CN101422563A - 治疗小儿咽喉炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗小儿咽喉炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。本发明药物组合物由金银花、牛黄、射干、金果榄、桔梗、玄参等原料药材组成，按照中药常规技术制备成适合临床应用的各种制剂，包括片剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸剂、颗粒剂等，其质量控制方法包括薄层色谱的定性鉴别和高效液相色谱的含量测定等方法。本发明药物组合物用于治疗流感，上呼吸道感染及肺实热引起的咽喉肿痛，口舌糜烂，咳嗽痰盛，咽炎喉炎，扁桃体炎，发热等有显著疗效。

Description

治疗小儿咽喉炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，特别是涉及一种治疗小儿咽喉炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属中药技术领域。

背景技术

幼儿喉腔小，粘膜下组织疏松，因此一旦染病就易使喉腔因炎症肿胀而变得更为狭窄甚至被阻塞，以致出现重度呼吸困难。小儿急性喉炎多发冬、春两季，在1至2月份达到高峰，并常与麻疹、流行性感冒、水痘、腮腺炎、百日咳等急性传染病并发。临床表现除发热、畏寒外，伴有阵发性咳嗽或呼吸困难等症状，并有浓痰咳出，继之可出现持续阻塞性气管炎，还可导致肺炎，甚至威及到生命，对小儿身体健康损害很大。

目前西药治疗虽能及时有效控制病情，但服用太多消炎药、抗生素等药会导致人体阴阳失去平衡、免疫功能低下、抵抗力减退。而现有的中药制剂虽然毒副作用小，但大多疗效不明显，很难达到西药见效快的特点。提供一种见效快，且毒副作用小的中药制剂是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗小儿咽喉炎的药物组合物；

本发明的另一个目的是提供该药物组合物的制备方法；

本发明的第三个目的是提供该药物组合物的质量控制方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明治疗小儿咽喉炎的中药组合物由以下重量份的原料药组成：

金银花  90～120重量份    牛黄 0.3～0.5重量份   射干 20～40重量份

金果榄  65～85重量份     桔梗 50～60重量份     玄参 65～85重量份

麦冬    50～65重量份     冰片 0.15～0.17重量份

上述原料药优选为：

金银花  100重量份    牛黄 0.4重量份    射干 30重量份

金果榄  75重量份     桔梗 55重量份     玄参 75重量份

麦冬    60重量份     冰片 0.16重量份

本发明治疗小儿咽喉炎的中药组合物还可以由以下重量份的原料药组成：

金银花  90～120重量份  牛黄 0.3～0.5重量份  射干 20～40重量份

金果榄  65～85重量份   桔梗 50～60重量份    玄参 65～85重量份

麦冬    50～65重量份  冰片 0.15～0.17重量份  连翘 40～60重量份

野菊花  30～40重量份

上述原料药优选为：

金银花  100重量份      牛黄 0.4重量份          射干 30重量份

金果榄  75重量份       桔梗 55重量份           玄参 75重量份

麦冬    60重量份       冰片 0.16重量份         连翘 50重量份

野菊花  35重量份

本发明药物组方合理，其中金银花清热解毒，疏散风热，为君药；牛黄，清热解毒，化痰，定惊；射干清热解毒，消痰利咽；金果榄清热解毒，利喉止痛；连翘、野菊花解毒泻火、利咽止痛为臣药，助君药清热解毒利咽；桔梗宣肺、利喉、祛痰，排浓；玄参凉血滋阴，泻火解毒；麦冬养阴生津、润肺清心；冰片开窍醒神，清热止痛，为使药，既助君药之清热解毒利咽，而且有滋阴润躁止痛之效。诸药合用共奏清热利咽，解毒止痛之效，用于治疗流感，上呼吸道感染及肺实热引起的咽喉肿痛，口舌糜烂，咳嗽痰盛，咽炎喉炎，扁桃体炎，发热。

