CN105012938B - 重组人干扰素α2b阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种重组人干扰素α2b阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法，所述膨胀栓包括主要由重组人干扰素α2b和基质形成的含药基质和膨胀载体；所述含药基质加入苦地丁提取物，与重组人干扰素α2b有显著的协同作用，10万单位重组人干扰素α2b的抗病作用在加入苦地丁提取物后相当于30万单位干扰素的效果；所述栓剂的含药基质中还包括山奈酚‑3‑O‑β‑D槐花苷和十二烷基硫酸钠的混合物和磁性铁交联酯化木薯变性淀粉和甲壳素‑甲基纤维素的交联物形成的磁性微球，提高所述栓剂疗效。并且本发明所提供的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓采用了独创的六项领先技术，具有防止药液外流，稳定性高，疗效持久，防止二次感染等有益效果。

Description

重组人干扰素α2b阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明属于阴道栓剂领域，特别涉及一种重组人干扰素α2b阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法。

背景技术

重组人干扰素α2b，是一类由白细胞及淋巴细胞所产生的多功能和高活性的诱生蛋白，遇光和湿不稳定；临床上主要用于对宫颈炎的治疗，主要是依靠其广谱抗病毒作用和对机体的免疫调节功能。重组人干扰素α2b的剂型开发一直很不理想，影响了重组人干扰素α2b的应用，目前上市制剂主要包括片剂、栓剂；片剂塞入阴道后，重组人干扰素α2b难以溶出，难于发挥作用，且片剂对人体阴道的适应性不好；而一般的栓剂存在崩解慢、不易吸收、使用不便、起效慢、污染衣物的缺点，治疗效果受患者使用时体位的影响，患者阴道后穹窿腹侧面患处难以接触到药物。另外由于重组人干扰素α2b本身性质不稳定，制成栓剂后，稳定性差，结构很容易被破坏而失去活性，生物利用度低，因此常用人血白蛋白作为保护剂，然而人血白蛋白来源困难，价格昂贵，且有感染血液病毒风险等；且普通重组人干扰素α2b栓剂还存在着不易清洁，容易污染衣物；活性成分与人体接触面小，导致吸收不充分，没有发挥栓剂的最佳疗效等技术问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，增加重组人干扰素α2b的稳定性，充分发挥疗效，本发明研究了一种重组人干扰素α2b阴道膨胀栓及其制备 方法；同时还提供了一种能够控制上述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓产品质量的科学检测方法。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供一种重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，所述膨胀栓包括含药基质和可膨胀的膨胀载体；所述含药基质主要由重组人干扰素α2b和基质制成，含药基质涂敷在膨胀载体表面，所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1.1，所述膨胀栓各成分的重量份数为：

重组人干扰素α2b 0.03-0.65

基质 87-180

膨胀载体 80-390

所述基质选自合成脂肪酸酯、天然脂肪酸酯、类脂类基质、水溶性基质、凝胶基质、氢化油、甘油酯、分馏油或胶体化合物中的一种或多种；

所述合成脂肪酸酯选自混合脂肪酸甘油酯、硬脂酸丙二醇酯、硬化油、半合成脂肪酸甘油酯、半合成椰油酯、半合成棕榈油酯或半合成山苍子酯中的一种或多种；

所述天然脂肪酸酯选自乌桕脂、香果脂、茴香脂、油酸甲酯或可可豆脂中的一种或多种；

所述类脂类基质选自羊毛脂或羊毛醇；

所述水溶性基质选自聚乙二醇400、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油明胶、吐温60、吐温65、聚氧乙烯单硬脂酸酯或泊洛沙姆中的一种或多种；

所述凝胶基质选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、卡波姆、海藻酸或海藻酸钠中的一种或多种；

所述氢化油选自氢化花生油、氢化蓖麻油或氢化棉籽油中的一种或多种；

所述甘油酯选自甘油三棕榈酸酯、甘油三硬脂酸酯、甘油山萮酸酯或月桂酸甘油三酯中的一种或多种；

所述分馏油选自分馏棕榈油或分馏椰子油；

所述胶体化合物选自阿拉伯胶、明胶或果胶中的一种或多种。

所述重组人干扰素α2b比活性为每1mg蛋白含1亿国际单位，即1.0×10⁸IU。

本发明采用了独创的“阴道内贴附式给药技术”，该技术通过在栓剂中加入膨胀载体来实现。普通栓剂由于重力的关系，无论使用者是在站立、坐式或躺式体位下，总有阴道不能或较少接触到含药基质，所述的膨胀载体膨胀后，含药基质可呈360°与阴道内壁接触，充分给药，给药面积扩大6倍，药物直接贴附到病灶部位，使原来无法接触药物的部位也能得到有效贴附治疗；并且由于药栓在阴道当中起到的隔离作用，使创面之间不再互相接触，从而避免二次感染，使其不再反复发作。此外，膨胀载体的引入应用了“防侧漏栓体”设计理念，因为膨胀载体尾端(非含药基质)的膨胀，可以与阴道壁紧贴，进而防止药物和基质的外流，减少衣物的污染和保持药物的有效浓度。并且通过“内芯膨胀系数控制技术”，可使膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1.1。

