CN105102981A - 免疫学检测方法和免疫学检测试剂 - Google Patents

免疫学检测方法和免疫学检测试剂 Download PDF

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Abstract

本发明的目的是提供一种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段(以下，“包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段”简称为“针对抗原的抗体片段”)的抗原-抗体反应检测样品中的分析物(抗原)的方法，所述方法抑制由所述抗体片段引起的非特异性反应。更具体地，本发明提供一种通过使用针对抗原的抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤：a)使样品与变性的抗体片段接触；和b)在步骤a)后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触，所述方法抑制非特异性的反应。

Description

免疫学检测方法和免疫学检测试剂
技术领域
本发明涉及一种抑制方法和用于抑制非特异性反应的试剂(非特异性反应抑制剂)以及使用所述试剂的免疫测定，并且更具体地涉及抑制方法和用于抑制非特异性反应的试剂，其特征在于使用固定在不溶性载体上的抗体片段的免疫测定。
背景技术
临床化学领域中，用于测量样本中的分析物的一种通用方法是使用针对分析物(抗原)的抗体的免疫测定。具体地，使用固定在不溶性载体上的抗体的免疫凝集反应法和免疫色谱法在灵敏性和可用性方面具有优点，因此，它们成为用于多种临床检查项目的通用测量方法。
由于近来在测量准确性方面的提高，避免免疫测定中的非特异性反应成为体外诊断试剂研发中的一个问题。非特异性反应是这样的现象：其中样品中的某种因子与用作免疫测定要素的作为试剂的组成成分的抗体反应，并且产生假信号，这导致对正确的测量的干扰。发现非特异性反应的一个引起因素是异好性抗体和类风湿因子(RF)。
异好性抗体是下述人抗体的总称，所述抗体表现出针对构成免疫测定的主要成分的动物来源的抗体的反应性，并且已知HAMA(人抗小鼠抗体)是代表性的抗体。由于提议异好性抗体可以在不知不觉的情形下(如饮食，与动物接触，和施用生物学药物)通过抗原致敏产生，并且在来自未暴露于抗原的人的样品中的抗体可以表现出异好性(heterophilicity)，所以其原因目前尚没有详细或以统一方式澄清。另一方面，由于类风湿因子在类风湿性关节炎患者中出现，并且已知识别免疫球蛋白(抗体)的Fc区，因此，认为类风湿因子的概念不同于异好性抗体的概念；然而，二者在关于与动物来源的抗体的反应性方面都具有共同的特征，并且已知二者实际上是人IgG或IgM(所谓的自体抗体)，如非专利文献1所述。
在常规方法中，通过去除Fc区域获得的抗体片段(下文定义)，Fab或F(ab′)2，用作用于体外诊断试剂的抗体，以减少非特异性反应，并且所述方法在抑制类风湿因子的作用方面特别有效。另外地，作为成分包含在非专利文献2和3所述的抗-人IgM单克隆抗体中的异好性阻断剂HBR由SCANTIBODIES商业化作为抑制非特异性反应的添加剂，所述非特异性反应是由于与Fab结合的异好性抗体导致。还已经设计了其他方法，包括在专利文献1中所述的方法，所述方法包括向由与制备用于测量的抗体的物种相同物种的动物制备的IgM种类天然抗体中加入多克隆抗体；专利文献2中所述的方法，所述方法包括向类风湿因子的识别区加入多种动物抗体；和专利文献3中所述的抑制非特异性反应的方法，所述方法包括使用能够凝集人IgM的单一种类的抗人IgM单克隆抗体。
然而，仅通过常规对策不能充分抑制非特异性反应，并且已经发现，在一些样本中，所述对策本身引起非特异性反应。
引用列表
专利文献
专利文献1：JPH11-287801A
专利文献2：JPH07-012818A
专利文献3：WO2010/026758
非专利文献
非专利文献1：ClinicalChemistry(临床化学)；第23卷增刊175a-1至175a-10(1994)
非专利文献2：AdvertisingMaterialforHeterophilicBlockingReagentHBR(NAGASE&CO.,LTD.,1993)
非专利文献3：CLIN.CHEM.(临床化学)45/7,942-956(1999)
发明概述
技术问题
本发明涉及一种抑制方法和非特异性反应抑制剂以及使用所述抑制剂的免疫测定，更具体地，本发明要解决的问题是提供用于抑制非特异性反应的方法和试剂，其特征在于使用固定在不溶性载体上的抗体片段的免疫测定。