本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

本发明所述的中药组合物颗粒剂的制备方法为：

选取原料药材，除牛黄、冰片外，其余金银花等原料药，加4～10倍量水煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1重量份，蔗糖粉4重量份，糊精1重量份，牛黄(与蔗糖粉、糊精先配研均匀)及乙醇适量，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，即得。

本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇15～30ml，超声处理10～20分钟，滤过，滤液浓缩至3～6ml，做为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～6ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(8～12：0.3～0.6：0.3～0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1～2g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液8～10μl、上述对照药材溶液2～4μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(16～20：1～3：0.1～0.4)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加40～60ml乙醇回流提取1～3小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加3～6ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液；另取金果榄对照药材粗粉1～2g，同法制成对照药材溶液；分别吸取供试品和对照药材溶液各4～5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(6～9∶1～4)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇30～50ml，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10～30ml溶解，加盐酸1～3ml，沸水浴回流1～3小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取1～3次，每次20～40ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材1～2g，同法制成对照药材溶液；分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇45～60ml超声处理15～30分钟，滤过，蒸干，残渣加水10～30ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇10～30ml，萃取1～3次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1～2ml溶解作为供试液；取玄参对照药材1～2g同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各8～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(8～12:0.3～0.6)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约4～7分钟，至斑点显色清晰，取出；供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加氯仿15～30mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.3～0.7mL使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液4～6μL，对照品溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(17～23∶20～28∶1～4∶2～6)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(6～13:94～87)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024。

对照品溶液的制备 精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加40～60％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备 取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.5～0.9g，置具塞锥型瓶中，精密加入40～60％甲醇40～60ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_z)25～40分钟，放冷，再称定重量，用40～60％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液3～6ml，置25ml棕色量瓶中，加40～60％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定方法 分别精密吸取对照品液、供试品液各8～12μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物制剂相当于原药材量2～5g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0～6.0mg。

本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：鉴别：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取2小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液；另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液；分别吸取供试品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液；分别吸上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液；取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10:0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出；供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液5μL，对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(10:90)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024；

对照品溶液的制备 精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)；

供试品溶液的制备 取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.78g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_z)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定方法 分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物制剂相当于原药材量3.1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0mg。

本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，重现性好。高效液相色谱技术的应用更进一步增加了本发明药物组合物质量控制方法的准确性和合理性。

具体实施方式

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

试验例1 本发明药物质量控制方法的研究试验

1、金银花的薄层鉴别

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水不同配比混合物为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。比较供试品与对照品的色谱展开效果，结果见下表：

表1 展开剂配比的选择结果

 

展开剂	醋酸乙脂-甲酸-水(6：1：1)	醋酸乙脂-甲酸-水(3：0.4：0.5)	醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)	醋酸乙脂-甲酸-水(70：25：25)
					展开效果	供试品与对照品各斑点分离不清晰，干扰大。	供试品与对照品各斑点分离不清晰，干扰大。	供试品在与对照品色谱相同位置，显相同颜色荧光斑点，斑点分离清晰，无干扰。	供试品与对照品各斑点分离不清晰，干扰大。

从上表可以看出，在对金银花的薄层鉴别中展开剂选择醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)，展开效果最好，符合试验要求，且阴性无干扰。

2、射干的薄层鉴别

供试品溶液：即1中金银花供试品溶液的制备液。

对照药材溶液的制备：取射干对照药材1～2g，同1中供试品溶液制法制备对照药材溶液。比较供试品溶液与对照药材溶液在不同展开条件下的展开效果，结果见下表：

表2 不同展开条件的展开效果

 

展开条件	展开效果
		1、照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。	供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，各斑点分离清楚。

 

2、照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿—丁酮-甲醇(3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但各斑点分离不清楚，有干扰。

从上表可以看出，选择展开条件1，展开效果好，符合试验要求，且阴性无干扰。

3、金果榄薄层鉴别

1)供试品溶液与对照药材溶液制备时乙醇回流提取时间的考察：

取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液。另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液。分别吸取样品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)为展开剂，展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，比较不同提取时间，供试品溶液和对照药材溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表：

