CN115927718B - 用于鉴定小麦粒重和粒宽的kasp分子标记及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鉴定或辅助鉴定小麦粒重和粒宽相关的KASP分子标记应用及其引物组合物。该方法包括检测待测小麦基因组中SNP位点的多态性或基因型(等位基因)，根据所述基因型鉴定或辅助鉴定小麦粒重和粒宽，所述SNP位点为小麦5A染色体上的一个SNP位点，其核苷酸种类为T或C，为序列表中序列1的第101位核苷酸。该方法可用于预测小麦粒重和粒宽，和进行小麦育种。可将检测所述SNP位点多态性和基因型的物质与其他物质(如检测其他与小麦粒重和粒宽相关的分子标记的单核苷酸多态性或基因型的物质)联合在一起制备鉴定小麦高粒重、粒宽产品。

Description

用于鉴定小麦粒重和粒宽的KASP分子标记及应用

技术领域

本发明属于基因生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定小麦粒重和粒宽的KASP分子标记及应用。

背景技术

分子标记辅助选择(MAS,marker assisted selection)是基于基因型的直接选择，不受外界环境因素的影响，被广泛应运于育种实践中。常用的分子标记(如RFLP、AFLP、DArT、SSR等)检测周期长、步骤繁琐、成本高，不易对育种后代材料进行大规模筛选。KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)标记，即竞争性等位基因特异性PCR，利用在引物末端加入不同的荧光基团，基于PCR终端荧光信号的读取判断对目标序列进行分型，可对目标等位基因中包含的特定SNP(单碱基核苷酸多态性)或InDels(插入/缺失)进行鉴定，鉴定过程具有高效、低廉、快捷、方便的优点，且能够进行高通量分析，极大地加快了分子标记辅助选择的进程，在作物育种中有着广阔的应用前景。

小麦是我国重要的粮食作物，其产量的高低直接影响到我国人们生活水平和国家粮食安全。随着人口的增长、耕地减少和粮食生产成本的不断提高，高产育种将是我国小麦育种的永恒主题。小麦产量主要由粒重、穗粒数和单位面积的穗数等要素决定。小麦粒重与产量显著正相关，小麦粒重主要由籽粒大小决定，而小麦籽粒大小又可以进一步分解为粒长、粒宽、粒厚等构成要素。小麦粒重主要受加性效应控制，遗传力高达59-92％，是受多基因控制的数量性状。研究表明，小麦粒长、粒宽与粒重呈极显著正相关。因此，通过现代分子生物学手段研究控制小麦籽粒大小基因的遗传基础、克隆粒重、粒形相关基因、发掘优异等位变异并开发其标记对我国小麦高产育种具有重要意义。

目前已定位到一些与小麦粒重及粒形相关的QTL，但由于受作图群体、遗传背景、QTL作图方法、标记类型等因素的影响，使得不同的结果可比性差。此外，由于大多数QTL对粒重及其构成要素的表型贡献率较小，且在不同年际及环境间重复性差，所以仍不能满足分子标记辅助选择的需要。因此，开发用于鉴定小麦多环境下粒重和粒形的KASP标记，将为培育高产小麦品种提供有效的检测手段，对于确保小麦高产、稳产以及国家粮食安全和农业可持续发展具有十分重要的战略意义。

发明内容

本发明所要解决的问题是如何鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽。

为了解决以上技术问题，本发明首先提供了鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的方法，包括检测待测小麦基因组中所述SNP位点的基因型，根据所述基因型鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽，所述基因型为TT或CC，所述TT是所述SNP位点为T的纯合型，所述CC是所述SNP位点为C的纯合型。

作为一种实施方案，所述鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的方法可包括如下步骤：

(1)以待测小麦的基因组DNA为模板，采用引物组合物进行KASP分子标记检测；所述引物组合物由引物A、引物B和引物C组成；

所述引物A为核苷酸序列是序列表中序列2的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列2的第22-43位的单链DNA；

所述引物B为核苷酸序列是序列表中序列3的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列3的第22-42位的单链DNA；

所述引物C为核苷酸序列是序列表中序列4的单链DNA分子；

(2)完成步骤(1)后，进行荧光检测，确定待测小麦的所述SNP的基因型；

(3)根据基因型结果进行鉴定待测小麦的粒重和粒宽：所述SNP位点的基因型为CC的待测小麦的粒重和/或粒宽优于所述SNP位点的基因型为TT的待测小麦。

本发明还提供了小麦育种的方法。

本发明所提供的小麦育种的方法，包括检测小麦基因组中所述SNP位点的基因型，选择所述SNP位点的基因型为CC的小麦作为亲本进行育种，所述CC是所述SNP位点为C的纯合型。

作为一种实施方法，小麦育种的方法可包括如下步骤：

(1)以待测小麦的基因组DNA为模板，采用上述引物组进行KASP分子标记检测；

(2)完成步骤(1)后，进行荧光检测，确定待测小麦所述SNP位点的基因型；

(3)选择CC基因型小麦进行小麦粒宽粒重优势小麦育种。

上述方法中，引物溶解与配制方法可为：先将3条引物分别用ddH₂O稀释成100mM，再按如下配制引物工作液：引物A12μL、引物B12μL、引物C 30μL、ddH₂O 46μL，作为KASP标记的引物工作液，-20℃保存备用。

上述方法中，KASP的反应体系可为：模板DNA 1.5μL，引物工作液0.0417μL，2×KASP Master Mix(LGC公司，Lot No.13426773)0.75μL，用无菌超纯水补充反应体系至3μL。

上述方法中，KASP标记可在普通PCR扩增仪上进行。

上述方法中，KASP标记的反应程序可为：

第一步：94℃预变性15min；

第二步：94℃变性20s、复性20s(第一次的复性温度为61℃，每个循环降温0.6℃)共10个循环；94℃变性20s、55℃复性1min共26个循环；

第三步：72℃延伸3min、4℃保存。

上述方法中，确定待测小麦所述SNP的基因型的方法可为：PCR反应完成后，利用荧光信号阅读仪(Omega)和荧光检测系统(Araya)将荧光信号转变为可分析的数值对反应产物进行荧光数据读取。采用终末端读取荧光值进行基因分型，荧光扫描结果利用R软件包进行图形化展示，T碱基类型带有FAM荧光，分布于x轴附近；C碱基类型带有HEX荧光，分布于y轴附近；无检出信号的样本分布于原点附近。

上述方法在小麦育种中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明还提供了检测小麦基因组中KASP的多态性或基因型的物质在如下任一中的应用，

(1)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽；

(2)小麦育种；

(3)制备鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

(4)制备小麦育种的产品；

所述SNP位点为小麦5A染色体上的一个位点，其核苷酸种类为T或C，为序列表中序列1的第101位核苷酸。

以普通小麦品种中国春基因组序列为参考基因组，所述SNP位点为小麦5A染色体546,521,932bp处(具体为序列表中序列1第101位)。

本发明还提供了用于检测小麦基因组中SNP位点的多态性或基因型的产品。

本发明所提供的用于检测小麦基因组中所述SNP位点的多态性或基因型的产品，含有上述检测小麦基因组中SNP位点的多态性或基因型的物质，所述产品为任一种：

C1)检测小麦粒重和/或粒宽相关的单核苷酸多态性或基因型的产品；

C2)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

C3)用于小麦育种的产品。

上述应用、方法和产品中，所述物质可为通过下述至少一种方法确定所述SNP位点的多态性或基因型所需的试剂和/或仪器：DNA测序、限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、变性高效液相色谱和SNP芯片。其中，SNP芯片包括基于核酸杂交反应的芯片、基于单碱基延伸反应的芯片、基于等位基因特异性引物延伸反应的芯片、基于“一步法”反应的芯片、基于引物连接反应的芯片、基于限制性内切酶反应的芯片、基于蛋白DNA结合反应的芯片，及基于荧光分子DNA结合反应的芯片。

可选地，所述物质为如下D1)、D2)或D3)：

D1)所述物质为扩增包括所述SNP位点在内的小麦基因组DNA片段的引物组合物；

D2)所述物质为含有D1)所述引物组合物的PCR试剂；

D3)所述物质为含有D1)所述引物组合物或D2)所述PCR试剂的试剂盒。

可选地，所述扩增可为PCR扩增。所述引物组合物由所述引物A、所述引物B和所述引物C组成。

D3)所述试剂盒还可包括KASP Master Mix。

上述应用、方法和产品中，所述引物组合物可被标记物标记也可不被标记物标记。所述标记物指可用于提供可检测的效果且可以连接至核酸的任何原子或分子。标记物包括但不限于染料；放射性标记，诸如32P；结合部分，诸如生物素(biotin)；半抗原，诸如地高辛(DIG)；发光、发磷光或发荧光部分；和单独的荧光染料或与可以通过荧光共振能量转移(FRET)抑制或移动发射光谱的部分组合的荧光染料。标记可以提供可通过荧光、放射性、比色、重量测定、X射线衍射或吸收、磁性、酶活性等检测的信号。标记可以是带电荷的部分(正电荷或负电荷)或可选地，可以是电荷中性的。标记可以包括核酸或蛋白序列或由其组合，只要包含标记的序列是可检测的。在一些实施方案中，核酸在没有标记的情况下直接检测(例如，直接读取序列)。如所述引物组合物可为由核苷酸序列是序列表中序列2的第22-43位的单链DNA、核苷酸序列是序列表中序列3的第22-42位的单链DNA和核苷酸序列是序列表中序列4的单链DNA组成的引物组合物，所述引物组合物也可为由序列表中序列2所示的单链DNA、序列表中序列3所示的单链DNA和由序列表中序列4所示的单链DNA的引物组。序列表

中序列2由43个核苷酸组成，第1-21位核苷酸为FAM接头序列(作为标记物)，第

22-43位核苷酸为特异序列；序列表中序列3由42个核苷酸组成，第1-21位核苷酸

为HEX接头序列(作为标记物)，第22-42位核苷酸为特异序列。

本发明还提供了DNA分子，核苷酸序列如序列表的序列1所示。

上述的DNA分子的应用也属于本发明的保护范围之内。所述应用具体为在如下任一中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽；

(2)小麦育种；

(3)制备鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

(4)制备小麦育种的产品。

可选地，在上述应用中，该DNA分子作为检测靶标。

可将检测所述SNP位点多态性和基因型的物质与其他物质(如检测其他与小麦粒宽和产量相关的分子标记的单核苷酸多态性或基因型的物质)联合在一起制备鉴定小麦粒重和/或粒宽的小麦品种的产品。

本文中，所述育种的目的可包括培育高产小麦。所述小麦可为纯系或自交系。

本发明提供了一种引物组合物，还提供了利用引物组合物鉴定或辅助鉴定小麦粒重和粒宽的方法。本发明建立的方法可用于预测小麦粒重和粒宽，可以对待筛选小麦进行早期筛选，可用于小麦分子标记辅助育种，在发掘粒宽增加、产量提高的小麦种质资源和选育粒宽增加、产量提高的小麦品种的研究中具有重要的应用价值。

本发明筛选出有代表性的黄淮麦区主栽小麦品种(或优异品系)，在正常灌溉和干旱两个环境下、连续三年进行粒重、粒形数据调查，通过全基因组关联分析(GWAS)定位到稳定存在的小麦粒重、粒宽相关QTL，并根据不同等位基因间的SNP差异设计KASP(竞争性等位基因特异性PCR，Kompetitive Allele-Specific PCR)分子标记用于高产小麦种质材料的筛选。

附图说明

图1为普通小麦粒重和粒宽QTL位点QTGW.ICO-5A不同等位基因类型在5A染色体的KASP标记引物位置。小麦5A染色体物理位置546,521,932bp(芯片位点AX-109369427)处SNP以阴影标识，KASP标记上、下游引物位置以下划线标识。图中序列为小麦5A染色体物理位置546,521,832bp-546,522,032bp的序列。

图2为小麦种质材料Kasp_QTGW5A标记检测结果图。

图3为QTGW.ICO-5A不同等位基因类型的小麦种质在不同年份、不同环境中的千粒重数据箱形图分析结果。

图4为QTGW.ICO-5A不同等位基因类型的小麦种质在不同年份、不同环境中的粒宽数据箱形图分析结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下实施例中的定量实验，如无特别说明，均设置三次重复实验。

以下实施例中的小麦材料分别记载于如下非专利文献中：“曹文昕,万映秀,张琪琪,李炎,张平治.黄淮麦区主要推广小麦品种抗寒性的演变规律.麦类作物学报,2015,35(1):57-63.”、“耿晓丽,张月伶,臧新山,赵月,张金波,尤明山,倪中福,姚颖垠,辛明明,彭惠茹,孙其信.北方冬麦区与黄淮北片优良小麦品种(系)耐热性评价.麦类作物学报,2016,36(2):172-181.”、“郭总总,王翔,卫丽,白瑞英,曹云,郭创,尹钧.黄淮麦区小麦春化基因组成的多态性分布研究.河南农业大学学报,2014,48(3):255-262.”、“张帅,张希兰,张娜,赵明辉,乔文臣,孙丽静,李辉,傅晓艺,何明琦,纪军,李俊明.黄淮麦区北片小麦穗部相关性状的全基因组关联分析.华北农学报,2020,35(增刊):31-39.”、“张颖君,高慧敏,李子千,胡梦芸,孙丽静,刘茜,吕亮杰,李辉.黄淮北片冬麦区抗赤霉病基因云澡遭员种质挖掘及溯源.华北农学报,2022,35(2):196-202.”、“Chen Shulin,Cheng Xiyong,Yu Kang,Chang Xiangnan,Bi Huihui,Xu Haixia,Wang Junsen,Pei Xingxu,Zhang Ziliang,ZhanKehui.Genome-wide association study of differences in 14agronomic traitsunder low-and high-density planting models based on the 660k SNP array forcommon wheat.Plant Breeding,2020,139(2):272-283.”。实施例中的普通小麦种质均为河北省农林科学院粮油作物研究所小麦研究中心保存，公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1、小麦粒重和粒宽QTL QTGW.ICO-5A区间SNP标记芯片位点AX-109369427及KASP标记引物组的获得

1.QTL定位和连锁标记芯片位点AX-109369427的发现

利用全基因组关联分析软件TASSEL 5.0进行小麦粒重、粒宽QTL定位。发现5A染色体上的SNP位点AX-109369427与小麦粒重、粒宽存在显著相关性，因此将其转化为KASP标记，用于分子标记辅助选择育种。SNP位点AX-109369427为序列1的第101位，其核苷酸种类为T或C。序列1的核苷酸序列为5’-tagcagatcggagtgcggaggcactgttccggagtgcgtggctgccccagcccagaagcatatcctgcaaaat tcgtcgcaggggccatatggcatatccygaacgtaaatcctttatattctgaaaaatgatggcaggacgaccgg cgaaacgagaccgagcgcagtgccatgctagttaccagtagaaaaacaattggt-3’。序列表中序列1的y表示t或c。

2.KASP标记AX-109369427的引物组的获得

设计基于KASP技术检测SNP多态性位点的引物组(即KASP标记Kasp_QTGW5A)，简称KASP引物组。KASP引物组由两条上游引物(引物A和引物B)和一条下游引物(引物C)组成，具体序列见表1。

表1用于鉴定普通小麦QTL QTGW.ICO-5A等位基因变异的KASP标记引物序列

引物A为5’端带有FAM荧光标签序列(下划线部分的碱基)的引物，和引物C扩增SNP位点AX-109369427为T的片段，用酶标仪或荧光定量PCR仪可读取到FAM基团的荧光信号；

引物B为5’端带有HEX荧光标签序列(下划线部分的碱基)的引物，和引物C扩增SNP位点AX-109369427为C的片段，用酶标仪或荧光定量PCR仪可读取到HEX基团的荧光信号。

