CN105147548B - 一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物及其制备方法，该药物组合物是由以下重量份数比的原料组成：白蔹8～120份，白及8～120份，天南星5～120份，白芍5～100份，丹参5～100份，硫黄5～100份。本发明还进一步公开了该药物组合物的具体制备方法。本发明具有抑制角质层及皮脂腺增生，抑制毛囊扩张的作用，对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌都有一定的抑菌和杀灭作用，对实验性兔耳痤疮具有较好的治疗作用。本发明药物组合物组成简单、成本低廉、具有疗效显著、无毒副作用等优点。

Description

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种外用药物，尤其是涉及一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物及其制备方法。

背景技术

痤疮(Acne)俗称“青春痘、粉刺”，是皮肤科最常见的一种累及毛囊、皮脂腺的损容性慢性炎症性皮肤病，主要发生在面部和胸背部，形成粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿及瘢痕等损害。常对患者的交友、求职、生活质量产生负面心理影响。而且随着生活水平的提高及社会生存压力的增加，痤疮的发病率逐年上升，发病年龄跨度变大，有向少年和中年发展的趋势。

现代医学认为痤疮是一种多因素的疾病，主要与雄激素、皮脂分泌增多、毛囊皮脂腺导管异常角化、微生物过度繁殖及遗传等因素有关。祖国医学则认为其病机有风热外袭、肺经郁热、胃肠湿热、毒热互结、血瘀痰结、血热偏盛、冲任失调、肝肾阴虚等。

近年来，中医药对痤疮的研究也取得了较大的进展，与西医治疗比较，中医药治疗痤疮有着效果显著、副作用较少、价格低廉等优点。因此，对于不能耐受西药治疗或不愿接受系统药物治疗的痤疮患者，外用药物治疗无疑成为其最佳的选择。故如何发挥中医药优势，寻求简便易行、安全有效、耐受性好的外用中药，成为痤疮治疗研究的热点，也是我们课题组研究的主要方向。但在目前痤疮外用药物的研究中，存在组方用药使用欠合理、药物微生物含量不达标、加工提取和制备工艺缺乏先进性、疗效稳定性较差等诸多问题。

发明内容

本发明的一个目的在于克服现有技术的不足，提供一种具有抗菌抑脂作用的药物，该药物具有成本低、疗效好、无毒副作用、可以长期使用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量份数比的原料组成：白蔹8～120份，白及8～120份，天南星8～120份，白芍5～100份，丹参5～100份，硫黄5～100份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹15～100份，白及15～100份，天南星15～100份，白芍10～80份，丹参10～80份，硫黄10～80份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹30～80份，白及30～80份，天南星30～80份，白芍20～60份，丹参20～60份，硫黄20～60份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹40～60份，白及40～60份，天南星40～60份，白芍30～50份，丹参30～50份，硫黄30～50份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹100份，白及100份，天南星100份，白芍50份，丹参50份，硫黄10份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹提取物8～120份，白及提取物8～120份，天南星提取物8～120份，白芍提取物5～100份，丹参提取物5～100份，硫黄5～100份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：白蔹提取物100份，白及提取物100份，天南星提取物100份，白芍提取物50份，丹参提取物50份，硫黄10份。

一种制备权利上述任意一项权利要求所述的药物的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

S1：按重量比称取白蔹、白及、天南星、白芍、丹参和硫黄；

S2：按照常规制备方法制备成面膜。

本发明所述的提取物可以是水提取物、醇提取物，其中醇提取物优选乙醇提取物。

本发明所述泡脚制剂中的白蔹、白及、天南星、白芍、丹参和硫黄为2010版《中国药典》第一部收载的中药或其炮制品。

白蔹为葡萄科植物白葱的块根，性微寒，味苦、甘，归心、胃经，具有清热解毒，消痈散结的作用；白及为兰科植物白及的干燥块茎，苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经，具有收敛止血，消肿生肌的作用；天南星为天南星科植物天南星、异叶天南星或东北天南星的干燥块茎，苦、辛，温，归肺、肝、脾经，具有燥湿化痰，祛风止痉，散结消肿的作用；白芍为毛茛科植物芍药的干燥根，苦、酸，微寒，归肝、脾经，具有平肝止痛，养血调经，敛阴止汗的作用；丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，苦，微寒，归心、肝经，具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的作用；硫黄为自然元素类矿物硫族自然硫，采挖后，加热熔化，除去杂质，或用含硫矿物经加工制得，酸、温，归肾、大肠经，外用解毒杀虫疗疮，内服具有补火助阳通便的作用。

