CN105079422A - 一种复方川贝精片的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种复方川贝精片及其制备方法，通过下述方法制得：将麻黄、川贝母用适当浓度的乙醇循环浸泡提取浸出液；用超临界CO2萃取法提取陈皮挥发油，以乙醇做夹带剂，精制后用β-环糊精包含挥发油；连续动态多重萃取法提取麻黄、川贝母、五味子、远志、桔梗和提取挥发油残余药渣药液；将浸出液和萃取液合并浓缩加入辅料制成软材，拌入法半夏粉和β-环糊精包含的挥发油，制成每片重量在0.8g的复方川贝精片。该复方川贝精片中，不同溶解性质的有效成分含量均有提高，且稳定性增强，同时最大程度的考虑到在中成药制备的过程中君药药对配伍的药性发挥，本发明公开的制备方法得到的复方川贝精片能够宣肺化痰、止咳平喘的功效，适用于风寒咳嗽、痰喘引起的咳嗽气喘、胸闷、痰多；急、慢性支气管炎，且对胃肠的刺激性小，副作用低，具有良好的功效。

Description

一种复方川贝精片的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种复方川贝精片以及其制备方法

技术背景：

中药的组方是在辨证的基础上，根据病情的需要，利用药物的七情，规定必要的药量，配伍组织成方。其原则分为“君、臣、佐、使”四个部分，指各味药的不同作用，《素问·至真要大论》说：“主药之谓君，佐君之谓臣，应臣之谓使。”清代吴仪洛进一步解释说：“主病者，对症之要药也，故谓之君。君者味数少而分量重，赖之以为主也。佐君以为臣，味数稍多，分量稍轻，所以匡君之不迨也。应臣者谓之使，数可出入，而分量更轻，所以备通行向导之使也。此则君臣佐使之义也。”不同的组方的配伍原则针对不同的病症，有非常明确的药用意义，复方川贝精片的组方中麻黄散寒宣肺平喘；川贝母清热化痰，润肺止咳，兼制麻黄温燥耗散之性，两药相辅相成，既宣肺又清热，共奏宣肺化痰，止咳平喘功效，为君药。半夏降逆和胃，燥湿祛痰；陈皮理气宽中，燥湿化痰；桔梗宣肺利咽止咳，共为臣药。五味子和远志为佐药。甘草和中化咳，调和诸药为使药，诸药合用，共奏宣肺化痰，止咳平喘之功。

李时珍在本草纲目中对于中药的制备就有如下指导：“凡服汤药虽令物专精，修治如法，而煎煮鲁莽造次，水火不良，火候失度，则药品失效。”由于现代生活需求的转变和制药工艺的精进，中成药变成普方、古方主要的存在形式被广大患者所接受，所以中成药的制备工艺选择和优化是保证药效的关键环节。银翘散作为解表古方药的代表，在制法上也强调“香气大出，即取服，勿过煮”，怕“香气”流失就是对挥发油有效成分保留，挥发油在解表功效上发挥着重要的作用。但中药材的有效成分不单单是挥发油部分，川贝母中含有生物碱类化合物15个、核苷类化合物8个、有机酸类化合物2个。不拘泥于某化学成分或适合纯化学成分的药理模型，而是考虑到综合成分的作用。药料提取过程中有些成分可能相互作用，生成新的化合物，从药物代谢过程考虑，可能是体内发挥药效过程中的复合作用。

本发明的组方是采用中国药典公布的复方川贝精片的组方，在制法上利用浸出液浆化和动态提取法权衡组方配伍中各味中药的地位和性质，利用现代技术的同时保证其稳定性以达到增强药效并减小副作用和毒性的目的。

2010版药典的制备方法如下：麻黄浸膏适量(相当于盐酸麻黄碱和盐酸伪麻碱的总量2.1g)、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g以上八味，麻黄浸膏系取麻黄适量，加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩成相对密度为1.40(50℃)的清膏，干燥，测定盐酸麻黄碱的含量，即得。麻黄浸膏粉碎成细粉，川贝母、法半夏粉碎成细粉；陈皮蒸馏提取挥发油，挥发油备用；药渣加水煎煮一次，滤过；五味子、远志、桔梗用65％乙醇加热回流提取二次，滤过，合并滤液，回收乙醇，与陈皮煎液合并，浓缩成稠膏，加入甘草浸膏、川贝母和法半夏的细粉及适量辅料，混匀，干燥，粉碎，加入麻黄浸膏细粉，混匀，干燥，喷加陈皮挥发油，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。

