CN105052536A - 一种深层发酵制作灵芝菌种的方法 - Google Patents

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伍德富
谢刚
刘长斯
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    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
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    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05B—PHOSPHATIC FERTILISERS
    • C05B17/00—Other phosphatic fertilisers, e.g. soft rock phosphates, bone meal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
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Abstract

本发明提供一种深层发酵制作灵芝菌种的方法，步骤如下：（1）斜面试管母种制备：在斜面试管培养基上培养灵芝菌；（2）液体深层发酵：挑选菌丝纯净、洁白的斜面试管菌种，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，每隔一段时间，通入无菌洁净空气搅拌；当发酵罐中明显看到有菌丝球后，持续通入无菌洁净空气搅拌；当菌丝无明显芽头和锁状联合，菌丝变细，pH4.0-4.5时，发酵培养完成，得到灵芝菌种。使用本发明的方法作液体菌种制备，一般只需4-6天；且灵芝菌的各项性能参数均得到了改善。

Description

一种深层发酵制作灵芝菌种的方法
技术领域
本发明涉及一种深层发酵制作灵芝菌种的方法。
背景技术
“液体深层培养”就是发酵工程技术。“液体制种”实质是利用生物发酵工程生产液体菌种，取代传统、朴素的固体制种，利用生物发酵原理，给菌丝生长提供最佳的营养、酸碱度、温度、供氧量，使菌丝快速生长，迅速扩繁，在短时间达到一定菌球数量，完成一个发酵周期，即培养完毕。目前，液体制种技术已广泛应用于食用菌的工厂化、自动化生产。制种的过程一般三分步骤，即：斜面试管母种——摇瓶母种——液体深层发酵菌种，从摇瓶母种到深层发酵完成，一般需要10天左右，这种制种工艺操作过程烦杂，时间长，过程很容易感受杂菌感染导致制种失败。本发明旨在简化制种过程，提高制种效率，由斜面试管母种直接接入进行液体深层发酵培养，整个制种一般只需4-6天。
发明内容
本发明提供了一种深层发酵制作灵芝菌种的方法。
本发明提供一种深层发酵制作灵芝菌种的方法，步骤如下：
（1）斜面试管母种制备：在斜面试管培养基上培养灵芝菌；
（2）液体深层发酵：挑选菌丝纯净、洁白的斜面试管菌种，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，每隔一段时间，通入无菌洁净空气搅拌；当发酵罐中明显看到有菌丝球后，持续通入无菌洁净空气搅拌；当菌丝无明显芽头和锁状联合，菌丝变细，pH4.0-4.5时，发酵培养完成，得到灵芝菌种；其中，每1L液体深层发酵培养基的配方为：土豆100g，麦麸40g，红糖12g，葡萄糖12g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，维生素B11片，泡敌0.3mL，其余为去离子水。
优选地，步骤（1）中每1L所述斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯150-200g，葡萄糖15-25g，琼脂15-25g，磷酸二氢钾2-4g，硫酸镁1-2g，维生素B18-15mg，其余为去离子水。
优选地，步骤（1）中每1L所述斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B110mg，其余为去离子水。
优选地，步骤（2）中，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，之后每隔8-10小时，通入无菌洁净空气搅拌，气流速度0.2（v/v·min）。
优选地，步骤（2）中，当发酵罐中明显看到有菌丝球后，以0.5（v/v·min）气流速度持续通入无菌洁净空气搅拌。
在上述各优选条件下制备得到的灵芝菌种的时间更短，灵芝菌的各项性能（生长速度、菌包感染率、灵芝孢子粉产量、功效成分）更佳。
使用本发明的方法作液体菌种制备，一般只需4-6天；经试验，使用本发明得到的灵芝菌种，在以桑枝为主的栽培培养基中菌丝生长速度快，比椴木栽培生长周期缩短30天左右，菌包感染率低，从普通菌种的5%左右下降到1.0%左右；灵芝孢子粉产量大，生物转化率可达到10%，高出普通菌种的8%的生物转化率；功效成份多糖和三萜含量高，子实体多糖含量比普通菌种高出20%，三萜高出25%，孢子粉多糖含量比普通菌种高出35%，三萜高出20%。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
本发明的一种深层发酵制作灵芝菌种的方法步骤如下：
