TW201737939A - 陽離子之脂質疫苗組合物及其使用方法 - Google Patents

陽離子之脂質疫苗組合物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本揭示提供包含至少一種佐劑及至少一種治療因子之疫苗組合物。本揭示亦提供使用該等疫苗組合物減少哺乳動物之免疫抑制細胞群之方法、強化哺乳動物之免疫反應之方法及治療哺乳動物之疾病之方法。

Description

陽離子之脂質疫苗組合物及其使用方法 相關申請案之交叉參考
本申請案根據35 USC § 119(e)規定主張2012年6月15日申請之美國臨時申請案序號61/660,172之權利，該案之整體揭示內容以引用的方式併入本文中。
政府權利
導致本發明之部份工作係在美國政府支持下，根據美國國家衛生研究所(National Institutes of Health)第2644號CRADA之規定進行。因此，美國政府在本發明中享有一定權利。
以引用方式併入並以電子檔呈送之材料
同時附上之計算機可讀序列表係以整體方式引用而併入，且標識如下：一個建立於2013年6月12日之3,228字元的ASCII(文本)文件，名為「225611_ST25.txt」。
開發供人類使用之安全及有效免疫療法及治療性疫苗仍然係全世界患者之重要醫療需求。通常，疫苗組合物包括刺激定向免疫反應之抗原。然而，有些發展型疫苗並無效果，因為在廣大哺乳類群體中，其等係免疫反應之弱刺激因子。例如，疫苗組合物中之抗原在哺乳動物中之免疫原性可能較差。此外，有些疫苗可能無法有效地將抗原遞送至哺乳動物的免疫系統之抗原呈現細胞(「APC」)。
骨髓衍生的抑制型細胞(MDSC)為早期髓系祖細胞之異質性群體，其能抑制患者之適應性免疫反應，諸如由CD4+及CD8+ T細胞所介導之反應。已知MDSC可分泌免疫抑制細胞介素，並誘導調節性T細胞發育。此外，MDSC係由促炎性細胞介素所誘導，且發現在感染性及炎性病理病況中之數量會上升。
MDSC在荷瘤小鼠之血液、骨髓及次級淋巴器官中累積，且已表明，其出現在腫瘤微環境中對於促進腫瘤相關性免疫抑制而言具有決定性作用。重要地，據報導，腫瘤抗原特異性T細胞耐受係腫瘤逃逸(tumor escape)之關鍵因素。此外，已發現，MDSC存在於大多數癌症患者中。產業內當前正在進行大量研究，以確定一種抑制免疫抑制細胞(例如MDSC及T-調節細胞)之方式，如提高T細胞反應以攻擊並殺死受感染細胞之方式。產業內之當前實務著重探索使用阻斷抗體來阻斷並抑制相關免疫抑制因子。可使用諸如人類抗體伊匹單抗(Ipilimumab)之疫苗作為治療黑色素瘤之治療性疫苗來阻斷已知在調節免疫反應中起作用之細胞毒性T淋巴細胞相關抗原-4(CTLA-4)。
疫苗通常亦包含試圖提高疫苗組合物中之抗原之效力之佐劑。例如，通常使用諸如油包水乳液、明礬(例如，鋁鹽)之佐劑及其他化學品來提高在哺乳動物中之抗原反應。除傳統佐劑以外，可使用其他具有固有免疫效應之佐劑(例如，流感病毒體及Chiron的MF59)。然而，此等佐劑亦不理想，因為來自動物模型之證據(根據針對HSV及流感疫苗之臨床試驗報告)表明，其等僅提高中和抗體之生產而未提高動物中之T細胞反應。
因此，需提供有效遞送抗原或促進抗原呈現細胞攝取抗原，以便刺激哺乳動物之免疫反應及抑制免疫抑制細胞以提高哺乳動物之免疫反應之新型疫苗組合物。此外，可藉由在疫苗組合物中包含安全及 有效的免疫調節物(「免疫調節劑」)及治療因子來刺激哺乳動物中之細胞介導之免疫反應之新型及有效方法亦極為可取。因此，本揭示內容提供疫苗組合物及使用呈現所需性質並提供針對減少哺乳動物內之免疫抑制細胞群體及強化免疫反應之改良之相關益處之組合物之方法。
本揭示內容提供包含至少一種佐劑及至少一種治療因子之疫苗組合物。本揭示內容亦提供使用該等疫苗組合物減少哺乳動物內之免疫抑制細胞群體之方法、強化哺乳動物內之免疫反應之方法及治療哺乳動物之疾病之方法。
與此項技術中之其他組合物及方法相比，根據本揭示內容之疫苗組合物及方法提供若干益處。首先，該等疫苗組合物包括佐劑，其係一種提高、引導或促進哺乳動物內之適宜免疫反應之免疫調節劑。若疫苗組合物中包含免疫調節劑，則其具有有效提高哺乳動物針對抗原之免疫反應之潛力。例如，免疫調節劑可有利地達成以下一或多者：(1)提高抗原遞送及/或APC中之加工，(2)誘導有利於發展針對抗原之免疫反應之免疫調節細胞介素之生產，從而促進細胞所介導的免疫性，包括細胞毒性T淋巴細胞(「CTL」)，(3)減少免疫接種之次數或得到有效疫苗所需之抗原用量，(4)提高疫苗抗原之生物或免疫半衰期，及(5)藉由抑制免疫抑制性因子而克服免疫耐受性。在一些實施例中，基於陽離子性脂質之佐劑可用作強效免疫修飾佐劑，且可引發疫苗組合物之優良T細胞及抗體免疫反應。
其次，本揭示內容之疫苗組合物包含治療因子如細胞介素作為組合，該組合可減少哺乳動物之免疫抑制細胞群體，此可提高哺乳動物響應疾病之免疫反應。當前為確定抑制免疫抑制性細胞(諸如MDSC及T調節細胞)之方式之研究使用複雜的阻斷抗體。因此，投與包含治療因子如細胞介素之強效疫苗組合物可較為容易地投與至患者，並提 高免疫反應，尤其針對腫瘤之免疫反應。
第三，本揭示內容之包含治療因子之疫苗組合物可在具有及不具有疾病特異性抗原下減少MDSC，從而得到一種藉由促進抗原特異性T細胞之天然活化同時減少免疫抑制細胞群體而治療疾病(如癌症)之有力途徑。該包含治療因子之疫苗組合物導致產生優良的疾病特定性免疫反應，此現象在佐劑或治療因子單獨與抗原調配時係觀察不到的。
最後，治療因子在與陽離子性脂質佐劑組合形成疫苗組合物時導致哺乳動物中之免疫反應出現獨特的協同性增進。治療因子(例如，GM-CSF)與其他佐劑(例如不完全弗氏(Freund)佐劑(IFA)或抗-CD40+IFA)之組合並不會導致免疫反應出現類似的協同性增進。因此，陽離子性脂質佐劑與治療因子之組合特異性且顯著地導致免疫反應出現協同性增進，該增進無法利用其他常用佐劑加以複製。
涵蓋以下編號的實施例，且其係非限制性：
1.一種疫苗組合物，其包含佐劑及治療因子。
2.如第1項之疫苗組合物，其中該佐劑為免疫調節劑。
3.如第1或2項之疫苗組合物，其中該佐劑為陽離子性脂質。
4.如第3項之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質係經純化。
5.如第3或4項之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
6.如第3至5項中任一項之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
7.如第3至5項中任一項之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質為DOTMA。
8.如第3至5項中任一項之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質為DOEPC。
9.如第1或2項之疫苗組合物，其中該佐劑為陽離子性脂質之對映異構體。
10.如第9項之疫苗組合物，其中該對映異構體係經純化。
11.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOTAP或S-DOTAP。
12.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOTAP。
13.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為S-DOTAP。
14.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOTMA或S-DOTMA。
15.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOTMA。
16.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為S-DOTMA。
17.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOEPC或S-DOEPC。
18.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOEPC。
19.如第9或10項之疫苗組合物，其中該對映異構體為S-DOEPC。
20.如第1至19項中任一項之疫苗組合物，其中該治療因子係選自由下列組成之群：介白素1-18、幹細胞因子、鹼性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配體、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其組合。
21.如第1至19項中任一項之疫苗組合物，其中該治療因子為細 胞介素。
22.如第20項之疫苗組合物，其中該細胞介素為GM-CSF。
23.如第1至19項中任一項之疫苗組合物，其中該治療因子為免疫細胞生長因子。
24.如第1至23項中任一項之疫苗組合物，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
25.如第24項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為基於蛋白質的抗原。
26.如第24項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為基於肽的抗原。
27.如第24至26項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原係選自由癌抗原、病毒性抗原、細菌性抗原及致病性抗原組成之群。
28.如第24至26項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為癌抗原。
29.如第24至26項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為病毒性抗原。