表3 回流提取时间的考察结果

 

回流提取时间	1h	1.5h	2h	2.5h
					显色效果	供试品与对照药材色谱相应位置，各斑点显色很不清晰。	供试品在与对照药材色谱相应位置，各斑点显色不清晰。	供试品与对照药材色谱相应位置，各斑点显色清晰。	供试品在与对照药材色谱相应位置，各斑点显色清晰。

从上表可以看出，回流提取2h所得供试品溶液与对照品溶液在薄层板上的显色效果已经符合试验要求，各斑点显色清晰。

2)展开剂的选择

按1)中优选方法制备供试品溶液和对照品溶液，比较不同展开剂下供试品与对照品色谱中各斑点展开的效果，结果见下表：

表4 展开剂配比的选择结果

 

展开剂	氯仿-甲醇(9：1)	氯仿-甲醇(7：3)	石油醚—甲醇(9：1)	石油醚—甲醇(7：3)	苯—甲醇(9∶1)	苯—甲醇(7∶3)
							展开效果	供试品与对照品溶液在薄层板上展开效果差，有	供试品与对照品溶液在薄层板上展开效果差，	供试品与对照品溶液在薄层板上展开	供试品与对照品溶液在薄层板上展开效果差，	供试品与对照药材溶液在薄层板上的展开效果	供试品与对照品溶液在薄层板上展开效果差，

 

干扰。

有干扰。

效果差，有干扰。

有干扰。

较好，各斑点分离清晰，无干扰。

有干扰。

从上表可以看出，以苯-甲醇(9：1)为展开剂，供试品与对照品溶液在薄层板上的展开效果好符合试验要求，且阴性无干扰。

4、麦冬的薄层鉴别

供试品溶液与对照品溶液制备方法的考察：

分别吸供试品溶液和对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰。比较不同方法制备的供试品溶液和对照药材溶液在薄层板上的显色效果，结果见下表：

表5 供试品溶液与对照品溶液制备方法的考察结果

 

制备方法	展开效果
		1、取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。	供试品溶液和对照品溶液色谱中，各斑点显色清晰，分离效果好，阴性无干扰。
2、取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加水饱和正丁醇30ml振摇提取2次，合并提取液，回收正丁醇至3ml，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。	供试品溶液和对照品溶液色谱中，各斑点显色清晰，分离效果较差，阴性有干扰。

从上表可以看出，按照制备方法1制备的供试品溶液和对照品溶液，在薄层色谱中展开效果好，符合试验要求。

5、玄参的薄层鉴别

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液。

对照药材溶液的制备：取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液。

吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇不同配比的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出。比较不同配比展开剂下，供试品与对照药材色谱的展开效果，结果见下表：

表6 展开剂配比的选择结果

 

展开剂配比(氯仿-甲醇)	10：0.1	10：0.5	10：2	10：5
					展开效果	供试品色谱与对照品色谱相应位置上，各斑点显色不清晰，分离效果差，无干扰。	供试品色谱与对照品色谱相应位置上，各斑点显色清晰，分离效果好，无干扰。	供试品色谱与对照品色谱相应位置上，各斑点显色不清晰，分离效果差，有干扰。	供试品色谱与对照品色谱相应位置上，各斑点显色不清晰，分离效果差，有干扰。

从上表可以看出，展开剂氯仿-甲醇的配比为10：0.5时，展开效果好，且阴性无干扰，符合试验要求.

