CN105125610B - 葵花盘水解复合粉剂在制备治疗或缓解高尿酸痛风症药物中的应用 - Google Patents
葵花盘水解复合粉剂在制备治疗或缓解高尿酸痛风症药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
葵花盘水解复合粉剂在制备预防、缓解或治疗与血尿酸水平升高相关疾病的食品、药物或食品及药物组合物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明中所用的葵花盘水解复合粉剂是通过对葵花盘浸泡液酶水解的方法，在尽可能不破坏葵花盘原有成分的基础上，使葵花盘中的植物大分子水解成为小分子多肽。我们在研究中首次发现，葵花盘水解复合粉剂不仅具有潜在的预防动物体内血尿酸升高的作用，同时，还具有降低血中已经形成高尿酸水平的潜在性作用。因此，我们认为葵花盘水解复合粉剂在制备缓解或治疗痛风症的食品、药物或食品及药物组合物中能够得到应用。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及葵花盘水解复合粉剂在制备预防、缓解或治疗与血尿酸水平升高相关疾病的食品、药物或食品及药物组合物中的应用。
背景技术
痛风是一种慢性代谢紊乱疾病，它的主要特点是体内尿酸盐生成过多或肾脏排泄尿酸减少，从而引起血液中尿酸盐浓度升高，因此也称为高尿酸血症。目前认为，引起高尿酸血症的原因主要是由于食用过多的高嘌呤食物(如动物内脏、海鲜食品、鸡鸭鹅肉、鹌鹑、鸽子等)。尿酸是嘌呤的代谢产物，因此，长期过多摄取高嘌呤食物，一旦超出机体排泄能力，就会使体内尿酸逐渐堆积导致高尿酸血症。关于高尿酸血症的治疗，目前还没有明确的治疗药物。因此，寻找痛风症的预防、缓解和治疗药物或食品的开发已经成为急需解决的问题。
葵花盘(Helianthus annuus L.)为菊科植物向日葵的花盘。向日葵是一种耐盐碱、喜光、抗旱的植物，东北的气候非常适宜大面积的葵花种植。长期以来人们只重视收集并利用葵花盘果实(葵花籽)，而忽略了葵花盘本身。其实，葵花盘作为一种中药材，其中医治病功效早在《中华本草》中记载。即葵花盘具有清热、平肝、止痛、止血等功效。基于其以上功效，葵花盘长期流传于民间并作为镇痛和治疗痛风的偏方，但是，至今没有针对其痛风病症状的缓解和治疗作用进行科学研究。最近研究发现，葵花盘浸膏透析液在一定范围内灌胃给药可以降低动物(狗或猫)血压，使兔耳血流量增加，狗的心率减慢，大剂量还可以抑制心脏搏动。
对葵花盘有效成分分析发现，葵花盘中含有大多中草药中常见的有效化学成分，如绿原酸、黄酮、糖类、挥发油、微量元素等(Tong WJ,Chen F,Wen XY.Analysis ofmineral elements of sunflower(Helianthus annuus L.)grown on saline land inHetao Irrigation District by ICP-AES.Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi,2014)。另外，葵花盘中含有大量的有益于人体健康的植物蛋白，但是，由于植物蛋白分子量大，进入人体后多数不吸收或者吸收效率极低。因此，将葵花盘中的大分子植物蛋白通过降解成小分子肽来促进在人体内的吸收和利用，进而使其治疗功效发挥到最佳是能够利用葵花盘的关键所在。
发明内容
本发明的目的是提供葵花盘水解复合粉剂在制备预防、缓解或治疗高尿酸痛风症食品、药物或食品及药物组合物中的应用。
我们在研究中首次发现，葵花盘水解复合粉剂不仅具有潜在的预防动物体内血尿酸升高的作用，同时，还具有降低血中已经形成高尿酸水平的潜在性作用。因此，我们认为葵花盘水解复合粉剂在制备缓解或治疗痛风症的食品、药物或食品及药物组合物中能够得到应用。
本发明中所用的葵花盘水解复合粉剂是通过对葵花盘浸泡液酶水解的方法(葵花盘水解复合粉剂由吉林省金塔实业股份有限公司提供)，在尽可能不破坏葵花盘原有成分的基础上，使葵花盘中的植物大分子水解成为小分子多肽。
