CN105104201B - 一种撒瓦那柏初代组培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种撒瓦那柏初代组培方法,包括以下步骤:(1)培养基的配制:选择基础培养基,加入蔗糖和琼脂,再加入6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)或者萘乙酸,调节pH值,灭菌,即得;(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,清洗,消毒;(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养。相对于现有技术,本发明方法不仅具有现有技术中组培繁殖的优势,还通过特定的培养基、激素种类和浓度,与其它处理方法相结合,能够显著降低撒瓦那柏的污染率,提高其成活率,使撒瓦纳柏能顺利形成更多分枝,不会出现玻璃化、褐化等现象。
Description
技术领域
本发明涉及一种撒瓦那柏初代组培方法,属于苗木繁殖技术领域。
背景技术
撒瓦纳柏是一种四季均为黄色的新引进的彩叶植物,由于枝条流线形,色彩鲜明,日本早己在园林中大量应用,而我国在园林绿化中还没有见到。撒瓦纳一般采用种子播种、扦插方法繁殖,但种子繁殖容易发生变异,扦插繁殖的穗源较少,不能快速大量繁殖,所以用组织培养的方法是撒瓦纳柏快繁新途径。
目前,在撒瓦纳柏的初代组织培养过程中,培养基、激素种类和浓度都很重要,但是现有技术中的选择都不够合理,导致形成分枝过少,易出现玻璃花、褐化等现象。
发明内容
发明目的:为了解决上述技术问题,本发明提供一种撒瓦那柏初代组培方法。
技术方案:为了实现上述发明目的,本发明公开了一种撒瓦那柏初代组培方法,包括以下步骤:
(1)培养基的配制:选择基础培养基,加入蔗糖和琼脂,再加入6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)或者萘乙酸,调节pH值,灭菌,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,清洗,消毒;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养。
作为优选,所述步骤(1)中基础培养基为MS、1/2MS(1/2MS培养基中大量元素为MS培养基的一半)、B5或者WPM培养基。
作为另一种优选,所述步骤(1)中蔗糖和琼脂的浓度分别为30g/L和7g/L。
作为另一种优选,所述步骤(1)中6-苄氨基腺嘌呤或者萘乙酸的浓度均为0.05-1mg/L。
作为另一种优选,所述步骤(1)中pH值为5.8~6.0,灭菌条件为:121℃高压下灭菌25min。
作为另一种优选,所述步骤(2)中清洗方法为:先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时。
作为另一种优选,所述步骤(2)中消毒方法为:先用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡5-8min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取。
作为另一种优选,所述步骤(3)中培养室的培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
技术效果:相对于现有技术,本发明方法不仅具有现有技术中组培繁殖的优势,还通过特定的培养基、激素种类和浓度,与其它处理方法相结合,能够显著降低撒瓦那柏的污染率,提高其成活率,使撒瓦纳柏能顺利形成更多分枝,不会出现玻璃化、褐化等现象。
附图说明
图1为不同的培养基对初代培养效果的影响;
图2为不同浓度的6-BA对初代培养效果的影响(横坐标中1、2、3、4分别为0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L);
图3为不同浓度的NAA对初代培养效果的影响(横坐标中1、2、3、4分别为0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L);
具体实施方式
实施例1
(1)培养基的配制:选择MS培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,浓度分别为30g/L和7g/L,再加入6-苄氨基腺嘌呤(6-BA),其浓度为0.05mg/L,调节pH值为5.8~6.0,121℃高压下灭菌25min,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时,然后用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡5min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养,培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
实施例2:
(1)培养基的配制:选择B5培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,浓度分别为30g/L和7g/L,再加入6-苄氨基腺嘌呤,其浓度为1mg/L,调节pH值为5.8~6.0,121℃高压下灭菌25min,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时,然后用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡8min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养,培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
实施例3:
(1)培养基的配制:选择1/2MS培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,浓度分别为30g/L和7g/L,再加入萘乙酸,其浓度为0.05mg/L,调节pH值为5.8~6.0,121℃高压下灭菌25min,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时,然后用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡6min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养,培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