问题的解决方案
作为解决该问题的深入研究的结果，本发明人已经发现，在使用其上固定有抗体片段的不溶性载体的测量方法中，可以在使样品与其上固定有抗体片段的不溶性载体接触之前或同时使表现出不能通过常规对策使用全长、非片段化的抗体(以下还称为完整抗体)抑制非特异性反应的样品与变性的抗体片段接触而抑制非特异性反应，由此完成了本发明。因此，本发明的目的是涉及使用变性的抗体片段抑制非特异性反应的方法。
本发明人已经令人惊讶地发现，即使变性的抗体片段和固定在不溶性载体上的抗体片段不是来源于相同的全长抗体，只要所述抗体片段是针对分析物抗原的抗体，就发挥本发明目的的非特异性反应抑制作用。因此，本发明的另一个目的是涉及包含变性的抗体片段的非特异性反应抑制剂，并且另一个目的是涉及使用所述抑制剂的免疫测定和免疫测定剂。
具体地，本发明具有下述方案。
[1]一种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段(以下“包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段”简称为“抗体片段”)的抗原-抗体反应检测样品中的所述分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使样品与变性的抗体片段接触；
b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触。
[2][1]的检测方法，其中所述变性的抗体片段识别与所述固定在不溶性载体上的抗体片段所识别的表位相同或不同的表位。
[3][1]或[2]的检测方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区，并且独立地固定在不溶性载体上。
[4]一种在通过使用抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法中抑制非特异性反应的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使样品与变性的抗体片段接触；
b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触。
[5][4]的抑制非特异性反应的方法，其中所述变性的抗体片段识别与所述固定在不溶性载体上的抗体片段识别的表位相同或不同的表位。
[6][4]或[5]的抑制非特异性反应的方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区，并且独立地固定在不溶性载体上。
[7][4]至[6]中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应由用于测量的抗体片段引起。
[8][4]至[7]中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应是用包含全长抗体的用于抑制非特异性反应的试剂不能抑制的反应。
[9][8]的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体抗体是全长抗人IgG抗体或抗人IgM抗体或抗人IgA抗体。
[10][9]的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体是由杂交瘤FERMBP-11134产生的单克隆抗体。
[11][9]的抑制非特异性反应的方法，其中包含全长抗体的用于抑制非特异性反应的试剂是HBR(SCANTIBODIES)。
[12]一种用于通过抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的试剂，所述试剂包含：
1)不溶性载体，其上固定有针对所述分析物抗原的抗体片段；和
2)针对所述分析物抗原的变性的抗体片段。
[13][12]的试剂，其中所述变性的抗体片段识别与固定在不溶性载体上的抗体片段所识别的表位相同或不同的表位。
[14][12]或[13]的试剂，其中固定在1)不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区，并且独立地固定在不溶性载体上。
[15][12]或[13]的试剂，其还包含：3)包含全长抗体的用于抑制非特异性反应的试剂。
[16]一种在通过使用抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法中抑制非特异性反应的试剂，所述抑制非特异性反应的试剂包含变性的抗体片段作为活性成分。