我们通过联合灌胃腺苷溶液(200mg/kg，嘌呤前体物)和氧嗪酸钾溶液(200mg/kg，尿酸酶抑制剂)的方法建立了大鼠高尿酸血症模型(这里两种药物一起统称为建模剂)。实验研究证实：1)给大鼠灌胃建模剂(建模组)或灌胃建模剂+葵花盘水解复合粉剂(80mg/kg)(给药组)10天后，与建模组相比较，给药组的大鼠血尿酸浓度明显降低(p<0.05)，说明葵花盘水解复合粉剂具有抑制血尿酸增高的作用；2)为了研究葵花盘水解复合粉剂对高尿酸血症的治疗作用，先通过灌胃建模剂造成大鼠高尿酸血症后，将高尿酸血症大鼠分成建模组(继续灌胃建模剂)和给药组(继续灌胃建模剂+葵花盘水解复合粉剂)，1周后发现给药组的血尿酸值与对照组(灌胃饮用水)无显著性差异(p>0.05)，而建模组与对照组(灌胃饮用水)之间仍保持统计学上的显著性差异(p<0.05)，也说明葵花盘水解复合粉剂具有治疗或缓解高尿酸血症的作用。
附图说明
图1：腺苷溶液和氧嗪酸钾溶液联合灌胃Wistar大鼠1周，可致大鼠血尿酸浓度明上升。(A)实验流程；(B)血尿酸值统计分析(Student t-Test)。图1相关实验细节见实施例1。
A.实验流程。
Wistar雄性大鼠40只购自吉林省长春市Y-S实验动物公司。购入时平均体重200g，健康状况良好。将大鼠每5只为一笼，饲养于铺有木削垫料的大鼠饲养笼中一周，以便大鼠适应新环境。大鼠饲料与垫料均购自Y-S实验动物公司，实验期间允许大鼠自由摄取饲料与饮用水。将已经饲养一周的实验大鼠，随机分为三组。空白对照组10只(平均体重：231g)，建模Ⅰ组为15只(平均体重：229g)，建模Ⅱ组为15只(平均体重：228g)。建模前从大鼠外眼角取血，并送检检测建模前大鼠血尿酸浓度测定。然后，空白对照组每天灌胃饮用水，建模Ⅰ和建模Ⅱ组每天联合灌胃给药腺苷溶液(大鼠每kg体重给药200mg，即200mg/kg)和氧嗪酸钾溶液(200mg/kg)(两种药物一起统称为建模剂)，一周后三个组的所有大鼠外眼角取血测血尿酸。
B.血尿酸值统计分析图(Student t-Test，与对照组比较)。腺苷溶液(200mg/kg和氧嗪酸钾溶液(200mg/kg)联合灌胃Wistar大鼠1周，可致大鼠血尿酸浓度明显上升。
联合灌胃建模剂一周后，与灌胃饮用水的对照组相比，建模Ⅰ组和建模Ⅱ组的平均血尿酸浓度明显升高，Student t-Test统计分析有显著性差异，p值分别为<0.05和<0.01，说明大鼠高血尿酸动物模型成立，可用于后续的葵花盘水解复合粉剂治疗效果的评估实验。
图2：葵花盘水解复合粉剂(Sunflower Plate powder,SfPP)对大鼠高尿酸血症的预防作用。(A)实验流程；(B)血尿酸值统计分析(Student t-Test)。图2相关实验细节见实施例2。
A.实验流程。
Wistar雄性大鼠40只购自吉林省长春市Y-S实验动物公司。购入时平均体重～200g，健康状况良好。将大鼠每5只为一笼，饲养于铺有木削垫料的大鼠饲养笼中一周，以便大鼠适应新环境。大鼠饲料与垫料均购自Y-S实验动物公司，实验期间允许大鼠自由摄取饲料与饮用水。将已经饲养一周的实验大鼠，随机分为三组。空白对照组10只(平均体重221g)，建模组为15只(平均体重224g；灌胃过程中死亡1只，最后14只数据列入统计)，建模+SfPP组(用药组)为15只(平均体重223g；灌胃过程中死亡2只，最后13只数据列入统计)。建模前从大鼠外眼角取血，并送检检测建模前大鼠血尿酸浓度。实验开始后，对照组每天灌胃饮用水一次，建模组每天灌胃建模剂(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg)一次，而建模+SfPP组每天同时灌胃建模剂和SfPP(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg+葵花盘水解复合粉剂溶液80mg/kg)，10天后再次取血测血尿酸值。
B.血尿酸值统计分析图。建模剂+SfPP组与单独灌胃建模剂组相比较，血中尿酸浓度明显降低。
如A中实验流程，空白对照组(灌胃饮用水)，建模组(灌胃建模剂)和用药组(建模剂+SfPP)灌胃10天后，与空白对照组相比，建模组的血尿酸浓度明显升高(Student t-Test统计分析，p<0.01)，说明大鼠高血尿酸动物模型建成。另外，与建模组相比，建模剂+SfPP组的平均血尿酸浓度明显回落(Student t-Test统计分析，p<0.05)，说明SfPP具有潜在的预防性抗血尿酸增高的作用。