本发明的有益效果是：本发明面膜对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌和灭菌作用，能减轻毛囊角化性丘疹，减少局部毛囊角栓。能减轻病理损伤，抑制角质层及皮脂腺增生，抑制毛囊扩张，对炎性细胞浸润也有一定的抑制作用。家兔皮肤急性毒性试验显示本发明面膜属无明显毒性药物；家兔皮肤刺激性试验显示本品及其基质属无皮肤刺激性药物；皮肤过敏性试验显示本品及其基质均无致敏性，表明本品外用安全可靠。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹8g，白及8g，天南星8g，白芍5g，丹参5g，硫黄5g。

实施例2：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹120g，白及120g，天南星120g，白芍100g，丹参100g，硫黄100g。

实施例3：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹15g，白及15g，天南星15g，白芍10g，丹参10g，硫黄10g。

实施例4：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹150g，白及150g，天南星150g，白芍80g，丹参80g，硫黄80g。

实施例5：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹100g，白及100g，天南星100g，白芍80g，丹参80g，硫黄80g。

实施例6：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹30g，白及30g，天南星30g，白芍20g，丹参20g，硫黄20g。

实施例7：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹80g，白及80g，天南星80g，白芍60g，丹参60g，硫黄60g。

实施例8：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹40g，白及40g，天南星40g，白芍30g，丹参30g，硫黄30g。

实施例9：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹60g，白及60g，天南星60g，白芍50g，丹参50g，硫黄50g。

实施例10：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹100g，白及100g，天南星100g，白芍50g，丹参50g，硫黄10g。

实施例11：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹30g，白及30g，天南星30g，白芍20g，丹参20g，硫黄20g。

实施例12：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹提取物8g，白及提取物8g，天南星提取物8g，白芍提取物5g，丹参提取物5g，硫黄5g。

实施例13：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹水提取物120g，白及水提取物120g，天南星水提取物120g，白芍水提取物100g，丹参水提取物100g，硫黄100g。

实施例14：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹水提取物15g，白及水提取物15g，天南星水提取物15g，白芍水提取物10g，丹参水提取物10g，硫黄10g。

实施例15：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹水提取物150g，白及水提取物150g，天南星水提取物150g，白芍水提取物80g，丹参水提取物80g，硫黄80g。

实施例16：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹水提取物100g，白及水提取物100g，天南星水提取物100g，白芍水提取物80g，丹参水提取物80g，硫黄80g。

实施例17：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹水提取物30g，白及水提取物30g，天南星水提取物30g，白芍水提取物20g，丹参水提取物20g，硫黄20g。

实施例18：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹乙醇提取物80g，白及乙醇提取物80g，天南星乙醇提取物80g，白芍乙醇提取物60g，丹参乙醇提取物60g，硫黄60g。

实施例19：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹乙醇提取物40g，白及乙醇提取物40g，天南星乙醇提取物40g，白芍乙醇提取物30g，丹参乙醇提取物30g，硫黄30g。

实施例20：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹乙醇提取物60g，白及乙醇提取物60g，天南星乙醇提取物60g，白芍乙醇提取物50g，丹参乙醇提取物50g，硫黄50g。

实施例21：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹乙醇提取物100g，白及乙醇提取物100g，天南星乙醇提取物100g，白芍乙醇提取物50g，丹参乙醇提取物50g，硫黄10g。

实施例22：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹乙醇提取物30g，白及乙醇提取物30g，天南星乙醇提取物30g，白芍乙醇提取物20g，丹参乙醇提取物20g，硫黄20g。

实施例23：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹8g，白及8g，天南星8g，白芍5g，丹参5g，硫黄5g。按照常规方法制备成面膜。

实施例24：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹120g，白及120g，天南星120g，白芍100g，丹参100g，硫黄100g。按照常规方法制备成面膜。

实施例25：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹15g，白及15g，天南星15g，白芍10g，丹参10g，硫黄10g。按照常规方法制备成面膜。

实施例26：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹150g，白及150g，天南星150g，白芍80g，丹参80g，硫黄80g。按照常规方法制备成面膜。

实施例27：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹100g，白及100g，天南星100g，白芍80g，丹参80g，硫黄80g。按照常规方法制备成面膜。

实施例28：

一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，它是由以下重量比的原料组成：白蔹30g，白及30g，天南星30g，白芍20g，丹参20g，硫黄20g。按照常规方法制备成面膜。

本课题先后受四川省科技厅基本科研业务项目(编号：No.A-2013N-19)、四川省中医药管理局基金项目(编号：No.2014-K-144)资助。

本发明药物白蔹、白及、天南星、白芍、丹参、硫黄可以按照上述配伍比例制备成面膜制剂，也可以按照常规方法制备成穴位敷贴、膏剂及散剂进行局部应用。通过实验证明本发明药物具有抑菌、抗过敏、抗炎等方面的作用。

下面通过具体的实验研究来验证本发明的有益效果：

一、本发明药物组成(暂定商品名为：复方白蔹面膜)：白蔹100g，白及100g，制天南星100g，白芍50g，丹参50g，硫黄10g。按照2010年版《中国药典》标准，分别对复方白蔹面膜组成药物(白芍、丹参、白蔹、白及、制天南星和硫黄)进行性状、鉴别、水分、灰分、浸出物等检查，以及对白芍中的芍药苷、丹参中的丹参酮ⅡA和丹酚酸B、硫黄中硫的含量测定等进行检验，均符合《中国药典》规定。

二、实验药物的制备：丹参粉碎，过10目筛，加适量80％乙醇浸润，溶胀2h，装入渗漉筒，加80％乙醇浸渍3小时后，以4ml/min kg的速度渗漉，收集10倍量的渗漉液，渗漉液减压回收至2.0g生药/ml，备用。白芍、白及、白蔹、制天南星加水煎煮两次，第一次煎煮加水12倍，第二次则加水10倍，每次煎煮2小时，滤过，合并煎液，浓缩至1.0g生药/ml，加3倍量乙醇沉淀，搅匀，静置24小时，滤过，滤液减压回收，浓缩至4.0g生药/ml，备用。硫黄粉碎，过150目筛，备用。通过单因素实验设计，考察PVA用量和辅料等对成膜性的影响，确定制剂成型工艺为：称取PVA 41g，加92ml蒸馏水，85℃水浴加热，使其充分溶解后，加入水提浸膏，水浴加热，使其溶解，再称取10g硫黄粉末，缓慢加入，使其混合均匀。量取80ml 95％乙醇加入丹参浸膏，使其充分溶解后，缓慢加入水相，不断搅拌，再加入16.4ml丙二醇，8.2ml吐温-80，8.2ml PEG400，加95％乙醇至410ml，搅拌均匀，即得。由试验结果可见，工艺路线合理可行，具有生产可操作性。建立了成品中白蔹、白芍和丹参的TLC鉴别方法以及芍药苷的HPLC含量测定方法，保证了成品质量的可控性。

三、复方白蔹面膜治疗痤疮的实验研究

1复方白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型的影响

1.1实验材料

1.1.1实验动物

日本大耳白兔：白色雄性家兔，体重2.0～2.5kg，一级合格，合格证号：SCXK(川)2008-14，由四川省实验动物专委会养殖场提供。

1.1.2受试药物与阳性药

白蔹面膜高剂量组：棕红色半透明粘稠液体，2g原生药/ml，批号：Y20141201。

白蔹面膜中剂量组：棕红色半透明粘稠液体，1g原生药/ml，批号：Y20141102。

白蔹面膜低剂量组：棕红色半透明粘稠液体，0.5g原生药/ml，批号：Y20141101。

白蔹面膜基质组：为不含药物的无色透明液体，批号：Y20141203。

以上样品均由四川省中医药科学院黄志芳副研究员提供。

阳性药物：维胺酯维E乳膏。规格：10克/支(含维胺酯3mg，维生素E 5mg)。福建太平洋制药有限公司。国药准字：H20059598，产品批号：130401。适应症：用于痤疮。用法用量：外用。一日1～2次，先将患部用温水洗净擦干后，均匀涂抹一层，睡前使用更佳。

1.1.3实验试剂

煤焦油：黑色粘稠状膏体。市售。

橄榄油：市售。

一抗：AR411，福州迈新试剂有限公司。

二抗：UltraMap anti-Ms HRP，Roche Discovery。

1.1.4实验仪器

JA1003A电子天平(d＝1mg)：上海精天电子仪器有限公司；

RTZ-10A-RT型婴儿秤：规格10kg×50g，无锡市衡器厂，86量制苏字02000117号；

PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪：常州市中威医疗仪器有限公司；

BMJ-III型包埋机，常州市中威医疗仪器有限公司；

轮转式切片机，德国LEICA；

TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机：常州市中威医疗仪器有限公司；

CX31光学显微镜，日本OLYMPUS；

Motic BA400显微摄像系统：麦克奥迪公司；

Roche Dscovery全自动免疫组化染色机，德国Roche；

Image-Pro Plus图像分析系统：美国Media Cybernetics Inc。

1.2实验条件

实验环境符合家兔屏障系统使用设施标准，四川省实验动物管理会，许可证号：SCXK(川)2008-100。

实验环境保持温度及湿度相对恒定，定时换气。单笼饲养，每笼1只。动物购进后，观察饲养1周，观察动物的进食量、一般状况和体重变化，均无明显异变化者方可作为受试动物。

1.3实验方法

1.3.1剂量设计

白蔹面膜高剂量组：2g原生药/ml，0.6g/只/次。

白蔹面膜中剂量组：1g原生药/ml，0.6g/只/次。

白蔹面膜低剂量组：0.5g原生药/ml，0.6g/只/次。

正常对照组：等量白蔹面膜基质，0.6g/只/次。

模型对照组：等量白蔹面膜基质，0.6g/只/次。

维胺酯维E乳膏组：维胺酯维E乳膏，0.6g/只/次。

1.3.2动物分组、造模与给药

健康日本大耳白兔48只，体重2.0～2.5kg，全雄。动物适应性饲养1周后按体重随机选取8只作为正常对照组，剩余40只家兔于耳道口外2cm处2×2cm2范围，每日涂煤焦油一次，厚度约为0.5mm。(涂前先将煤焦油水浴加热融化，每次涂煤焦油前先将上次涂的煤焦油焦壳取下；正常对照组涂橄榄油，方法同前。)造模3周后，40只家兔按皮损程度轻重随机分为模型对照组、阳性对照组(维胺酯维E乳膏组)和白蔹面膜三个剂量组，共5组，每组8只。分组后，各剂量组每日上午继续涂煤焦油，下午去除煤焦油后在病损局部涂抹受试药物0.6g/只，1次/日，连续2周(模型对照组和正常对照组涂等量白蔹面膜基质)。

末次给药后24小时，空气栓塞处死动物，取耳部给药处皮肤(全层)，4％多聚甲醛溶液固定，HE染色，进行常规病理观察。同时免疫组化方法观察皮肤雄激素受体表达情况。

1.3.3测量方法及统计处理

1.3.3.1HE染色测量方法

各组从角化程度、表皮增厚程度、毛囊扩张程度、皮脂腺增生程度、毛囊内角化物质多少和炎细胞浸润等6个方面重点进行观察。在250倍光镜下，随机选用5个视野测量角质层厚度的平均值、表皮厚度的平均值、毛囊长径与短径之和的平均值及皮脂腺长径与短径之和的平均值。并按下述评分标准对毛囊内角化物质多少及炎细胞浸润程度进行病理评分。

毛囊内角化物质及炎细胞浸润程度评分标准：

(1)毛囊内角化物质多少：

0：与正常组相同(0分)；

+：角化物质增多，但不致密，且为未充满毛囊(1分)；

++：角化物质致密，但未充满毛囊；或角化物质不致密，但充满毛囊(2分)；

+++：角化物质致密，充满毛囊(3分)。

(2)炎细胞浸润程度

0：与正常组相同(0分)；

+：局灶性炎细胞浸润，细胞散在(1分)；

++：局灶性炎细胞浸润，细胞较密集，或出现多个浸润灶(2分)；

+++：弥漫性炎细胞浸润(3分)。

1.3.3.2雄激素受体测量方法

在100倍光镜下，选取3个视野，采用Image-Pro Plus图像分析系统测量分析阳性表达面积(Area)和积分光密度(IOD)值。

1.3.3.3统计分析

采用PEMS3.1软件进行统计分析。计量资料进行t或t’检验，病理评分进行秩和检验，检验水准α＝0.05。

1.4实验结果

1.4.1大体观察

1.4.1.1造模前后肉眼观察

正常对照组：正常兔耳菲薄、柔软，皮肤光滑，清晰可见其毛细血管，不见角栓、粉刺、丘疹。

模型对照组：造模1周，肉眼可见兔耳厚度有所增加，皮肤粗糙，有痂皮脱落，毛囊孔扩张增大，周围皮肤角化过度；造模3周可见兔耳厚度增加、变硬，皮肤表面粗糙，毛囊口有黑色角栓形成，呈现黑头粉刺状，部分毛囊口隆起呈红色丘疹状，触之较硬，似痤疮样改变。

1.4.1.2给药后肉眼观察

给药1周可见：各剂量组兔耳皮肤症状减轻，耳毛囊角化性丘疹顶端渐平复，触之较软，局部毛囊角栓减少，角栓脱落后遗有点状凹陷的毛囊，模型对照组可见脱屑及痂皮。

给药2周后可见：各给药组兔耳均可见皮肤变软、变薄，毛囊性丘疹基本消失，无脱屑痂皮，手触皮肤无颗粒感，表面皮肤较平滑。模型对照组皮损有所减轻，但肉眼观察兔耳皮肤粗糙，手触皮肤仍有颗粒感，仍见丘疹。给药组中以高剂量组减轻最为明显。

1.4.2病理观察

家兔耳廓组织病理图片(HE×100)。正常对照组：正常兔耳的表皮和真皮结构完好，表皮基底层、棘层、颗粒层、透明层及角质层的结构完整，未见溃疡形成。真皮层副器结构完整、数量分布正常，毛囊未见扩张，间质未见水肿，透明软骨结构正常。

模型对照组：表皮和真皮结构完好，表皮基底层、棘层、颗粒层、透明层及角质层结构完整，真皮层纤维结缔组织透亮度增强，可见轻度水肿，毛囊高度扩张，皮脂腺轻度扩张，毛囊及毛细血管周围可见多量炎性浸润，以嗜酸性粒细胞为主，可见中性粒细胞及少量淋巴细胞。

白蔹面膜低剂量组：表皮和真皮结构完好，表皮基底层、棘层、颗粒层、透明层及角质层结构完整，表皮可见溃疡形成，真皮层纤维结缔组织透亮度增强，可见轻度水肿，毛囊高度扩张，皮脂腺轻度扩张，毛囊及毛细血管周围可见多量炎性浸润，以嗜酸性粒细胞为主，可见中性粒细胞及少量淋巴细胞。

白蔹面膜中剂量组：病理改变基本同模型对照组，但毛囊扩张有一定改善。

白蔹面膜高剂量组：病理改变较模型对照组有一定改善，毛囊扩张，炎细胞浸润，皮脂腺扩张、间质水肿等病变均有减轻。

阳性对照组：病理改变基本同高剂量组。

1.4.2.1对实验性兔耳痤疮模型角质层厚度的影响

由表1可见，高、中剂量组兔耳角质层厚度减小，与模型对照组比较，统计差异显著(P<0.05)。表明本品能减轻实验性兔耳痤疮模型角质层厚度，且呈一定量效关系。

表1白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型角质层厚度的影响

注：与模型对照组相比，*P<0.05**P<0.01。

1.4.2.2对实验性兔耳痤疮模型表皮厚度的影响

由表2可见，各剂量组兔耳表皮厚度无明显减少，与模型对照组比较，统计学差异不显著(P>0.05)。结果表明本品对实验性兔耳痤疮模型表皮厚度影响不明显，但有降低作用趋势。

表2白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型表皮层厚度的影响

注：与模型对照组相比，*P<0.05。

1.4.2.3对实验性兔耳痤疮模型毛囊扩张程度的影响

由表3可见，高剂量组兔耳毛囊扩张减轻，与模型对照组比较，统计差异显著(P<0.05)。中、低剂量组有降低作用趋势。结果表明本品能减轻实验性兔耳痤疮模型毛囊扩张程度。

表3白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型毛囊扩张程度的影响

注：与模型对照组相比，*P<0.05**P<0.01。

1.4.2.4对实验性兔耳痤疮模型皮脂腺增生的影响

由表4可见，各剂量组兔耳皮脂腺大小均减小，与模型对照组相比，统计差异显著(P<0.05)。表明本品能减轻实验性兔耳痤疮模型皮脂腺增生程度，且呈一定量效关系。

表4白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型皮脂腺增生的影响

注：与模型对照组相比，**P<0.01。

1.4.2.5对实验性兔耳痤疮模型角化物的影响

由表5可见，各剂量组兔耳毛囊内角化物有减少作用趋势，与模型对照组比较，统计差异不显著(P>0.05)。表明本品对减轻实验性兔耳痤疮模型毛囊内角化物作用不明显。

表5白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型角化物的影响

注：与模型对照组相比，**P<0.01。

1.4.2.6对实验性兔耳痤疮模型真皮炎性浸润程度的影响

由表6可见，各剂量组兔耳真皮炎性浸润程度有减少作用趋势，与模型对照组比较，统计差异不显著(P>0.05)。表明本品对减轻实验性兔耳痤疮模型真皮炎性浸润抑制作用不明显。

表6白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型真皮炎性浸润程度的影响

注：与模型对照组相比，**P<0.01。

1.4.3对雄激素受体表达的影响

表7白蔹面膜对实验性兔耳痤疮模型AR阳性表达的影响

注：与模型对照组相比，*P<0.05**P<0.01。

模型对照组雄激素受体主要表达在兔耳表皮的棘层细胞核，基底层细胞核有少量阳性表达，毛囊细胞核也可见较多阳性表达。其余各给药组阳性表达位置与模型对照组相似，但表达强度及面积较模型对照组均有不同程度的减少。空白对照组仅见极少量阳性表达。由表7可见，各剂量组与模型对照组相比，雄激素受体表达强度(IOD)及面积(Area)减少，统计差异显著(P<0.05)，且呈一定量效关系。表明复方白蔹面膜对痤疮动物模型的雄激素受体表达具有抑制作用。

1.5实验结论

本次实验结果表明，复方白蔹面膜对实验性兔耳痤疮具有治疗作用。能减轻毛囊角化性丘疹，减少局部毛囊角栓。能减轻病理损伤，抑制角质层及皮脂腺增生，抑制毛囊扩张，对炎性细胞浸润也有一定的抑制作用。其作用机理可能与其抑制雄激素受体表达有关。

2复方白蔹面膜的体外抗菌试验研究

2.1实验材料

2.1.1受试药物

复方白蔹面膜，精密称取0.5ml，加无菌生理盐水稀释，使其浓度为512mg/ml，临用时取用无菌肉汤作对倍稀释，使其首管浓度为256mg/ml，最小浓度为1mg/ml。阳性药，维胺酯维E乳膏，批号：130401，精密称取1.0g，加无菌生理盐水稀释，使其浓度为512mg/ml，临用时用无菌肉汤稀释取用无菌肉汤作对倍稀释，使其首管浓度为256mg/ml，最小浓度为1mg/ml。

2.1.2培养基

牛肉膏肉汤培养基，自配(牛肉膏，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20141208)；胰蛋白胨，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20140205)；厌氧肉汤(葡萄糖蛋白胨酵母培养液)，PH＝7.2，杭州天和微生物试剂有限公司，批号：140215；血琼脂平板，郑州安图生物工程股份有限公司，批号：20150204B。

2.1.3仪器设备及材料

SPX-150B型生化培养箱，上海浦东荣丰科学仪器有限公司；医用超净工作台，上海浦东荣丰科学仪器有限公司；麦氏比浊管，北京哲成科技有限公司，批号：LB20；厌氧袋及厌氧产气袋，三菱瓦斯化学株式会社。

2.1.4菌株

金黄色葡萄球菌(菌号：ATCC29213)，痤疮丙酸杆菌(菌号：GIM1.162)，均购于北京北纳创联生物技术研究院。

2.2实验方法

2.2.1痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌的培养

按微生物临床操作规程进行厌氧菌培养。气袋法，接种后置于厌氧气袋内37℃、48小时培养，多呈网球拍状，进行初级鉴定，然后挑取单个菌落，转种2块平板，一块置于厌氧条件下37℃培养，另一块37℃需氧培养，48小时后观察结果，需氧培养无细菌生长。厌氧培养的平板上出现形态均一，灰白色，细小，直径约1.0mm，凸起的圆形、边缘稍齐的菌落，成对排列或排为"X"、"Y"、"V"等形状，需氧条件下不生长，厌氧条件下生长良好，证明此菌为厌氧菌。

2.2.2菌种活化和准备

分别将金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌从冰箱取出升温至室温，然后分别接种于营养肉汤和厌氧肉汤中增菌，于37℃，24小时(痤疮丙酸杆菌，48小时)下进行活化培养，传二代分别取活化并传代培养好的菌株，使用无菌生理盐水把菌苔洗下。采用比浊法，用麦氏比浊管对比配制菌体悬浮液，使菌悬液的菌数为1x108cfu/ml，再用培养液稀释至1x105～1x106cfu/ml备用。

2.2.3最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定

最低抑菌浓度(MIC)测定采用试管液体二倍稀释法，取12支无菌试管各加1ml的营养肉汤，使第1管的终浓度为256mg/ml，混匀后弃去1ml于第2管，混匀后吸取1ml于第3管，以此类推到15管弃去1ml，第11和第12管加1ml肉汤作为细菌生长管对照和基质对照，且每个组设2个复管，然后第1至第11管内加入菌悬液0.1ml于37℃培养24小时后观察结果。痤疮丙酸杆菌于厌氧袋中培养48小时。结果判定：2个复管均肉汤清亮透明表示细菌不生长(-)，2个复管有其中之一或2个复管都肉汤浑浊表示有细菌生长(+)。能抑制细菌生长的最高稀释度作为其最低抑菌浓度。最低杀菌浓度(MBC)测定采用平皿法，取澄清组的0.1ml菌液于肉汤琼脂平板(丙酸杆菌于血琼脂平板)37℃培养24小时(痤疮丙酸杆菌于厌氧袋中培养48小时观察)，观察无细菌生长的最低浓度为MBC。

2.3结果

细菌生长管对照的细菌正常生长，肉汤浑浊；基质对照管，无细菌生长，肉汤澄清。结果见表8。

表8复方白蔹面膜的MIC和MBC测定(mg/ml)

2.4结论

结果显示，复方白蔹面膜对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌和杀灭作用，而且复方白蔹面膜对实验菌株的抑菌和灭菌作用均优于维胺脂维E乳膏。说明复方白蔹面膜对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌有良好的抑菌和灭菌作用。

四、复方白蔹面膜的安全性初步评价

1家兔皮肤急性毒性试验

1.1实验目的

观察家兔完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。

1.2受试药物

白蔹面膜，棕红色粘稠液体，浓度为4.4g生药/ml。样品均由四川省中医药科学院黄志芳副研究员提供，批号：Y20141202。

1.3实验动物

日本大耳白兔16只，雌雄各半，体重2.0-2.3kg。一级合格，许可证号：SCXK(川)204-14。由四川省实验动物专委会养殖场提供。

1.4实验方法

成年家兔16只，雌雄各半，体重2.0-2.3kg，分成4组，每组4只。分别为破损皮肤受试药组，破损皮肤基质对照组，完整皮肤受试药组，完整皮肤基质对照组。给药前24小时，用剃毛器剃除家兔背部脊柱两侧约150cm2(10％体表面积)的毛发。去毛后24小时检查去毛皮肤无受伤。家兔破损皮肤的制作：采用手术刀片将去毛消毒皮肤“井”字型划破，以渗血为度。取受试物4ml均匀地涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷于受试物，用双层纱布和一层牛皮纸覆盖后再以无刺激性医用胶布封闭、固定，使受试药物能很好地与皮肤接触，保持24小时后，用温水去除残留受试物。每日观察，连续14天。给受试物后注意动物的全身中毒表现和死亡情况，包括动物毛发、皮肤和粘膜的变化、眼睛、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动和体重等变化。若有死亡动物则需要进行尸检和肉眼观察。当有肉眼可见的病变时，则需要进行病理学检查。

1.5试验结果

白蔹面膜浓浸膏均匀涂抹于家兔背部去毛区24小时，家兔的外观、行为活动、精神状态、大小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常，连续观察14天，亦未见异常。试验前后家兔体重呈正常增长状态(表9)。试验结束时解剖肉眼未见明显病理改变。白蔹面膜浓浸膏24小时外敷家兔皮肤未见毒性表现，该浓度约相当于临床推荐浓度的4.4倍。

表9白蔹面膜对家兔皮肤急性毒性试验前后体重变化

3.1.6试验结论

白蔹面膜浓浸膏均匀涂抹动物24小时，未见毒性症状表现，连续观察14天亦未见异常。家兔体重在试验前后呈正常增长状态。试验结束时解剖肉眼未见明显病理改变。该浓度约相当于临床推荐浓度的4.4倍。从本品的急性毒性所试浓度以及给药后毒性表现判断，本品属无明显毒性药物。

2家兔皮肤刺激试验

2.1实验目的

观察家兔皮肤接触受试物后所产生的刺激反应情况，考察动物的皮肤部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变性或坏死等局部反应。

2.2受试药物

白蔹面膜：棕红色半透明粘稠液体，浓度为1.0生药/ml。批号：Y20141102。

白蔹面膜基质：为不含药物的无色透明液体，批号：Y20141203。

以上样品均由四川省中医药科学院黄志芳副研究员提供。

2.3实验动物

日本大耳白兔12只，雌雄各半，体重2.1-2.3kg。一级合格，许可证号：SCXK(川)2004-14。由四川省实验动物专委会养殖场提供。

2.4实验方法

成年家兔12只，雌雄各半，体重2.1-2.3kg，按体重、性别随机分为完整皮肤组、破损皮肤组，每组6只。给受试物前24小时，用剃毛器将家兔背部脊柱两侧去毛，去毛范围左、右两侧各3cm×3cm。给药前检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜进行实验。破损皮肤(消毒)采用针尖稍微折弯的8号注射针头将去毛皮肤“#”划伤，以渗血为度。注意保证左右两侧皮肤的破损程度基本一致。

采用自身左右侧对照，左侧去毛区涂白蔹面膜2.0ml，右侧涂等量白蔹面膜基质作为对照。然后用双层纱布和一层牛皮纸覆盖，再用无刺激性医用胶布和绷带固定，让家兔皮肤与受试药物能较好地接触，每次保持6小时，然后用温水洗去残留受试物。连续7天。每天观察涂受试物前和去除受试物后1小时涂抹部位皮肤的变化。末次涂受试物后，观察去除受试物后1小时、24小时、48小时和72小时涂抹部位有无红斑和水肿等情况，是否有出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄、色素沉着等情况及其发生时间及消退时间。如出现持久性损伤，则须延长观察期限，连续观察至2周以评价上述变化的恢复情况和时间。

每只动物按表10进行刺激反应评分并计算各组刺激积分均值，按表11评价刺激强度。

表10皮肤刺激反应评分标准

表11皮肤刺激强度评价标准

3.2.5试验结果

由表12、13、14可见，在白蔹面膜对家兔皮肤刺激试验中，每日给药1次，连续给药7天。每次涂药前及去除药物后1小时家兔皮肤未见红斑与水肿，末次涂药去除药物后1小时，24小时，48小时和72小时均未见家兔皮肤红斑和水肿出现。也未观察到涂抹受试药物的部位有出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄、色素沉着等情况。

表12家兔皮肤刺激试验涂药前皮肤刺激反应积分均值(分)

表13家值兔皮肤刺激试验去除药后1小时皮肤刺激反应积分均值(分)

表14家兔皮值肤刺激试验末次涂药去除药后各时段皮肤刺激反应积分均值(分)

3.2.6试验结论

家兔皮肤刺激性试验表明，白蔹面膜及其基质用药前后各观察时段均未见家兔皮肤出现红斑、水肿以及出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄、色素沉着等情况，故可认为白蔹面膜及其基质属无皮肤刺激性药物。

本发明药物除具有上述抗菌和抑脂作用外，还兼具有美白的作用。另外，通过抗过敏实验表明，本发明药物组合物具有抗过敏作用，通过冰醋酸致小鼠扭体反应实验、二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验表明，本发明药物组合物还具有抗炎镇痛的作用。在豚鼠皮肤过敏试验、家兔皮肤急性毒性试验及家兔皮肤刺激性试验均未见异常现象，表明本发明药物组合物具有较好的安全性。

Claims (8)

1.一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：它是由以下重量份数比的原料组成：白蔹8～120份，白及8～120份，天南星8～120份，白芍5～100份，丹参5～100份，硫黄5～100份。

2.根据权利要求1所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹15～100份，白及15～100份，天南星15～100份，白芍10～80份，丹参10～80份，硫黄10～80份。

3.根据权利要求1所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹30～80份，白及30～80份，天南星30～80份，白芍20～60份，丹参20～60份，硫黄20～60份。

4.根据权利要求1所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹40～60份，白及40～60份，天南星40～60份，白芍30～50份，丹参30～50份，硫黄30～50份。

5.根据权利要求1所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹100份，白及100份，天南星100份，白芍50份，丹参50份，硫黄10份。

6.根据权利要求1所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹提取物8～120份，白及提取物8～120份，天南星提取物8～120份，白芍提取物5～100份，丹参提取物5～100份，硫黄5～100份。

7.根据权利要求6所述的一种具有抗菌抑脂作用的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：白蔹提取物100份，白及提取物100份，天南星提取物100份，白芍提取物50份，丹参提取物50份，硫黄10份。

8.一种制备权利要求1～7中任意一项权利要求所述的具有抗菌抑脂作用的药物组合物方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

S1：按重量比称取白蔹、白及、天南星、白芍、丹参和硫黄；

S2：按照常规制备方法制备成面膜。