（1）斜面试管母种制备：在斜面试管培养基上培养灵芝菌，斜面试管培养基配方为：马铃薯（去皮）150-200g，葡萄糖15-25g，琼脂15-25g，磷酸二氢钾2-4g，硫酸镁1-2g，维生素B18-15mg，加去离子水至1L；当菌丝刚刚长满斜面时，进行下一步；
（2）液体深层发酵：挑选菌丝纯净、洁白的斜面试管菌种，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，之后，每隔8-10小时，通入无菌洁净空气搅拌1小时，气流速度0.2（v/v·min）（意思是通气比，即通气量为罐体体积的0.2倍每分钟，下同）。当发酵罐中明显看到有菌丝球后，以0.5（v/v·min）气流速度持续通入无菌洁净空气搅拌，每8小时观察一次。当菌丝无明显芽头和锁状联合，菌丝变细，pH4.0-4.5时，发酵培养完成，得到灵芝菌种。整个过程仅需4-6天。其中，使用的液体深层发酵培养基配方为：土豆100g，麦麸40g，红糖12g，葡萄糖12g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，维生素B11片，泡敌0.3mL，加去离子水至1L。与灵芝固体菌种相比，液体菌种深层发酵周期缩短15天左右，在连续大生产时设备硬件投资更少，生产更灵活；与其它液体发酵工艺相比较，菌丝繁殖更快，缩短1-2天时间，单位体积的菌丝体干重高出15%，发酵更快更彻底。
实施例1
本发明的一种深层发酵制作灵芝菌种的方法步骤如下。
（1）斜面试管母种制备：在斜面试管培养基上培养灵芝菌，斜面试管培养基配方为：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B110mg，加去离子水至1L；当菌丝刚刚长满斜面时，进行下一步；
（2）液体深层发酵：挑选菌丝纯净、洁白的斜面试管菌种，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，之后，每隔8小时，通入无菌洁净空气搅拌1小时，气流速度0.2（v/v·min）。2天后，在发酵罐中能够明显看到有菌丝球悬浮于培养基中，以0.5（v/v·min）气流速度持续通入无菌洁净空气搅拌，每8小时观察一次。3天后，菌丝无明显芽头和锁状联合，菌丝变细，pH4.0-4.5时，发酵培养完成，得到灵芝菌种。液体发酵过程共进行5天。
实施例2
本实施例与实施例1的不同之处在于：步骤（1）中，斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯150g，葡萄糖15g，琼脂25g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，维生素B115mg，加去离子水至1L。其余步骤均相同。
实施例3
本实施例与实施例1的不同之处在于：步骤（1）中，斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯180g，葡萄糖25g，琼脂15g，磷酸二氢钾4g，硫酸镁1g，维生素B18mg，加去离子水至1L。其余步骤均相同。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种深层发酵制作灵芝菌种的方法，其特征在于：步骤如下：
（1）斜面试管母种制备：在斜面试管培养基上培养灵芝菌；
（2）液体深层发酵：挑选菌丝纯净、洁白的斜面试管菌种，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，每隔一段时间，通入无菌洁净空气搅拌；当发酵罐中明显看到有菌丝球后，持续通入无菌洁净空气搅拌；当菌丝无明显芽头和锁状联合，菌丝变细，pH4.0-4.5时，发酵培养完成，得到灵芝菌种；其中，每1L液体深层发酵培养基的配方为：土豆100g，麦麸40g，红糖12g，葡萄糖12g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，维生素B11片，泡敌0.3mL，其余为去离子水。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中每1L所述斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯150-200g，葡萄糖15-25g，琼脂15-25g，磷酸二氢钾2-4g，硫酸镁1-2g，维生素B18-15mg，其余为去离子水。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中每1L所述斜面试管培养基的配方为：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B110mg，其余为去离子水。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，将菌种切成小块后直接接入液体发酵罐中静置培养，之后每隔8-10小时，通入无菌洁净空气搅拌，气流速度0.2（v/v·min）。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，当发酵罐中明显看到有菌丝球后，以0.5（v/v·min）气流速度持续通入无菌洁净空气搅拌。
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