图3：葵花盘水解复合粉剂(Sunflower Plate powder,SfPP)对大鼠高尿酸血症的治疗作用。(A)实验流程；(B)血尿酸值统计分析。图3相关实验细节见实施例3。
A.实验流程。
Wistar雄性大鼠40只购自吉林省长春市Y-S实验动物公司。购入时平均体重～200g，健康状况良好。将大鼠每5只为一笼，饲养于铺有木削垫料的大鼠饲养笼中一周，以便大鼠适应新环境。大鼠饲料与垫料均购自Y-S实验动物公司，实验期间允许大鼠自由摄取饲料与饮用水。将已经饲养一周的实验大鼠，随机分为三组。空白对照组10只(平均体重224g)，建模组为15只(平均体重223g)，建模剂+SfPP组为15只(平均体重225g)。建模前从大鼠外眼角取血检测建模前大鼠血尿酸浓度值。实验开始后，对照组每天灌胃饮用水一次，建模组和建模剂+SfPP组每天灌胃建模剂(腺苷溶液和氧嗪酸钾溶液)一次，7天后，对照组和建模组不变，而建模剂+SfPP组每天同时灌胃建模剂和SfPP(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg+葵花盘水解复合粉剂80mg/kg)，7天后再次取血测血尿酸值。
B.血尿酸值统计分析图。高血尿酸模型建成后进行治疗性灌胃SfPP，实验结果显示建模剂+SfPP组的平均血尿酸值低于单独灌胃建模剂组。
按A中实验流程，实验开始后，对照组每天灌胃饮用水一次，建模组和建模剂+SfPP组每天灌胃建模剂(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg)一次，7天后抽血检测血脲酸值。Student t-Test统计分析确定无论是建模组还是建模剂+SfPP组与对照组相比血中尿酸浓度明显增高，p值分别为p<0.01和p<0.05，说明大鼠高血尿酸模型已经建成。然后，对照组和建模组灌胃内容不变，而建模剂+SfPP组每天同时灌胃建模剂和SfPP，7天后再次取血检测血尿酸值。Student t-Test统计分析发现建模组与对照组之间有统计学上的显著性差异，p<0.05，而建模剂+SfPP组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)，说明SfPP具有潜在的缓解或治疗高尿酸血症的作用。
图4:葵花盘水解复合粉剂(Sunflower Plate powder,SfPP)停止灌胃给药后对大鼠高尿酸值的影响。(A)实验流程；(B)血尿酸值统计分析。图4相关实验细节见实施例3。
A.实验流程。
Wistar雄性大鼠40只购自吉林省长春市Y-S实验动物公司。购入时平均体重～200g，健康状况良好。将大鼠每5只为一笼，饲养于铺有木削垫料的大鼠饲养笼中一周，以便大鼠适应新环境。大鼠饲料与垫料均购自Y-S实验动物公司，实验期间允许大鼠自由摄取饲料与饮用水。将已经饲养一周的实验大鼠，随机分为三组。空白对照组10只(平均体重224g)，建模组为15只(平均体重223g)，建模剂+SfPP组为15只(平均体重225g)。建模前从大鼠外眼角取血检测建模前大鼠血尿酸值。实验开始后，对照组每天灌胃饮用水一次，建模组和建模剂+SfPP组每天灌胃建模剂(腺苷溶液和氧嗪酸钾溶液)一次，7天后，检测血尿酸值确认产生高尿酸血症后，对照组和建模组不变，而建模剂+SfPP组每天同时灌胃建模剂和SfPP，7天后再次取血检测血尿酸值，确认SfPP的治疗作用。然后，建模组改用灌胃饮用水，而建模剂+SfPP组只灌胃SfPP，3天后再次取血检测血尿酸值。
B.血尿酸值统计分析图。高尿酸血症形成后，停用建模剂，则继续灌胃SfPP组的血尿酸浓度比模型组下降速度快。模型组的血尿酸值比对照组低可能是突然停止外源建模剂导致体内产生反馈性的调节机制。