发明的有益效果
本发明避免非特异性反应的方法能够允许抑制通过使用完整抗体的常规方法不能抑制的非特异性反应。
由于抑制了通过已知的抑制剂不能避免的非特异性反应，因此，包含本发明的非特异性反应抑制剂的免疫测定法和免疫测定剂能够给出更准确的测量值。
附图简述
图1是试剂校准曲线的图表(实施例2)。
实施方案描述
(抗体片段)
抗体片段是来源于抗体的片段，并且包含是抗原结合区的Fab结构，并且常用Fab和F(ab′)2。所述抗体片段典型地通过以常规方式用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶酶处理完整的抗体(非片段化的全长抗体)去除Fc区域产生，或者可以通过基因重组合成或改变，没有特别限制。
(不溶性载体)
不溶性载体没有特别的限制，并且优选地选自由包括下述的材料制成的不溶性载体颗粒：由合成聚合物制成的胶乳，金属胶体，硅石，矾土，炭黑，陶瓷或磁性材料。合成聚合物优选是选自下述的一种或多种聚合物：聚苯乙烯，苯乙烯-磺酸共聚物，苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物，丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物，乙烯氯-丙烯酸酯共聚物，和乙酸乙烯酯-丙烯酸酯共聚物。在免疫色谱法中，诸如使用膜用该膜上的检测线检测标记的抗体、抗原和检测抗体的三元复合物的那些方法，认为标记的抗体的标记部分和检测线部分的膜包含在具有本发明的固定的抗体片段的不溶性载体中。
(抗体片段在载体上的固定)
将抗体片段固定在不溶性载体上的方法没有特别的限制，并且可以通过常用的物理和化学的结合方法实施。
在使用免疫凝集法检测的情形中，固定在不溶性载体上的抗体必须包括至少两种用于识别抗原上的不同表位的抗体(如果所述抗原不是多价抗原)；在本发明中，可以使用一种或多种抗体片段；所有的抗体都可以是抗体片段；并且下文所述的实施例示例了两种抗体片段独立地固定在不溶性载体上的情形。
(非特异性反应)
本发明抑制非特异性反应的方法能够有效地抑制这样的非特异性反应，所述非特异性反应在使用固定在不溶性载体上的完整抗体的免疫测定中不发生，但是在使用固定在不溶性载体上的由所述完整抗体产生的抗体片段的方法中表现，并且其不能通过使用完整抗体的常规方法抑制。使用完整抗体的常规非特异性反应抑制剂的实例包括抑制由HAMA、异好性抗体和类风湿因子(RF)引起的非特异性反应的试剂，并且包括，例如，包含全长抗人IgG抗体或抗人IgM抗体的抑制剂，并且更具体地，包含异好性阻断剂HBR(SCANTIBODIES)或由杂交瘤FERMBP-11134产生的单克隆抗体作为活性成分的抑制剂。
(变性的抗体片段)
用于使抗体片段变性的方法没有特别的限制，并且可以通过施加典型用于常规蛋白变性的热、酸、碱、还原剂、离液盐等而实行，并且特别优选导致不可逆的变性作用的处理方法。关于片段化和变性的顺序，全长抗体可以在片段化之后变性，或者全长抗体可以在变性之后片段化。在本说明书中，“一个/所述一个或多个变性抗体片段”还可以称为“变性的抗体片段”或“变性抗体片段”，并且这些术语作为同义词使用，除非另外指明。
抗体片段变性的程度可以是在任意水平，只要与不溶性载体上的抗体片段相比，针对抗原的反应性丧失或反应性减小，而不抑制用于抗原测量的主反应至实际水平以下。在变性操作时，可以允许蛋白成分，如BSA，丝胶蛋白，和阻断肽片段(TOYOBOCO.LTD)和甘油共存，用于调节变性水平。
(应用)
本发明的非特异性反应抑制剂可用于使用固定在不溶性载体上的抗体片段的任意免疫测定，并且可以优选地用作用于样品预处理的试剂或用作免疫测定/试剂的组成成分的一部分。所述免疫测定具体包括常用的颗粒增强的免疫凝集法，作为简单检查方法的免疫色谱法和使用专用仪器的化学发光-与荧光-酶方法。
(添加剂)
本发明的非特异性反应抑制剂和包含所述抑制剂的免疫测定剂可以包含缓冲液、蛋白、肽、氨基酸、核酸、脂质、磷脂、糖、无机盐、表面活性剂、防腐剂等，只要其非特异性反应抑制作用不被抑制即可。
(测量目标物质或分析物抗原)
本发明的抑制非特异性反应的方法可用于任何物质，只要能产生其抗原是测量的目标物质的抗体片段即可。所述测量目标物质可以是蛋白、肽、氨基酸、核酸、脂质、糖、核酸和半抗原，并且没有特别限制，只要分子理论上是可测量的即可。实例包括CRP(C-反应蛋白)，Lp(a)，MMP-3(基质金属蛋白酶-3)，抗-CCP(环瓜氨酸化的(citrullinated)肽)，抗体，抗-磷脂抗体，RPR，IV型胶原，PSA，BNP(脑利钠肽)，NT-proBNP，胰岛素，微白蛋白，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，RF(类风湿因子)，CA-RF，KL-6，PIVKA-II，FDP，D-二聚体，SF(可溶性纤维蛋白)，TAT(凝血酶-抗凝血酶III复合物)，PIC，PAI，因子XIII，胃蛋白酶原I/II，苯妥英，苯巴比妥，卡马西平，丙戊酸和茶碱。