30.如第24至26項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為細菌性抗原。
31.如第24至26項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為致病性抗原。
32.如第31項之疫苗組合物，其中該致病性抗原為合成或重組抗原。
33.如第24至32項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
34.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原包含一條選自由下列組成之群之序列：RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO： 1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)及KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
35.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原包含選自由下列組成之群之序列：gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])及p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其組合。
36.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該等抗原包含gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])之一或多者。
37.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)。
38.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)。
39.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)。
40.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)。
41.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)。
42.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)。
43.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)。
44.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)。
45.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)。
46.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)。
47.如第24至33項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)。
48.如第24至47項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原係選自由下列組成之群：脂蛋白、脂肽及經具有經增加的疏水性或經減少的疏水性之胺基酸序列修飾之蛋白質或肽。
49.如第24至48項中任一項之疫苗組合物，其中一或多種抗原為脂質化抗原或經修飾以增加抗原疏水性之抗原。
50.如第24至49項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原為經修飾的蛋白質或肽。
51.如第50項之疫苗組合物，其中該經修飾的蛋白質或肽係結合至疏水性基團。
52.如第51項之疫苗組合物，其中該結合至疏水性基團之經修飾的蛋白質或肽進一步包含介於該抗原與該疏水性基團之間之連接子序列。
53.如第51或52項之疫苗組合物，其中該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
54.如第24至53項中任一項之疫苗組合物，其中至少一種抗原係未經修飾的蛋白質或肽。
55.如第1至54項中任一項之疫苗組合物，其中該疫苗組合物藉由使有絲分裂原活化蛋白(MAP)激酶訊號傳遞路徑活化而在哺乳動物中誘導免疫反應。
56.如第55項之疫苗組合物，其中該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激細胞外訊號調節激酶(「ERK」)-1、ERK-2及p38之至少一者而加以活化。
57.如第1至56項中任一項之疫苗組合物，其中該疫苗組合物提高哺乳動物之功能性抗原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。
58.如第57項之疫苗組合物，其中該哺乳動物為人類。
59.一種減少哺乳動物之免疫抑制細胞群體之方法，該方法包括將有效量之疫苗組合物投與至哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
60.如第59項之方法，其中該免疫抑制細胞為MDSC。
61.如第59項之方法，其中該免疫抑制細胞為T調節細胞。
62.如第59至61項中任一項之方法，其中該減少導致哺乳動物之T細胞反應增加。
63.如第62項之方法，其中該T細胞係腫瘤浸潤T細胞。
64.如第62或63項之方法，其中該T細胞反應為CD4+ T細胞反應。
65.如第64項之方法，其中該CD4+ T細胞係腫瘤浸潤CD4+ T細胞。
66.如第62或63項之方法，其中該T細胞反應為CD8+ T細胞反應。
67.如第66項之方法，其中該CD8+ T細胞係腫瘤浸潤CD8+ T細 胞。
68.如第59至67項中任一項之方法，其中該哺乳動物為人類。
69.如第59至68項中任一項之方法，其中該佐劑為免疫調節劑。
70.如第59至69項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質。
71.如第70項之方法，其中該陽離子性脂質係經純化。
72.如第70或71項之方法，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
73.如第70至72項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
74.如第70至72項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTMA。
75.如第70至72項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOEPC。
76.如第59至69項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質之對映異構體。
77.如第76項之方法，其中該對映異構體係經純化。
78.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP或S-DOTAP。
79.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP。
80.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為S-DOTAP。
81.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA或S-DOTMA。
82.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA。
83.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為S-DOTMA。
84.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC或S-DOEPC。
85.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC。
86.如第76或77項之方法，其中該對映異構體為S-DOEPC。
87.如第59至86項中任一項之方法，其中該治療因子係選自由下列組成之群：介白素1-18、幹細胞因子、鹼性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配體、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其組合。
88.如第59至86項中任一項之方法，其中該治療因子為細胞介素。
89.如第88項之方法，其中該細胞介素為GM-CSF。
90.如第59至86項中任一項之方法，其中該治療因子為免疫細胞生長因子。
91.如第59至90項中任一項之方法，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
92.如第91項之方法，其中一或多種抗原為基於蛋白質的抗原。
93.如第91項之方法，其中一或多種抗原為基於肽的抗原。
94.如第91至93項中任一項之方法，其中一或多種抗原係選自由癌抗原、病毒性抗原、細菌性抗原及致病性抗原組成之群。
95.如第91至93項中任一項之方法，其中一或多種抗原為癌抗原。
96.如第91至93項中任一項之方法，其中一或多種抗原為病毒性抗原。
97.如第91至93項中任一項之方法，其中一或多種抗原為細菌性抗原。
98.如第91至93項中任一項之方法，其中一或多種抗原為致病性抗原。
99.如第98項之方法，其中該致病性抗原為合成或重組抗原。
