CN105079567A - 一种无糖型桑菊感冒颗粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种无糖型桑菊感冒颗粒剂及其制备方法，该颗粒剂由主药和辅料组成，主药有桑叶、菊花、连翘、薄荷、苦杏仁、桔梗、甘草、芦根，辅料为糊精和甜味剂。其制备方法是甘草提取甘草酸，浓缩到一定体积，连翘和薄荷采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，以上三味药渣与其余五味药合并，采用微波处理乙醇梯度提取的方式，浓缩得干浸膏，添加糊精及少量的甜味剂，混匀制成颗粒，干燥，喷洒甘草酸提取液，干燥，喷入提取的挥发油，混匀，制成颗粒。采用此方法制备颗粒剂不添加蔗糖，辅料用量少，通过喷洒甘草酸提取液，改善颗粒剂的味质，通过改进提取工艺，有效成分含量提高，疗效显著。

Description

一种无糖型桑菊感冒颗粒及其制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，具体的涉及一种无糖型桑菊感冒颗粒及其制备方法。

背景技术

桑菊感冒颗粒剂处方来源于卫生部药品标准中药成方制剂第二册，由桑叶、菊花、连翘、薄荷、苦杏仁、桔梗、甘草、芦根八味要组成，功能与主治为：疏风清热，宜肺止咳。用于肺热感冒初起，头痛，咳嗽，口干，咽痛。

甘草:甘草主要活性成包括分甘草酸与甘草黄酮。甘草根及根状茎中含的主要成分是甘草酸，甘草酸具有补脾益气、润肺止咳、调和诸药等功效。同时,甘草酸又是高甜度的甜味剂，甘草酸甜度高(蔗糖的200-300倍)、低热能、安全无毒和较强的医疗保健功效，是高血压、肥胖症、糖尿病、心脏病患者使用的最理想的甜味剂,且具有很强的增香效能,已广泛应用于食品、化妆品、烟草等行业。同时甘草中的甘草黄酮类成分有较强的抑菌作用。

传统的制备方法是将以上八味，取连翘、薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余桑叶等六味加水煎煮二次(苦杏仁压榨去油后，在水沸时加入)，每次2小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.38-1.40(80℃-85℃)的浸膏。取浸膏一份，蔗糖3.5份，糊精一份以及乙醇适量制成颗粒，干燥，加入上述连翘等挥发油，混匀，即得。

《桑菊感冒颗粒的制备工艺及质量标准研究》一文中优化了水煎煮提取中药的制备工艺，并且采用β-环糊精包覆挥发油，包合物比挥发油更稳定，防止挥发油在运输中损失。提高桑菊感冒颗粒的功效和制粒，保证了用药的安全。

但是，上述方法中均采用煎煮法提取药材的有效成分，存在提取时间长、提取温度高、有效成分易损失、回收率低、后处理麻烦等缺点。其次，目前市场上都是按处方添加大量蔗糖和糊精，对于糖尿病患者来说，服用大量的糖，会大大加重胰岛的负担，从而加重病情。因此，对于一部分人来说，含有大量蔗糖的桑菊感冒颗粒是不适合的，为了解决上述问题，技术人员对桑菊感冒颗粒进行了配方和工艺方面的研究，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种无糖型桑菊感冒颗粒；

本发明的另一个目的是提供一种桑菊感冒颗粒的制备方法。该方法能有效提高有效成分的含量、去除影响主成分存储稳定性的杂质，提高颗粒剂的稳定性，增强其药理活性。

为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

桑菊感冒颗粒的处方：桑叶：465g菊花：185g连翘：280g薄荷：150g苦杏仁：370g桔梗：370g甘草：150g芦根：370g，辅料：糊精、甜味剂

本发明通过以下方法实现，其制备方法为：

(1)甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比(1:10-1:20)g/ml加入0.08％NaHCO₃-乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取2min-5min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90％乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为5-8ml,得甘草的提取液；

(2)连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为30℃-45℃，萃取釜压力为20-35MPa，萃取时间90-200min，CO₂的流量为20-32kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析。

(3)连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤(1)与步骤(2)中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入95％乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为60℃-75℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1％/min-1.2％/min，反应62.5min-75min；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入95％乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.6％/min-0.75％/min，反应100min-125min；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

(4)颗粒剂的制备

将步骤(3)药液浓缩至相对密度为1.30-1.32(80℃)的干浸膏，取清膏，添加甜味剂，糊精制成颗粒，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

