CN105106959A - 虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用以及一种药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药领域，公开了虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述虫草素具有式(1)所示的结构；本发明还公开了一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物，其中，该药物组合物包括活性成分，所述活性成分包括柔红霉素、更生霉素、阿霉素中的至少一种以及虫草素。本发明所述的虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用时具有作用效率高且副作用小的优点。

Description

虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用以及一种药物组合物

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地，涉及虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用以及一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物。

背景技术

当前治疗恶性肿瘤的主要手段包括放射线治疗和化学治疗，临床上约有90％的恶性肿瘤需要进行放射治疗和/或化学治疗。

所谓化学治疗主要是用可以杀死癌细胞的药物治疗癌症，由于癌细胞与正常细胞最大的不同处在于癌细胞的细胞分裂和细胞生长较正常细胞，所以抗癌药物的作用原理通常是通过干扰细胞的分裂的机制来抑制癌细胞的生长，例如抑制DNA的复制或者是阻止染色体的分离。然而，大多数的化疗药物选择性都很低，它们在杀死癌细胞的同时也会杀死进行细胞分裂的正常组织细胞，因而常常会伤害需要进行分裂以维持正常功能的健康组织，这样常常会使得免疫力较弱的患者在接受化学治疗后情况变得更差。而放射线治疗也称放疗、辐射疗法，是通过使用辐射线杀死癌细胞，缩小肿瘤。放射治疗可经由体外放射治疗或体内接近放射治疗。由于癌细胞的生长和分裂都较正常细胞快，借由辐射线破坏细胞的遗传物质，可阻止细胞生长或分裂，进而控制癌细胞的生长。但是，放射治疗的效果仅能局限在接受照射的区域内。放射治疗的目标则是要尽可能的破坏所有癌细胞，同时尽量减少对邻近健康组织的影响。但是，在临床实践中，为了尽可能地破坏所有癌细胞，常常会杀死邻近较多的正常细胞，从而使得免疫力较弱的癌症患者难以从放射治疗的伤害中恢复过来。

作为一把双刃剑，放疗和化疗在有效治疗肿瘤的同时，也对人体多个器官和系统产生巨大的伤害。在这些伤害当中，最常见的就是骨髓抑制。骨髓抑制对人体的直接影响是造成血液中各种细胞尤其是白细胞的生成减少。白细胞作为机体免疫力的指标，它的功能就是杀灭或抑制入侵到体内的各种细菌、病毒和有害细胞的产生。由于骨髓抑制导致的白细胞减少，对病人的免疫力造成了极大伤害。放化疗对人体免疫力近期产生的伤害是即刻的，有的时候是危及生命的，每个经过这两种方法治疗的癌症病人都会有深切的感受，很少能有肿瘤病人在治疗期间白细胞一直处在正常的范围之内，常见的情况是许多病人由于放疗和化疗摧毁了其多道免疫防线，使得病人最后由于免疫力低下不能抵御通常的细菌和病毒感染而死亡。

因此，如何在癌症的治疗过程中保护好患者的各道免疫力防线是癌症治疗成功的关键。

为了减小由于放疗和化疗给癌症患者带来的难以逆转的伤害，现有技术通常采用在进行放疗和/或化疗的同时或者进行放疗和/或化疗的前后给予癌症患者一些增强免疫能力的药物，常用的用于增强癌症患者免疫能力的药物主要有：糖皮质激素、黄芩苷以及冬虫夏草的提取混合物等。然而，这些药物普遍存在会给患者带来不同程度的副作用以及作用效率不高的缺陷。

因此，目前亟需找到一种能够克服现有技术的治疗效率低以及副作用高的缺陷的药物，使得癌症患者能够在接受放疗和/或化疗过程中维持较强的免疫能力，从而减小或者避免放疗和/或化疗过程对癌症患者的伤害。

发明内容

本发明的目的是克服采用现有技术提供的方法提高接受放疗和/或化疗的癌症患者的免疫能力时存在的效率低以及副作用大的缺陷，提供虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用以及一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述虫草素具有式(1)所示的结构，