按A中实验流程，实验开始后，对照组每天灌胃饮用水一次，建模组和建模剂+SfPP组每天灌胃建模剂(腺苷溶液和氧嗪酸钾溶液)一次，7天后抽血检测血脲酸值以便确定大鼠高尿酸血症模型的形成。然后，对照组和建模组不变，而建模剂+SfPP组每天同时灌胃建模剂和SfPP，7天后再次取血检测血尿酸值，检查SfPP是否有治疗效果。随后，建模组停用建模剂改成灌胃饮用水，而建模剂+SfPP组改成灌胃饮用水和SfPP，3天后再次取血检测血尿酸值并进行了Student t-Test统计分析。结果显示建模组与对照组之间无统计学上的显著性差异，p>0.05，说明建模剂在体内代谢较快，停用建模剂3天就可以使血中尿酸浓度恢复正常。而建模剂+SfPP组比建模组下降更多，p<0.05(Student t-test，建模组与建模剂+SfPP组相比较)，同时，建模剂+SfPP组的平均血尿酸值与对照组相比有显著性差异(Student t-test，p<0.01)，说明SfPP在体内能够维持一段时间，对内源血尿酸也有降低作用。
具体实施方式
1、葵花盘水解复合粉剂溶液的配制：取葵花盘水解复合粉剂(金塔实业股份有限公司提供，其中含有脂肪1.18％，植物蛋白5.31％、碳水化合物49.7％、能量979kJ/100g、钠(Na)1.266g/100g)10g溶于100mL的PBS溶液中作为保存溶液(浓度100mg/mL)。具体实验中将保存溶液稀释成50mg/mL使用。灌胃大鼠时，每公斤体重称量80mg葵花盘粉剂溶液灌胃。
2、细胞培养基配制：在500mL DMEM细胞培养基中加入50mL胎牛血清和5mL青/链霉素双抗生素混合液。DMEM培养基、胎牛血清及青/链霉素双抗生素混合液均购自美国Gibco生物公司。
3、磷酸盐缓冲液(PBS)配制：8g氯化钠，0.2g氯化钾，3.581g十二水合磷酸氢二钠，0.24g磷酸二氢钾，溶于超纯水并定容至1L。上述药品均购自北京化工厂。
4、氧嗪酸钾溶液的配制，浓度为100mg/mL。将5g氧嗪酸钾粉剂直接溶于50mL PBS溶液里。最终制得的氧嗪酸钾溶剂为悬浊液。灌胃大鼠时，直接用灌胃器取出灌胃。
5、腺苷溶液的配制，浓度为100mg/mL。将5g腺苷粉剂直接溶于50mL PBS溶液里。最终制得的腺苷溶液同样为悬浊液。灌胃大鼠时，直接用灌胃器取出一定量的体积灌胃即可。
实施例1：大鼠高血尿酸症模型的建立。
【实验过程】：
(1)订购大鼠：从吉林省长春市Y-S实验动物公司订购Wistar雄性大鼠在实验室环境饲养一周，使其适应实验环境。
(2)建模前准备：适应实验环境1周后称量体重、随机分为对照组(10只)、建模I组(15只)和建模II组(15只)。
(3)每只大鼠用毛细玻管行眼眶取血约300μL，血样在30℃放置30分后×10000g离心30分，取上清血清，检测血中尿酸值，以此作为实验前对照数据。
(4)建立高血尿酸模型：根据大鼠体重每天进行灌胃一次，(对照组：灌胃饮用水；建模I组和II组灌胃氧嗪酸钾溶液200mg/kg+腺苷溶液200mg/kg)。一周后同样方法眼眶取血检测血尿酸值。
(5)对照组和建模组之间的显著性差异用Student t-test检验。p<0.05或p<0.01认为有统计学上的显著性差异，并判断为建模成功。
实施例1通过联合灌胃建模剂(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg)一周后，大鼠血中尿酸浓度与灌胃饮用水的对照组相比明显升高，Student t-Test统计分析有显著性差异，p值分别为<0.05(建模Ⅰ组)和<0.01(建模Ⅱ组)，说明大鼠高血尿酸动物模型建成，可用于后续的葵花盘水解复合粉剂治疗效果的评估实验。
实施例2：葵花盘水解复合粉剂(SfPP)对大鼠高尿酸血症的预防作用检测。
【实验过程】：
(1)订购大鼠：从吉林省长春市Y-S实验动物公司订购Wistar雄性大鼠在实验室环境饲养一周，使其适应实验环境。
(2)建模前准备：适应实验环境1周后称量体重、随机分为空白对照组(10只)、建模组(15只)和建模剂+SfPP组(15只)。
(3)每只大鼠用毛细玻管行眼眶取血约300μL，血样在30℃放置30分后×10000g离心30分，取上清血清，检测血中尿酸值，以此作为实验前对照数据。
(4)SfPP的预防性治疗检测：根据大鼠体重每天进行灌胃一次，(对照组：灌胃饮用水；建模组：灌胃氧嗪酸钾溶液200mg/kg+腺苷溶液200mg/kg；建模剂+SfPP组：同时灌胃氧嗪酸钾溶液200mg/kg+腺苷溶液200mg/kg+SfPP，)。10天后同样方法眼眶取血检测血尿酸值。
(5)两组间的显著性差异用Student t-test检验。p<0.05或p<0.01认为有统计学上的显著性差异。对照组与建模组之间有显著性差异，则认为高尿酸血症模型形成；模型组与建模剂+SfPP组之间有显著性差异，则认为SfPP对高尿酸血症的产生有预防作用。