尽管可以实现针对其的非特异性反应的抑制的分析物抗原的浓度取决于抗原的种类、抗体的种类和其他条件而变化，但是，特别理想的是作用在一定范围内产生，例如，包括血清中的分析物抗原的正常浓度，并且，如果测量目标是PSA时，理想的是，以接近4ng/mL的浓度水平发挥抑制作用，该浓度水平定义为临床截点值，诸如在下述实施例中的2-5ng/mL。
本发明的检测包括用于检验样品中存在/不存在分析物抗原的定性检测，并且还意指定量检测(即，测量)，诸如定量检验样品中分析物抗原的丰度。因此，在本说明书中，术语“检测”、“定量”和“测量”旨在广泛地解释为包括存在的证据和/或作为分析物的抗原的定量，除非另外指明。
实施例
尽管将通过用免疫测定和免疫测定剂的实施例详细描述本发明的一部分，所述免疫测定和免疫测定剂应用使用变性抗体片段和包含变性抗体片段的非特异性反应抑制剂来抑制非特异性反应的方法，但是本发明并不限于此。
实施例1：分析表现出非特异性反应的样本和通过本发明抑制非特异性反应
(1)制备抗体片段
以常规方式由抗-PSA(前列腺特异性抗原)单克隆抗体63279IgG(由保藏号为FERMBP-11454的杂交瘤产生的单克隆抗体)产生抗体片段并纯化。
具体地，将63279IgG溶液与0.2M柠檬酸溶液(pH3.5)等量混合并加入为IgG的一百三十分之一(1/130)量(w/w)的胃蛋白酶后，将溶液在37℃温育4小时，然后加入十分之一(1/10)体积的2MTris溶液用于中和。将终溶液进行凝胶过滤方法，以获得纯化的63279F(ab')2。
(2)制备抗体结合的胶乳溶液
将用20mM甘氨酸缓冲液(pH9.0)稀释至各自的浓度的0.4％的胶乳溶液(平均粒径为300nm)与制备的在280nm波长具有0.4Abs/mL的吸光度的63279F(ab')2溶液等量混合(1份(体积)+1份(体积))，并且搅拌约一小时，然后加入0.1份体积的10％BSA，并将溶液搅拌约一小时。通过离心去除上清后，将沉淀重悬在5mMMOPS缓冲液(pH7.0)中，并且调节至在600nm波长具有1.5Abs/mL的吸光度，以获得63279F(ab')2-结合的胶乳溶液。通过使用63279IgG(没有片段化的全长抗体)替代63279F(ab')2制备63279IgG-结合的胶乳溶液作为对照。
(3)制备含有由完整的抗体制成的非特异性反应抑制物质的处理液
通过向含有氯化钾、BSA和PVP-K90的HEPES缓冲液中加入非特异性反应抑制物质，即HBR(SCANTIBODIES)和抗-IgM单克隆抗体73224(即由保藏号为FERMBP-11134的杂交瘤产生的单克隆抗体)至终浓度100μg/mL而制备处理液。这些非特异性反应抑制物质都是全长IgG，即，完整的抗体。
(4)制备变性的抗体片段
将在280nm波长吸光度为4.0Abs/mL的含有63279F(ab')2的PBS溶液在65℃加热30分钟，以获得变性的63279F(ab')2溶液。
(5)分析方法
将表现出PSA-阳性反应的血清(SLRResearch,Lot.101409，具有2.36ng/mL的所示的PSA浓度；以下称为所示值)用作样品，并向所述样品中加入上述(3)中调节的处理液和上述(2)中调节的抗体结合的胶乳溶液，以从吸光度的变化证实非特异性反应的存在。由于PSA不是在分子中具有多个相同表位的多价抗原，因此，即使当样品中的PSA与抗体结合的胶乳反应时，单独的单种抗体结合的胶乳也不能形成凝集，由此，吸光度通常没有变化。因此，认为在该分析方法中产生的吸光度变化归因于非特异性的凝集。分析条件如下所述：
(分析条件)
分析装置：日立7180自动化分析仪
S/R比率：样品处理液-抗体结合的胶乳溶液＝9.6–60–60(单位为μL)
测量波长：800/570nm(亚波长/主波长)
分析方法：双终点法(光度计点19–34)
(6)验证本发明的变性的抗体片段的作用
在上述(5)的分析中表现出吸光度增加并且其中认识到非特异性反应的血清样品Lot.101409分别用含有变性的63279F(ab')2的PBS溶液或不含有变性的63279F(ab')2的PBS溶液适当稀释，以获得进行测量的样本或对照样品。
测量结果显示在表1中。