进一步改进，所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓还包括重量份为0.015-0.18的苦地丁提取物。

本发明经过长时间的试验和探索，发现苦地丁提取物与重组人干扰素α2b在抵御女性阴道炎症病毒方面有显著的协同作用，加入苦地丁提取物后，明显增加重组人干扰素α2b对女性阴道炎症的治疗效果，10万单位重组人干扰素α2b的抗病作用在加入苦地丁提取物后相当于30万单位干扰素的效果，因此在同等治疗效果下，可以减少干扰素的用量，从而降低成本，也能降低干扰素带来的各种副作用的困扰。

进一步，所述阴道膨胀栓各成分的重量份数为：

所述基质为水溶性基质和凝胶基质的混合物，所述水溶性基质与凝胶基质的重量份数比为2-3:1。所述基质中的凝胶基质可以与药物有很好的生物相容性和粘附性，水溶性基质对身体无毒、无刺激性，能吸收组织渗出液，药物释放和渗透较快，两者配合有利于提高有效成分的生物利用度；另外凝胶基质与水溶性基质加工工艺简单，条件温和，有助于保持干扰素的生物活性。

更进一步，所述水溶性基质为泊洛沙姆，所述凝胶基质为羟丙甲纤维素，所述膨胀栓各成分的重量份数为：

优选，本发明所述的基质还包括重量份为10-15份的质量比为3:1.3的山奈酚-3-O-β-D槐花苷和十二烷基硫酸钠的混合物。

所述混合物作为保护剂使用，可提高重组人干扰素α2b的稳定性；其积极作用在于，取代人血制品，原料易得，大大降低成本，不存在潜在的病毒危险，且保护效果明显。

进一步优选，所述含药基质还包括重量份数为12-15份的磁性铁交联酯化木薯变性淀粉和1-3份的甲壳素-甲基纤维素交联物；所述交联物的交联度为23-45％，所述磁性铁交联酯化木薯变性淀粉与甲壳素-甲基纤维素交联物形成磁性微球。

本发明将磁性铁交联酯化木薯变性淀粉与甲壳素和甲基纤维素的交联物制成微球加入到含药基质中，增加了重组人干扰素α2b的稳定性，促进其吸收，并起到靶向定位释放作用，从而提高有效成分的利用度，提高所述栓剂疗效。

本发明所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1.5，所述膨胀值为径向的膨胀值；所述膨胀载体包括但不限于棉条，还可包括其他能够膨胀的无菌材料，如无纺布、弹性纤维等。

本发明所述基质呈半包围式涂敷在所述膨胀载体的前端1/5-4/5处，根据“人体工程学栓剂”形状，设计成鸭嘴形、球形、卵形、子弹形、鱼雷形、圆柱形、圆锥形或棒形等形状。

本发明所述膨胀载体的后端连有拉线，膨胀后的药栓，通过牵拉膨胀载体后端拉线，吸附在膨胀载体上的被杀灭的病毒、毒素、脱落的死皮也一并拉出体外，每次换药就等于给阴道做一次彻底清洁，从根本上预防炎症再次复发，该膨胀栓即属于“治疗清洗一体化剂型”。

为了达到本发明的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓遇水可迅速膨胀的效果，所述膨胀载体吸水后，每粒的最大吸水量不小于1.5毫升。适宜的吸水量，可以保证适宜的膨胀值，过低或过高的吸水量，都会造成不良的影响。吸水量过低时，将不能保证本发明重组人干扰素α2b阴道膨胀栓遇见水即膨胀的特点而使膨胀不充分；吸水量过高时，膨胀载体会过多的吸附药物成分而限制其扩散。因此，吸水量过低或过高，都不是本发明所期望的膨胀载体。

本发明另一方面提供了重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的制备方法，所述方法包括如下步骤：

1)含药基质的制备：

a.将基质置于水浴中60-70℃加热熔融，制得熔融物；

b.将山奈酚-3-O-β-D槐花苷、十二烷基硫酸钠和苦地丁水提取物分别加入到步骤a所制得的熔融物中，混合均匀，所得混合物降至38-45℃待用；

c.将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤b所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成栓剂。

本发明所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的制备方法采用了“药栓一次性灌装一体成形技术”。

本发明另一方面还提供了所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法，所述检测方法包括膨胀值测定方法、重量差异检测方法、含量测定等。