实施例2通过联合灌胃建模剂(腺苷溶液200mg/kg+氧嗪酸钾溶液200mg/kg)和葵花盘水解复合粉剂(SfPP)10天后，明显抑制了大鼠血中尿酸浓度的增高，与单独灌胃建模剂组相比较，Student t-Test统计分析有显著性差异(p<0.05)，说明SfPP具有潜在的预防性抗血尿酸增高的作用。
实施例3：葵花盘水解复合粉剂(SfPP)对大鼠高尿酸血症的治疗作用检测。
【实验过程】：
(1)订购大鼠：从吉林省长春市Y-S实验动物公司订购Wistar雄性大鼠在实验室环境饲养一周，使其适应实验环境。
(2)建模前准备：适应实验环境1周后称量体重、随机分为空白对照组(10只)、建模组(15只)和建模剂+SfPP组(15只)。
(3)每只大鼠用毛细玻管行眼眶取血约300μL，血样在30℃放置30分后×10000g离心30分，取上清血清，检测血中尿酸值，以此作为实验前对照数据。
(4)SfPP对大鼠高尿酸血症的治疗作用检测：根据大鼠体重每天进行灌胃一次，(对照组：灌胃饮用水；建模组和建模剂+SfPP组：灌胃氧嗪酸钾溶液200mg/kg+腺苷溶液200mg/kg)，7天后(第一周)同样方法眼眶取血检测血尿酸值，以便确认大鼠高尿酸血症的形成。然后，建模组继续灌胃建模剂，而建模剂+SfPP组同时灌胃建模剂和SfPP，7天后(第二周)同样取眼眶血检测血尿酸值，通过分析评估SfPP对大鼠高血尿酸症的治疗作用。随后，建模组停用建模剂改成灌胃饮用水，而建模剂+SfPP组改成灌胃饮用水和SfPP，3天后再次取血检测血尿酸值。
(5)两组间的显著性差异用Student t-test检验。p<0.05或p<0.01认为有统计学上的显著性差异。
实施例3通过先建立大鼠高尿酸血症后(第一周)，再开始联合灌胃建模剂和SfPP，一周后(第二周)对照组和建模剂+SfPP组之间无统计学上的显著性差异(Student t-Test，p>0.05)，说明SfPP具有潜在的缓解或治疗高尿酸血症的作用；二周后建模组和建模剂+SfPP组都停止灌胃建模剂，而建模剂+SfPP组继续单独灌胃SfPP，结果显示建模组与对照组之间无统计学上的显著性差异，p>0.05,说明建模剂在体内代谢较快，停用建模剂3天就可以使血中尿酸浓度恢复正常。而建模剂+SfPP组比建模组下降更多，p<0.05(Student t-test，建模组与建模剂+SfPP组相比较)，同时，建模剂+SfPP组的平均血尿酸值与对照组相比有显著性差异(Student t-test，p<0.01)，说明SfPP在体内能够维持一段时间，对内源血尿酸也有降低作用。
注明：所有大鼠血尿酸浓度的检测在长春市肝胆医院完成。
Claims (2)
1.葵花盘水解复合粉剂在制备预防、缓解或治疗高尿酸痛风症食品中的应用。
2.葵花盘水解复合粉剂在制备预防、缓解或治疗高尿酸痛风症药物中的应用。
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| CN102924622A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 温雪 | 向日葵多糖及其制备方法 |
| CN104000923A (zh) * | 2014-05-26 | 2014-08-27 | 河南科技大学第一附属医院 | 一种尿道结石用排石汤及其服用方法 |
| CN104352716A (zh) * | 2014-11-14 | 2015-02-18 | 西北农林科技大学 | 一种预防/治疗羊尿石症的组合物及其制备方法和应用 |
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2015
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| CN102924622A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 温雪 | 向日葵多糖及其制备方法 |
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