本发明的有益效果为：

1、薄荷和连翘挥发油的提取采用超临界CO₂萃取方法一次提取混合挥发油，节省了提取时间，提取成分完全，有效成分含量提高。

2、淡竹叶、淡豆豉、芦根、橘梗、甘草药液的制备过程中，采用微波处理乙醇梯度提取的方法而非水煎提取的方法，提取温度低，提取时间段短，能够有效地提高有效成分含量。

3、本发明颗粒剂不含蔗糖，添加少量的甜味剂，并且甘草酸具有特殊的香味，采用外喷于制粒表面的方式，甜味适中，改善制剂的味质。

4、实验证明，本发明产品由于药物有效成分的提取率高，且提取液中杂质含量较低，提高了药物的生物利用度，与传统工艺相比，药效增强，祛痰止咳的作用增强，解热能力也有一定提高。

具体实施方式

实施例1

桑菊感冒颗粒的处方：桑叶：465g菊花：185g连翘：280g薄荷：150g苦杏仁：370g桔梗：370g甘草：150g芦根：370g

制备方法：

(1)甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比(1：10)g/ml加入0.08％NaHCO₃-40％乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取2min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90％乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为8ml,得甘草的提取液；

(2)连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为30，℃萃取釜压力为35MPa，萃取时间150min，CO₂的流量为32kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析。

(3)连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤(1)与步骤(2)中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入5倍量的95％乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为65℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1.2％/min，反应62min，使乙醇浓度达到20％；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入4倍量浓度为95％乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.75％/min，反应100min，使乙醇浓度达到20％；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

(4)颗粒剂的制备

将步骤(3)药液浓缩至相对密度为1.30(80℃)的干浸膏。取清膏1份，甜蜜素1份，适量糊精制成颗粒1000g，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

实施例2

桑菊感冒颗粒的处方：桑叶：465g菊花：185g连翘：280g薄荷：150g苦杏仁：370g桔梗：370g甘草：150g芦根：370g

制备方法：

(1)甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比(1：15)g/ml加入0.08％NaHCO₃-60％乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取3min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90％乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为8ml,得甘草的提取液；

(2)连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为45℃，萃取釜压力为20MPa，萃取时间90min，CO₂的流量为20kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析。

(3)连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤(1)与步骤(2)中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入4倍量的95％乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为70℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1.1％/min，反应68min，使乙醇浓度达到20％；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入4倍量浓度为95％乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.68％/min，反应110min，使乙醇浓度达到20％；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

(4)颗粒剂的制备

将步骤(3)药液浓缩至相对密度为1.32(80℃)的干浸膏。取清膏2份，甜菊糖1份，适量糊精制成颗粒1000g，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

实施例3

桑菊感冒颗粒的处方：桑叶：465g菊花：185g连翘：280g薄荷：150g苦杏仁：370g桔梗：370g甘草：150g芦根：370g

制备方法：

(1)甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比(1：12)g/ml加入0.08％NaHCO₃-70％乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取5min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90％乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为6ml,得甘草的提取液；

(2)连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为40℃，萃取釜压力为25MPa，萃取时间120min，CO₂的流量为25kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析。

(3)连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤(1)与步骤(2)中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入4倍量的95％乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为70℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1.0％/min，反应75min，使乙醇浓度达到20％；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入4倍量浓度为95％乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.6％/min，反应125min，使乙醇浓度达到20％；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

(4)颗粒剂的制备

将步骤(3)药液浓缩至相对密度为1.30(80℃)的干浸膏。取清膏1份，阿斯巴甜1份，适量糊精制成颗粒1000g，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

实施例4

桑菊感冒颗粒的处方：桑叶：465g菊花：185g连翘：280g薄荷：150g苦杏仁：370g桔梗：370g甘草：150g芦根：370g

制备方法：

(1)甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比(1:20)g/ml加入0.08％NaHCO₃-80％乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取3min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90％乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为5ml,得甘草的提取液；

(2)连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为35，℃萃取釜压力为30MPa，萃取时间200min，CO₂的流量为28kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析。

(3)连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤(1)与步骤(2)中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入3倍量的95％乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为75℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1.0％/min，反应75min，使乙醇浓度达到20％；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入4倍量浓度为95％乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.75％/min，反应100min，使乙醇浓度达到20％；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