100.如第91至99項中任一項之方法，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
101.如第91至100項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含一條選自由下列組成之群之序列：RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)及KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
102.如第91至100項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含選自由下列組成之群之序列：gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])及p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其組合。
103.如第91至100項中任一項之方法，其中該等抗原包含gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])之一或多者。
104.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)。
105.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)。
106.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)。
107.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)。
108.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)。
109.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)。
110.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)。
111.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)。
112.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)。
113.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)。
114.如第91至100項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)。
115.如第91至114項中任一項之方法，其中至少一種抗原係選自由下列組成之群：脂蛋白、脂肽，及經具有增加疏水性或減少疏水性之胺基酸序列修飾之蛋白質或肽。
116.如第91至115項中任一項之方法，其中一或多種抗原為脂質化抗原或經修飾以增加疏水性之抗原。
117.如第91至116項中任一項之方法，其中至少一種抗原為經修飾的蛋白質或肽。
118.如第117項之方法，其中該經修飾的蛋白質或肽係結合至疏 水性基。
119.如第118項之方法，其中該結合至疏水性基之經修飾的蛋白質或肽進一步包含介於該抗原與該疏水性基之間之連接子序列。
120.如第118或119項之方法，其中該疏水性基為棕櫚醯基。
121.如第91至120項中任一項之方法，其中至少一種抗原係未經修飾的蛋白質或肽。
122.如第59至121項中任一項之方法，其中投藥係經由哺乳動物之免疫系統之細胞中之MAP激酶訊號傳遞路徑活化免疫反應。
123.如第122項之方法，其中該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激ERK-1、ERK-2及p38之至少一者而活化。
124.如第122或123項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之細胞毒性T淋巴細胞。
125.如第124項之方法，其中該等細胞毒性T淋巴細胞為CD8+ T細胞。
126.如第122至125項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之抗體反應。
127.如第122至126項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之干擾素-γ(IFN-γ)。
128.如第59至127項中任一項之方法，其中投藥提高功能性抗原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。
129.一種強化哺乳動物之免疫反應之方法，該方法包括將有效量之疫苗組合物投與至哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
130.如第129項之方法，其中該減少導致哺乳動物之T細胞反應增加。
131.如第130項之方法，其中該T細胞係腫瘤浸潤T細胞。
132.如第130或131項之方法，其中該T細胞反應為CD4+ T細胞反應。
133.如第132項之方法，其中該CD4+ T細胞係腫瘤浸潤CD4+ T細胞。
134.如第129至133項中任一項之方法，其中該T細胞反應為CD8+ T細胞反應。
135.如第134項之方法，其中該CD8+ T細胞係腫瘤浸潤CD8+ T細胞。
136.如第129至135項中任一項之方法，其中該哺乳動物為人類。
137.如第129至136項中任一項之方法，其中該佐劑為免疫調節劑。
138.如第129至137項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質。
139.如第138項之方法，其中該陽離子性脂質係經純化。
140.如第138或139項之方法，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
141.如第138至140項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
142.如第138至140項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTMA。
143.如第138至140項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOEPC。
144.如第129至137項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質之對映異構體。
145.如第144項之方法，其中該對映異構體係經純化。
146.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP或S-DOTAP。
147.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP。
148.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為S-DOTAP。
149.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA或S-DOTMA。
150.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA。
151.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為S-DOTMA。
152.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC或S-DOEPC。
153.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC。
154.如第144或145項之方法，其中該對映異構體為S-DOEPC。
155.如第129至154項中任一項之方法，其中該治療因子係選自由下列組成之群：介白素1-18、幹細胞因子、鹼性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配體、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其組合。
156.如第129至154項中任一項之方法，其中該治療因子為細胞介素。
157.如第156項之方法，其中該細胞介素為GM-CSF。
158.如第129至154項中任一項之方法，其中該治療因子為免疫細胞生長因子。
159.如第129至158項中任一項之方法，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
160.如第159項之方法，其中一或多種抗原為基於蛋白質的抗原。
161.如第159項之方法，其中一或多種抗原為基於肽的抗原。
162.如第159至161項中任一項之方法，其中一或多種抗原係選自由癌抗原、病毒性抗原、細菌性抗原及致病性抗原組成之群。
163.如第159至161項中任一項之方法，其中一或多種抗原為癌抗原。
164.如第159至161項中任一項之方法，其中一或多種抗原為病毒性抗原。
165.如第159至161項中任一項之方法，其中一或多種抗原為細菌性抗原。
166.如第159至161項中任一項之方法，其中一或多種抗原為致病性抗原。
167.如第166項之方法，其中該致病性抗原為合成或重組抗原。
168.如第159至167項中任一項之方法，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
