CN105017356B - 一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，包括下述步骤:预湿堆放、原料处理、第一次酶解、去油、第二次酶解、柱层析、干燥。本发明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分对油和水的亲和力差异及油水比重不同而将油和非油成分分离，增加了产品收率和提高了提取率。

Description

一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法。

背景技术

桅子是茜草科(Rubiaceae)植物桅子(Gardenia jasminoides Ellis)的果实，长椭圆形或椭圆形，呈深红色或黄红色，桅子属卫生部颁布的首批药食两用资源，是传统中药。桅子具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒，利胆保肝，降压，灭菌消炎，外用消肿止痛的功效。中医临床上主要用于治疗热病，黄疽型肝炎，扭挫伤，高血压，糖尿病等。桅子中的化学成分很多，其中主要有藏花素，藏花酸(Ichietal)和京尼平甙(Geniposide)等环烯醚萜类化合物，其中京尼平甙是其主要有效成分。

京尼平苷酸，又名京尼平甙酸、金尼泊甙酸，英文名称：Geniposidic acid。来源：茜草科植物龙船花ixora chinensis Lam.叶和小枝,栀子Gardenia jasminoides Ellis.的果实,伞房花耳草(水线草)Hedyotis corymbosa lam.(Oldenlandi corymbosa L.)，杜仲科杜仲属植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的皮、叶和雄花。药理药效：1.预防性功能降低。2.增强记忆功能(抗健忘)。3.防癌、抗癌作用：日本专家佐佐木教授等人查明，杜仲具有抑制导致癌细胞突然变异的作用。这主要是由于杜仲中含有许多环烯醚萜类化合物。如京尼平甙、京尼平甙酸及甙元等具有此生理活性。京尼平苷酸和京尼平苷可用以防止X射线导致的肿瘤发生，对血液系统的辐射损害起到一定的减轻作用。4.抗氧化、抗衰老等作用：京尼平苷酸能有效促进胶原蛋白合成,防止衰老。5.泻下及促进胆汁分泌作用。6.降压作用：环烯醚萜类的京尼平苷酸具有多优良的降低血压和调节血压的功效。京尼平苷酸对大鼠心脏有明显的负性肌力作用、负性变时作用及负性冠状动脉注率作用。7.抗应激作用。

京尼平甙酸主要存在于桅子、杜仲等天然植物中，是提取京尼平甙的理想原料。国内现有提取工艺方案中存在着提取率不高、产品纯度低、能源消耗大、大量使用有机溶剂、废水量大等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：

1)预湿堆放：将栀子在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放；

2)原料处理：将步骤1)得到的栀子粉碎或破碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50-60℃维持5-10分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4-5，加入膏状浆液0.05-0.1％重量份的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40-60分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的纯净水，加热至60-70℃浸提60-120分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.1-0.2％重量份的纤维素酶进行酶解40-60分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为60-70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到膏状的京尼平甙酸，再通过干燥得到京尼平甙酸。

本发明步骤1)所述的预湿的堆放，优选1-2天。

步骤3)所述的果胶-纤维素复合酶，优选活性是1-3万活性单位/克(毫升)的固态或液态果胶-纤维复合酶。

步骤6)所述的大孔吸附树脂型号优选D101型、DA201型。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、栀子的植物细胞内含有大量的油脂，主要由成分为甘油三酯的化合物组成的混合物，这些油脂以油粒和油体原生质体形式、呈不连续颗粒状、与颗粒蛋白体一起无规则地分散在细胞内等存在形式存在。现有的提取方法，都是直接对栀子等原料打碎或粉碎后通过水提/醇提、酶解、或者微波提取等方式直接提取，在提取的时候，细胞中的油脂会同时分离出，含有油脂的基团和京尼平甙、京尼平甙酸、色素等成分混在一起，从而影响后续有效成分的分离，增加了工序的处理难度。本发明先采用酶提取植物油脂，利用非油成分对油和水的亲和力差异及油水比重不同而将油和非油成分分离，增加了产品收率和提高了提取率。

2、本发明采用栀子预湿堆放，加适量水，建堆发酵，随着发酵过程温度的上升，栀子逐渐软化，水分自然进入到内部，利于植物油脂的分离，利于后续酶解、去油。

3、本发明先采用果胶-纤维素复合酶去除细胞壁，释放植物细胞中的油脂，加入甘露醇，可以保持渗透压，利于油脂的释放。

4、本发明得到的京尼平甙酸，经HPLC检测，含量在98％以上，提取率85％以上。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，具体包括如下步骤：

1)预湿堆放：将栀子在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放1天；

2)原料处理：将步骤1)得到的栀子粉碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50℃维持5分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4，加入膏状浆液0.05％重量份活性是1万活性单位/克的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的纯净水，加热至60℃浸提120分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.1％重量份的纤维素酶进行酶解60分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用D101型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到膏状的京尼平甙酸，再通过干燥得到京尼平甙酸，经HPLC检测，含量98.2％。

实施例2：

一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，具体包括如下步骤：

1)预湿堆放：将栀子在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放1天；

2)原料处理：将步骤1)得到的栀子破碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至60℃维持8分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4.5，加入膏状浆液0.1％重量份活性是2万活性单位/毫升的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解50分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入3倍重量的纯净水，加热至70℃浸提60分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.15％重量份的纤维素酶进行酶解50分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用DA201型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为65％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到膏状的京尼平甙酸，再通过干燥得到京尼平甙酸，经HPLC检测，含量98.1％。

实施例3：

1)预湿堆放：将栀子在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放2天；

2)原料处理：将步骤1)得到的栀子粉碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至55℃维持10分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为5，加入膏状浆液0.08％重量份活性是3万活性单位/克的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解60分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入2倍重量的纯净水，加热至65℃浸提100分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.2％重量份的纤维素酶进行酶解40分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用D101型大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到膏状的京尼平甙酸，再通过干燥得到京尼平甙酸，经HPLC检测，含量98.6％。

Claims (3)

1.一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)预湿堆放：将栀子在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放1-2天；

2)原料处理：将步骤1)得到的栀子粉碎或破碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50-60℃维持5-10分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4-5，加入膏状浆液0.05-0.1％重量份的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40-60分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的纯净水，加热至60-70℃浸提60-120分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.1-0.2％重量份的纤维素酶进行酶解40-60分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为60-70％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)干燥：将洗脱液浓缩，得到膏状的京尼平甙酸，再通过干燥得到京尼平甙酸。

2.根据权利要求1所述的一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，其特征在于：步骤3)所述的果胶-纤维素复合酶，为活性是1-3万活性单位/克的固态或1-3万活性单位/毫升的液态果胶-纤维复合酶。

3.根据权利要求1所述的一种从栀子中提取京尼平甙酸的方法，其特征在于：步骤6)所述的大孔吸附树脂型号为D101型、DA201型。