6、牛黄的薄层鉴别

供试品溶液的制备：取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。

吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视。比较不同配比展开剂及不同点样量下，供试品与对照药材色谱的展开效果，结果见下表：

表7 展开剂配比及点样量的选择结果

从上表可以看出，正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇的配比为20∶25∶2∶3、点样量为供试品溶液5μL，对照品溶液3μL时，供试品和对照药材溶液在薄层板上的展开效果最好，符合试验要求。

7、本发明药物中绿原酸的含量测定

本发明药物中以金银花为主药，绿原酸是金银花中主药有效成份，所以质量控制方法研究中对绿原酸的含量测定方法进行了研究。以下试验供试品是按照实施例1方法制备的颗粒剂。

1)、供试品溶液制备中甲醇浓度及超声提取时间的比较：

取本发明药物制剂相同重量份，分别加入不同浓度甲醇，超声提取不同时间，比较提取溶液中绿原酸的含量，结果见下表：

表8 供试品溶液制备中甲醇浓度及超声提取时间的考察结果

从上表可以看出，用50％的甲醇超声提取30min所制得的供试品溶液中绿原酸的含量最高，所以供试品溶液的制备方法为：

取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.78g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_Z)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

检测仪器(室温检测)：

Agilent 1100型高效液相色谱仪；十八烷基硅烷键合硅胶(4.6×150mm，5μm)

厂家：Agilent Technologies安捷伦科技有限公司(中国)

流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液(10：90)  检测波长：327nm

流速：1.0ml/min  柱温：室温

对照品来源：绿原酸 购于中国药品生物制品检定所 批号：0753-200111

对照品溶液的制备 精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)。

测定方法：用微孔滤膜(0.45μm)滤过。分别精密吸取阴性对照液、对照品液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2)、含量测定方法考察：

(1)线性关系考察 取对照品溶液(0.042mg/ml)摇匀，分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，表明绿原酸在0.084ug-0.504ug间呈线性关系，其回归方程为：Area＝3098.2158×Amt+0.7571(r＝0.99979)

表9 线性关系考察表

(2)稳定性试验 对照品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表

表10 稳定性试验结果

(3)精密度试验 精密吸取供试品溶液，(批号：03060202)10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差<2％，结果见下表

表11 精密度试验结果

(4)重现性试验 按正文方法，取同一批制备的供试品5份，分别进行测定，求得相对标准偏差<2％，结果见下表

表12 重现性试验结果

(5)回收率试验 精密称取已知含量的同一批制备的供试品1g再分别精密称取绿原酸对照品1.45mg，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：

表13 回收率试验结果

从上面的方法学考察试验结果可以看出，本发明药物制剂所用含量测定方法稳定、重现性好，能够有效控制药品质量。

试验例2 药效学实验研究

药品 本发明药物I   按照实施例1制备的药物

     本发明药物II  按照实施例2制备的药物

     本发明药物III 按照实施例3制备的药物

     阳性对照药物市售小儿清咽颗粒

1.2 动物   Wistar大鼠，昆明种小鼠，新西兰兔，由中国医科大学实验动物中心提供。

菌种 八种引起呼吸道感染的常见疾病菌，由中国医科大学生物教研室提供，常规方法制备实验菌液。

2 方法与结果

2.1 抑制毛细血管通透性的作用

取大鼠60只，体重200～250g，雌雄各半，每组10只。随机分为6组，本发明药物I，II，III组分别给药3.1g/kg(相当所含生药量)，盐水对照组给生理盐水20ml/kg，阿司匹林组给阿司匹林268mg/kg，阳性对照组给小儿清咽颗粒7.0g/kg(相当所含生药量)，各组于ig给药或盐水30min后，在大鼠背部中线左侧sc 1μg/ml的5-羟色胺0.1ml，立即iv 1％依文思兰4ml/kg。15min后处死动物，将背部着色皮肤剪下并剪碎放入3ml生理盐水-丙酮(3∶7)混合液中，放置24h，取上清液，用721分光光度计(610nm)测光密度。结果见表14。

表14 抑制毛细血管通透性的作用

 

组别	剂量	光密度值(X±s)
			盐水对照组	20ml/kg	0.1233±0.0526
阿司匹林组	268mg/kg	0.0611±0.0224**
			阳性对照药物组	7.0g/kg	0.0747±0.0224*
本发明药物I组	3.1g/kg	0.0570±0.0218**★
			本发明药物II组	3.1g/kg	0.0588±0.0200**
本发明药物III组	3.1g/kg	0.0604±0.0236**