实施例2、应用KASP标记检测SNP标记AX-109369427基因型方法的建立

利用KASP标记Kasp_QTGW5A检测小麦粒重和粒宽QTGW.ICO-5A在5A染色体物理位置546,521,932bp(SNP位点AX-109369427)处不同等位基因类型。

1.PCR扩增体系及程序

以CTAB法提取普通小麦叶片基因组DNA，加400μL TE溶解。DNA经1％琼脂糖凝胶电泳进行质量检测，所提DNA要求无明显杂质、条带清晰、无降解。DNA测浓度后，统一稀释为28.3ng/μL，以稀释后的小麦基因组DNA为模板，进行PCR扩增。

KASP标记引物工作液制备：根据小麦粒重和粒宽QTL位点QTGW.ICO-5A在芯片位点AX-109369427处的SNP设计KASP引物，该SNP位点的多态性为T/C碱基差异，引物序列见表1。先将3条引物分别用ddH₂O稀释成100mM，再按如下配方配制引物工作液：引物A12μL、引物B12μL、引物C 30μL、ddH₂O 46μL。-20℃保存备用。

PCR扩增体系为：模板DNA 1.5μL，引物工作液0.0417μL，2×KASP Master Mix(LGC公司，Lot No.13426773)0.75μL，用无菌超纯水补充反应体系至3μL。

PCR反应程序为：94℃预变性15min；94℃变性20s、复性20s(第一次的复性温度为61℃，每个循环降温0.6℃)共10个循环；94℃变性20s、55℃复性1min共26个循环；72℃延伸3min、4℃保存。

实验同时设置反应体系中不添加模板DNA的空白对照(CK)，每个板设置1个对照。

2.基因分型

PCR反应完成后利用荧光信号阅读仪(Omega)和荧光检测系统(Araya)将荧光信号转变为可分析的数值对反应产物进行荧光数据读取。荧光扫描结果利用R软件包进行图形化展示，T碱基类型带有FAM荧光，分布于x轴附近；C碱基类型带有HEX荧光，分布于y轴附近；无检出信号的样本分布于原点附近。

FAM激发波长为485nm，发射波长为520nm。HEX激发波长为535nm，发射波长为556nm。系统参比荧光ROX激发波长为575nm，发射波长为610nm。

结果如图2所示，若显示只有FAM基团的荧光信号，则所述待测小麦的AX-109369427的基因型为TT(即小麦基因组中SNP位点AX-109369427为T的纯合型)；若显示只有HEX基团的荧光信号，则所述待测小麦的AX-109369427基因型为CC(即小麦基因组中SNP位点AX-109369427为C的纯合型)。

实施例3、KASP标记AX-109369427辅助鉴定小麦粒重和粒宽在育种中的应用1.279份小麦种质粒重和粒宽表型分析

279份小麦种质材料于2017-2018年水地(标识为2018年水地)、2018-2019年水地和旱地(分别标识为2019年水地、2019年旱地)、2020-2021年水地和旱地(分别标识为2021年水地、2021年旱地)条件下种植于河北省农林科学院粮油作物研究所堤上试验站。水地为足墒播种，拔节期和灌浆期各浇水一次，灌水量为50m³/亩；旱地为足墒播种，全生育期不浇水；均设置两个处理，3m行长，，行间距30cm，随机区组设计，三次重复，单行区，种子成熟收获后，采用万深SC-G型自动考种分析系统(www.wseen.com)分析测试各组重复的籽粒宽度和粒重，用于统计分析。

2.用KASP标记鉴定小麦SNP标记AX-109369427的基因型

按实施例2所述的方法，提取各实验材料基因组DNA，并采用上述分子标记检测受试小麦的基因型。结果见表2和图2。图2中，CC为小麦材料的SNP位点AX-109369427的基因型为CC，TT为小麦材料的SNP位点AX-109369427基因型为TT的小麦，CK为反应体系中不添加模板DNA的空白对照。