169.如第159至168項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含一條選自由下列組成之群之序列：RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)及KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
170.如第159至168項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含選自由下列組成之群之序列：gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])及p53(KYICNSSCM [SEQ.ID.No.10])及其組合。
171.如第159至168項中任一項之方法，其中該等抗原包含gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])之一或多者。
172.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)。
173.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)。
174.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)。
175.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)。
176.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)。
177.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)。
178.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)。
179.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)。
180.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)。
181.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)。
182.如第159至168項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)。
183.如第159至182項中任一項之方法，其中至少一種抗原係選自由下列組成之群：脂蛋白、脂肽及經具有經增加的疏水性或經減少的疏水性之胺基酸序列修飾之蛋白質或肽。
184.如第159至183項中任一項之方法，其中一或多種抗原為脂質化抗原或經修飾以增加抗原疏水性之抗原。
185.如第159至184項中任一項之方法，其中至少一種抗原為經修飾的蛋白質或肽。
186.如第185項之方法，其中該經修飾的蛋白質或肽係結合至疏水性基團。
187.如第185項之方法，其中該結合至疏水性基團之經修飾的蛋白質或肽進一步包含介於該抗原與該疏水性基團之間之連接子序列。
188.如第186或187項之方法，其中該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
189.如第159至188項中任一項之方法，其中至少一種抗原係未經修飾的蛋白質或肽。
190.如第129至189項中任一項之方法，其中投藥經由哺乳動物之免疫系統之細胞中之MAP激酶訊號傳遞路徑活化免疫反應。
191.如第190項之方法，其中該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激ERK-1、ERK-2及p38之至少一者而活化。
192.如第190或191項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之細胞毒性T淋巴細胞。
193.如第192項之方法，其中該等細胞毒性T淋巴細胞為CD8+ T細胞。
194.如第190至193項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之抗體反應。
195.如第190至194項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺 乳動物之干擾素-γ(IFN-γ)。
196.如第129至195項中任一項之方法，其中投藥提高功能性抗原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。
197.一種治療哺乳動物之疾病之方法，該方法包括將有效量之疫苗組合物投與至哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
198.如第197項之方法，其中該方法為預防性治療。
199.如第197或198項之方法，其中該疾病為癌症。
200.如第197至199項中任一項之方法，其中該佐劑為免疫調節劑。
201.如第197至200項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質。
202.如第201項之方法，其中該陽離子性脂質係經純化。
203.如第201或202項之方法，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
204.如第201至203項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
205.如第201至203項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOTMA。
206.如第201至203項中任一項之方法，其中該陽離子性脂質為DOEPC。
207.如第197至200項中任一項之方法，其中該佐劑為陽離子性脂質之對映異構體。
208.如第207項之方法，其中該對映異構體係經純化。
209.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP或S-DOTAP。
210.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOTAP。
211.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為S-DOTAP。
212.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA或S-DOTMA。
213.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOTMA。
214.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為S-DOTMA。
215.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC或S-DOEPC。
216.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為R-DOEPC。
217.如第207或208項之方法，其中該對映異構體為S-DOEPC。
218.如第197至217項中任一項之方法，其中該治療因子係選自由下列組成之群：介白素1-18、幹細胞因子、鹼性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配體、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其組合。
219.如第197至217項中任一項之方法，其中該治療因子為細胞介素。
220.如第156項之方法，其中該細胞介素為GM-CSF。
221.如第197至217項中任一項之方法，其中該治療因子為免疫細胞生長因子。
222.如第197至221項中任一項之方法，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
223.如第222項之方法，其中一或多種抗原為基於蛋白質的抗原。
224.如第222項之方法，其中一或多種抗原為基於肽的抗原。
225.如第222至224項中任一項之方法，其中一或多種抗原係選自由癌抗原、病毒性抗原、細菌性抗原及致病性抗原組成之群。
226.如第222至224項中任一項之方法，其中一或多種抗原為癌抗原。
227.如第222至224項中任一項之方法，其中一或多種抗原為病毒性抗原。
228.如第222至224項中任一項之方法，其中一或多種抗原為細菌性抗原。
229.如第222至224項中任一項之方法，其中一或多種抗原為致病性抗原。
230.如第166項之方法，其中該致病性抗原為合成或重組抗原。
231.如第222至230項中任一項之方法，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
232.如第222至231項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含一條選自由下列組成之群之序列：RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)及KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
233.如第222至231項中任一項之方法，其中至少一種抗原包含選自由下列組成之群之序列：gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])及p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其組合。
234.如第222至231項中任一項之方法，其中該等抗原包含gp100 序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])之一或多者。