注：n＝10，与盐水对照组比较，**P<0.01，*P<0.05；与阳性对照药物组比较★★P<0.01，★P<0.05。

本发明药物、阳性对照药物及阿司匹林各组对5-羟色胺所致毛细血管通透性均有显著抑制作用。本发明药物的抑制作用强于阳性对照药物，尤其本发明药物I的抑制作用显著高于阳性对照药物。

2.2 对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀的影响

取雄性Wistar大鼠60只，体重140～160g，分组及给药同上，给药后1h，于大鼠右足跖皮下注入1％角叉莱胶0.1ml/只。致炎后1～6h分别测定足跖容积，计算出肿胀值(致炎前后足跖容积差)，结果见表15。

表15 对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀的影响

注：n＝10，与盐水对照组比较，**P<0.01，*P<0.05；与阳性对照药物组比较★★P<0.01，★P<0.05。

本发明药物、阳性对照药物及阿司匹林各组对角叉莱胶致大鼠足跖肿胀均有抑制作用。本发明药物对抑制大鼠足趾肿胀的作用优于阳性对照药物，其中本发明药物的作用最好。

2.3 对大鼠肉芽肿增生的影响

取雄性Wistar大鼠60只，体重140-160g，分组及给药同上。在麻醉状态下行背部正中切口1cm，在左肩部皮下埋藏一直径9mm，厚1.5mm，重9.25mg的无菌滤纸片。每天给药2次，连续7天，第8天取出肉芽组织，60℃干燥24h后称重，求出各组织净重的平均数和抑制率。结果见表16。

表16 对大鼠肉芽肿增生的影响

 

组别	剂量	肉芽组织净重(mg，x±s)	抑制率(％)
				盐水对照组	20ml/kg	76.9±11.6	-
阿司匹林组	268mg/kg	41.9±9.0	45.5**★
				阳性对照药物组	7.0g/kg	48.9±10.0	36.4**
本发明药物I组	3.1g/kg	41.0±8.2	46.7**★
				本发明药物II组	3.1g/kg	43.1±11.0	44.0**★
本发明药物III组	3.1g/kg	45.9±11.2	40.3**

注：n＝10，与盐水对照组比较**P<0.01，*P<0.05；与阳性对照药物组比较★★P<0.01，★P<0.05。

本发明药物、阳性对照药物及阿司匹林各组对大鼠肉芽肿增生均有抑制作用。本发明药物对抑制大鼠肉芽肿增生的作用优于阳性对照药物，其中本发明药物I、II具有显著性提高。

3.1 体内抑菌实验昆明种小鼠随机分为感染模型组、本发明药物组及阳性对照药物组，每组10只。连续喂药3d，每只给药0.5ml。各组分别给予生理盐水、本发明药物I、II、III及阳性对照药物供试液(1g/ml)。于给药第2天分别以1×106个/ml肺炎克雷伯菌腹腔注射0.5ml/只感染小鼠，观察记录给药第4天后各组小鼠的存活数，进行V2检验。体内抑菌试验结果，见表17。

表17 对肺炎克雷伯菌感染小鼠的保护作用比较(只)

注：与感染模型组相比，^**P<0.01，与阳性对照药物组比较，★★P<0.01。

从上表可以看出，本发明药物及阳性对照药物均有较好的体内抑菌作用，本发明药物的抑菌作用优于阳性对照药物，且本发明药物I的抑菌作用显著高于阳性对照药物。

3.2 体外抑菌试验

将本发明药物I～III用培养基稀释为不同浓度，分别置于试管中(1ml/管)，每管加入0.1ml稀释10-3倍的新鲜菌液，于37℃培养箱培养18小时后，观察有无细菌生长，确定最低抑菌浓度。结果见下表：

表18 本发明药物对8种呼吸道感染的病原菌和条件菌的抗菌作用(g/ml)

结果表明，本发明药物与阳性对照药物对8种呼吸道感染的病原菌和条件菌均有不同程度的抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌和肺炎双球菌作用较强。从上表可以看出，本发明药物的抑菌作用优于阳性对照药物，其中以本发明药物I的抑菌作用最强。