经KASP标记检测，279份中国小麦种质中有109份种质为QTGW.ICO-5Aa等位基因类型TT(即SNP位点AX-109369427基因型为TT)，170份种质为QTGW.ICO-5Ab等位基因类型CC(SNP位点AX-109369427的基因型为CC)。

表2小麦种质Kasp_QTGW5A标记检测结果和千粒重数据

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注：NA代表缺失数据，缺失数据的小麦品种不进行粒重的统计。

表3小麦种质Kasp_QTGW5A标记检测结果和粒宽数据

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注：NA代表缺失数据，缺失数据的小麦品种不进行粒宽的统计。

表4和表5统计学分析结果显示，SNP位点AX-109369427基因型为TT的小麦种质在不同年份的两种环境中粒重和粒宽均值都低于SNP位点AX-109369427基因型为CC的小麦种质，两者达到显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。

在选育高粒重和粒宽的小麦育种中，最好选择SNP位点AX-109369427基因型为CC的小麦作为亲本进行育种。

表4普通小麦QTL QTGW.ICO-5A等位基因变异类型与千粒重关系的统计分析结果

注：统计分析采用双尾t-test检验(P<0.05代表差异达到显著水平；P<0.01代表差异达到极显著水平)。

表5普通小麦QTL QTGW.ICO-5A等位基因变异类型与粒宽关系的统计分析结果

注：统计分析采用双尾t-test检验(P<0.05代表差异达到显著水平；P<0.01代表差异达到极显著水平)。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (9)

1.鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的方法，其特征在于：包括检测待测小麦基因组中SNP位点的基因型，根据所述基因型鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽，所述SNP位点为小麦5A染色体上的一个SNP位点，其核苷酸种类为T或C，为序列表中序列1的第101位核苷酸。

2.小麦育种的方法，其特征在于：所述方法包括检测小麦基因组中权利要求1中所述SNP位点的基因型，选择所述SNP位点的基因型为CC的小麦作为亲本进行育种，所述CC是所述SNP位点为C的纯合型。

3.权利要求1或2所述的方法在小麦育种中的应用。

4.检测小麦基因组中SNP位点的多态性或基因型的物质在如下任一中的应用，

(1)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽；

(2)小麦育种；

(3)制备鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

(4)制备小麦育种的产品；

所述SNP位点为小麦5A染色体上的一个SNP位点，其核苷酸种类为T或C，为序列表中序列1的第101位核苷酸。

5.根据权利要求1或2所述的方法，或权利要求4所述的应用，其特征在于：所述SNP位点的基因型为TT或CC，所述CC是所述SNP位点为C的纯合型，所述TT是所述SNP位点为T的纯合型；所述SNP位点的基因型为CC的待测小麦的粒重和/或粒宽高于所述SNP位点的基因型为TT的待测小麦。

6.产品，其特征在于：所述产品含有权利要求4所述应用中的所述物质，所述产品为任一种：

C1)检测小麦粒重和/或粒宽相关的单核苷酸多态性或基因型的产品；

C2)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

C3)用于小麦育种的产品。

7.根据权利要求4所述的应用或权利要求6所述的产品，其特征在于：所述物质为如下D1)、D2)或D3)：

D1)所述物质为扩增包括所述SNP位点在内的小麦基因组DNA片段的引物组合物；

D2)所述物质为含有D1)所述引物组合物的PCR试剂；

D3)所述物质为含有D1)所述引物组合物或D2)所述PCR试剂的试剂盒。

8.根据权利要求7所述的应用或产品，其特征在于：所述引物组合物由引物A、引物B和引物C组成；

所述引物A为核苷酸序列是序列表中序列2的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列2的第22-43位的单链DNA；

所述引物B为核苷酸序列是序列表中序列3的单链DNA分子或核苷酸序列是序列表中序列3的第22-42位的单链DNA；

所述引物C核苷酸序列是序列表中序列4的单链DNA分子。

9.DNA分子在如下任一中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽；

(2)小麦育种；

(3)制备鉴定或辅助鉴定小麦粒重和/或粒宽的产品；

(4)制备小麦育种的产品；

所述DNA分子的核苷酸序列是序列表中的序列1。