另一方面，本发明还提供一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物，其中，该药物组合物包括活性成分，所述活性成分由柔红霉素、更生霉素、阿霉素、博来霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、甲氨蝶呤、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊甙、盐酸厄洛替尼片、顺铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯、羟基喜树碱、多烯紫极醇、吉西他滨、托泊替康和伊立替康中的至少一种以及虫草素组成。

本发明所述的虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用时具有作用效率高且副作用小的优点，癌症患者在接受放疗和/或化疗的周期内或者以及任选地在接受放疗和/或化疗的周期之前和之后使用虫草素时能够显著地减小放疗和化疗对身体造成的伤害，有助于癌症患者在接受放疗和/或化疗后恢复免疫能力。

本发明所述的虫草素作为与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物的活性成分之一使用时，可以将所述活性成分与任选的常用药用辅料混合调制成通常使用的各种剂型，如片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂等，作为本发明所述的与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物使用。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

一方面，本发明提供了虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述虫草素具有式(1)所示的结构，

在本发明中，需要特别说明的是，所述虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用包括虫草素在制备与放疗协同治疗肿瘤的药物中的应用、虫草素在制备与化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用以及虫草素在制备与放疗和化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用。

在本发明中，所述虫草素又称为3’-脱氧腺苷(3-deoxyadenosine)。

在本发明所述的应用中，在含有所述虫草素的药物(也即为与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物)中，所述虫草素的含量为10-100重量％；优选为50-100重量％；更优选为100重量％。

在本发明所述的应用中，对用于所述化疗的药物没有特别的限定，特别优选的情况下，本发明的发明人发现，所使用的化疗的药物包括柔红霉素、更生霉素、阿霉素、博来霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、甲氨蝶呤、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊甙、盐酸厄洛替尼片、顺铂和紫杉醇中的至少一种时，使用本发明所述的虫草素能够更加显著地减小放疗和化疗对身体造成的伤害，有助于癌症患者在接受放疗和/或化疗后恢复免疫能力。

根据本发明所述的应用，含有所述虫草素的药物优选与辐照剂量为0.1Gy至100Gy之间的放疗过程协同使用。

在本发明所述的应用中，所述肿瘤可以包括皮肤癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、食管癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、淋巴癌、肝癌、肺癌、白血病和胃癌中的至少一种。

根据本发明所述的应用，含有所述虫草素的药物可以在接受放疗和/或化疗的周期内、在接受放疗和/或化疗的周期之前的1-180天内以及在接受放疗和/或化疗的周期之后的1-180天内的至少一个时期内被使用。特别地，在本发明中，所述接受放疗和/或化疗的周期是指从开始接受放疗和/或化疗至遵照医嘱放疗和/或化疗结束的时间范围，通常根据癌症患者的肿瘤情况，医生会安排两次或者两次以上的放疗，那么这两次或者两次以上的放疗属于接受放疗的同一个周期；同样地，对于化疗的周期来说，具体可以解释如下：从遵照医嘱开始服用或者注射化疗药物至停止服用或者注射化疗药物称为化疗的一个周期。特别地，有的癌症患者在停止接受放疗和/或化疗之后的2个月以上复查发现癌细胞有大量增加而不得不再次接受放疗和/或化疗时，再次开始的放疗和/或化疗属于另一个周期。

优选情况下，在本发明的应用中，含有所述虫草素的药物在接受放疗和/或化疗的周期内、在接受放疗和/或化疗的周期之前的1-100天内以及在接受放疗和/或化疗的周期之后的1-150天内均被使用。

本发明所述的应用中虫草素的给药剂量取决于许多因素，例如癌症患者的患癌种类以及严重程度，患者的性别、年龄、体重及个体反应，给药途径以及给药次数等，因此，本发明的剂量可以有较大的变化范围。优选情况下，相对于待使用含有所述虫草素的药物的患者的每kg体重，含有所述虫草素的药物的用量可以为0.001-1000mg。