4、家兔解热实验

选用家兔，体重1.5～2.0Kg，雌雄各半。选取体温在38.5—39.5℃之间，且连续3天基础体温变化小于0.5℃的合格家兔48只，随机分为6组，每组8只，即空白对照组(蒸馏水10ml/Kg)，阿斯匹林对照组(0.1g/Kg)，阳性药物对照组(3.1g/Kg)，本发明药物I～III组(3.1g/Kg)。分别灌服不同药物，给药30min后，分别耳缘静脉注射伤寒疫苗1ml/Kg，30min后开始测量肛温，每0.5h测1次，连续测4h。见表19。

表19 对伤寒疫苗所致家兔发热体温的影响(n＝8，℃，x±s)

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照药物比较★P<0.05。

注射疫苗后30min，各组家兔体温均显著上升，1h达峰值，结果表明本发明药物I～III及阳性对照药物对家兔体温上升均有抑制作用，其中以本发明药物I组作用尤为显著，与阿斯匹林对照组相近，而且2h后本发明药物I组体温的降低幅度大于阿斯匹林对照组。本发明药物的抑制作用优于阳性对照药物，尤其本法明药物I的作用显著高于阳性对照药物。

具体实施例

实施例1

金银花 100g  牛黄 0.4g    射干 30g

金果榄 75g   桔梗 55g     玄参 75g

麦冬   60g   冰片 0.16g   连翘 50g

野菊花 35g

以上十味，除牛黄、冰片外，其余金银花等八味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1份，蔗糖粉4份，糊精1份，牛黄(与蔗糖粉、糊精先配研均匀)及乙醇适量，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，制成1000g，即得。

鉴别：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取2小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液。另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液。分别吸取供试品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。分别吸上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液。取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10:0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5μL，对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(10:90)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024。

对照品溶液的制备 精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备 取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.78g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_z)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定方法 分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明药物制剂相当于原药材量3.1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0mg。

实施例2

金银花  100g   牛黄 0.4g        射干 30g

金果榄  75g    桔梗 55g         玄参 75g

麦冬    60g    冰片 0.16g

以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1份，蔗糖粉4份，糊精1份，牛黄(与蔗糖粉、糊精先配研均匀)及乙醇适量，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，制成1000g，即得。

鉴别：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取2小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液。另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液。分别吸取供试品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。分别吸上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液。取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10:0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5μL，对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(10:90)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024。

对照品溶液的制备精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备  取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.78g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_z)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定方法  分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。本发明药物制剂相当于原药材量3.1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0mg。

实施例3

金银花  90g      牛黄 0.3g    射干 20g

金果榄  65g      桔梗 50g     玄参 65g

麦冬    50g      冰片 0.15g   连翘 40g

野菊花  30g

以上十味，除牛黄、冰片外，其余金银花等八味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1份，糊精2份、牛黄(与糊精先配研均匀)，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，制成500g，即得。

鉴别：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取2小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液。另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液。分别吸取供试品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液。分别吸上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液。取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10：0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液5μL，对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

实施例4

金银花 100g     牛黄 0.4g      射干 30g

金果榄 75g      桔梗 55g       玄参 75g

麦冬   60g      冰片 0.16g     连翘 50g

野菊花 35g

以上十味，除牛黄、冰片外，其余金银花等八味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1份，糊精2份、牛黄(与糊精先配研均匀)，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，制成500g，即得。

实施例5

金银花 100g     牛黄 0.4g           射干 30g

金果榄 75g      桔梗 55g            玄参 75g

麦冬   60g      冰片 0.16g

以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏，减压干燥，粉碎，加入牛黄(与糊精先配研均匀)、冰片(先用乙醇适量溶解)及适量糊精，混匀，制粒，干燥，整粒，加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，压成500片。