(4)颗粒剂的制备

将步骤(3)药液浓缩至相对密度为1.31(80℃)的干浸膏。取清膏1份，木糖醇1份，适量糊精制成颗粒1000g，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

对比例1

参照卫生部药品标准中药成方制剂第二册：桑菊感冒冲剂的制备方法：以上八味，取连翘、薄荷提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余桑叶等六味加水煎煮二次(苦杏仁压榨去油后，在水沸时加入)，每次2小时，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.38-1.40(80℃-85℃)的浸膏。取浸膏一份，蔗糖3.5份，糊精一份以及乙醇适量制成颗粒，干燥，加入上述连翘等挥发油，混匀，即得。

对比例2

根据《桑菊感冒颗粒的制备工艺及质量标准研究》一文制备桑菊感冒颗粒的制备方法：按处方量取连翘、薄荷，置于挥发油提取器中，加水8倍量的水，提取4h，收集挥发油；蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余桑叶等六味加12倍量的水煎煮3次，每次2h；将水提液浓缩至相对密度为1.20(60℃)的浸膏，取浸膏1份、蔗糖2份，喷雾速率为60g/min，雾化压力为2.1kg，物料温度为80℃，进行喷雾制粒；加入挥发油包合物，混合分装即得。

对比例3水煎法提取甘草酸

取处方量的甘草，粉碎成粗粉，过40目筛，加12倍量的水煎煮3次，每次2h，得甘草的水提取物。

对比例4

将实施例1中步骤(3)采用200W下微波处理4min后，加入90％的乙醇回流提取3次，每次1小时，提取温度60℃，合并三次滤液，浓缩，得浸膏；其余步骤不变。

对比例5

将实施例1中步骤(3)采用200W下微波处理4min后，加入50％的乙醇回流提取3次，每次1小时，提取温度60℃，合并三次滤液，浓缩，得浸膏；其余步骤不变。

实验例1本产品各步骤中制备工艺的研究

1.1甘草提取工艺的研究

(1)甘草中甘草酸的含量测定

按照2010版药典规定的HPLC方法测定甘草酸的含量。色谱条件如下：以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂，流动相乙腈(A)-0.05％磷酸(B)梯度洗脱(见表1)；流速1mL·min^-1；检测波长237nm；柱温25℃；进样量20μl。

表1流动相梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-8	19	81
8-35	19-50	81-50
			35-36	50-100	50-0
36-40	100-19	0-81

溶液配制：

对照品溶液的配制：精密称取甘草酸铵标准品适量，加入70％乙醇制成0.2mg/mL的甘草酸铵对照品溶液(甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)。

供试品溶液的制备：取甘草提取物0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相适量超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，再取1ml至10ml的量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，测定并计算结果。

提取率＝提取液中甘草酸的质量/甘草的质量

表2不同提取方式下甘草酸含量的比较

采用本产品制备(1)中提取甘草的提取方法，对提取溶剂进行了考察，并按照上述检测方法进行了检测。其实验结果如下表3所示。

表3不同提取溶剂甘草酸含量的影响

编号	溶剂	提取率(％)
			1	水	3.10％
2	75％乙醇	4.97％
			3	0.08％NaHCO3-30％乙醇	4.21％
4	0.08％NaHCO3-40％乙醇	4.75％
			5	0.08％NaHCO3-50％乙醇	4.61％
6	0.08％NaHCO3-60％乙醇	5.02％
			7	0.08％NaHCO3-70％乙醇	5.29％
8	0.08％NaHCO3-80％乙醇	4.86％

由此可见0.08％NaHCO₃-(60％-70％)乙醇作溶剂，甘草酸的含量明显高于其他溶剂。因此，优选60％-70％乙醇和0.08％NaHCO₃组合物作为提取溶剂。

1.2挥发油提取工艺的研究

关于本产品制备工艺中挥发油的超临界流体萃取方法，现有文献中均已报道。

关于夹带剂乙醇的浓度与提出成分的关系，现有技术中指出，当乙醇的浓度≥90％时，适合提取挥发油类物质，因此本产品在挥发油提取中采用的乙醇浓度一般为95％。

本发明对混合物料在进行超临界CO₂萃取时，萃取压力，萃取温度，萃取时间以及CO₂的流量进行考察，并与现有文献进行了比较，得到不同的结果。本发明的考察结果见表4和表5。