235.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)。
236.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)。
237.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)。
238.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)。
239.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)。
240.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)。
241.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)。
242.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)。
243.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)。
244.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)。
245.如第222至231項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)。
246.如第222至231項中任一項之方法，其中至少一種抗原係選自由下列組成之群：脂蛋白、脂肽及經具有經增加的疏水性或經減少 的疏水性之胺基酸序列修飾之蛋白質或肽。
247.如第222至246項中任一項之方法，其中一或多種抗原為脂質化抗原或經修飾以增加抗原疏水性之抗原。
248.如第222至247項中任一項之方法，其中至少一種抗原為經修飾的蛋白質或肽。
249.如第248項之方法，其中該經修飾的蛋白質或肽係結合至疏水性基團。
250.如第248項之方法，其中該結合至疏水性基團之經修飾的蛋白質或肽進一步包含介於該抗原與該疏水性基團之間之連接子序列。
251.如第249或250項之方法，其中該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
252.如第222至251項中任一項之方法，其中至少一種抗原係未經修飾的蛋白質或肽。
253.如第197至252項中任一項之方法，其中投藥係經由哺乳動物之免疫系統之細胞中之MAP激酶訊號傳遞路徑活化免疫反應。
254.如第253項之方法，其中該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激ERK-1、ERK-2及p38之至少一者而活化。
255.如第253或254項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之細胞毒性T淋巴細胞。
256.如第255項之方法，其中該等細胞毒性T淋巴細胞為CD8+ T細胞。
257.如第253至256項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之抗體反應。
258.如第253至257項中任一項之方法，其中該免疫反應活化哺乳動物之干擾素-γ(IFN-γ)。
259.如第197至258項中任一項之方法，其中投藥提高功能性抗 原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。
260.如第24至34項或第48至58項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)。
261.如第24至34項或第48至58項中任一項之疫苗組合物，其中該抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
262.如第91至100項或第115至128項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)。
263.如第91至100項或第115至128項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
264.如第159至168項或第183至196項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)。
265.如第159至168項或第183至196項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
266.如第222至231項或第246至259項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)。
267.如第222至231項或第246至259項中任一項之方法，其中該抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。
本文如下描述本發明之各實施例。在本文所述之一個實施例中，提供一種疫苗組合物。該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
在另一實施例中，提供一種減少哺乳動物之免疫抑制細胞群之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
在又另一實施例中，提供一種強化哺乳動物之免疫反應之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
在又另一實施例中，提供一種治療哺乳動物之疾病之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。
在各種實施例中，該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。如本文所用，術語「佐劑」係指提高、強化及/或增強哺乳動物對抗原之免疫反應之物質。如本文所用，術語「治療因子」係指與藉由誘導、提 高或抑制免疫反應而治療疾病相關之任何劑。如本文所用，治療因子包括(但不限於)免疫系統刺激劑、殺細胞劑、腫瘤滲透增強劑、化療劑或細胞毒性免疫細胞。預期疫苗組合物包括佐劑及治療因子一起投與之調配物，及佐劑及治療因子分開投與之調配物。佐劑及治療因子之劑量係熟習此項技術者所知。
在本文所述之一些實施例中，該佐劑為免疫調節劑。如本文所用，術語「免疫調節劑」係指提高、引導及/或促進哺乳動物之免疫反應之免疫調節物。
在本文所述之一些實施例中，該佐劑為奈米顆粒。如本文所用，術語「奈米顆粒」係指所測量的尺寸於奈米級別之顆粒。如本文所用，「奈米顆粒」係指具有尺寸小於約1,000奈米之結構之顆粒。在一些實施例中，該奈米顆粒為脂質體。
在本文所述之一些實施例中，該佐劑為陽離子性脂質。如本文所用，術語「陽離子性脂質」係指許多在生理pH下攜帶凈正電荷，或具有可質子化基團且在低於pKa之pH下帶正電荷之脂質物質之任一者。
根據本揭示內容之適宜陽離子性脂質包括(但不限於)：3-.β.[.sup.4N-(.sup.1N,.sup.8-二胍基亞精胺)-胺甲醯基]膽固醇(BGSC)；3-.β.[N,N-二胍基乙基-胺基乙烷)-胺甲醯基]膽固醇(BGTC)；N,N.sup.1N.sup.2N.sup.3四-甲基四棕櫚基精胺(cellfectin)；N-第三丁基-N'-十四烷基-3-十四烷基-胺基丙-脒(CLONfectin)；二甲基二十八烷基溴化銨(DDAB)；1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羥基乙基溴化銨(DMRIE)；2,3-二油醯氧基-N-[2(精胺甲醯胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙銨三氟乙酸酯)(DOSPA)；1,3-二油醯氧基-2-(6-羧酸精基)-丙基醯胺(DOSPER)；4-(2,3-雙-棕櫚醯基氧基-丙基)-1-甲基-1H-咪唑(DPIM)N,N,N',N'-四甲基-N,N'-雙(2-羥乙基)-2,3-二油醯氧基- 1,4-丁烷-碘化二銨)(Tfx-50)；N-1-(2,3-二油醯氧基)丙基-N,N,N-三甲基氯化銨(DOTMA)或其他N-(N,N-1-二烷氧基)-烷基-N,N,N-三取代銨表面活性劑；1,2二油醯基-3-(4'-三甲基銨基)丁醇-sn-甘油(DOBT)或膽固醇基(4'三甲基氨)丁酸酯(ChOTB)，其中三甲基銨基係經由丁醇間隔臂連接至(DOTB之)雙鏈或(ChOTB之)膽固醇基；揭示於WO 93/03709中之DORI(DL-1,2-二油醯基-3-二甲基胺基丙基-.β.-羥乙基銨)或DORIE(DL-1,2-O-二油醯基-3-二甲基胺基丙基-.β.-羥乙基銨)(DORIE)或其類似物；1,2-二油醯基-3-琥珀醯基-sn-甘油膽鹼酯(DOSC)；膽固醇基半琥珀酸酯(ChOSC)；脂多胺，諸如二(十八烷基)醯胺基甘胺醯精胺(DOGS)及二棕櫚醯基磷脂醯乙醇戊基精胺(DPPES)、膽固醇基-3.β.-羧基-醯胺基-伸乙基三甲基碘化銨、1-二甲基胺基-3-三甲基銨基-DL-2-丙基-膽固醇基碘化羧酸酯(1-dimethylamino-3-trimethylammonio-DL-2-propyl-cholesteryl carboxylate iodide)、膽固醇基-3-O-羧基醯胺基乙二胺、膽固醇基-3-.β.-氧基琥珀醯胺基-伸乙基三甲基碘化銨、1-二甲基胺基-3-三甲基銨基-DL-2-丙基-膽固醇基-3-.β.-氧基碘化琥珀酸酯、2-(2-三甲基銨基)-乙基甲基胺基乙基-膽固醇基-3-.β.-氧基碘化琥珀酸酯、3-.β.-N-(N',N'-二甲基胺基乙烷)胺甲醯基膽固醇(DC-chol)及3-.β.-N-(聚伸乙基亞胺)-胺甲醯基膽固醇；O,O'-二肉豆蔻基-N-離胺醯基天冬胺酸酯(DMKE)；O,O'-二肉豆蔻基-N-離胺醯基-榖胺酸酯(DMKD)；1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羥基乙基溴化銨(DMRIE)；1,2-二月桂醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DLEPC)；1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DMEPC)；1,2-二油醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DOEPC)；1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DPEPC)；1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DSEPC)；1,2-二油醯基-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)；二油醯基二甲基胺基丙烷(DODAP)；1,2-棕櫚 醯基-3-三甲基銨丙烷(DPTAP)；1,2-二硬脂醯基-3-三甲基銨丙烷(DSTAP)、1,2-肉豆蔻醯基-3-三甲基銨丙烷(DMTAP)及十二烷基硫酸鈉(SDS)。此外，亦涵蓋所述的陽離子性脂質任一者之結構變異體及衍生物。