实施例4:
(1)培养基的配制:选择1/2MS培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,浓度分别为30g/L和7g/L,再加入萘乙酸,其浓度为0.05mg/L,调节pH值为5.8~6.0,121℃高压下灭菌25min,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时,然后用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡5min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养,培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
实施例5:
(1)培养基的配制:选择1/2MS培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,浓度分别为30g/L和7g/L,再加入萘乙酸,其浓度为0.05-1mg/L,调节pH值为5.8~6.0,121℃高压下灭菌25min,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽的外植体,先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时,然后用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡8min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养,培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
实验例1不同消毒时间对撒瓦那柏茎尖污染的影响
不同消毒时间对撒瓦那柏茎尖的影响如表1所示。对外植体处理效果最好的是处理1,成活率达到87.7%,污染率最高的也是处理1达46%,而死亡率最高的是处理3达31.6%,可以看出,污染随升汞的处理时间延长而下降,但死亡率却反而升高,说明随着升汞处理时间的增加,对外殖体的伤害也逐渐加大,因而死亡率会逐渐升高,植物的细胞因而失去活力。综合以上各项指标可以看出,处理2是最好的处理条件,也就是在75%的酒精处理30s后,用0.1%升汞处理6min是对外殖体影响最小的。
表1不同消毒时间对撒瓦那柏茎尖污染的影响
实验例2不同的培养基对初代培养效果的影响
通过对平均再生鳞叶数占原有鳞叶数百分比数据进行方差分析,不同基础培养基间的F=2.92<3.34=F0.05(3,14),故四种基础培养基对初代培养无显著影响。从说明书附图1中可以明确看出:接种于1/2MS和B5培养基上的外植体萌发率同样高,且1/2MS培养基上外植体死亡率最低,污染率相对较低。因此,1/2MS培养基最适合撒瓦那柏的初代培养。
实验例3不同浓度的6-BA对初代培养效果的影响
同样对数据进行方差分析,不同6-BA浓度间的F=1.04<3.34=F0.05(3,14),故四种6-BA浓度对初代培养无显著影响。由说明书附图2可得:随着6-BA浓度的增加,萌发率不断降低,培养基中加入了第1种6-BA浓度的撒瓦那柏外植体萌发率最高,污染率、死亡率最低,可知培养基中加入第1种(及不添加)6-BA对撒瓦那柏初代培养效果较好。
实验例4不同浓度的NAA对初代培养效果的影响
同样对数据进行方差分析,不同NAA浓度间的F=0.52<4.07=F0.05(3,8),故四种NAA浓度对初代培养无显著影响。由说明书附图3可知:培养基中加入了第2种NAA浓度的撒瓦那柏外植体萌发率最高,污染率、死亡率最低,可得培养基中添加第2种(及0.05mg/L)NAA有利于撒瓦那柏的初代培养。
实验例4整个组培方法污染率和成活率考察
取同一批次的撒瓦那柏,分别按照本发明实施例3、4和5方法进行初代组培,分别设为实施例3组、4组和5组;
另取以上相同批次的撒瓦那柏,按照现有技术中进行初代组培,作为对照组。
各组分别培养17天后对外植体的污染率和成活率进行统计,结果下见表2
表2各组植株移栽成活率
由上表1结果可得,本发明实施例组将各种因素组合,所得外植体污染率大大降低,成活率大大提高,并且实施例3组的效果最佳;相比较对照组,本发明初代组培方法,能够显著降低撒瓦那柏外植体的污染率,并且显著提高其成活率。
此外,相比较对照组,本发明三个实施例组的撒瓦纳柏形成了更多分枝,并且没有出现玻璃化、褐化等现象。
Claims (5)
1.一种撒瓦那柏初代组培方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)培养基的配制:选择1/2MS培养基作为基础培养基,加入蔗糖和琼脂,再加入萘乙酸,萘乙酸的浓度为0.05-1mg/L,调节pH值,灭菌,即得;
(2)外植体处理:选择不带芽茎尖作为外植体,清洗,消毒;消毒方法为:先用75%酒精处理30秒,再用0.1%的升汞浸泡5-8min,最后用无菌水冲洗5次,残留的水分用无菌滤纸吸取;
(3)接种培养:将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去,插入步骤(1)所得培养基中,置于培养室内培养。
2.根据权利要求1所述的撒瓦那柏初代组培方法,其特征在于,所述步骤(1)中蔗糖和琼脂的浓度分别为30g/L和7g/L。
3.根据权利要求1所述的撒瓦那柏初代组培方法,其特征在于,所述步骤(1)中pH值为5.8~6.0,灭菌条件为:121℃高压下灭菌25min。
4.根据权利要求1所述的撒瓦那柏初代组培方法,其特征在于,所述步骤(2)中清洗方法为:先用洗衣粉水溶液浸泡干净后,再用纯水冲洗2小时。
5.根据权利要求1所述的撒瓦那柏初代组培方法,其特征在于,所述步骤(3)中培养室的培养条件为:光照16h/d,光照度为2000lx,温度控制在(25±2)℃。
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