CN105154442A - 豌豆抗白粉病等位基因er1-7的Indel标记及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种与豌豆抗白粉病er1等位基因er1-7共分离的Indel标记InDel111-120及其应用，属于植物病理和农作物抗病遗传育种领域。扩增所述Indel标记的引物具有如下核苷酸序列：InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG，InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如Seq？ID？No.3所示。本发明还提供了基于所述Indel标记的用于筛选包含er1-7基因的豌豆种质资源的试剂盒。采用所述Indel标记或试剂盒可以快速准确地区分出含有抗性等位基因er1-7的豌豆资源，因此该标记或试剂盒可有效应用于豌豆抗白粉病的分子辅助育种中，高效准确、方便快捷，大大缩短育种周期、加速育种进程。
Description
技术领域
本发明属于植物病理和农作物抗病遗传育种领域，具体涉及一种与豌豆抗白粉病er1等位基因er1-7共分离的Indel标记及其应用。
背景技术
由白粉菌(ErysiphepisiD.C.)引起的豌豆白粉病是世界性的重要病害。在生产上造成25％～50％的产量损失，严重感染的豌豆品种损失可达80％以上(Nisaretal.,2011；Fondevillaetal.,2012)。豌豆白粉病在我国南、北豌豆产区均有的发生。气候条件适宜的情况下，感病品种的侵染率高达100％，极大地影响豌豆产量和品质，造成严重的经济损失(彭化贤等，1991)。
种植抗病品种是防治豌豆白粉病最为经济、有效且环境安全的一种方法。目前，国外已经鉴定了大量的抗白粉病豌豆资源，并在抗性资源中鉴定了3个独立遗传的抗白粉病基因，包括两个隐性基因(er1，er2)和一个显性基因(Er3)(Harlandetal.,1948；Heringaetal.,1969)。迄今，除在豌豆资源JI2480中鉴定抗性基因er2和在一个豌豆野生种P.fulvum中鉴定Er3外，大量抗性资源筛选和遗传分析方面的研究表明，许多不同地理起源的抗白粉病豌豆资源的抗性均由隐性基因er1控制(Tiwarietal.,1997；Ghafooretal.,2012；Liuetal.,2003；Vaidetal.,1997)。因此，目前生产中应用的抗白粉病豌豆资源的抗性均由er1控制。er1基因的抗性机制是抑制病原菌对寄主表皮细胞的侵入，表现高抗或免疫，抗性不受环境条件的影响，具有广谱、持久抗性，已在欧洲、北美洲及澳大利亚的豌豆育种中广泛应用(Fondevillaetal.,2007)。隐性抗病基因er1和er2分别被定位在豌豆遗传图谱的第6连锁群(LGVI)(Timmermanetal.,1994)和第3连锁群(LGⅢ)(Katochetal.,2010)上，而显性基因Er3在豌豆遗传图谱上的位置还不确定(Fondevillaetal.,2007)。
最近，Humphryetal.(2011)和Pavanetal.(2011)等研究发现，豌豆抗白粉病基因er1是由与大麦感白粉病基因(MLO)序列同源PsMLO功能丧失而产生的。在自然条件下，豌豆PsMLO同源序列发生碱基缺失、插入、替换等导致不同的er1等位基因产生,即er1-1、er1-2、er1-3、er1-4和er1-6(Humphryetal.,2011；Sunetal.,2015)。最近，通过化学诱变剂处理豌豆感白粉病品种也获得了er1另一个等位基因er1-5(Pereiraetal.,2010)。随后，基于不同分子标记技术,Pavan等(2013)和Sun等(2015)开发了er1的6个等位基因的功能分子标记,除了等位基因er1-5和er1-6的功能标记已在遗传群体中验证，其它4个等位基因的功能标记的有效性尚未被验证。
发明内容
本发明的目的是提供一种与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记，基于该标记的试剂盒及制备方法，以及所述标记或试剂盒在筛选抗白粉病豌豆种质资源方面的应用。
本发明的技术方案如下：
与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记，其特征在于，用于扩增所述Indel标记的引物具有如下核苷酸序列：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
用于筛选包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的Indel标记引物；
所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
所述试剂盒还包括进行PCR反应和/或电泳所需的试剂；
所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；
所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。
所述试剂盒的制备方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中包括所述Indel标记引物；
所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT。
组装试剂盒的试剂中还包括PCR反应和/或电泳所需的试剂；
所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；
所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。
所述Indel标记或所述试剂盒在鉴定包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源方面的应用，包括如下步骤：
(1)采用所述Indel标记引物对待测豌豆材料的基因组DNA进行PCR扩增；所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
(2)对扩增结果进行电泳检测；
(3)从电泳结果中筛选出与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带一致的材料；
所述与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
所述PCR扩增的反应体系为：豌豆基因组DNA2ng/μl,2×PCRMasterMix0.4μl/μl，上下游引物各0.2μmol/L，其余为双蒸水。
所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5分钟；以94℃30秒，45℃-63℃30秒，72℃30秒为1个循环，35个循环；72℃10分钟。
所述电泳检测指，采用6％的聚丙烯酰胺凝胶或者3.5％的琼脂糖凝胶，于120V恒功率电泳分离，最后银染显色。
本发明根据抗病品种G0003967中克隆到的抗白粉病基因er1-7和感病品种坝豌6号的候选基因PsMLO1序列比对结果,获知er1-7与PsMLO1cDNA序列之间存在10bp碱基缺失(111-120处碱基缺失)，进而采用PrimerPremier5.0软件在该序列缺失位点两侧设计引物，开发功能性标记。所述标记为插入缺失标记(Indel标记)，并将其命名为InDel111-120，该标记的上、下游引物分别位于PsMLO1基因的第一个外显子和第一个内含子上，且该标记InDel111-120与基因er1-7的遗传距离为0cM，二者紧密连锁且共分离，因此该Indel标记可用于筛选含er1-7的豌豆材料的分子标记辅助育种工作。
本发明首先验证了所述Indel标记及其引物的有效性和特异性，即用G0003967和坝豌6号基因组DNA为模板进行PCR扩增，发现标记InDel111-120能在亲本间呈现多态性，在抗病亲本G0003967上扩增出183bp的目的条带，而在感病亲本坝豌6号上扩增出193bp的条带(图1)。随后，用所述Indel标记检测了坝豌6号与G0003967杂交衍生的F2群体中的102个单株的基因型，发现InDel111-120在F2群体中的基因型与F3群体的每一个株系的表现性一一对应(图1)，进一步表明该标记InDel111-120是与er1-7紧密连锁共分离的共显性功能标记，证实了所述Indel标记在筛选抗白粉病基因er1-7中的准确性。
本发明提供了一种与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记，其特征在于，用于扩增所述Indel标记的上下游引物具有分别如SeqIDNo.1和SeqIDNo.2所示的核苷酸序列；所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。采用所述Indel标记引物扩增F2群体单株豌豆材料的基因组DNA，可能出现三种电泳结果：纯合抗病基因型(183bp)，纯合感病基因型(193bp)和杂合基因型(183bp，193bp)3种带型，且三种带型与F3群体的性状表现型一一对应。根据育种需要，可以基于最终的电泳结果选择符合育种要求的含有抗白粉病基因er1-7的豌豆材料，剔除其它不符合要求的材料。由此可见，采用本发明所述的Indel标记及其引物，可在豌豆植株生长周期的任一阶段采集植物样品进行分子检测以获知待测样品是否含有抗白粉病基因er1-7，高效准确、方便快捷。更重要的是，采用本发明所述的标记或试剂盒，可在豌豆生长早期通过提取幼苗DNA进行PCR扩增，能简捷快速地获知该豌豆幼苗是否含有抗白粉病基因er1-7，并筛选出符合条件的幼苗，对于不符合条件的幼苗可以停止进一步继续培养，使豌豆培育工作更有针对性，从而避免产生多余劳动和资源浪费。
基于所述Indel标记InDel111-120及其引物，本发明还提供了一种用于筛选含有抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源的试剂盒。该试剂盒的特征是，包括具有如SeqIDNo.1和SeqIDNo.2所示核苷酸序列的引物。进一步地，为了提升试剂盒的便捷度，所述试剂盒还可以包括进行PCR反应和/或电泳所需的试剂；所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix等；所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银等。采用所述引物，以豌豆基因组DNA为模板，采用常规试剂进行常规PCR反应与电泳即可获知所测基因组DNA对应的豌豆材料是否含有抗白粉病基因er1-7，简单快捷，采用最少的步骤能最快地获得结果。本发明还请求保护所述试剂盒的制备方法，任何规模的基于商业目的销售或生产所述试剂盒的行为都属于本发明请求保护的范围，其中生产所述试剂盒的行为指组装试剂盒的试剂中包括具有如SeqIDNo.1和SeqIDNo.2所示的核苷酸序列的引物。
本发明还请求保护所述Indel标记InDel111-120或所述试剂盒在鉴定含有抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源方面的应用，利用所述Indel标记InDel111-120的引物扩增待测豌豆材料的基因组DNA，通过常规的PCR方法及电泳检测手段即可方便快速的获知待测豌豆材料中是否含有er1-7基因，并且该方法对豌豆材料的限制较少，可以在豌豆植株的任一生长阶段取材进行检测，例如，可以在豌豆生长早期，幼苗时期即能进行鉴定，通过鉴定结果就能准确判断预测出该豌豆幼苗是否含有抗/感病基因，是否会发病，无需等待豌豆长成植株发病之后观察表型，因此大大地提高了育种效率，也很大程度地减少了不必要的育种步骤，节约了成本资源。
本发明还验证了所述Indel标记InDel111-120在具有其它不同遗传背景的非亲本豌豆材料中用于筛选含基因er1-7材料的准确性，结果表明，InDel111-120在所有含有抗病等位基因er1-7的豌豆资源上，都能扩增出一条183bp的目的条带(图2)。然而，在含有抗性等位基因er1-1，er1-2，er1-4，er1-6的豌豆资源以及感病豌豆品种上都扩增出一条比183bp大10bp的193bp的片段(图2)。这表明本发明所述Indel标记InDel111-120能够准确区分出含抗病等位基因er1-7的豌豆资源，同时验证了标记InDel111-120在鉴定各豌豆资源是否含有抗病基因er1-7方面的有效性和普适性。
综上所述，本发明所述的分子标记BCYM000140或试剂盒以及基于它们的筛选方法，能够有效地被应用到豌豆抗白粉病的分子标记辅助育种中，不仅克服了常规育种方法所需时间周期长等缺点，还可以有目标地将含有抗白粉病基因er1-7的豌豆材料在实验室阶段选择获得，从而培育出具有理想目标性状的豌豆新品种。因此，本发明在豌豆育种实践和抗病机理的研究中具有重要意义、大大提高了育种效率，在豌豆的实际育种和生产工作中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为功能标记InDel111-120对亲本以及坝豌6号×G0003967衍生的F2群体中部分单株的PCR扩增结果。
图2为功能标记InDel111-120对15份其它遗传背景的豌豆资源的PCR扩增结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但并不以此限制本发明的范围。如无特殊说明，下述实施例中使用的操作均为常规方法，所采用的试剂均可以商购获得。
试剂与耗材
PCR反应所需的试剂，如dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；以及电泳所需的试剂，如TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银等均可商购获得。
本发明所述引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。
植物材料
抗病品种G0003967来自国家种质资源库，由中国农业科学院作物科学研究所宗绪晓研究员提供；
感病品种坝豌6号由河北省张家口市农业科学院徐东旭副研究员提供。
11份其它遗传背景的豌豆材料均为现有已知品种，其来源及出处如下表1所示：
表1
实施例1、本发明所述Indel标记InDel111-120的获得
1.1er1-7的功能标记开发
根据抗病品种G0003967和感病品种坝豌6号的PsMLO1候选基因序列及野生型PsMLO1序列(FJ463618)比对分析(Humphryetal.,2011),结果发现G0003967的PsMLO1cDNA序列开放阅读框第111～120个碱基缺失，这种小片段缺失目前还没有相关报道，是一种新的PsMLO1变异形式，此结果表明G0003967中含有新的抗白粉病等位基因，命名为er1-7。根据G0003967的PsMLO1基因的第一个外显子上的10bp的缺失，用PrimerPremier5.0软件设计上、下游引物开发InDel功能性标记，该Indel标记被命名为InDel111-120。
所述Indel标记InDel111-120的上下游引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：5’-GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG-3’(SeqIDNo.1)
InDel111-120-R：5’-CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT-3’(SeqIDNo.2)
该InDel标记的上、下游引物分别位于PsMLO1基因的第一个外显子和第一个内含子上。
所述引物扩增的与抗白粉病基因er1-7紧密连锁的Indel标记特征条带为183bp，序列如SeqIDNo.3所示。
以亲本材料G0003967和坝豌6号基因组DNA为模板进行PCR扩增,检测引物有效性和多态性，采取如下检测步骤：
(1)采用所述Indel标记InDel111-120的引物对待测豌豆材料的基因组DNA进行PCR扩增；PCR扩增反应使用的体系为以10μl计为：豌豆基因组DNA模板浓度2ng/μl,2×PCRMasterMix(Tiangen)4μl，上、下游引物各0.2μmol/L,用ddH2O补足至10μl。反应程序为：95℃预变性5分钟；以94℃30秒，45℃-63℃(退火温度范围)30秒，72℃30秒为1个循环，35个循环；72℃10分钟。
所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
(2)对扩增结果进行电泳检测，即，采用6％的聚丙烯酰胺凝胶或者3.5％的琼脂糖胶，于120V恒功率电泳分离，最后银染显色。
结果表明，标记InDel111-120在抗病亲本G0003967上扩增出一条目的片段183bp，经测序，该片段的核苷酸序列如SeqIDNo.3所示，在感病亲本坝豌6号上扩增出一条多10bp的193bp的片段(图1；图2)，经测序，该片段的核苷酸序列如SeqIDNo.4所示。
实施例2、本发明所述试剂盒的组装
基于实施例1获得的Indel标记InDel111-120，组装本发明所述的试剂盒。所述试剂盒包括扩增所述Indel标记InDel111-120的具有SeqIDNo.1和SeqIDNo.2所示序列的上下游引物。
所述试剂盒还包括用于PCR反应和/或电泳的常规试剂。具体地，所述用于PCR反应的常规试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水等，也可以是常见的可商购获得的PCR试剂盒、PCR反应Mix等等；所述电泳的常规试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银等。
实施例3、本发明所述Indel标记或试剂盒的验证与应用
1.1本发明所述Indel标记或试剂盒在筛选含基因er1-7的杂交后代中的有效性验证及筛选应用