实施例6

金银花 100g  牛黄 0.4g   射干 30g

金果榄 75g   桔梗 55g    玄参 75g

麦冬   60g   冰片 0.16g

以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏，减压干燥，粉碎，加入牛黄(与糊精先配研均匀)、冰片(先用乙醇适量溶解)及适量糊精，混匀，制粒，干燥，整粒，制成500粒胶囊，即得。

实施例7

金银花 100g    牛黄 0.4g   射干 30g

金果榄 75g     桔梗 55g    玄参 75g

麦冬   60g     冰片 0.16g

以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏，减压干燥，粉碎成细粉，备用。牛黄粉碎成细粉，与上述药物细粉混合均匀，药物细粉与聚乙二醇以1：3混合后，再加入冰片混合均匀，滴入冷却的液体石蜡中，制成滴丸，即得。

实施例8

金银花 100g      牛黄 0.4g            射干 30g

金果榄 75g       桔梗 55g             玄参 75g

麦冬   60g       冰片 0.16g

以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.15(50℃)的清膏。牛黄粉碎成细粉，与冰片、蜂蜜及适量苯甲酸纳加入上述清膏中，混匀，制成1000ml，即得。

实施例9

金银花  120g        牛黄 0.5g            射干 40g

金果榄  85g         桔梗 60g             玄参 85g

麦冬    65g         冰片 0.17g

【制法】以上八味，除牛黄、冰片外，其余金银花等六味，加水煎煮二次，第一次加水8倍量煎煮2.5小时，第二次加水6倍量煎煮1.5小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏。取清膏1份，蔗糖粉4份，糊精1份，牛黄(与蔗糖粉、糊精先配研均匀)及乙醇适量，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，制成1000g，即得。

【性状】本品为黄棕色的颗粒；味甜、微苦。

【鉴别】(1)取本品16g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10：0.5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取射干对照药材1g，同[鉴别](1)法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别](1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5：1.5：0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(10:90)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024。

对照品溶液的制备 精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备 取本品装量差异下颗粒适量，研细，精密称取约2g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_Z)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定方法 分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每袋含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0mg。

【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定。(中国药典2005年版一部附录IC)

【功能与主治】清热利咽，解毒止痛。用于治疗流感，上呼吸道感染及肺实热引起的咽喉肿痛，口舌糜烂，咳嗽痰盛，咽炎喉炎，扁桃体炎，发热。

【用法与用量】开水冲服，一岁至二岁一次4g，一日2次；三岁至五岁一次4g，一日3次；六岁至十四岁一次8g，一日2～3次。

Claims (8)

1、一种治疗小儿咽喉炎的中药组合物，其特征在于由以下重量份的原料药组成：

金银花90～120重量份       牛黄0.3～0.5重量份            射干20～40重量份

金果榄65～85重量份        桔梗50～60重量份              玄参65～85重量份

麦冬50～65重量份          冰片0.15～0.17重量份

2、按照权利要求1所述中药组合物，其特征在于由以下重量份的原料药组成：

金银花100重量份           牛黄0.4重量份                 射干30重量份

金果榄75重量份            桔梗55重量份                  玄参75重量份

麦冬60重量份              冰片0.16重量份

3、按照权利要求1所述中药组合物，其特征在于由以下重量份的原料药组成：

金银花90～120重量份       牛黄0.3～0.5重量份            射干20～40重量份

金果榄65～85重量份        桔梗50～60重量份              玄参65～85重量份

麦冬50～65重量份          冰片0.15～0.17重量份          连翘40～60重量份

野菊花30～40重量份

4、按照权利要求3所述中药组合物，其特征在于由以下重量份的原料药组成：

金银花100重量份           牛黄0.4重量份                 射干30重量份

金果榄75重量份            桔梗55重量份                  玄参75重量份

麦冬60重量份              冰片0.16重量份                连翘50重量份

野菊花35重量份

5、按照权利要求1～4任一项所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

6、按照权利要求5所述颗粒剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

选取原料药材，除牛黄、冰片外，其余金银花等原料药，加4～10倍量水煎煮1～3次，每次1～3小时，滤过，合并煎液，滤液减压浓缩至相对密度为1.32～1.35(50℃)的清膏；取清膏1重量份，蔗糖粉4重量份，糊精1重量份，牛黄(与蔗糖粉、糊精先配研均匀)及乙醇适量，制成颗粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)，混匀，即得。