表4本发明提取结果与现有工艺的比较

表5本发明各物质在不同条件下的出油率研究

结论：由表4可知，通过比较可知，与传统水蒸气提取方法相比，采用超临界流体萃取方法能够有效的节省时间，提取的成分比较完全，出油率相对提高。本发明挥发油提取工艺中，不同条件下，提取物挥发油成分大致相同，但是其出油效果不同。

1.3桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根提取工艺的研究

中药化学成分复杂，不同成分极性差异大，例如葡萄糖、蔗糖等分子比较小的多羟基化合物，具有强亲水性，极易溶于水。蛋白质和氨基酸都是酸碱两性化合物，有一定程度的极性，所以能溶于水，不溶于或难溶子有机溶剂。淀粉虽然羟基数目多，但分子大大，所以难溶解于水。苷类都比其苷元的亲水性强，特别是皂苷由于它们的分子中往往结合有多数糖分子，羟基数目多，能表现出较强的亲水性，而皂苷元则属于亲脂性强的化合物。多数游离的生物碱是亲脂性化合物，与酸结合成盐后，能够离子化，加强了极性，这些生物碱可称为半极性化合物。所以，生物碱的盐类易溶于水，不溶或难溶于有机溶剂；而多数游离的生物碱不溶或难溶于水，易溶于亲脂性溶剂。鞣质是多羟基的化台物，为亲水性的物质。油脂、挥发油、脂溶性色素都是强亲脂性的成份。中药提取往往需要尽可能多的提取有效成分，增强药物活性。本发明采用连续动态乙醇浓度提取的方法提取中药，能够更充分地提取不同极性的有效成分。

(1)总黄酮的含量测定

标准品溶液制备：精密称取芦丁对照品10mg，置50ml量瓶中，加乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得；

工作曲线绘制：精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5与6ml，分别置25ml量瓶中，各加乙醇至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L氢氧化钠试液10ml，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度与其对应的浓度计算回归方程；

供试品溶液制备：取本品，研细，精密称取样品，置25ml量瓶中，加乙醇适量，超声波振荡30min，冷却至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得；精密吸取供试品溶液2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，在500nm的波长处测定吸光度值；

空白溶液制备：以相应溶液作为空白。

(2)桔梗皂苷D、连翘苷的含量测定方法

1)桔梗皂苷D的检测方法

液相色谱条件：色谱柱：ODSC₁₈(46mm×250mm，5μm)；流动流动相为乙腈-水(25∶75)；流速1mL·min^-1；检测波长210nm；柱温25℃；进样量10μl。

2)连翘苷的检测方法

液相色谱条件：色谱柱：ODSC₁₈(46mm×250mm，5μm)；流动流动相为乙腈-水(25∶75)；流速1ml·min^-1；检测波长277nm；柱温30℃；进样量10μl。

取上述提取工艺制备的浸膏适量，乙醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔滤膜(0.45μm)过滤后，注入高效液相色谱中，以桔梗皂苷D对照品、连翘苷对照品进行外标法定量，测得桔梗皂苷D、连翘苷的含量。

表6不同提取条件下有效成分含量测定结果

实施例编号	总黄酮含量(％)	桔梗皂苷D含量(％)	连翘苷含量(％)
				实施例1	7.42	0.38	0.89
实施例2	7.89	0.40	0.81
				实施例3	8.21	0.45	0.92
实施例4	8.01	0.37	0.95
				比较例1	4.74	0.12	0.32
比较例2	5.02	0.20	0.48
				比较例4	6.04	0.24	0.54
比较例5	6.28	0.23	0.62

结论：从结果上可以看出，采用连续动态乙醇浓度提取的方式较传统的水提、醇提工艺总黄酮、桔梗皂苷D、连翘苷的含量明显提高。

实验例2

本实验例考察了本发明颗粒剂对鼠的祛痰、止咳以及解热作用药效，并与现有技术进行了比对。

2.1祛痰作用研究

取实验用小鼠80只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为8组，每组10只。釆用氨水喷雾引咳法造模。除空白对照组小鼠给蒸馏水外，其余各组均灌胃给药，给予相应药物4.0g/kg，空白对照组给予等量生理盐水，连续给药3d末次给药前禁食不禁水18h。

测定方法

(1)小鼠末次给药1h后，在每只小鼠的腹腔内，注射酚红溶液0.5ml/只，30min后脱颈椎处死，仰位固定后，解剖分离出气管，并在气管下穿一根丝线以备固定气管插管用。