用实施例1获得的Indel标记InDel111-120或实施例2获得的试剂盒进行群体验证，用于鉴定感病品种坝豌6号(Er1)与抗病品种G0003967杂交衍生的F1、F2群体的每个单株的基因型。InDel111-120在所有F1植株中都扩增出两条目的条带，分别为183bp和193bp。InDel111-120在F2群体单株材料中的扩增结果出现三种情况：纯合抗病基因型(183bp)，纯合感病基因型(193bp)和杂合基因型(183bp，193bp)3种带型，且三种带型与F2群体的性状表现型一一对应。显示出的这三种基因型分别对应纯合抗病，纯合感病和抗感分离的株系(图1)。标记InDel111-120在F2群体中的分离模式通过X2检验，符合1:2:1比例，表明InDel111-120为共显性标记。并且PCR扩增出的3种带型与F3的每一个株系的表型一一对应，这表明InDel111-120是与抗病基因er1-7共分离的功能标记。通过mapmaker3.0软件计算遗传连锁距离，使用MapDraw构建遗传连锁图谱。InDel111-120与抗病基因er1-7的遗传距离为0cM，证明标记InDel111-120为与er1-7共分离的功能标记。
可以采用本发明所述Indel标记InDel111-120或试剂盒在感病品种坝豌6号(Er1)×抗病品种G0003967的杂交后代进行含基因er1-7的单株筛选，即，在各豌豆单株的生长早期，如，幼苗期，对各单株进行基因组DNA提取，采取实施例1的检测步骤进行PCR扩增和电泳，并根据电泳结果，筛选出与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带(183bp，序列如SeqIDNo.3所示)一致的材料，即可尽早地筛选出包含抗白粉病基因er1-7的杂交单株材料。
1.2本发明所述Indel标记或试剂盒在筛选其它遗传背景豌豆资源中的应用
将实施例1获得的Indel标记InDel111-120或实施例2获得的试剂盒在豌豆品种资源上进行应用和功能验证。PCR扩增和电泳检测按照实施例1中描述的检测步骤进行，最后根据电泳结果筛选出与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带(183bp，序列如SeqIDNo.3所示)一致的材料。结果如图2所示，所述标记InDel111-120在所有含有抗病等位基因er1-7的豌豆资源上(G0003936，G0003958，G0004394，G0003895，G0003899，G0003931经过PsMLO1cDNA序列鉴定，均在111-120处缺失10bp)，均扩增出一条183bp的目的条带。在感病资源(坝豌6号，陇豌1号)和含有抗病基因er1其它等位基因er1-1(Tara)，er1-2(X9002)，er1-4(YI)，er1-6(G0001778)上均扩增出一条大10bp的193bp的片段。InDel111-120能够成功区分含抗病基因er1-7的豌豆资源。此结果验证了功能标记InDel111-120在豌豆资源鉴定中的有效性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明做了比较详细的阐述，但在发明基础上，可以对其做一些修改和改进，这对本领域技术人员而言是显而易见。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记，其特征在于，用于扩增所述Indel标记的引物具有如下核苷酸序列：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
2.用于筛选包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的Indel标记引物；
所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括进行PCR反应和/或电泳所需的试剂；
所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；
所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。
4.权利要求2或3任一所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中包括所述Indel标记引物；
所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中还包括PCR反应和/或电泳所需的试剂；
所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；
所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。
6.权利要求1所述Indel标记或权利要求2-3任一所述试剂盒在鉴定包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源方面的应用，包括如下步骤：
(1)采用所述Indel标记引物对待测豌豆材料的基因组DNA进行PCR扩增；所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：
InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；
InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；
(2)对扩增结果进行电泳检测；
(3)从电泳结果中筛选出与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带一致的材料；
所述与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：豌豆基因组DNA2ng/μl,2×PCRMasterMix0.4μl/μl，上下游引物各0.2μmol/L，其余为双蒸水。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5分钟；以94℃30秒，45℃-63℃30秒，72℃30秒为1个循环，35个循环；72℃10分钟。
9.根据权利要求6-8任一所述的应用，其特征在于，所述电泳检测指，采用6％的聚丙烯酰胺凝胶或者3.5％的琼脂糖凝胶，于120V恒功率电泳分离，最后银染显色。
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Cited By (7)