从这一结果，在表现出吸光度增加的样品Lot.101409中证实存在与63279F(ab')2-结合的胶乳的非特异性反应。没有发现与用作对照的63279IgG-固定的胶乳的非特异性反应的存在，并且与63279F(ab')2-固定的胶乳的非特异性反应的存在不能被由完整抗体制成的非特异性反应抑制物质(HBR或抗-IgM单克隆抗体)抑制(数据未显示)，并且因此，推测所述反应是由抗体片段引起的非特异性反应。
当用在280nm波长下吸光度为0.4Abs/mL的包含变性的63279F(ab')2的PBS溶液稀释两倍后分析样品Lot.101409时，吸光度的变化基本上为零，并且证实非特异性反应得到了抑制。当样品用不含变性的63279F(ab')2的PBS溶液稀释两倍时，非特异性反应不被抑制，尽管观察到本身由于稀释导致的吸光度减小。
[表1]
PI：本发明，trmt：处理，w：具有单位(mAbs)
实施例2：包含本发明的用于抑制非特异性反应的试剂的免疫测定剂
(1)寻找表现出非特异性反应抑制作用的变性的抗体片段
为寻找表现出非特异性反应抑制作用的抗体片段，按照实施例1制备多种抗-PSA单克隆抗体的变性的F(ab')2，并且得到变性的63284F(ab')2。63284-抗体可以与用于实施例1的63279-抗体组合以进行夹心ELISA测量，并且由此识别的表位不同于63279-抗体识别的表位。
(2)制备第一试剂溶液
通过向实施例1所述的处理液中加入在280nm波长下吸光度为0.0003Abs/mL的变性的63279F(ab')2或变性的63284F(ab')2而获得第一试剂溶液。没有变性的抗体片段的处理液用作对照第一试剂溶液。
(3)制备第二试剂溶液
将实施例1中制备的63279F(ab')2-固定的胶乳溶液和以同样方法制备的63291(由保藏号为FERMBP-11455的杂交瘤产生的单克隆抗体)F(ab')2-固定的胶乳溶液分别用5mMMOPS缓冲液(pH7.0)调节至600nm波长下吸光度为1.5Abs/mL，并且以等量混合，以获得第二试剂溶液。通过组合两种分别结合识别不同表位的抗体片段的胶乳，可以在样品中形成PSA凝集，这能够允许对PSA浓度的计算。
(4)测量方法
将两种第一试剂溶液(含有变性的63279F(ab')2或变性的63284F(ab')2)和第二试剂溶液组合作为测量试剂，并且通过在下述条件下使用PSA校准物(SEKISUIMEDICALCo.,Ltd.)提前建立校准曲线，用来测量样品Lot.101409的PSA浓度。分析条件如下所述：
(分析条件)
分析装置：日立7180自动化分析仪
S/R比率：样品-第一试剂溶液-第二试剂溶液＝8–76–76(单位为μL)
测量波长：800/570nm(亚波长/主波长)
分析方法：双终点法(光度计点19-34)
校准物浓度：0,3.9,9.9(ng/mL)
算术表示：样条函数
通过参照所示的值获得样品Lot.101409的PSA浓度。
(5)结果
图1显示试剂的校准曲线。
与不含有变性的抗体片段的对照试剂相比，含有变性的63279F(ab')2的试剂具有减少约一半的吸光度。假设这是由于变性的63279F(ab')2与63279F(ab')2-固定的胶乳竞争并且抑制由于残留的对PSA的活性引起的凝集而发生的。另一方面，在使用含有识别与抗体片段(63279F(ab')2和63291F(ab')2)所识别的表位不同的表位的变性的63284F(ab')2的第一试剂组成测量系统的情形中，灵敏度减少约10％。
使用所述试剂对样品Lot.101409的测量值显示在表2中。
尽管对照试剂导致高于所示的值30％以上的测量值，但是其证实本发明含有变性的抗体片段的两种试剂都抑制非特异性反应的作用。PSA的正常浓度是4ng/mL以下，并且从临床观点来看，这对于确保接近该浓度附近的测量值的准确性是重要的。
特别地，优选将识别与用作免疫测定剂的主要成分的抗体片段所识别的表位不同的表位的抗体片段，如变性的63284F(ab')2，用作抑制本发明的非特异性反应的试剂，原因在于对试剂灵敏性的作用小。
[表2]
conc.：浓度，PI：本发明，Dn.：变性的单位：(ng/mL)
实施例3：分析具有非特异性反应的样品和本发明对非特异性反应的抑制2。
(1)制备抗体片段-固定的胶乳溶液
按照实施例1的方法从抗-MMP-3单克隆抗体82208IgG(由保藏号为FERMBP-11517的杂交瘤产生的单克隆抗体)产生抗体片段并纯化，并且用5mMMOPS缓冲液(pH7.0)调节至在600nm波长下的吸光度为3.0Abs/mL，以获得82208F(ab')2-固定的胶乳溶液。
(2)制备含有由完整的抗体制成的非特异性反应抑制物质的处理液
通过向含有氯化钠和BSA的Tris缓冲液中加入HBR(SCANTIBODIES)和抗-IgM单克隆抗体73224(二者为非特异性反应抑制物质)至终浓度100μg/mL而制备处理液。