发明内容：

本发明的一个目的是提供一种复方川贝精片；

本发明的另一个目的是提供一种复方川贝精片的制备方法。

为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

复方川贝精片的处方：麻黄210g、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g

其辅料可选硬脂酸镁、羟丙基甲基纤维素中的一种或两种。

本发明通过以下方法实现，其制备方法为

1、麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50％的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50％的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50％的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40(50℃)的浸膏，干燥。

2、超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95％的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

3、五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后粉碎成20目粉，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95％乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至60～75℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测。向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5～5％/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为50％；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50％乙醇为溶剂搅拌，加热至60～75℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5～5％/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为10％。将提取液滤过至储液罐；将(1)(2)药渣投入提取仓2，向提取仓2内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5～5％/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为10％，将提取液滤过至储液罐，低压浓缩至稠膏。

4、法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用。

5、复方川贝精片的制备

将(1)得到的浆化过的浸膏、(2)得到的β-环糊精包含挥发油和(3)得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。

本发明的有益效果为：利用麻黄、川贝母药对的配伍规律得到，药效佳并具有配伍特殊性质的复方川贝精片。

具体实施方式

实施例1.复方川贝精片

处方：麻黄210g、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g

辅料：淀粉、蔗糖和β-糊精

制成：500片0.8g

制备方法：

(1)麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50％的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50％的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50％的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40(50℃)的浸膏，干燥。

(2)超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95％的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

(3)五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后微波粉碎，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95％乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至60℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测。向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.35％/min，反应2.5h，至酒精浓度为50％；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50％乙醇为溶剂搅拌，加热至60～75℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.35％/min，反应2.5h，至酒精浓度为10％。将提取液滤过至储液罐；将(1)(2)药渣投入提取仓2，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为3％/min，反应2.5h，至酒精浓度为10％，将提取液滤过至储液罐。

(4)法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用；

(5)复方川贝精片的制备

将(1)得到的浆化过的浸膏、(2)得到的β-环糊精包含挥发油和(3)得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。

实施例2

处方：麻黄210g、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g

辅料：淀粉、蔗糖和β-糊精

制成：500片0.8g

制备方法：

(1)麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50％的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50％的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50％的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40(50℃)的浸膏，干燥。

(2)超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95％的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

(3)五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后粉碎成最粗粉，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95％乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至70℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测。向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5％/min，反应1.5h，至酒精浓度为50％；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50％乙醇为溶剂搅拌，加热至70℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5％/min，反应1.5h，至酒精浓度为10％。将提取液滤过至储液罐；将(1)(2)药渣投入提取仓2，向提取仓2内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为3％/min，反应1.5h，至酒精浓度为10％，将提取液滤过至储液罐。

(4)法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用；

(5)复方川贝精片的制备

将(1)得到的浆化过的浸膏、(2)得到的β-环糊精包含挥发油和(3)得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。

实施例3

处方：麻黄210g、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g

辅料：淀粉、蔗糖和β-糊精

制成：500片0.8g

制备方法：

(1)麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50％的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50％的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50％的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40(50℃)的浸膏，干燥。

(2)超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95％的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

(3)五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后微波粉碎，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95％乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至75℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测。向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为4％/min，反应1h，至酒精浓度为50％；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50％乙醇为溶剂搅拌，加热至75℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为4％/min，反应1h，至酒精浓度为10％。将提取液滤过至储液罐；将(1)(2)药渣投入提取仓2，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为5％/min，反应1h，至酒精浓度为10％，将提取液滤过至储液罐。

(4)法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用；

(5)复方川贝精片的制备

将(1)得到的浆化过的浸膏、(2)得到的β-环糊精包含挥发油和(3)得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。

