A dna vaccine for treating or preventing cervical cancer comprising a gene encoding hpv protein
Chiarella et al. DNA Vaccination by Electrogene Transfer
CN117462667A (zh) 一种复合佐剂及其在疫苗制备中的应用
CN113227121A (zh) 通过特异性结合至靶细胞具有增强的多种免疫功能的嵌合抗原及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant