CN105132589A - 一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的pcr-rflp引物及方法 - Google Patents

一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的pcr-rflp引物及方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物及其方法，所述引物为上游引物P1：5’-？CAATTGAGGACATGGCTAAGAAA-3’，下游引物P2：5’-？TCAGAGASCCRTCRAAWCCAGAAA？-3’，该方法是利用鸭肝炎病毒1型和新血清型基因编码区所含有的酶切位点差异来进行区别的，包括RNA的提取，RT-PCR扩增得到相应的目的片段后，XhoⅠ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法操作简单快速，准确率高。

Description

一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物及方法
技术领域
本发明属于兽医传染病快速诊断技术领域，具体涉及一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物及其方法。
背景技术
鸭肝炎病毒（Duckhepatitisvirus，DHV）是由鸭肝炎病毒引起的一种急性、高度接触性传染病，主要侵害3周龄内雏鸭，以肝炎为典型特征。该病发病急、病程短、发病率和死亡率高，严重威胁养鸭业健康发展[杨维星，施少华，陈红梅，等．3株鸭肝炎病毒1型全基因序列分析[J]．中国农学通报，2010，26（14）：8-12．]。
1999年中国农业大学苏敬良等从发病的北京鸭和樱桃谷鸭中分离到2株与鸭肝炎病毒1型无血清学相关性的鸭肝炎病毒新血清型（Duckhepatitisvirusnewserotype,DHV-N）。本研究室施少华等以苏敬良等惠赠的鸭肝炎病毒新血清型DHV-NG株进行了基因组序列测定，发现鸭肝炎病毒新血清型G株和鸭肝炎病毒1型的5’UTR和3’UTR相比，发生了较大的插入与缺失现象，并明确鸭肝炎病毒1型和新血清型存在较大差异[施少华，程龙飞，傅光华，等．鸭肝炎病毒新血清型基因组序列分析[J]．微生物学报，2009，49（3）：309-315．]。
目前，关于鸭肝炎病毒1型和新血清型病原学检测的PCR方法和荧光定量方法均有相关报道。但相关方法均需要分别针对鸭肝炎病毒1型和新血清型设计特异性引物，建立双重PCR检测，但双重PCR条件优化较为繁琐。本发明提供的方法仅需一组引物（比分别设计特异性引物检测时少1组引物）结合酶切位点差异进行RFLP分析，无虚复杂繁琐的条件优化过程，本发明在鸭肝炎病毒1型和新血清型病原学检测上快捷准确，可填补国内外相关领域研究空白。
发明内容
本发明的目的是提供一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物及方法。该引物能有效区分鸭肝炎病毒1型和新血清型感染（或共感染），为水禽养殖业健康养殖提供技术保证。
本发明根据鸭肝炎病毒1型和新血清型基因组中序列特征，设计一组引物能同时对鸭肝炎病毒1型和新血清型进行RT-PCR产阳性扩增，根据鸭肝炎病毒新血清型扩增RT-PCR产物中有特异性的XhoⅠ酶切位点，而鸭肝炎病毒1型扩增RT-PCR产物中没有XhoⅠ酶切位点（见图1），来对建立一种对鸭肝炎病毒1型和新血清型进行快速检测的PCR-RFLP方法。
从图1可以看出，鸭肝炎病毒1型在此处均为CAAGAG,鸭肝炎病毒新血清型均为CTCGAG，刚好为的XhoⅠ酶识别酶切位点。
本发明采用以下技术方案：
一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP方法，包括以下步骤：
（1）提取鸭肝炎病毒1型和新血清型核酸RNA；
（2）用引物P1和P2同时对鸭肝炎病毒1型和新血清型进行RT-PCR扩增，得到相应的目的基因片段；
（3）取PCR产物经XhoⅠ酶切后进行RFLP分析。
其中，PCR引物需满足如下要求：
（1）该PCR产物需选择鸭肝炎病毒1型和新血清型编码区基因中的保守区域进行设计，以便能一个RT-PCR反应能对鸭肝炎病毒1型和新血清型核酸RNA均能进行RT-PCR扩增，并获得相同大小的目的基因片段；
（2）该PCR产物需选择鸭肝炎病毒1型和新血清型编码区基因中的保守区域进行设计时必须跨过鸭肝炎病毒新血清型基因中的XhoⅠ酶切位点，以便对PCR产物能够进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析。
根据以上要求，所述的步骤（2）的扩增引物P1和P2的序列为：
上游引物P1：5’-CAATTGAGGACATGGCTAAGAAA-3’，
下游引物P2：5’-TCAGAGASCCRTCRAAWCCAGAAA-3’。
其中，所述的步骤（2）PCR扩增产物经大小为555bp。
其中S=C/G，W=A/T，R=A/G。
其中，所述的步骤（3）PCR产物经XhoⅠ酶切后进行RFLP分析：在所扩增的目的片段中仅鸭肝炎病毒新血清型可被XhoⅠ酶切后经常规琼脂糖凝胶电泳检测片段为2段，大小分别为349bp和206bp，而鸭肝炎病毒1型的目的片段中不含被XhoⅠ酶切位点，RT-PCR产物被XhoⅠ酶切后经常规琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变，仍然是555bp。
所述的引物P1和P2在检测鸭肝炎病毒1型和新血清型试剂盒中的应用。
本发明的有益效果：本发明所采用引物，特异性强，灵敏度高；鉴定方法简单，快捷和准确率较高。使用本引物对对本临床送检20份疑似鸭肝炎病毒1型和新血清型感染病料，提取核酸后进行RT-PCR扩增，后进行XhoⅠ酶切检测，其中肝炎病毒1型感染6株、鸭肝炎病毒新血清型感染5株，该20份样品没有检测到共感染。同时对本研究分离鉴定的鸭肝炎病毒1型（3株，GenBank登录号JX390982-390984）和新血清型（1株GenBank登录号EU755009）进行验证，仅鸭肝炎病毒新血清型能够被酶切成2段，而鸭肝炎病毒1型片段大小不变。
附图说明
图1鸭肝炎病毒1型和新血清型基因比对。
图2为鸭肝炎病毒1型和新血清型进行快速检测的PCR-RFLP方法的电泳图。M为DL2000DNAMarker,1为鸭肝炎病毒1型RT-PCR产物，2为鸭肝炎病毒新血清型RT-PCR产物，3为经XhoⅠ酶切鸭肝炎病毒1型RT-PCR产物，4为经XhoⅠ酶切鸭肝炎病毒新血清型RT-PCR产物，5为阴性对照。
具体实施方式
下面实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
1、毒株：
鸭肝炎病毒1型和新血清型均由福建省农业科学院畜牧兽医研究所保存。
2、引物设计与合成
根据鸭肝炎病毒1型和新血清型基因特征设计引物P1和P2，其中引物P1和P2序列为：上游引物P1：5’-CAATTGAGGACATGGCTAAGAAA-3’，下游引物P2：5’-TCAGAGASCCRTCRAAWCCAGAAA-3’。
3、RT-PCR扩增
以常规方法提取鸭肝炎病毒1型和新血清型核酸RNA。用所设计的特异性引物P1和P2进行RT-PCR扩增，扩增片段大小均约555bp。RT-PCR扩增（以宝生物工程(大连)有限公司PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2(DyePlus)为例）体系为50μL，其中PrimeScript1StepEnzymeMix2μL、2×1StepBuffer（DyePlus）25μL、上下游引物（20μM/mL）各1μL、RNA模板2μL，补充灭菌去离子水至终体积50μL。反应条件为50℃反转录30min，94℃预变性2min，随后进行94℃40s、53℃30s、72℃35s，进行35个循环后，72℃延伸7min。
4、RFLP分析
RT-PCR反应结束后，将鸭肝炎病毒1型和新血清型RT-PCR产物进行XhoⅠ酶切。酶切体系为30μL，其中10×QuickCutBuffer3μL，RT-PCR产物15μL，QuickCut?XhoⅠ酶1μL、补充灭菌去离子水至终体积30μL。混匀后，经37℃水浴8min，加入3μL10×LoadingBuffer终止，进行常规琼脂糖凝胶电泳分析，对检测样品进行分析鸭肝炎病毒1型和新血清型感染类型。
5、临床应用
使用本方法对本临床送检20份疑似鸭肝炎病毒1型和新血清型感染病料，提取核酸后进行RT-PCR扩增，后进行XhoⅠ酶切检测，其中肝炎病毒1型感染6株、鸭肝炎病毒新血清型感染5株，该20份样品没有检测到共感染。同时对本研究分离鉴定的鸭肝炎病毒1型（3株，GenBank登录号JX390982-390984）和新血清型（1株GenBank登录号EU755009）进行验证，仅鸭肝炎病毒新血清型能够被酶切成2段，而鸭肝炎病毒1型片段大小不变。根据建立的PCR-RFLP方法，可在3小时内对确定感染的水鸭肝炎病毒1型和新血清型感染类型进行准备判断。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCELISTING
<110>福建省农业科学院畜牧兽医研究所
<120>一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物及方法
<130>2
<160>2
<170>PatentInversion3.3
<210>1
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
caattgaggacatggctaagaaa23
<210>2
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
tcagagasccrtcraawccagaaa24

Claims (3)

1.一种区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP引物，其特征在于：所述引物序列为上游引物引物P1：5’-CAATTGAGGACATGGCTAAGAAA-3’，下游引物P2：5’-TCAGAGASCCRTCRAAWCCAGAAA-3’。
2.利用权利要求1所述引物区别鸭肝炎病毒1型和新血清型的PCR-RFLP方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）从检测样品中提取病毒的核酸；
（2）用上游引物引物P1：5’-CAATTGAGGACATGGCTAAGAAA-3’，下游引物P2：5’-TCAGAGASCCRTCRAAWCCAGAAA-3’，同时对鸭肝炎病毒1型和新血清型进行RT-PCR扩增，得到相应的目的片段，大小均为555bp；
（3）取PCR产物经XhoⅠ酶切后进行RFLP分析：在所扩增的目的片段中仅鸭肝炎病毒新血清型可被XhoⅠ酶切后经常规琼脂糖凝胶电泳检测片段为2段，大小分别为349bp和206bp，而鸭肝炎病毒1型的目的片段中不含被XhoⅠ酶切位点，RT-PCR产物被XhoⅠ酶切后经常规琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变，仍然是555bp。
3.一种如权利要求1所述的引物在检测鸭肝炎病毒1型和新血清型试剂盒中的应用。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106011315A (zh) * 2016-08-12 2016-10-12 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一组1型和新血清型鸭肝炎病毒的rt-pcr鉴别诊断引物
CN106119422A (zh) * 2016-08-30 2016-11-16 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区别clade2.3.4和clade2.3.4.4H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106282409A (zh) * 2016-08-30 2017-01-04 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区别clade 2.3.4和clade 7.2H5AIV的PCR‑RFLP方法
CN106319090A (zh) * 2016-08-30 2017-01-11 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 基于序列多态性区别clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106367532A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 基于序列多态性区别clade2.3.4和clade2.3.4.4 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106755566A (zh) * 2016-10-10 2017-05-31 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别clade2.3.2.1和clade2.3.4 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN107663531A (zh) * 2017-11-15 2018-02-06 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分禽流感病毒na基因不同遗传进化分支的pcr‑rflp引物及其检测方法和应用
CN109487015A (zh) * 2019-01-12 2019-03-19 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭2型甲肝病毒的实时荧光定量pcr检测引物及其试剂盒

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103409562A (zh) * 2013-09-02 2013-11-27 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的pcr-rflp方法
CN103602759A (zh) * 2013-11-22 2014-02-26 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的pcr-rflp方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103409562A (zh) * 2013-09-02 2013-11-27 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的pcr-rflp方法
CN103602759A (zh) * 2013-11-22 2014-02-26 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的pcr-rflp方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
施少华等: "鸭肝炎病毒新血清型基因组序列分析", 《微生物学报》 *
阎丽等: "乙型肝炎病毒基因型S基因PCR-RFLP分型方法的建立", 《中华传染病杂志》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106011315A (zh) * 2016-08-12 2016-10-12 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一组1型和新血清型鸭肝炎病毒的rt-pcr鉴别诊断引物
CN106119422A (zh) * 2016-08-30 2016-11-16 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区别clade2.3.4和clade2.3.4.4H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106282409A (zh) * 2016-08-30 2017-01-04 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区别clade 2.3.4和clade 7.2H5AIV的PCR‑RFLP方法
CN106319090A (zh) * 2016-08-30 2017-01-11 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 基于序列多态性区别clade2.3.4和clade7.2 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106367532A (zh) * 2016-08-30 2017-02-01 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 基于序列多态性区别clade2.3.4和clade2.3.4.4 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN106119422B (zh) * 2016-08-30 2019-08-02 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区别clade2.3.4和clade2.3.4.4H5 AIV的PCR-RFLP方法
CN106755566A (zh) * 2016-10-10 2017-05-31 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种区别clade2.3.2.1和clade2.3.4 H5 AIV的PCR‑RFLP方法
CN107663531A (zh) * 2017-11-15 2018-02-06 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分禽流感病毒na基因不同遗传进化分支的pcr‑rflp引物及其检测方法和应用
CN107663531B (zh) * 2017-11-15 2021-06-25 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 区分禽流感病毒na基因不同遗传进化分支的pcr-rflp引物及其检测方法和应用
CN109487015A (zh) * 2019-01-12 2019-03-19 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭2型甲肝病毒的实时荧光定量pcr检测引物及其试剂盒

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