在一些實施例中，該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。在其他實施例中，該陽離子性脂質為DOTAP。在又有其他實施例中，該陽離子性脂質為DOTMA。在其他實施例中，該陽離子性脂質為DOEPC。在一些實施例中，該陽離子性脂質係經純化。
在一些實施例中，該陽離子性脂質為陽離子性脂質之對映異構體。術語「對映異構體」係指陽離子性脂質之立體異構體，其係其對應立體異構體之不可疊加鏡像，例如R及S對映異構體。在各種實例中，該對映異構體為R-DOTAP或S-DOTAP。在一實例中，該對映異構體為R-DOTAP。在另一實例中，該對映異構體為S-DOTAP。在一些實施例中，該對映異構體係經純化。在各種實例中，該對映異構體為R-DOTMA或S-DOTMA。在一實例中，該對映異構體為R-DOTMA。在另一實例中，該對映異構體為S-DOTMA。在一些實施例中，該對映異構體係經純化。在各種實例中，該對映異構體為R-DOPEC或S-DOPEC。在一實例中，該對映異構體為R-DOPEC。在另一實例中，該對映異構體為S-DOPEC。在一些實施例中，該對映異構體係經純化。
在本文所述之各種實施例中，該治療因子係選自由下列組成之群：介白素1-18、幹細胞因子、鹼性FGF、EGF、G-CSF、GM-CSF、FLK-2配體、HILDA、MIP-1α、TGF-β、TGF-α、M-CSF、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、可溶性CD23、LIF及其組合。其他治療因子係一般技術者所知，且亦可用於本揭示內容之疫苗組合物中。
在本文所述之各種實施例中，該治療因子為細胞介素。在一些實施例中，該細胞介素為GM-CSF。在本文所述之其他實施例中，該治療因子為免疫細胞生長因子。
在本文所述之各種實施例中，該組合物進一步包含一或多種抗原。如本文所用，術語「抗原」係指在(直接或如在(例如)DNA疫苗中表現後)引入具有免疫系統之哺乳動物中時為該哺乳動物之免疫系統所識別並能引發免疫反應之任何因素(例如，蛋白質、肽、多糖、糖蛋白、糖脂、核酸或其組合)。如本文所定義，抗原誘發性免疫反應可係體液或細胞所介導或二者所介導。當某一因素能特異性地與免疫系統之抗原識別分子(諸如，免疫球蛋白(抗體)或T細胞抗原受體(TCR))相互作用時被稱為係「抗原性的」。
在一些實施例中，一或多種抗原為基於蛋白質的抗原。在其他實施例中，一或多種抗原為基於肽的抗原。在各種實施例中，一或多種抗原係選自由下列組成之群：癌抗原、病毒性抗原、細菌性抗原及致病性抗原。如本文所用之「微生物抗原」為微生物之抗原且包括(但不限於)傳染性病毒、傳染性細菌、傳染性寄生蟲及傳染性真菌。微生物抗原可為完整微生物及其天然分離物、片段或衍生物、與天然微生物抗原相同或類似之合成化合物，較佳地包括誘導特異性針對相應微生物(天然微生物抗原之來源)之免疫反應。在一實施例中，該抗原為癌抗原。在一實施例中，該抗原為病毒性抗原。在另一實施例中，該抗原為細菌性抗原。在各種實施例中，該抗原為致病性抗原。在一些實施例中，該致病性抗原為合成或重組抗原。
在一些實施例中，該抗原為癌抗原。如本文所用之「癌抗原」為與腫瘤或癌細胞相關，且能在MHC分子之存在下表現於抗原呈現細胞表面時引發免疫反應(體液性及/或細胞性)之分子或化合物(例如，蛋白質、肽、多肽、脂蛋白、脂肽、糖蛋白、糖肽、脂質、糖 脂、碳水化合物、RNA及/或DNA)。例如，癌抗原可為腫瘤相關性抗原。腫瘤相關性抗原包括自體抗原及其他可能並不與癌症特異性相關，但在投與至哺乳動物時提高針對腫瘤或癌細胞之免疫反應及/或減緩腫瘤或癌細胞之生長之抗原。在一實施例中，至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
在本發明之一些實施例中，至少一種抗原包含一條選自由下列組成之群之序列：RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)、GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)、KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)、YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)、KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)、MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)、LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)、KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)、SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)、KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)、KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)、KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)及KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。在一實施例中，至少一種抗原包含序列RAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：1)。在另一實施例中，至少一種抗原包含序列GQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：2)。在又另一實施例中，至少一種抗原包含序列KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)。在一些實施例中，KSSGQAEPDRAHYNIVTF(SEQ.ID.NO：3)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在其他實施例中，至少一種抗原包含序列YMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：4)。在另一實施例中，至少一種抗原包含序列KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)。在又另一實施例中，KSSYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：5)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在其他實施例中，至少一種抗原包含序列MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)。在另一實施例中，MHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：6)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在其他實施例中，至少一種抗原包含序列LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)。在一些實施例中，LLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：7)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在一些實施例中，至少一種抗原包含序列KVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：8)。在其他實施例中，至少一種抗原包含序列SYVDFFVWL(SEQ.ID.NO：9)。在又有其他實施例中，至少一種抗原包含序列KYICNSSCM(SEQ.ID.NO：10)。在另一實施例中，至少一種抗原包含序列KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)。在一些實施例中，KSSKVPRNQDWL(SEQ.ID.NO：11)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在其他實施例中，至少一種抗原包含序列KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)。在另一實施例中，KSSMHGDTPTLHEYMLDLQPETT(SEQ.ID.NO：12)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在其他實施例中，至少一種抗原包含序列KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)。在一些實施例中，KSSLLMGTLGIVCPICSQKP(SEQ.ID.NO：13)經修飾以進一步包含疏水性基團。在一實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。