(3)制备变性的抗体片段
按照实施例1所述的方法获得变性的82208F(ab')2溶液。
(4)样品和变性的抗体片段的处理
引起与82208F(ab')2-固定的胶乳的非特异性反应的血清选自RF阳性血清(TRINA)，并且用280nm波长下的吸光度为6.0Abs/mL的含有变性的82208F(ab')2的PBS溶液或用PBS溶液稀释十倍，以获得进行测量的样品或对照样品。
(5)分析方法
将(2)中调节的处理液和(1)中调节的抗体片段-固定的胶乳的溶液加入到(4)中调节的样品或对照样品中，以从吸光度的变化证实非特异性反应的存在和本发明的抑制作用。认为在本分析中发生的吸光度变化归因于非特异性凝集，如实施例1的情形一样。分析条件如下所述：
(分析条件)
分析装置：日立7180自动化分析仪
S/R比率：样品-处理液-抗体-固定的胶乳的溶液＝2.0–100–33(单位为μL)
测量波长：800/570nm(亚波长/主波长)
分析方法：双终点法(光度计点19-34)
(6)结果
结果显示在表3中。
尽管在对照样品中观察到由于非特异性反应引起的灵敏度增加，但是，在样品中吸光度的变化基本上为零，并且证实了非特异性反应的抑制。[表3]
单位(mAbs)
PI：本发明，trmt：处理，w：具有，Ctrl.：对照，den：变性的
从实施例1-3的结果，证实本发明抑制非特异性反应的方法是可广泛适用的，而与检测的靶标抗原(分析物)的类型和抗体片段的类型无关。
工业适用性
本发明抑制非特异性反应的方法能够抑制由抗体片段引起的并且不能通过使用完整抗体的常规方法抑制的非特异性反应。
保藏号
[引用保藏的生物材料]
(1)产生63279-抗体的杂交瘤63279
i)生物材料保藏的保藏机构的名称和地址
独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(InternationalPatentOrganismDepositary,NationalInstituteofAdvancedIndustrialScienceandTechnology)
日本，茨城，Tsukuba，Higashi，Central6,1-1-1(Central6,1-1-1Higashi,Tsukuba,Ibaraki,Japan)(邮政编码：305-8566)
ii)在i)的保藏机构的生物材料保藏日期
2010年2月19日(原始保藏日期)
2012年1月31日(从原始保藏转移至根据布达佩斯条约的保藏的日期)
iii)由i)的保藏机构为保藏指定的保藏号
FERMBP-11454
(2)产生63291-抗体的杂交瘤63291
i)生物材料保藏的保藏机构的名称和地址
独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(InternationalPatentOrganismDepositary,NationalInstituteofAdvancedIndustrialScienceandTechnology)
日本，茨城，Tsukuba，Higashi，Central6,1-1-1(Central6,1-1-1Higashi,Tsukuba,Ibaraki,Japan)(邮政编码：305-8566)
ii)在i)的保藏机构的生物材料保藏日期
2010年2月19日(原始保藏日期)
2012年1月31日(从原始保藏转移至根据布达佩斯条约的保藏的日期)
iii)由i)的保藏机构为保藏指定的保藏号
FERMBP-11455
(3)产生82208-抗体的杂交瘤82208
i)生物材料保藏的保藏机构的名称和地址
独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(InternationalPatentOrganismDepositary,NationalInstituteofAdvancedIndustrialScienceandTechnology)
日本，茨城，Tsukuba，Higashi，Central6,1-1-1(Central6,1-1-1Higashi,Tsukuba,Ibaraki,Japan)(邮政编码：305-8566)
ii)在i)的保藏机构的生物材料保藏日期
2012年1月27日(原始保藏日期)
2012年11月22日(从原始保藏转移至根据布达佩斯条约的保藏的日期)
iii)由i)的保藏机构为保藏指定的保藏号
FERMBP-11517
(4)产生抗-IgM抗体的杂交瘤73224
i)生物材料保藏的保藏机构的名称和地址