比较例1

处方：纳米麻黄浸膏适量132份、纳米川贝母120份、纳米陈皮300份、纳米桔梗300份、纳米五味子170份、纳米甘草240份、纳米法半夏160份、纳米远志170份、纳米浮海石40份、纳米罂粟壳160份、纳米紫苑40份。

制备方法：

在GMP净化车间，将上述纳米中药饮片或粉剂按所述比例配好混合后，依中国药典2000年版二部制剂胶囊剂标准，不添加辅料，不制粒，直接用全自动胶囊分装机封装胶囊，制成胶囊剂，每粒胶囊含药量0.5g。

比较例2

处方：麻黄浸膏适量(相当于盐酸麻黄碱和盐酸伪麻碱的总量2.1g)、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g。

辅料：硬脂酸镁和淀粉

制成：0.5g/片

制备方法：

麻黄浸膏系取麻黄适量，加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩成相对密度为1.40(50℃)的清膏，干燥，测定盐酸麻黄碱的含量，即得。麻黄浸膏粉碎成细粉，川贝母、法半夏粉碎成细粉；陈皮蒸馏提取挥发油，挥发油备用；药渣加水煎煮一次，滤过；五味子、远志、桔梗用65％乙醇加热回流提取二次，滤过，合并滤液，回收乙醇，与陈皮煎液合并，浓缩成稠膏，加入甘草浸膏、川贝母和法半夏的细粉及适量辅料，混匀，干燥，粉碎，加入麻黄浸膏细粉，混匀，干燥，喷加陈皮挥发油，混匀，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，

比较例3

麻黄浸膏的制备：麻黄浸膏系取麻黄适量，加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，减压浓缩成相对密度为1.40(50℃)的清膏，干燥，测定盐酸麻黄碱的含量，即得。

实验例：1.本产品各步骤中制备工艺的研究

1.1药典中的麻黄碱含量测定

麻黄浸膏照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(3:97)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不得低于4000。

对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加盐酸甲醇(1→1000)制成每1ml含盐酸麻黄碱0.25mg、盐酸伪麻黄碱0.1mg的混合溶液，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇-浓氨试液(19:1)的混合溶液至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取实施例1～3、对比例1～3各8g，除去糖衣，精密称定，研细，取适量(约相当于1片的重量)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/L的盐酸溶液25ml，密塞，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液5ml，加在固相萃取柱(以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂的固相萃取商品柱，规格：6cc/200mg，30μm；6cc/150mg，30μm。用甲醇、水各5ml预洗)上，依次用0.1mol/L盐酸溶液和甲醇各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置5分钟，继用甲醇-浓氨试液(19:1)的混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液于5ml量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含麻黄浸膏以盐酸麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCL)和盐酸伪麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCL)的总量计，不得少于1.4mg.

1.2川贝母生物碱的含量测定

色谱条件：流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸(10mmol/L)甲酸胺，pH＝4(B)，梯度洗脱(0～15mim，85～75％B；15～23min，75％B；25～23min，55～75％B；35～40min，55～0％B)；柱温25℃；体积流量0.8ml/min；进样体积20μLELSD漂移管温度108℃；载气体积流量2.8L/min。

对照品溶液制备：取西贝母碱、贝母辛、贝母素甲和贝母素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含西贝母碱0.3mg、贝母辛0.2mg、贝母素甲0.3mg和贝母素乙0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取样品粉末(过60目筛)约3g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加5mL浓氨水密闭浸润1h，然后加入60mL二氯甲烷-甲醇(4∶1)混合溶剂超声处理1h，滤过，滤渣用20mL混合溶剂洗涤，合并滤液与洗液，蒸干，残渣用0.1mol/L盐酸溶解，准备进行混合型阳离子交换(MCX)固相萃取。先以3mL甲醇活化，而后加3mL水平衡MCX小柱；将0.1mol/LHCl溶液溶解的样品转移至已活化的MCX小柱内；用3mL0.1mol/LHCl及3mL甲醇依次洗涤小柱除杂；用2mL10％二乙胺甲醇溶液洗脱样品，洗脱液经氮气吹干后以1mL甲醇涡旋复溶，离心取上清液即得。