7、按照权利要求5所述中药组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇15～30ml，超声处理10～20分钟，滤过，滤液浓缩至3～6ml，做为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3～6ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(8～12∶0.3～0.6∶0.3～0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1～2g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液8～10μl、上述对照药材溶液2～4μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(16～20∶1～3∶0.1～0.4)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加40～60ml乙醇回流提取1～3小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加3～6ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液；另取金果榄对照药材粗粉1～2g，同法制成对照药材溶液；分别吸取供试品和对照药材溶液各4～5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(6～9∶1～4)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇30～50ml，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10～30ml溶解，加盐酸1～3ml，沸水浴回流1～3小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取1～3次，每次20～40ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇1～3ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材1～2g，同法制成对照药材溶液；分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加甲醇45～60ml超声处理15～30分钟，滤过，蒸干，残渣加水10～30ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇10～30ml，萃取1～3次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1～2ml溶解作为供试液；取玄参对照药材1～2g同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各8～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(8～12∶0.3～0.6)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约4～7分钟，至斑点显色清晰，取出；供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量5～7g，研细，加氯仿15～30mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.3～0.7mL使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液4～6μL，对照品溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(17～23∶20～28∶1～4∶2～6)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(6～13∶94～87)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024；

对照品溶液的制备精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加40～60％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；(10℃以下保存)；

供试品溶液的制备取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.5～0.9g，置具塞锥型瓶中，精密加入40～60％甲醇40～60ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40K_Ｚ)25～40分钟，放冷，再称定重量，用40～60％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液3～6ml，置25ml棕色量瓶中，加40～60％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定方法分别精密吸取对照品液、供试品液各8～12μl注入液相色谱仪，测定，即得；本发明药物制剂相当于原药材量2～5g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0～6.0mg。

8、按照权利要求7所述中药组合物组合物质量控制方法，其特征在于该方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，做为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一含0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙脂-甲酸-水(10∶0.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取射干对照药材1g，同(1)中供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取(1)项的供试品溶液10μl、上述对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿-甲醇-水(18.5∶1.5∶0.2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加50ml乙醇回流提取2小时，滤液水浴蒸发至干，残渣加5ml乙醚溶解，滤过，滤液作为供试品液；另取金果榄对照药材粗粉1g，同法制成对照药材溶液；分别吸取供试品和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇(9∶1)展开，喷以10％磷钼酸乙醇液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；

(4)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，加盐酸2ml，沸水浴回流2小时，放冷，溶液转移至分液漏斗中，加氯仿提取2次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材1g，同法制成对照药材溶液；分别吸上述两种溶液各10μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶5)为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸无水乙醇溶液，在105℃烘至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点；

(5)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加甲醇50ml超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加水20ml溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇20ml，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解作为供试液；取玄参对照药材1g同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(10∶0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟，至斑点显色清晰，取出；供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；

(6)取本发明药物制剂相当于原药材量6.3g，研细，加氯仿20mL研磨，滤过，滤液蒸干，加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸，猪去氧胆酸对照品，分别加无水乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液5μL，对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙醋-醋酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上层溶液为展开剂，展开，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同亮黄色的两个荧光斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；乙腈—0.4％磷酸溶液(10∶90)为流动相；检测波长为327nm，理论塔板数按绿原酸计算应不低于2024；

对照品溶液的制备精密称取绿原酸适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；(10℃以下保存)；

供试品溶液的制备取本发明药物制剂，研细，精密称取约相当于原料药材0.78g，置具塞锥型瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KH_Ｚ)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量后，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得；

测定方法分别精密吸取对照品液、供试品液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明药物制剂相当于原药材量3.1g含金银花以绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于4.0mg。