CN105106577B - 一种含玫瑰花的治疗糖尿病的中药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药技术领域,具体涉及一种含玫瑰花的治疗糖尿病的中药组合物。所述中药组合物含有下述原料药:黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金、玫瑰花,使用本发明所述中药组合物治疗秀丽隐杆线虫糖尿病模型,结果表明:该中药组合物能显著减少糖尿病秀丽隐杆线虫的dauer表型,表明本发明提供的中药组合物可在制备治疗糖尿病的药物中应用。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域,具体涉及一种治疗糖尿病的中药组合物。
背景技术
糖尿病是世界范围最常见的流行病之一,已经成为继心血管、肿瘤之后的第三大严重威胁人类健康的疾病。随着人们生活水平的提高、人口的老龄化和居民生活方式的改变,糖尿病患病率呈上升趋势。目前全球约有1.5亿糖尿病患者,预测到2025年将增加至3亿。截止2013年,我国糖尿病患者已达1.14亿。糖尿病严重威胁着人们的健康,降低人们的生活质量,更带来严重的经济负担。
糖尿病需要长期治疗,目前市场上有多种治疗糖尿病的药物,例如双胍类,磺脲类,α-糖苷酶抑制剂等,但是长期服用后产生不良反应及耐药性,药用植物与合成药物相比,毒性较小且副作用不显著,世界卫生组织提出用药用植物辅助治疗糖尿病,尤其是对糖尿病常规治疗不足的国家。以上启示,我们借鉴长期临床实践中治疗糖尿病有效的古方,通过对古方的研究试验,使其达到治疗效果明显,毒副作用降低的目的。
玉液汤由黄芪、山药、葛根、知母、鸡内金、天花粉组成,收载于《医学衷中参西录》、《圣济总录》、《医方类聚》,具有益气生津,润燥止渴之功效。消渴之证,多由于元气不升,玉液汤乃升元气以止渴者也。方中山药、黄芪用量较重为君,取其补脾固肾,益气生津之功,一则使脾气升,散精达肺,输布津液以止渴,二则使肾气固,封藏精微以缩尿。知母、天花粉滋阴清热,润燥止渴为臣药。佐以葛根助黄芪升发脾胃清阳,输布津液而止渴;鸡内金助脾健运,运化水谷精微,“化饮食中糖质为津液也”(《医学衷中参西录》);五味子助山药补肾固精,收敛阴津以缩尿,使精微不致于下趋。但是,玉液汤中的天花粉会引起子宫痉挛,导致流产,且脾胃虚寒大便滑泄者忌服天花粉。而且,天花粉被证明具有血液系统、呼吸系统和肝毒性。
玫瑰花是一味行气活血的中药,玫瑰黄酮对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠具有降血糖作用。玫瑰花提取物可显著降低2型糖尿病大鼠血糖水平,调节血脂异常,其机制可能包括改善糖耐量及胰岛素抵抗,促进肝脏对糖的利用,对防治糖尿病及其并发症有积极作用。
秀丽隐杆线虫全身通体透明,在显微镜下能观察身体内部构造。它个体小,成虫体长1mm,以大肠杆菌E. coli OP50为食,既能在NGM平板上也能于液体培养液中生长发育,生活周期短,一般3.5天就会发育成具有产卵能力的成虫。最引人注目的是,秀丽隐杆线虫全基因组中60-80%的基因具有与人类同源性(Harris et al., 2004)。它作为一个从细胞体外水平药物初筛到小鼠体内水平药物复筛的一个桥梁,越来越受到药学家的青睐。美国devGen公司利用人源化线虫筛选的抗心律不齐药物已被FDA批准进入临床研究。
秀丽隐杆线虫DR1564株系在daf-2基因上携带有一个突变,从而导致了DAF-2失活。daf-2基因编码类胰岛素样生长因子的受体,携带daf-2基因突变的DR1564株系线虫在15℃正常生长发育,在22℃可产生类似胰岛素抵抗的代谢变化进入dauer期的休眠态,在人类表现为胰岛素抵抗,葡萄糖耐受等糖尿病病症(Kimura et al., 1997)。给予线虫受试药物再以22℃诱导线虫进入dauer期,治疗糖尿病药物可阻止秀丽隐杆线虫进入dauer期发育为成虫,受试线虫群体中发育为成虫的线虫比例越高,表明受试药物治疗糖尿病的效果越好。
钒酸钠能使小鼠胰岛素敏感性增加、高脂血症减少(Brichard and Henquin,1995)。钒酸钠秀丽隐杆线虫糖尿病模型试验后,钒酸钠能使线虫从dauer期释放出来,而未使用钒酸钠的线虫仍处于dauer期。PCT/IBO1/01199利用秀丽隐杆线虫胰岛素受体突变daf-2基因,从23040种化合物中筛选出作用于下游途径的活性药物300种。
本发明提供一种治疗糖尿病的中药组合物,该中药组合物是在玉液汤组方中添加适量比例的玫瑰花,在不影响药效的前提下显著降低了玉液汤中天花粉的用量,从而降低由于使用天花粉带来的毒性作用。利用秀丽隐杆线虫糖尿病模型检验该中药组合物的疗效,结果表明:本发明提供的中药组合物,能显著减少糖尿病秀丽隐杆线虫的dauer表型,在降低天花粉用量的同时,不影响药效,玉液汤与玫瑰花发挥协同作用治疗糖尿病。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗糖尿病的中药组合物。
本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的应用。
本发明所述的上述目的是通过以下技术方案实现的:
一种治疗糖尿病的中药组合物,所述中药组合物含有下述原料药:黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉、鸡内金、玫瑰花。
上述中药组合物含有下述重量比的原料药:黄芪0.3-15份、山药0.6-30份、知母0.36-18份、葛根0.1-5份、五味子0.18-9份、天花粉0.18-9份、鸡内金0.12-6份,玫瑰花0.05份-4份。
上述治疗糖尿病的中药组合物可在制备治疗糖尿病的药物中应用。
上述治疗糖尿病的中药组合物可在制备治疗糖尿病的保健品中应用。
该中药组合物作为药效成分的药物和/或保健品的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。
本发明的有益效果是:
本发明提供的中药组合物是在玉液汤中添加适量比例的玫瑰花,在不影响药效的前提下显著降低了玉液汤中天花粉的用量,降低由于应用天花粉带来的毒性。利用秀丽隐杆线虫糖尿病模型检验该中药组合物的疗效,结果表明:该中药组合物发挥协同作用减少糖尿病秀丽隐杆线虫的dauer表型,即在降低玉液汤用量减少天花粉用量的同时,不影响药效,玉液汤与玫瑰花发挥协同作用治疗糖尿病。
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。
参考文献
Brichard SM, Henquin JC (1995) The role of vanadium in the managementof diabetes. Trends Pharmacol Sci 8: 265−270.
Kimura KD, Tissenbaum HA, Liu Y, Ruvkun G (1997). daf-2 an insulinreceptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditiselegans. Science 277, 942-946.
Harris TW, Chen N, Cunningham F, Tello-Ruiz M, Antoshechkin I,Bastiani C, Bieri T et al. (2004). Nucleic. Acids Res., 32 (database issue),D411–D417.
PCT/IBO1/01199 Compound screens relating to insulin deficiency orinsulin resistance
说明书附图
图1 本发明所述中药组合物对秀丽隐杆线虫糖尿病模型的治疗作用
control-空白对照组;1600R-极低浓度玫瑰花水煎液组,800R-低浓度玫瑰花水煎液组,400R-中浓度玫瑰花水煎液组,200R-高浓度玫瑰花水煎液组;800Y-极低浓度玉液汤组,500Y-低浓度玉液汤组,200Y-中浓度玉液汤组,50Y-高浓度玉液汤组;group1-中药组合物1组,group2-中药组合物2组,group3-中药组合物3组,group4-药组合物4组,group5-中药组合物5组,group6-中药组合物6组,group7-中药组合物7组,group8-中药组合物8组。
纵坐标表示成虫线虫数占受试秀丽隐杆线虫总数(dauer期线虫数+成虫数目)的百分比,即(adult/total)100%。
具体实施方式
实施例1 中药组合物的制备
中药组合物含有下述重量比的原料药:
玫瑰花4克,黄芪15克、山药30克、知母18克、葛根5克、五味子9克、天花粉9克、鸡内金6克,加水383mL,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,滤液备用。
中药组合物含有下述重量比的原料药:
玫瑰花0.05g克,黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
实施例2本发明所述中药组合物对秀丽隐杆线虫糖尿病模型的治疗作用
1.生物材料
(1)秀丽隐杆线虫 DR1564购自Caenorhabditis Genetics Center(CGC);daf-2(m41) III,温度敏感株系,在25℃ 时,线虫进入dauer期的比率为100%,但是此时线虫对药物不敏感。在15℃时线虫进入dauer期比率为0%。在22℃时,线虫进入dauer期的比率大于80%,所以选择22℃为建立糖尿病病理模型的温度。
(2)大肠杆菌OP50(尿嘧啶渗漏突变株),购自Caenorhabditis Genetics Center(CGC),作为秀丽隐杆线虫的食物。
2.试剂
(1)液体LB培养基成分与制作(以1升为例):
成分 | 含量 |
蛋白胨 | 10g |
酵母 | 5g |
NaCl | 5g |
补充H2O至 | 1000mL |
(2)固体NGM(Nematode Growth Medium)培养基成分与制作(以1升为例):
成分 | 含量 |
NaCl | 3.00g |
K2HPO4 | 2.34g |
KH2PO4 | 17.23g |
蛋白胨 | 2.50g |
琼脂 | 17.00g |
补充H2O至 | 1000mL |
1M CaCl2 溶液
成分 | 含量 |
CaCl2 ·2 H2O | 14.702g |
补充H2O至 | 100mL |
1M MgSO4溶液
成分 | 含量 |
无水MgSO4 | 12.037g |
补充H2O至 | 100mL |
固体NGM培养基配制好后,121℃下高压恒温灭菌20min,在无菌操作台下加入5mg/mL胆固醇1mL,1M MgSO4 1mL,1M CaCl2 1mL摇匀,趁热倒入已灭菌的9cm培养板,约20mL/板。静置等待培养基凝固,备用。
(3)M9液配方
成分 | 含量 |
Na2HPO4 | 6.00g |
KH2PO4 | 3.00 g |
NaCl | 5.00g |
1M MgSO4 | 1.00 mL |
补充H2O至 | 1000 mL |
(4)S基础液的配制:
成分 | 含量 |
NaCl | 5.85 g |
K2HPO4 | 1 g |
KH2PO4 | 6 g |
补充H2O至 | 1000mL |
1 M柠檬酸钾的配制:
成分 | 含量 |
柠檬酸·H2O | 20g |
柠檬酸钾·H2O | 293.5 g |
补充H2O至 | 1000mL |
Trace的配制
成分 | 含量 |
EDTA二钠 | 1.86g |
FeSO4 ·7 H2O | 0.69g |
MnCl2·4 H2O | 0.2g |
ZnSO4 ·7 H2O | 0.29g |
CuSO4 ·5 H2O | 0.025g |
补充H2O至 | 1000mL |
S 液(S-complete):
成分 | 含量 |
S 基础液 | 1L |
1M柠檬酸钾 | 10ml |
Trace溶液 | 10ml |
1 M CaCl2 | 3ml |
1 M MgSO4 | 3ml |
胆固醇 | 1ml |
S基础液、1 M柠檬酸钾、 Trace都高压灭菌。配制S液时,其成分使用无菌技术依次添加,现配现用。1ml 胆固醇 (5 mg/mL,溶于乙醇)。
3.大肠杆菌OP50的制备:
挑取一个大肠杆菌OP50单菌落,接种于无菌的50mL LB中,置于37℃恒温摇床(220rpm)培养12h。 将大肠杆菌OP50按20%接种于灭过菌后的LB培养基中,于37℃,130rpm摇床过夜培养,次日第一次以10000rpm离心10min,第二次以8000rpm离心10min,得到固体菌,4℃冰箱保存,临用前以S液稀释至10 mg/mL,可用来接种液体培养基或加96孔板。
4.实施步骤
(1)实验组设置:
空白对照组(Control):S液
极低浓度玫瑰花水煎液组(1600R):玫瑰花0.025g加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
低浓度玫瑰花水煎液组(800R):玫瑰花0.05g加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中浓度玫瑰花水煎液组(400R):玫瑰花0.1g加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
高浓度玫瑰花水煎液组(200R):玫瑰花0.2g加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
极低浓度玉液汤组(800Y):黄芪187.5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62.5mg、五味子112.5mg、天花粉112.5mg、鸡内金75mg,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
极低浓度玉液汤组(500Y):黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中浓度玉液汤组(200Y):黄芪0.75g、山药1.5g、知母0.9g、葛根0.25g、五味子0.45g、天花粉0.45g、鸡内金0.3g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
高浓度玉液汤组(50Y):黄芪3g、山药6g、知母3.6g、葛根1g、五味子1.8g、天花粉1.8g、鸡内金1.2g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物1组(group1:800Y+1600R):玫瑰花0.025g、黄芪187.5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62.5mg、五味子112.5mg、天花粉112.5mg、鸡内金75mg,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物2组(group2:800Y+800R):玫瑰花0.05g、黄芪187.5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62.5mg、五味子112.5mg、天花粉112.5mg、鸡内金75mg,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物3组(group3:800Y+400R):玫瑰花0.1g、黄芪187.5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62.5mg、五味子112.5mg、天花粉112.5mg、鸡内金75mg,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物4组(group4:800Y+200R):玫瑰花0.2g、黄芪187.5mg、山药375mg、知母225mg、葛根62.5mg、五味子112.5mg、天花粉112.5mg、鸡内金75mg,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物5组(group5:500Y+1600R):玫瑰花0.025g、黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物6组(group6:500Y+800R):玫瑰花0.05g、黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物7组(group7:500Y+400R):玫瑰花0.1g、黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
中药组合物8组(group8:500Y+200R):玫瑰花0.2g、黄芪0.3g、山药0.6g、知母0.36g、葛根0.1g、五味子0.18g、天花粉0.18g、鸡内金0.12g,加水383ml,加热至沸腾并保持30分钟,定容至191 mL,过滤除菌,备用。
(2)线虫的培养:
将线虫接在涂有大肠杆菌OP50的固体NGM板上,然后置于15℃的培养箱中培养,当线虫长到成虫时进行同步化处理。
(3)线虫同步化:
挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基,用M9液将线虫从培养基上冲下,转移到离心管中,静置使线虫自由沉降至管底,弃上清。视线虫量多少向离心管中加入裂解液[6.4%(v/v)NaClO3溶液和1 M NaOH溶液按体积比1: 1混合,临用前配制],在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋,并分装于1.5mL离心管中,用M9溶液洗线虫卵三次。
(4)药物处理:
在96孔多孔板中,每孔加入线虫80-100条,20 μL上述制备的大肠杆菌OP50,给药组分别加入20μL极低浓度玫瑰花水煎液、低浓度玫瑰花水煎液、中浓度玫瑰花水煎液、高浓度玫瑰花水煎液、极低浓度玉液汤、低浓度玉液汤、中浓度玉液汤和高浓度玉液汤,以及中药组合物1-8组,空白对照组仅加入等量的S液。所有孔以S液补足至200 μL,每个组设3个平行。放入130 rpm/min,22℃的恒温振荡器中培养4天。4天后可用于镜检分别计数成虫线虫数目和dauer期线虫数目。
(5)实验结果:
实验结果见图1,图1的纵坐标表示成虫线虫数占受试秀丽隐杆线虫总数(dauer期线虫数+成虫数目)的百分比,即(adult/total)100%。百分比越大说明受试药物治疗糖尿病效果越好。
实验结果表明,与空白组相比,玫瑰花剂量依赖地阻止了秀丽隐杆线虫进入dauer期的休眠态(P<0.05),表明玫瑰花对糖尿病线虫具有显著的治疗作用,其中,低浓度玫瑰花水煎液组(800R)的玫瑰花水煎液治疗糖尿病效果最为显著,当玫瑰花浓度进一步升高时,其治疗作用反而下降。
与空白组相比,玉液汤剂量依赖地阻止了秀丽隐杆线虫进入dauer期的休眠态(P<0.05),表明玉液汤对糖尿病线虫具有显著的治疗作用,其中,高浓度玉液汤组(50Y)治疗糖尿病效果最为显著。
本发明所述中药组合物均比单独应用相同浓度的玫瑰花或玉液汤治疗糖尿病效果显著,其中,中药组合物6组(500Y+800R)、中药组合物2组(800Y+800R)治疗糖尿病的效果与玉液汤高浓度组(50Y)治疗糖尿病的效果相同,但是,50Y和500Y+800R和800Y+800R相比,500Y+800R和800Y+800R中的天花粉量明显降低,毒副作用更低。本发明公开的组合物实现了减毒增效的有益效果。
综上所述,本发明提供的中药组合物可在不影响药效的前提下显著降低天花粉的用量,从而降低由于使用天花粉带来的毒性,达到了减毒增效的有益效果,可在制备治疗糖尿病的药物和/或保健品中应用。
Claims (3)
1.一种治疗糖尿病的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由下述重量比的原料药组成:玫瑰花4 份,黄芪15 份、山药30 份、知母18 份、葛根5 份、五味子9 份、天花粉9份、鸡内金6 份。
2.如权利要求1所述的一种治疗糖尿病的中药组合物,其特征在于,该中药组合物作为药效成分的药物和/或保健品的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。
3.一种如权利要求1所述的治疗糖尿病的中药组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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