1.3总皂苷含量的测定

取川贝母原料10g、实施例1浆化浸膏10g、实施例1所得产品10g、比较例1～2所得各10g，精密称定，置索氏提取器中加甲醇150ml，回流提取至不呈里伯曼正反应,提取液减压浓缩至50ml,冷却后加入乙醚150ml，混匀,4℃放置12h,倾出上清液,沉淀用10ml乙醚洗涤,再用50ml甲醇加热溶解,然后用垂熔玻沙漏斗过滤.在滤液中加入150ml乙醚,4℃放置12h,用干燥至恒重垂熔玻沙漏斗过滤,抽干,干燥至恒重,减去漏斗重量,即为总皂苷的重量.

1.3有效成分稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进行测定，记录色谱图，以标准品为参照峰，计算特征峰的相对保留时间。结果各特征峰相对保留时间的RSD值均小于0.5％，说明样品溶液在24h内稳定。

实验例2动物模型药效学实验

2.1平喘作用

豚鼠雌雄不拘，体重在120～200g之间，分别放入容积为4L的玻璃罩中，用压力泵以53.3kPa压力喷入2％氯化乙酰胆碱和0.1％磷酸组胺等容混合液15秒钟，选用引喘潜伏期(即从喷雾开始到哮喘发作，及呼吸困难，张口呼吸的时间)不超过120秒的豚鼠35只，体重57±34g。于第二天随机分为7组。实施例和比较例得药均制成0.5％羧甲基纤维素混悬液，灌胃给药，灌胃容积均为1ml/100g体重。给药后1小时，按上述方法分别测定各鼠6分钟内引喘潜伏期即抽搐跌倒的时间。

结果：对照组全部动物均出现哮喘发作和最后抽搐跌倒，引喘潜伏期在20～56秒之间。舒喘灵组近4/7动物出现哮喘发作，其潜伏期比对照组显著为长(P<0.01)，仅1/7豚鼠350秒时出现抽搐跌倒；实施例1组有5/7动物出现哮喘发作，引喘潜伏期显著延长(P<0.01)，无抽搐跌倒；实施例2组有5/7动物出现哮喘发作，引喘潜伏期显著延长(P<0.01)，仅1只出现抽搐跌倒时间以较对照组为长；实施例3组有5/7动物出现哮喘发作，引喘潜伏期显著延长(P<0.01)，无抽搐跌倒。比较例1、2，各有7/7、6/7动物出现哮喘发作，引喘潜伏期均显著延长(P<0.05)，抽搐跌倒时间以较对照组为长。表明复方川贝精片对乙酰胆碱组胺混合液致豚鼠哮喘有明显的对抗作用，随剂量增加而作用增强。片剂已有明显的对抗作用。

复方川贝精片对豚鼠乙酰胆碱-组胺性哮喘的平缓作用(X±S)

***P<0.01,**P<0.05与对照组相比

2.2止咳作用

1氨水引咳

昆明鼠50只，体重18～22g。随机分7组，10只/组。分别灌胃给予实施例对比例得药(胶囊1g/kg、3g/kg，精片3g/kg，磷酸可待因10mg/kg)，对照组给予0.5％羧甲基纤维素混悬液，灌胃容积为0.2ml/10g体重。给药后1小时，以2只小鼠为一组，放入4L容积的玻璃罩内，用压力泵以53.3kPa恒压将25％氢氧化铵水溶液均匀地喷入玻璃罩内，喷雾10秒钟，观察记录小鼠出现咳嗽的时间(引咳潜伏期)及2分钟内咳嗽次数。

结果：对照组全部小属于50秒内出现咳嗽，2分钟约咳嗽28～66次。可待因组小鼠8/10只出现咳嗽，与对照组相比，引咳潜伏期显著为长，咳嗽次数显著减少(P值均<0.01)。表明：复方川贝精片有相同的止咳作用

复方川贝精片对小鼠氨水引咳的止咳作用(X±S)