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|---|---|---|---|---|
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| CN111826454A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel2及其引物和应用 |
| CN111996285A (zh) * | 2020-09-27 | 2020-11-27 | 广东省农业科学院蔬菜研究所 | 一种与丝瓜白粉病相关的分子标记及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090193536A1 (en) * | 2008-01-24 | 2009-07-30 | Seminis Vegetable Seeds, Inc. | Pea line 08240773 |
| RU2012147570A (ru) * | 2013-03-04 | 2014-09-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Молекулярный маркер fr_er1 и его использование для селекции новых сортов гороха, устойчивых к мучнистой росе |
-
2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090193536A1 (en) * | 2008-01-24 | 2009-07-30 | Seminis Vegetable Seeds, Inc. | Pea line 08240773 |
| RU2012147570A (ru) * | 2013-03-04 | 2014-09-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Молекулярный маркер fr_er1 и его использование для селекции новых сортов гороха, устойчивых к мучнистой росе |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GENBANK: "KC466597.1", 《GENBANK》 * |
| 付海宁 等: "加拿大豌豆品种(系)抗白粉病表型和基因型鉴定", 《植物遗传资源学报》 * |
| 张卫兵 等: "《分子生物学原理与应用研究》", 30 April 2014, 北京：中国水利水电出版社 * |
| 王仲怡 等: "豌豆品系X9002抗白粉病基因鉴定", 《作物学报》 * |
| 王仲怡: "豌豆抗白粉病 er1等位基因鉴定", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109504688A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-22 | 华南农业大学 | ITS1基因在检测白粉病病原Erysiphe alphitoides中的应用 |
| CN109504688B (zh) * | 2018-12-28 | 2020-06-12 | 华南农业大学 | ITS1基因在检测白粉病病原Erysiphe alphitoides中的应用 |
| CN111826454A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel2及其引物和应用 |
| CN111826458A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel3及其引物和应用 |
| CN111826456A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记snp#1及其引物和应用 |
| CN111826457A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记snp#2及其引物和应用 |
| CN111826455A (zh) * | 2019-04-23 | 2020-10-27 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel1及其引物和应用 |
| CN111826455B (zh) * | 2019-04-23 | 2022-08-16 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel1及其引物和应用 |
| CN111826458B (zh) * | 2019-04-23 | 2022-08-16 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记VrMLO_Indel3及其引物和应用 |
| CN111826456B (zh) * | 2019-04-23 | 2022-12-09 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记snp#1及其引物和应用 |
| CN111826457B (zh) * | 2019-04-23 | 2023-07-18 | 江苏省农业科学院 | 用于鉴定绿豆抗白粉病表型的分子标记snp#2及其引物和应用 |
| CN111996285A (zh) * | 2020-09-27 | 2020-11-27 | 广东省农业科学院蔬菜研究所 | 一种与丝瓜白粉病相关的分子标记及其应用 |
| CN111996285B (zh) * | 2020-09-27 | 2021-09-14 | 广东省农业科学院蔬菜研究所 | 一种与丝瓜白粉病相关的分子标记及其应用 |
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