(2)将9号针头磨平，丝线备好。将磨平的针头从甲状软骨处插入气管内，大概0.3cm，用丝线将气管结扎固定。

(3)准备1ml注射器，准确吸取0.5ml的5％浓度的碳酸氢钠溶液，边推边注入气管内，需要反复推抽大约三次。

(4)灌洗呼吸道后，将灌洗液体抽出后注进试管中，反复注入三次，冲洗呼吸道九次后，吸取1.5ml的5％浓度的碳酸氢钠溶液。

(5)最后合并1.5ml灌洗液，1000rpm离心约5min，取得上清液，在波长560nm处测定光密度(OD)。

(6)根据酚红的标准曲线，计算出分泌液中的酚红含量。

表7桑菊感冒颗粒对小鼠祛痰作用的影响

组别	n	剂量(g/kg)	排泌量(μg/ml)
				空白对照组	10	-	0.23±0.05
颗粒剂组(市售)	10	4.0	0.30±0.06
				对比例1	10	4.0	0.20±0.07
对比例2	10	4.0	0.22±0.05
				实施例1	10	4.0	0.39±0.06
实施例2	10	4.0	0.40±0.05
				实施例3	10	4.0	0.43±0.06
实施例4	10	4.0	0.41±0.05

结果表明:本发明的药物组明显的酚红排放量明显多于对照组(p<0.01)，表明本发明的桑菊感冒颗粒具有明显的祛痰作用。

2.2止咳作用研究

取实验用小鼠80只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为8组。分别釆用氨水喷雾引咳法造模。除空白对照组小鼠给蒸馏水外，其余各组均灌胃给药，给予相应药物4.0g/kg，空白对照组给予等量生理盐水，连续给药3d。末次给药前禁食不禁水18h。

测定方法

末次给药后1h后，将小鼠放入多功能诱咳引喘仪内，喷氨水30s，观察记录小鼠咳嗽潜伏期和2min内的咳嗽次数。小鼠咳嗽表现为以其腹肌收缩，同时张大嘴为准。

表8桑菊感冒颗粒对小鼠止咳作用的影响

组别	n	剂量(g/kg)	咳嗽次数f/次(2min)-1	潜伏期t/s
					空白对照组	10	-	46.76±2.55	43.56±3.25
颗粒剂组(市售)	10	4.0	30.45±2.80	57.35±2.80
					对比例1	10	4.0	28.72±3.06	52.34±2.78

对比例2	10	4.0	29.73±5.30	57.31±4.42
					实施例1	10	4.0	20.18±3.45	66.04±3.24
实施例2	10	4.0	20.203.55	66.11±4.27
					实施例3	10	4.0	20.23±3.98	66.20±4.50
实施例4	10	4.0	20.12±3.24	66.18±4.51

结果表明:本发明的药物组的咳嗽次数均明显少于对照组(p<0.01)，且潜伏期延长作用强，较对比实验组和市售组也有明显改善作用，表明本发明的桑菊感冒颗粒具有明显的止咳作用。

2.3解热作用的研究

取实验用Wistar大鼠，雌雄各半，体重150-200g，在室温18-20℃环境下适应3d后，随机分为8组。大鼠饥饿12h后先测正常体温，除空白对照组小鼠给蒸馏水外，其余各组灌胃给药，除空白对照组小鼠给蒸馏水外，其余各组均给予相应药物4.0g/kg，空白对照组给予等量生理盐水，1h后于动物皮下注射15％酵母混悬液10ml/kg致热，并分别于注射酵母后l、2、3、4h后测理量大鼠体温。结果见表9。

表9桑菊感冒颗粒对大鼠酵母致热反应的影响

组别

n

正常

1h

2h

3h

4h

空白对照组

10

37.39±0.15

39.31±0.13

39.13±0.21

39.43±0.18

39.47±0.25

颗粒剂组(市售)

10

37.38±0.16

38.42±011

38.35±0.32

38.30±0.16*

38.25±0.26**

对比例1

10

37.40±0.07

38.46±0.21

38.39±0.19

38.45±0.31

38.36±0.17*

对比例2

10

37.41±0.16

38.47±0.24

38.42±0.14

38.36±0.26*

38.33±0.25*

实施例1

10

37.42±0.14

38.46±0.17

38.33±0.22*

38.27±0.30

38.14±0.24**

实施例2

10

37.42±0.15

38.47±0.19

38.32±0.30*

38.26±0.24

38.13±0.30**

实施例3

10

37.41±0.12

38.45±0.15

38.31±0.27*

38.26±0.35*

38.11±0.21**

实施例4

10

37.41±0.09

38.46±0.20

38.32±0.24*

38.27±0.33**

38.12±0.25**

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

实验表明，本发明的药物对酵母混悬液致动物的发热具有明显解热作用。

Claims (6)