***P<0.01,**P<0.05与对照组相比

2枸缘酸引咳法

豚鼠25只，体重211±26g。随机分为7组，分别灌胃给予实施例1～3、比较例1～2，磷酸可待因10mg/kg以及0.5％羧甲基纤维素(对照组)，灌胃容积为1ml/100g体重。给药后1小时以2只豚鼠为一组，放入4L容积的玻璃罩内，用压力泵53.3kPa恒压将17.5％枸缘酸水溶液均匀地喷入玻璃罩内，喷雾1分钟，观察5分钟内豚鼠的咳嗽次数。

结果：对照组全部动物均出现咳嗽，5min内咳嗽8～26次。可待因组全部未出现咳嗽。实施例1组有2/7出现咳嗽，其咳嗽次数明显少于对照组(P<0.05)；实施例2、3组全部未出现咳嗽。对比例1组有3/7出现咳嗽，其咳嗽次数明显少于对照组(P<0.05)；对比例2仅有1/7豚鼠出现咳嗽，咳嗽较对照组少。表明：复方川贝精片对豚鼠枸缘酸引发的咳嗽有明显的止咳作用。

复方川贝精片对小鼠枸缘酸引咳的止咳作用(X±S)

组别	N	咳嗽数	5分钟内咳嗽次数
				对照组	7	7/7	17±9
可待因1mg/kg	7	0/7	0
				实施例1	7	2/7	5±1
实施例2	7	0/7	0
				实施例3	7	0/7	0
对比例1	7	3/7	9±3
				对比例2	7	1/7	7

***P<0.01,**P<0.05与对照组相比

2.3祛痰作用

昆明鼠60只，体重20～25g，禁食过夜，自由饮水。随机分为7组，对照组(给予0.5％羧甲基纤维素)、氯化铵2g/kg(水溶液)阳性对照组。上述药物均灌胃给药，灌胃容积均为0.2ml/10g体重。给药后30min给全部小鼠腹腔注射5％粉红生理盐水溶液，注射后1小时，处死动物，北魏固定，分离气管。气管上切一小口，插入连接有2ml注射器的塑料套管，以1ml生理盐水冲洗气道30分钟，最后吸出的冲洗液不得少于0.7ml，不足0.7ml者舍弃不用。将冲洗液置于试管内，加1mmol/LNaOH0.1ml，使冲洗液呈碱性。用分光光度计(722)在波长546nm处读出光密度，与酚红标准曲线比较，折算酚红量，比较不同给药组气道排除酚红量，以评价其祛痰作用。

结果表明，实施例1～3可明显促进酚红排出。

复方川贝精片对小鼠气道内粉红排出量的影响

组别	N	咳嗽数	5分钟内咳嗽次数
				对照组	7	7/7	17±9
可待因1mg/kg	7	0/7	0
				实施例1	7	2/7	5±1
实施例2	7	0/7	0
				实施例3	7	0/7	0
对比例1	7	3/7	9±3
				对比例2	7	1/7	7

***P<0.01,**P<0.05与对照组相比

实验例3抑菌作用

3.1细菌液的准备

1、一般细菌

取已鉴定的菌种少许，接种于肉汤管内，35℃孵育6～8h后，使其浓度相当于1.5亿/ml细菌量，备用。

2、链球菌

取已分离的菌落数个，接种于0.5％羊血肉汤管内，35℃孵育18～24h备用

3.2接种方法

本实验采用试管法，每种细菌各取6支试管标明编号，除第1号试管外，其余试管各加入肉汤培养基1.5ml，并于1、2号试管中个加入0.5ml实施例1水溶液(0.8g/ml)，然后从2号试管吸取1ml混合液加入3号试管中混匀，从3号试管吸取1ml混合液加入4号试管中混匀，从4号试管吸取1ml混合液加入5号试管中混匀，5号管中吸取1ml混合液弃去，第6管作阴性对照。最后于各试管中种入0.05ml菌悬液，混匀，35℃孵育18～24h。

复方川贝精片抑菌试验结果

注：-：无菌生长，敏感；±：生长少量细菌(100～500/ml)，低敏；+：生长多量细菌(>500/ml)不敏感。

Claims (3)