独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(InternationalPatentOrganismDepositary,NationalInstituteofAdvancedIndustrialScienceandTechnology)
日本，茨城，Tsukuba，Higashi，Central6,1-1-1(Central6,1-1-1Higashi,Tsukuba,Ibaraki,Japan)(邮政编码：305-8566)
ii)在i)的保藏机构的生物材料保藏日期
2008年9月19日(原始保藏日期)
2009年6月9日(从原始保藏转移至根据布达佩斯条约的保藏的日期)
iii)由i)的保藏机构为保藏指定的保藏号
FERMBP-11134

Claims (16)

1.一种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段(以下“包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段”将简称为“抗体片段”)的抗原-抗体反应检测样品中的所述分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使样品与变性的抗体片段接触；
b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触。
2.权利要求1的检测方法，其中所述变性的抗体片段识别的表位与所述固定在不溶性载体上的抗体片段所识别的表位相同或不同。
3.权利要求1或2的检测方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区并且固定在各自的不溶性载体上。
4.一种在通过使用抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法中抑制非特异性反应的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使样品与变性的抗体片段接触；
b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触。
5.权利要求4的抑制非特异性反应的方法，其中所述变性的抗体片段识别的表位与所述固定在不溶性载体上的抗体片段所识别的表位相同或不同。
6.权利要求4或5的抑制非特异性反应的方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区并且固定在各自的不溶性载体上。
7.权利要求4-6中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应是由用于测量的抗体片段引起的反应。
8.权利要求4-7中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应是用包含全长抗体的非特异性反应抑制剂不能抑制的反应。
9.权利要求8的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体是全长抗人IgG抗体或抗人IgM抗体或抗人IgA抗体。
10.权利要求9的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体是由杂交瘤FERMBP-11134产生的单克隆抗体。
11.权利要求9的抑制非特异性反应的方法，其中所述包含全长抗体的非特异性反应抑制剂是HBR(SCANTIBODIES)。
12.一种用于通过抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的试剂，所述试剂包含：
1)不溶性载体，其上固定有针对所述分析物抗原的抗体片段；和
2)针对所述分析物抗原的变性的抗体片段。
13.权利要求12的试剂，其中所述变性的抗体片段识别的表位与所述固定在不溶性载体上的抗体片段所识别的表位相同或不同。
14.权利要求12或13的试剂，其中固定在1)不溶性载体上的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区并且固定在各自的不溶性载体上。
15.权利要求12或13的试剂，其还包含：3)包含全长抗体的非特异性反应抑制剂。
16.一种在通过使用抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法中抑制非特异性反应的试剂，所述抑制非特异性反应的试剂包含变性的抗体片段作为活性成分。
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