在一實施例中，該抗原包含選自包含下列之群之序列：gp100(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])、TRP2(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No. 9])及p53(KYICNSSCM[SEQ.ID.No.10])及其組合。
在一實施例中，該等抗原包含gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])之一或多者。
在各種實施例中，至少一種抗原係選自由下列組成之群：脂蛋白、脂肽及經具有經增加的疏水性或經減少的疏水性之胺基酸序列修飾之蛋白質或肽。在一些實施例中，一或多種抗原為經修飾以增加抗原疏水性之抗原。在一實施例中，至少一種抗原為經修飾的蛋白質或肽。在一些實施例中，該經修飾的蛋白質或肽係結合至疏水性基團。在其他實施例中，該結合至疏水性基團之經修飾的蛋白質或肽進一步包含介於該抗原與疏水性基團之間之連接子序列。在一些實施例中，該疏水性基團為棕櫚醯基基團。在又有其他實施例中，至少一種抗原係未經修飾的蛋白質或肽。
在本文所述之各種實施例中，該疫苗組合物藉由活化有絲分裂活化蛋白(MAP)激酶訊號傳遞路徑而誘導哺乳動物之免疫反應。藉由諸如陽離子性脂質之佐劑誘導免疫反應係描述於(例如)PCT/US2008/057678(WO/2008/116078；「Stimulation of an Immune Response by Cationic Lipids」)及PCT/US2009/040500(WO/2009/129227；「Stimulation of an Immune Response by Enantiomers of Cationic Lipids」)中，二者之整體揭示內容以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激細胞外訊號調節激酶(「ERK」)-1、ERK-2及p38之至少一者而活化。在其他實施例中，該組合物提高功能性抗原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。術語「哺乳動物」係為熟習此項技術者所熟知。在一實施例中，該哺乳動物為人類。
在本文所述之一實施例中，提供一種減少哺乳動物之免疫抑制細胞群體之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與哺乳動物之 步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。該疫苗組合物之先前所述實施例可應用於減少如本文所述的哺乳動物之免疫抑制細胞群體之方法中。
在一些實施例中，該免疫抑制細胞為骨髓衍生的抑制型細胞(MDSC)。在其他實施例中，該免疫抑制細胞為T調節細胞。
在各種實施例中，該減少導致哺乳動物之T細胞反應增加。在一些實施例中，該T細胞係腫瘤浸潤T細胞。在一些實施例中，該T細胞反應為CD4+ T細胞反應。在特定實施例中，該CD4+ T細胞係腫瘤浸潤CD4+ T細胞。在一些實施例中，該T細胞反應為CD8+ T細胞反應。在特定實施例中，該CD8+ T細胞係腫瘤浸潤CD8+ T細胞。
在各種實施例中，哺乳動物為人類。在一些實施例中，投藥係經由哺乳動物之免疫系統之細胞中之MAP激酶訊號傳遞路徑活化免疫反應。在各種實施例中，該MAP激酶訊號傳遞路徑係藉由刺激ERK-1、ERK-2及p38中之至少一者而活化。
在其他實施例中，該免疫反應活化哺乳動物之細胞毒性T淋巴細胞。在一實施例中，該等細胞毒性T淋巴細胞為CD8+ T細胞。在另一實施例中，該投藥提高功能性抗原特異性CD8+ T淋巴細胞反應。在文另一實施例中，該免疫反應活化哺乳動物之抗體反應。在其他實施例中，該免疫反應活化哺乳動物之干擾素-γ(IFN-γ)。
在本文所述之一實施例中，提供一種強化哺乳動物之免疫反應之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與至哺乳動物之步驟，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。該疫苗組合物及該減少哺乳動物之免疫抑制細胞群體之方法之先前所述實施例可應用於強化如本文所述的哺乳動物之免疫反應之方法中。
在本文所述之一實施例中，提供一種治療哺乳動物之疾病之方法。該方法包括將有效量之疫苗組合物投與至哺乳動物之步驟，其中 該疫苗組合物包含佐劑及治療因子。該疫苗組合物及該減少哺乳動物之免疫抑制細胞群體之方法之先前所述實施例可應用於治療如本文所述的哺乳動物之疾病之方法中。
在一些實施例中，如本文所用之針對感染性病原體之「治療」係指增加個體對感染病原體之抵抗力或降低個體感染該病原體之可能性之預防性治療；及/或在個體受感染後為對抗感染之治療，例如，減少或消除感染或防止其變得更嚴重。在一實施例中，該方法為預防性治療。在一些實施例中，該疾病為癌症。
圖1顯示各種疫苗組合物對荷瘤小鼠之抗原特異性免疫反應之影響。每106個來自小鼠之脾細胞中所觀察到的IFN-γ點數目係以由E749-57重新刺激培養之點數目減去對照抗原重新刺激培養之點數目/百萬脾細胞±SD表示。圖中E7肽係指GM-CSF-E7+Cd40+IFA。(***P<0.001)。
圖2顯示利用流式細胞儀分析法分析各種疫苗組合物對腫瘤浸潤的MDSC(定義為CD44+細胞群體內之CD11b+Gr-1+細胞)之數目之影 響。將腫瘤浸潤細胞之數目標準化為每1x106個總腫瘤細胞，並以平均值±SD表示。(*P<0.05，與未經處理及僅經GM-CSF處理之小組相比)。
圖3顯示各種疫苗組合物在投與至小鼠後對腫瘤浸潤CD8+ T細胞之數目之影響。利用流式細胞儀分析法分析CD44+細胞群體內之腫瘤浸潤CD8+ T細胞之數目。將腫瘤浸潤細胞之數目標準化為每1x106個總腫瘤細胞，並以平均值±SD表示。(*P<0.05)。
圖4顯示各種疫苗組合物對抗原特異性免疫反應之影響。藉由ELISPOT分析IFNγ在黑色素瘤抗原TRP-2及gp-100肽對肽對照(各為10μg/ml)存在下之活性。數值係以由TRP-2及gp100重新刺激培養之點數目減去由對照抗原重新刺激培養之點數目/百萬個脾細胞表示。(*P<0.01)。
實例1 佐劑及含抗原之佐劑之製備
可單獨利用陽離子性脂質製備佐劑。或者，可利用陽離子性脂質與其他免疫調節劑之混合物製備佐劑。可利用含抗原之陽離子性脂質基組合物製備疫苗組合物。在本實例中，使用DOTAP作為例舉性陽離子性脂質，而使用HPV蛋白E7肽抗原作為例舉性抗原。
將無菌注射用水(WFI)或緩衝劑用於所有程序中，在該等程序中將陽離子性脂質製備成脂質體。在此實例中，利用脂質膜製備脂質體。該用於併入該等脂質體之E7抗原係衍生自HPV 16 E7蛋白之H-2Db限制性CTL決定基(胺基酸49-57，RAHYNIVTF[SEQ.ID.NO.1])。在玻璃小瓶中藉由(1)將脂質溶於有機溶劑如氯仿中，及(2)在穩定的乾燥氮氣流下蒸發氯仿溶液製得脂質膜。藉由將該等膜保持在真空中隔夜而移除痕量有機溶劑。然後藉由添加需要量之WFI或緩衝劑使該等脂質膜水化，以得到4-10mg/mL之最終濃度。然後將該等懸浮液擠壓成200nm之尺寸，並儲存在4℃下。
為製備含抗原之陽離子性脂質，藉助E7肽之水溶液使該DOTAP脂質膜再次水化。亦可使用其他用於一般脂質體製備之方法，該等方法係熟習此項技術者所熟知。
實例2 疫苗組合物對荷瘤小鼠之抗原特異性免疫反應之影響
可根據本揭示內容比較各種疫苗組合物，並評估其對荷瘤小鼠之抗原特異性免疫反應之影響。在此實例中，使用R-DOTAP作為例舉性陽離子性脂質，使用E7肽作為例舉性抗原，並使用細胞介素GM-CSF作為例舉性治療因子。此外，使用抗-CD40 Ab及不完全弗氏(Freund)佐劑(IFA)作為比較佐劑。
在此實例中，根據本揭示內容製備疫苗組合物，並評估以下小組：
小組1：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)及GM-CSF(5μg/小鼠)
小組2：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
小組3：GM-CSF(5μg/小鼠)、E7肽(100ug/小鼠)、抗-CD40 Ab(20μg/小鼠)及IFA(50μg/小鼠)
小組4：只有R-DOTAP
小組5：只有GM-CSF
小組6：R-DOTAP及GM-CSF
小組7：未經處理的對照
在第0天，在6-8週齡的C57BL6雌性小鼠(5隻小鼠/小組)之右脅腹皮下植入50,000個TC-1細胞/小鼠。在第8天，當所有小鼠均具有直徑為~3-4mm之腫瘤時，以適宜小組之疫苗組合物處理來自各小組之受試動物。
在第15天重複處理。六天後(亦即在腫瘤植入後的第21天)，犧牲小鼠。獲得小鼠之脾臟，並經處理得到總淋巴細胞。藉由ELISPOT分析IFNγ在E749-57肽對無關肽對照(各為10μg/ml)存在下之活性。求得以由E749-57重新刺激培養之點數目減去由無關抗原重新刺激培養之點數目/百萬脾細胞之值。