另一方面，本发明还提供了一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物，其中，该药物组合物包括活性成分，所述活性成分由柔红霉素、更生霉素、阿霉素、博来霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、甲氨蝶呤、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊甙、盐酸厄洛替尼片、顺铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯、羟基喜树碱、多烯紫极醇、吉西他滨、托泊替康和伊立替康中的至少一种以及虫草素组成，所述虫草素具有式(1)所示的结构，

本发明所述的药物组合物中还可以包括本领域内常规使用的各种辅料，例如可以包括助溶剂、缓冲剂、pH调节剂、着色剂香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

在本发明中，所述药物组合物可以根据本领域内已知的各种方法制备。用于本发明的目的时，如果需要，可以将本发明所述的活性成分与一种或多种固体和/或液体药物赋形剂和/或辅料结合，制成可作为人药使用的适当使用形式或者剂量形式。

在本发明中，所述与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物可以制备成具有多种剂型的制剂，例如可以包括：片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂等。

为了将单位给药剂型制成上述列举的常用剂型，可以广泛使用本领域内公知的各种载体，关于载体的举例是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；润湿剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉等；崩解抑制剂，如可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅等。

本发明所述的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可以为肠道给药形式或者非肠道给药形式，例如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔黏膜、皮肤、腹膜或者直肠等。

本发明所述的药物组合物的给药途径还可以为注射给药，注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

在本发明所述的与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物中，相对于所述活性成分的总重量，所述虫草素的含量可以为0.001-80重量％。

优选情况下，在本发明所述的与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物中，相对于所述活性成分的总重量，所述虫草素的含量为0.01-50重量％。

在本发明中，对所述虫草素的来源没有特别的限定，只要所使用的虫草素的纯度为99％以上即可。本发明所述虫草素根据现有技术的方法合成获得或者来自商购。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，在没有特别说明的情况下，所使用的各种材料均来自商购。其中，所述小鼠的体重均为各组小鼠的体重平均值±标准差(g)。所使用的虫草素来自商购，并通过柱层析方法提纯至纯度为99.9％。

毒性试验

急性毒性试验：

试验动物：清洁级昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18-22g，由军事医学科学院实验动物中心提供。

动物饲养环境：SPF级，室温为(20.0-22.5)℃，相对湿度为(54.4-68.4)％RH，群笼饲养，10只/笼。

饲料来源：军事医学科学院实验动物中心；饲料生产许可证号：清洁级，SCXK-(军)2007-005。

实验方法：实验动物适应环境4天，选健康成年小鼠20只，雌雄各半，剂量设计雌性为10.0g/kg小鼠，雄性为10.0g/kg小鼠，按0.2mL/10g小鼠井口灌胃给予虫草素水溶液(1g/mL)，24h内灌胃两次。灌胃前动物禁食过夜，自由饮水。灌胃后给予正常饮食，观察14天，记录中毒体征及死亡情况。

结果发现，在上述观察期(14天)内，实验动物未见中毒体征，生长良好，大体解剖未见异常。

雌性小鼠经口MTD大于10.0g/kg小鼠；雄性小鼠经口MTD大于10.0g/kg小鼠。

根据食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中急性毒性分级标准判定，虫草素小鼠急性经口毒性属实际无毒。

慢性毒性试验：

前处理方法：低、中剂量组：分别称取100g、1000g虫草素，加基础面料至20kg，搅拌均匀。高剂量组，称取虫草素2000g、酪蛋白400g，加基础面料至20kg，搅拌均匀。

试验动物：清洁级Wistar种大鼠80只，雌雄各半，体重61-83g，由军事医学科学院实验动物中心提供。

动物饲养环境：SPF级，室温为(20.0-24.8)℃，相对湿度为(43.9-49.8)％RH，单笼饲养。

饲料来源：军事医学科学院实验动物中心；饲料生产许可证号：清洁级，SCXK-(军)2007-005。

给药方式：掺入饲料喂饲。

剂量设计：高剂量组剂量设计按虫草素在饲料中提那家的最大比例为10％、90天喂养摄食量按体重的8％折算，为8g/kg大鼠，中、低剂量组为4.0、0.4g/kg大鼠。另设阴性对照组。

操作步骤：选用离乳大鼠80只，雌雄各半，按体重随机分为4组，即阴性对照组、0.4g/kg大鼠、4.0g/kg大鼠和8g/kg大鼠三个剂量组。连续90天按剂量设计将虫草素掺入基础面料中喂饲，对照组给予普通基础面料。

实验期间，动物自由摄食和饮水，每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒体征和死亡情况。

采用SPSS12.0软件对数据进行统计处理。

结果：

在本实验条件下，低剂量组虫草素使动物体重下降、体重增重下降，每周进食量及总进食量降低、对个别周食物利用率及雄性动物总食物利用率有影响。对45天、90天低剂量组血常规及分类白细胞均无影响；对45天、90天生化指标有影响，但均无生物学意义，低剂量组总蛋白和白蛋白的降低考虑与进食量降低有关；低剂量组雌雄大鼠凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间与对照组比较差异均无显著性，低剂量组雄性大鼠血小板明显降低，但无生物学意义。虫草素对低剂量组脏器湿重及脏/体比有不同程度影响，考虑与体重降低有关，无生物学意义。低剂量组未出现有意义的与虫草素毒性相关的显著组织病理学改变。

实施例1

本实施例在细胞水平说明本发明所述虫草素在制备与化疗协同治疗肺癌的药物中的应用，具体地为：

采用CN103272216A提供的方法培养肺癌细胞，具体为：将人肺腺癌A-549细胞按照常规培养方法进行活化和传代，其中，培养基为RPMI1640+1％双抗+10％FBS(在RPMI1640(Invitrogen,11875-093)中加入青霉素、链霉素混合液和胎牛血清(FBS)，使前两者最终含量为1体积％，FBS的含量为10体积％得到的培养液)。

采用噻唑蓝比色法(MTT)检测虫草素与化疗对人肺腺癌A-549细胞的协同治疗作用。具体方法如下：选用P8代人肺腺癌A-549细胞，分别以每孔7×10³个/mL人肺腺癌A-549细胞接种于96孔板中，待细胞完全贴壁后，随机选40孔细胞分成8组，分别为高剂量及化疗组、中剂量及化疗组、低剂量及化疗组、高剂量非化疗组、中剂量非化疗组、低剂量非化疗组、化疗对照组和对照组，每组5孔细胞。

高剂量及化疗组的每孔细胞中加入200μL的含90μg/mL的虫草素的培养液和5mg的盐酸厄洛替尼片；

高剂量非化疗组的每孔细胞中加入200μL的含90μg/mL的虫草素的培养液；

中剂量及化疗组的每孔细胞中加入200μL的含60μg/mL的虫草素的培养液和5mg的盐酸厄洛替尼片；

中剂量非化疗组的每孔细胞中加入200μL的含60μg/mL的虫草素的培养液；

低剂量及化疗组的每孔细胞中加入200μL的含30μg/mL的虫草素的培养液和5mg的盐酸厄洛替尼片；

低剂量非化疗组的每孔细胞中加入200μL的含30μg/mL的虫草素的培养液；

对照组的每孔细胞中加入200μL的无血清培养液。

加完培养液在37℃培养72h后，每孔加入200μL的MTT工作液(无菌水配制的5mg/mLMTT溶液：无血清培养液＝1：9(体积比))避光继续培养4h，小心吸弃孔内的细胞培养液，每孔加200μL二甲亚砜(DMSO)，震荡孵育10min，使结晶物充分溶解。用酶标仪在560nm波长处测吸光度(OD)，以对照组的细胞存活率为100％，计算其余各组细胞的存活率(各组细胞的存活率＝OD(待评价组)/OD(对照组)×100％)以及各组细胞的凋亡率(各组细胞的凋亡率＝100％-各组细胞的存活率)。所述待评价组包括高剂量及化疗组、中剂量及化疗组、低剂量及化疗组、高剂量非化疗组、中剂量非化疗组、低剂量非化疗组和化疗对照组。

实验所有数据采用SPSS12.0统计软件的独立样本t检验处理统计。各组细胞的凋亡率如表1中所示。

其中，上述无血清培养液是RPMI1640+1％双抗，上述含有虫草素的培养液分别是向RPMI1640+1％双抗中加入相应量的虫草素。RPMI1640+1％双抗是在RPMI1640(Invitrogen,11875-093)中加入青霉素和链霉素混合液(青霉素10000U/mL、链霉素是10000μg/mL)，使二者最终含量为1体积％的无血清培养液。

MTT法测定结果如表1中所示。结果表明，在细胞水平上采用虫草素与化疗药物协同治疗肺癌细胞时，细胞的凋亡率可以达到85.2-97.2％，具体地，使用本发明所述的高剂量的虫草素与化疗同时进行时，肺癌细胞凋亡率为97.2％；使用本发明所述的中剂量的虫草素与化疗同时进行时，肺癌细胞凋亡率为91.1％；使用本发明所述的低剂量的虫草素与化疗同时进行时，肺癌细胞凋亡率为85.2％。而在相同条件下，肺癌细胞仅接受化疗而不使用虫草素时，肺癌细胞凋亡率仅为43.1％。并且将高剂量非化疗组、中剂量非化疗组和低剂量非化疗组的结果分别与高剂量化疗组、中剂量化疗组和低剂量化疗组的结果进行比较时可以看出，肺癌细胞仅接受本发明的高剂量、中剂量和低剂量的虫草素而不同时进行化疗时，肺癌细胞的凋亡率无生物学意义，该效果远远不及本发明的协同采用虫草素和化疗药物的效果，本实施例从细胞水平上说明了本发明的虫草素与治疗肺癌的药物具有协同作用。

表1

	细胞凋亡率(％)
		高剂量化疗组	97.2
中剂量化疗组	91.1
		低剂量化疗组	85.2
高剂量非化疗组	-
		中剂量非化疗组	-
低剂量非化疗组	-
		化疗对照组	43.1
对照组	-

实施例2

本实施例在动物水平说明本发明所述虫草素在制备与化疗协同治疗结肠癌的药物中的应用，具体地为：

造模：采用现有技术(“一种结肠炎相关的结肠癌模型的复制”，李宇华等，世界华人消化杂志，2007，15(3)：234-239)提供的方法造小鼠结肠癌模型，具体为：给待造模小鼠实施腹腔注射15mg/kg的二甲肼(DMH)1周后，再给予小鼠饮用含20g/L的右旋葡聚糖苷钠(DSS)水一周，然后正常喂养20周，然后随机选取10只造模小鼠处死，发现成癌率达到100％，结论为造模成功。

取50只(18-20g)上述结肠癌模型小鼠，在腹腔内注射5-氟尿嘧啶(剂量为150mg/kg体重)后随机分组(每组10只小鼠)，分别命名为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组1和对照组2，另取10只(18-20g)未造模的正常小鼠，命名为正常对照组；并且另取30只(18-20g)结肠癌模型小鼠均分成3组，分别命名为对照组3、对照组4和对照组5。

处理情况如下：对照组3、对照组4和对照组5中的模型小鼠不给予腹腔注射5-氟尿嘧啶，对所述高剂量组和对照组3给予腹腔内注射90mg/kg体重的虫草素水溶液50微升，对所述中剂量组和对照组4给予腹腔内注射60mg/kg体重的虫草素水溶液50微升以及对所述低剂量组和对照组5给予腹腔内注射30mg/kg体重的虫草素水溶液50微升，对对照组1给予腹腔注射50微升注射用水，对对照组2和正常对照组不做处理，按照上述相同的方法，每天早晚各一次(共2次)给予高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组1和对照组2小鼠腹腔内注射5-氟尿嘧啶(剂量为150mg/kg体重)，并且，按照上述分别相同的方法每天早中晚各一次(共3次)给予高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组3、对照组4和对照组5小鼠腹腔内注射虫草素水溶液50微升，给予对照组1腹腔内注射注射用水50微升，对对照组2和正常对照组不做处理。持续2周后实验结束，并且记录2周内各组小鼠的疾病指数，疾病指数的评价方法如表2中所示，评价结果如表3中所示。实验结束后处死各组小鼠并且解剖各组小鼠，取出小鼠结肠的瘤块称重，根据以下公式计算肿瘤抑制率，结果列于表3中：

肿瘤抑制率(％)＝(对照组2平均瘤重-待评价组平均瘤重)/对照组2平均瘤重×100％

其中，所述待评价组是指所述高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组1、对照组3、对照组4和对照组5。

表2

得分	体重下降(％)	粪便硬度	便血/潜血	脱毛
					0	-	正常	正常	正常
1	1-5	无	无	无
					2	5-10	松散	潜血	轻微
3	11-15	松散	潜血	中度
					4	>15	水样便	出血	严重

表3

	疾病指数	肿瘤抑制率(％)
			高剂量组	2	72.84
中剂量组	5	65.63
			低剂量组	7	53.59
对照组1	16	27.20
			对照组2	16	-
对照组3	11	-
			对照组4	13	-
对照组5	14	-
			正常对照组	0	-

从表3中的结果可以看出，采用虫草素与化疗药物协同治疗患有结肠癌的小鼠持续2周后发现小鼠的肿瘤抑制率可以达到53.59-72.84％，具体地，使用本发明所述的高剂量的虫草素时，肿瘤抑制率为72.84％；使用本发明所述的中剂量的虫草素时，肿瘤抑制率为65.63％；使用本发明所述的低剂量的虫草素时，肿瘤抑制率为53.59％。而在相同条件下，对照组1的小鼠仅接受化疗而不使用虫草素时，小鼠的肿瘤抑制率仅为27.20％。并且将对照组3、对照组4和对照组5的结果分别与高剂量组、中剂量组和低剂量组进行比较时可以看出，患有结肠癌的小鼠仅接受本发明的高剂量、中剂量和低剂量的虫草素而不同时进行化疗时，小鼠的肿瘤抑制率无生物学意义，该效果远远不及本发明的协同采用虫草素和化疗药物的效果，本实施例从动物水平上说明了本发明的虫草素与治疗结肠癌的药物具有协同作用。

实施例3

本实施例在动物水平说明本发明所述虫草素在制备与放疗协同治疗结肠癌的药物中的应用，具体地为：

造模方法与实施例2中相同。

取80只(18-20g)结肠癌模型小鼠随机分组(每组10只小鼠)，分别命名为高剂量放疗组、中剂量放疗组、低剂量放疗组、高剂量非放疗组、中剂量非放疗组、低剂量非放疗组、放疗组和对照组，对各组小鼠的处理情况如下：

高剂量放疗组：在小鼠接受放疗期间，每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升90mg/kg体重的虫草素水溶液，并且持续至最后一次放疗结束后2周；

中剂量放疗组：在小鼠接受放疗期间，每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升60mg/kg体重的虫草素水溶液，并且持续至最后一次放疗结束后2周；

低剂量放疗组：在小鼠接受放疗期间，每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升30mg/kg体重的虫草素水溶液，并且持续至最后一次放疗结束后2周；

高剂量非放疗组：每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升90mg/kg体重的虫草素水溶液，持续时间与高剂量放疗组的持续时间相同；

中剂量非放疗组：每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升60mg/kg体重的虫草素水溶液，持续时间与中剂量放疗组的持续时间相同；

低剂量非放疗组：每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升30mg/kg体重的虫草素水溶液，持续时间与低剂量放疗组的持续时间相同；

放疗组：在小鼠接受放疗期间，每天早中晚各一次给予实验小鼠灌胃50微升水；

对照组：不做处理，给予造模小鼠正常喂食；

其中，放疗的具体方法如下：

照射条件：Philips深部X射线治疗机，电压200kV，电流100mA，滤过板0.5mmCu+1.0mmAl，每天全身均匀照射2.0Gy(剂量率0.44Gy/min)，持续照射7天为一疗程。

记录实验过程中各组小鼠的疾病指数，疾病指数的评价方法如表2中所示，评价结果如表4中所示。实验结束后处死各组小鼠并且解剖各组小鼠，取出小鼠结肠的瘤块称重，根据以下公式计算肿瘤抑制率，结果列于表4中：

肿瘤抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-待评价组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％

其中，所述待评价组是指所述高剂量放疗组、中剂量放疗组、低剂量放疗组、高剂量非放疗组、中剂量非放疗组、低剂量非放疗组和放疗组。

表4

从表4中的结果可以看出，采用虫草素与放疗协同治疗患有结肠癌的小鼠持续2周后发现小鼠的肿瘤抑制率可以达到71.94-86.51％，而且，采用虫草素与放疗协同治疗患有结肠癌的小鼠时，小鼠在接受放疗期间疾病指数低，活动量也正常，而且无死亡情况，这说明采用虫草素与放疗协同治疗患有结肠癌的小鼠时能够显著地增强小鼠的免疫能力。而仅采用虫草素时，小鼠的肿瘤抑制率无生物学意义，且小鼠的活动量和进食均减少，甚至出现了死亡情况；仅采用放疗治疗患有结肠癌的小鼠时，实验过程中小鼠的疾病指数均较高，而且，小鼠的活动量和进食均减少，甚至出现了死亡情况。特别是单独的放疗组小鼠在整个实验周期中全部死亡。本实施例从动物水平上说明了本发明的虫草素能够与放疗协同治疗结肠癌。

对比例1

本对比例采用实施例3所述的方法进行，所不同的是，本对比例中用冬虫夏草提取液替换实施例3中的虫草素，其余均与实施例3中相同。

冬虫夏草提取液通过如下方法获得：

用人工培育的北虫草子座50克加水500毫升，加压煮沸10分钟，得到桔红色液体，倾出上清液，加水200毫升重复提取一次。过滤去渣，合并提取液，并且进行减压浓缩。该液体呈桔红色，味芬芳，略有甜味。以可见光谱分析获得的冬虫夏草提取液中虫草素的浓度为35μg/mL，虫草多糖的浓度为9.8mg/mL。分别配制成高剂量溶液(虫草素和虫草多糖总浓度为360μg/mL)、中剂量溶液(虫草素和虫草多糖总浓度为240μg/mL)和低剂量溶液(虫草素和虫草多糖总浓度为120μg/mL)。

实验结果如表5中所示。

表5

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.虫草素在制备与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述虫草素具有式(1)所示的结构，

2.根据权利要求1所述的应用，其中，在含有所述虫草素的药物中，所述虫草素的含量为10-100重量％；优选为50-100重量％；更优选为100重量％。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，用于所述化疗的药物包括柔红霉素、更生霉素、阿霉素、博来霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、甲氨蝶呤、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊甙、盐酸厄洛替尼片、顺铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯、羟基喜树碱、多烯紫极醇、吉西他滨、托泊替康和伊立替康中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述放疗的辐照剂量为0.1Gy至100Gy。

5.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述肿瘤包括皮肤癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、食管癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、淋巴癌、肝癌、肺癌、白血病和胃癌中的至少一种。

6.根据权利要求1或2所述的应用，其中，含有所述虫草素的药物在接受放疗和/或化疗的周期内、在接受放疗和/或化疗的周期之前的1-180天内以及在接受放疗和/或化疗的周期之后的1-180天内的至少一个时期内使用。

7.根据权利要求6所述的应用，其中，含有所述虫草素的药物在接受放疗和/或化疗的周期内、在接受放疗和/或化疗的周期之前的1-100天内以及在接受放疗和/或化疗的周期之后的1-150天内均被使用。

8.根据权利要求1或2所述的应用，其中，相对于待使用含有所述虫草素的药物的患者的每kg体重，含有所述虫草素的药物的用量为0.001-1000mg。

9.一种与放疗和/或化疗协同治疗肿瘤的药物组合物，其中，该药物组合物包括活性成分，所述活性成分由柔红霉素、更生霉素、阿霉素、博来霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、甲氨蝶呤、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊甙、盐酸厄洛替尼片、顺铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯、羟基喜树碱、多烯紫极醇、吉西他滨、托泊替康和伊立替康中的至少一种以及虫草素组成，所述虫草素具有式(1)所示的结构，

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，相对于所述活性成分的总重量，所述虫草素的含量可以为0.001-80重量％。