1.一种复方川贝精片，其特征在于，其主要成分包括麻黄210g、川贝母25g、陈皮94g、桔梗94g、五味子53g、甘草浸膏15g、法半夏75、远志53g，辅料为淀粉、糊精、硬脂酸镁中的一种或多种,其制备方法包括以下步骤：

(1)麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50%的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50%的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50%的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40（50℃）的浸膏，干燥,

(2)超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95%的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

(3)五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后粉碎成20目粉，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95%乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至60~75℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5~5%/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为50%；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50%乙醇为溶剂搅拌，加热至60~75℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5~5%/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为10%,将提取液滤过至储液罐；将（1）（2）药渣投入提取仓2，向提取仓2内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.5~5%/min，反应1h-2.5h，至酒精浓度为10%，将提取液滤过至储液罐，低压浓缩至稠膏，

(4)法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用；

(5)复方川贝精片的制备

将（1）得到的浆化过的浸膏、（2）得到的β-环糊精包含挥发油和（3）得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。

2.根据权利要求1所述的复方川贝精片，其特征在于：其辅料为硬脂酸镁、β-环糊精。

3.根据权利要求1所述的复方川贝精片，其特征在于，其制备方法为：

（1）麻黄、川贝母浸出液提取：

将处方量的麻黄和分别用6倍体积的50%的乙醇浸泡并充分搅拌，搅拌速度180rpm/min，第一次先从醇储罐中向浸泡罐加入2倍体积50%的乙醇浸泡并充分搅拌20min，将溶出液导出到储液罐中，第二次加入的滤过2倍体积50%的乙醇浸泡搅拌，重复一次至得到6倍体积的溶出液；将溶出液分三次加入反应罐，每次再浸泡搅拌20min，流出浸出液后加入第一次收集的溶出液，收集浸出液，加入淀粉使之浆化，低压浓缩1.40（50℃）的浸膏，干燥，

(2)超临界CO2萃取法挥发油

将处方量陈皮投入超临界CO₂萃取器的萃取釜中，并在萃取釜中加入十倍体积浓度为95%的乙醇做夹带剂；

对萃取釜、分离釜分离釜Ⅰ，分离釜Ⅱ进行加热，当萃取温度为25℃，分离釜Ⅰ温度为20时，打开CO₂气瓶，直至萃取釜压力为28MPa，分离釜Ⅰ压力为5时，开始循环萃取，调节CO₂的流量为15kg/h，恒温恒压萃取，100min后，收集挥发油粗油；上述挥发油残渣收集备用，将挥发油用无水乙醇溶解抽滤2次，除去残渣，旋转蒸发仪回收乙醇，计算收油率并收集计算收油率并收集后用β-环糊精包含挥发油；

(3)五味子、远志、桔梗等药液的制备

将处方量的五味子、远志、桔梗混合后微波粉碎，投入连续提取器的提取仓1中，加入3倍体积的95%乙醇为溶剂搅拌浸泡30min，将提取仓1和控温水箱的温度加热至60℃，水箱可向提取仓1、2分别加水，流量可适时调整，两个提取仓的压力可以分别独立控制，酒精浓度可独立监测，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.35%/min，反应2.5h，至酒精浓度为50%；将第一次反应提取液通入提取仓2，药渣仍留在提取仓1；向提取仓1内加入3倍体积的50%乙醇为溶剂搅拌，加热至60~75℃，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为0.35%/min，反应2.5h，至酒精浓度为10%，将提取液滤过至储液罐；将（1）（2）药渣投入提取仓2，向提取仓1内加水，调节水流速度使乙醇浓度变化率为3%/min，反应2.5h，至酒精浓度为10%，将提取液滤过至储液罐，

（4）法半夏细粉制备

将处方量的法半夏粉碎过筛后混合，备用，

（5）复方川贝精片的制备

将（1）得到的浆化过的浸膏、（2）得到的β-环糊精包含挥发油和（3）得到的稠膏粉碎，再与甘草浸膏细粉、法半夏细粉混合，分次投入一定比例的淀粉、蔗糖细粉至混合器中和处方量的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣制成复方川贝精片1000片，每片0.8g。