如圖1所示，與其他小組相比，小組1(亦即R-DOTAP-E7肽及GM-CSF)中荷瘤小鼠之抗原特異性免疫反應呈現統計學上顯著的提升。與個別組分相比，R-DOTAP-E7肽與GM-CSF之組合呈現針對抗原特異性免疫反應之協同作用。對小組3(亦即GM-CSF、E7肽、抗-CD40 Ab及IFA)投與生長因子及非陽離子性脂質佐劑，但對免疫反應不呈現如小組1所觀察到之協同作用。
實例3 疫苗組合物對荷瘤小鼠之腫瘤微環境中之MDSC之影響
可根據本揭示內容比較各種疫苗組合物，並評估其對荷瘤小鼠之腫瘤微環境中之MDSC數目之影響。在此實例中，使用R-DOTAP作為例舉性陽離子性脂質，使用E7肽作為例舉性抗原，並使用細胞介素GM-CSF作為例舉性治療因子。
在此實例中，根據本揭示內容製備疫苗組合物，並評估以下小組：
小組1：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)及GM-CSF(5μg/小鼠)
小組2：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
小組3：只有R-DOTAP
小組4：只有GM-CSF
小組5：R-DOTAP及GM-CSF
小組6：未經處理的對照
在第0天，在6-8週齡的C57BL6雌性小鼠(5隻小鼠/小組)之右脅腹皮下植入50,000個TC-1細胞/小鼠。在第8天，當所有小鼠均具有直徑為~3-4mm之腫瘤時，以適宜小組之疫苗組合物處理來自各小組之受試動物。
在第15天重複處理。六天後(亦即在腫瘤植入後的第21天)，獲得小鼠之腫瘤組織。如生產商所建議的，使用GentleMACS分離器 (Miltenyi Biotec,Auburn,CA)及實體腫瘤均質化程序處理腫瘤樣品。
利用流式細胞儀分析法分析CD44+細胞群體(造血細胞之標記)內之腫瘤浸潤的MDSC(定義為CD11b+Gr-1+細胞)之數目。將腫瘤浸潤細胞之數目標準化為每1x106個總腫瘤細胞，並以平均值表示。
如圖2中所示，與未經處理的小鼠及僅經GM-CSF處理的小鼠相比，小組1(亦即R-DOTAP-E7肽及GM-CSF)及小組5(亦即R-DOTAP-E7及GM-CSF)兩組中荷瘤小鼠之MDSC數目呈現統計學上顯著的下降。與個別組分相比，R-DOTAP-E7肽與GM-CSF之組合呈現使MDSC之數目減少之協同作用。此外，與個別組分相比，R-DOTAP與GM-CSF之組合(亦即不投與抗原)呈現使MDSC之數目減少之類似協同作用。
實例4 疫苗組合物對荷瘤小鼠之腫瘤浸潤CD8+ T細胞之影響
可根據本揭示內容比較各種疫苗組合物，並評估其對荷瘤小鼠中腫瘤浸潤CD8+ T細胞之數目之影響。在此實例中，使用R-DOTAP作為例舉性陽離子性脂質，使用E7肽作為例舉性抗原，並使用細胞介素GM-CSF作為例舉性治療因子。
在此實例中，根據本揭示內容製備疫苗組合物，並評估以下小組：
小組1：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)及GM-CSF(5μg/小鼠)
小組2：R-DOTAP-E7肽(20μg/小鼠)
小組3：只有R-DOTAP
小組4：只有GM-CSF
小組5：R-DOTAP及GM-CSF
小組6：未經處理的對照
在第0天，在6-8週齡的C57BL6雌性小鼠(5隻小鼠/小組)之右脅腹 皮下植入50,000個TC-1細胞/小鼠。在第8天，當所有小鼠均具有直徑為~3-4mm之腫瘤時，以適宜小組之疫苗組合物處理來自各小組之受試動物。
在第15天重複處理。六天後(亦即在腫瘤植入後的第21天)，獲得小鼠之腫瘤組織。如生產商所建議的，使用GentleMACS分離器(Miltenyi Biotec,Auburn,CA)及實體腫瘤均質化程序處理腫瘤樣品。
利用流式細胞儀分析法分析CD44+細胞群體(造血細胞之標記)內之腫瘤浸潤的CD8+ T細胞之數目。將腫瘤浸潤細胞之數目標準化為每1x106個總腫瘤細胞，並以平均值表示。
如圖3所示，與其他小組相比，小組1(亦即R-DOTAP-E7肽及GM-CSF)及小組2(亦即R-DOTAP-E7)兩組中荷瘤小鼠之腫瘤浸潤的CD8+ T細胞之數目均呈現統計學上顯著的上升。與個別組分相比，R-DOTAP-E7肽與GM-CSF之組合呈現使腫瘤浸潤的CD8+ T細胞之數目上升之協同作用。
實例5 疫苗組合物對小鼠之抗原特異性免疫反應之影響
可根據本揭示內容比較各種疫苗組合物，並評估其對小鼠之抗原特異性免疫反應之影響。在此實例中，使用R-DOTAP作為例舉性陽離子性脂質，使用TRP-2及gp100肽作為例舉性抗原，並使用細胞介素GM-CSF作為例舉性治療因子。
在此實例中，根據本揭示內容製備疫苗組合物，並評估以下小組：
小組1：R-DOTAP/TRP-2/gp100肽(190ug/160ug)
小組2：R-DOTAP/TRP-2/gp100肽/GM-CSF(190ug/160ug/0.5ug)
本研究中使用6-8週齡的C57BL6雌性小鼠(4隻小鼠/小組)。在第0天及第8天，以適宜小組之疫苗組合物處理來自各小組之受試動物。
七天後(亦即在第一次投藥後的第14天)，犧牲小鼠，並獲得其脾臟，並經處理得到總淋巴細胞。藉由ELISPOT分析IFNγ在TRP-2及gp-100肽對無關肽對照(各為10μg/ml)存在下之活性。將數值表示為以由TRP-2及gp-100重新刺激培養之點數目減去由無關抗原重新刺激培養之點數目/百萬脾細胞。
如圖4所示，與不包含GM-CSF之小組1相比，小組2(亦即R-DOTAP/TRP-2/gp100肽/GM-CSF)之抗原特異性免疫反應呈現統計學上顯著的增加。
雖然已在以上說明中詳細說明及描述本發明，但應將此種說明及描述視為例舉而非特徵之限制，應瞭解，僅描述說明性實施例，且希望所有處於本發明範圍內之變化及修改均受到保護。熟習此項技術者可輕易設計出其等自己的包含本文所述特徵之一或多者之實施，且因此落於本發明之範圍內。
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Claims (30)

  1. 一種疫苗組合物，其包含佐劑及治療因子，其中該佐劑為陽離子性脂質。
  2. 如請求項1之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
  3. 如請求項1之疫苗組合物，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
  4. 如請求項1之疫苗組合物，其中該佐劑為該陽離子性脂質之對映異構體。
  5. 如請求項4之疫苗組合物，其中該對映異構體為R-DOTAP。
  6. 如請求項1之疫苗組合物，其中該治療因子為細胞介素，且其中該細胞介素為GM-CSF。
  7. 如請求項1之疫苗組合物，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
  8. 如請求項7之疫苗組合物，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
  9. 如請求項7之疫苗組合物，其中該等抗原包含一或多個gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
  10. 一種疫苗組合物之用途，其係用於製造用於減少哺乳動物之免疫抑制細胞群之藥劑，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子，且其中該佐劑為陽離子性脂質。
  11. 如請求項10之用途，其中該免疫抑制細胞為MDSC。
  12. 如請求項10之用途，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
  13. 如請求項10之用途，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
  14. 如請求項10之用途，其中該佐劑為該陽離子性脂質之對映異構體。
  15. 如請求項14之用途，其中該對映異構體為R-DOTAP。
  16. 如請求項10之用途，其中該治療因子為細胞介素，且其中該細胞介素為GM-CSF。
  17. 如請求項10之用途，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
  18. 如請求項17之用途，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
  19. 如請求項17之用途，其中該等抗原包含一或多個gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
  20. 一種疫苗組合物之用途，其係用於製造強化哺乳動物之免疫反應之藥劑，其中該疫苗組合物包含佐劑及治療因子，且其中該佐劑為陽離子性脂質。
  21. 如請求項20之用途，其中該減少導致哺乳動物之T細胞反應增加。
  22. 如請求項21之用途，其中該T細胞反應為CD8+ T細胞反應。
  23. 如請求項20之用途，其中該陽離子性脂質係選自由下列組成之群：DOTAP、DOTMA、DOEPC及其組合。
  24. 如請求項20之用途，其中該陽離子性脂質為DOTAP。
  25. 如請求項20之用途，其中該佐劑為該陽離子性脂質之對映異構體。
  26. 如請求項25之用途，其中該對映異構體為R-DOTAP。
  27. 如請求項20之用途，其中該治療因子為細胞介素，且其中該細胞介素為GM-CSF。
  28. 如請求項20之用途，其中該組合物進一步包含一或多種抗原。
  29. 如請求項28之用途，其中至少一種抗原為HPV蛋白質或肽。
  30. 如請求項28之用途，其中該等抗原包含一或多個gp100序列(KVPRNQDWL[SEQ.ID.No.8])及TRP2序列(SYVDFFVWL[SEQ.ID.No.9])。
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