1.一种无糖型桑菊感冒颗粒，其处方包括465g，菊花185g，连翘280g，薄荷150g，苦杏仁370g，桔梗370g，甘草150g，芦根370g；其特征在于：所述无糖型桑菊感冒颗粒的制备方法包括以下步骤：（1）甘草中甘草酸的提取；（2）连翘、薄荷挥发油的提取；（3）连续动态乙醇浓度提取；（4）颗粒剂的制备。

2.根据权利要求1所述的一种无糖型桑菊感冒颗粒，其特征在于：所述无糖型桑菊感冒颗粒的制备方法包括以下步骤：

（1）甘草中甘草酸的提取

将处方量的甘草粉碎成粗粉，过40目粗筛，按料液比（1:10-1:20）g/ml加入0.08%NaHCO₃-乙醇作为提取剂，室温下于闪式提取器中提取2min-5min，闪式提取电压为160V，提取后于5000r/min离心20min，滤过，滤液浓缩至浸膏，加2倍量90%乙醇，静置24小时，采用超滤膜过滤，滤液浓缩至体积为5-8ml,得甘草的提取液；

（2）连翘、薄荷挥发油的提取

将处方量的连翘、薄荷粉碎，过40目粗筛，采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，萃取温度为30℃-45℃，萃取釜压力为20-35MPa，萃取时间90-200min，CO₂的流量为20-32kg/h，收集淡黄色连翘、薄荷挥发油粗油，并对其成分用GS-MS气质联用色谱仪进行分析；

（3）连续动态乙醇浓度提取

将处方量的桑叶、菊花、苦杏仁、桔梗、芦根原料粉碎，过40目粗筛，合并步骤（1）与步骤（2）中的药渣，从提取器的投料口中投入物料，投料完毕后，在中药提取器中加入95%乙醇溶液，对提取器进行加热搅拌，并控制最终温度为60℃-75℃；提取器顶部连接一水箱，使之与提取器连通，水箱与提取器之间设有阀门开关和流量计，其中流量计可以控制水箱内水流入提取器的速度；在对提取器进行加热的同时，也对水箱内水进行加热，使水箱中水温与提取器内温度一致；

当水箱和提取器内温度稳定之后，打开水箱的阀门开关，调节水流速度，使乙醇浓度变化率为1%/min-1.2%/min，反应62.5min-75min；第一次反应结束后，收集提取液，在第一次反应结束后的药渣中加入95%乙醇，并按照第一反应的步骤缓缓加水，使乙醇浓度变化率为0.6%/min-0.75%/min，反应100min-125min；收集滤液，冷却过滤后与第一次收集的滤液合并，得提取液，浓缩，得浸膏；

（4）颗粒剂的制备

将步骤（3）药液浓缩至相对密度为1.30-1.32（80℃）的干浸膏，取清膏，添加甜味剂，糊精制成颗粒，加入上述连翘、薄荷挥发油，干燥，喷洒甘草的提取液，混匀，即得。

3.根据权利要求2所述的无糖型桑菊感冒颗粒，其特征在于：步骤（1）中所用提取剂0.08%NaHCO₃-乙醇，乙醇浓度为30%-80%，优选乙醇浓度为60%-70%。

4.根据权利要求2所述的无糖型桑菊感冒颗粒，其特征在于：步骤（2）采用超临界CO₂萃取技术提取挥发油，优选萃取温度为40℃，萃取釜压力为25MPa，萃取时间120min，CO₂的流量为25kg/h。

5.根据权利要求2所述的无糖型桑菊感冒颗粒，其特征在于：步骤（3）中第一次连续动态乙醇浓提取温度为70℃，加入量为4倍的95%乙醇，乙醇浓度变化率为1.0%/min，提取时间为75min，第二次提取温度为70℃，加入量为4倍的95%乙醇，乙醇浓度变化率为0.6%/min，提取时间为125min。

6.根据权利要求2所述的无糖型桑菊感冒颗粒，其特征在于：步骤（4）中的甜味剂选自甜菊糖、甜蜜素、阿斯巴甜、木糖醇的一种。