其中所述膨胀值测定方法包括：

a.沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓端面的径向选取一点或若干点，测定所述膨胀载体的初始长度H；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓饱和吸水后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后长度h；

c.计算所述膨胀值时，按照I式计算；

其中，p表示轴向的膨胀值、h表示膨胀后长度、H表示初始长度；

或，膨胀值测定方法如下：

a.沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的轴向选取一处或若干位置，测定所述膨胀载体的初始直径R；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓饱和吸水后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后直径r；

c.计算所述膨胀值时，按II式计算；

其中，P表示径向的膨胀值、r表示膨胀后直径、R表示初始直径；

所述重量差异测定方法包括：

a.取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，称取重量M；

b.取刮下基质的所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓中的膨胀载体，干燥，称取重量m，按照如III式计算所述基质的重量X：

X＝M-m

(Ⅲ)。

进一步，所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法中，进行融变时限检测后，再进行如下至少一种检测方法：

1)膨胀值测定方法如下：

a.先沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓端面的径向选取一点或若干点，测定所述膨胀载体的初始长度H后，再滚动不同角度测量若干次，求平均值Hi；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行融变时限检测后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后长度h；再滚动不同角度测量若干次，求膨胀后平均长度hi；

c.计算所述膨胀值时，按照I式计算；

其中，pi表示轴向的膨胀值、hi表示膨胀后平均长度、Hi表示平均初始长度；

或，所述膨胀值测定方法如下：

a.先在一个角度沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的轴向选取一处或若干位置，测定所述膨胀载体的初始直径R后，再滚动不同角度测量若干次，求平均值Ri；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行融变时限检测后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后直径r；再滚动不同角度测量若干次，求膨胀后平均直径ri；

c.计算所述膨胀值时，按II式计算；

其中，Pi表示径向的膨胀值、ri表示膨胀后平均直径、Ri表示平均初始直径；

其中所述融变时限测定方法(现行中国药典二部附录)包括：取 所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓3粒，在室温放置1小时后，分别放在3个金属架的下层圆板上，装入各自的套管内，并用挂钩固定。除另有规定外，将上述装置分别垂直浸入盛有不少于4L的37.0±0.5℃水的容器中，其上端位置应在水面下90mm处，容器中装一转动器，每隔10分钟在溶液中翻转该装置一次。以上数值范围不应理解为对本发明的限制，不在上述数值范围内的技术方案也在本发明的保护范围内。

2)重量差异测定方法：

a.取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，称取重量M；

b.刮下基质和含药粘膜层，将膨胀载体置于20-90℃有机溶剂中，取出，于50-150℃干燥1-10h，称取重量m,按照如Ⅲ式计算所述基质和含药粘膜层的总重量X：

X＝M-m (Ⅲ)

其中，所述有机溶剂包括乙醇、甲醇或异丙醇中的一种或多种。

更进一步，所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法中，所述膨胀载体为棉条，所述检测包括如下至少一种方法：

1)膨胀值测定方法：

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓3粒，用游标卡尺测其尾部棉条直径，滚动约90°再测一次，每粒测两次，求出每粒测定的2次平均值Ri；将上述3粒栓用于融变时限测定结束后，立即取出剩余棉条，待水断滴，均轻置于玻璃板上，用游标卡尺测定每个棉条的两端以及中间三个部位，滚动约90°后再测定三个部位，每个棉条共获得六个数据，求出测定的6次平均值r_i，计算每粒的膨胀值P_i，三粒栓的膨胀值均应大于1.5；

2)重量差异测定方法：

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓10粒，分别精密称定重量， 轻刮下基质和含药粘膜层(不得损失棉条)，将棉条置于50-80℃的200-400ml乙醇中，优选地，将棉条置于60-70℃的300ml乙醇中，并在80KHz频率超声清洗5分钟，使棉条表面残余的基质溶解脱除，取出棉条用力挤干，再用滤纸吸3遍，于105℃干燥2小时，取出，室温放置1小时后，分别精密称定棉条重量，求出每粒含基质和含药粘膜层总重量与相对于总粒数的平均的基质和含药粘膜层总重量，并对二者进行比较，超出平均重量±10％的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。

本发明所提供的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的膨胀值的测定方法采用多角度多次测量方法，提高了测量的准确度，增加了测定的可操作性，方法更易于判断；在执行国家药典附录重量差异的标准检测本发明所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓时，需将基质刮下来，由于操作人员掌握的刮取程度不同，造成每粒刮取程度差异较大，所以本发明采用溶剂溶解膨胀栓表面的基质，经过试验验证，当采用热乙醇清洗膨胀栓表面的基质时，结果更理想，重现性更高，所述的重量差异测定方法更方便稳定。

本发明所提供的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓具有稳定性高、疗效好等有益效果，并且该重组人干扰素α2b阴道膨胀栓采用了独创的六项领先技术，所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓中的膨胀载体的加入应用了独创的“药栓一次性灌装一体成形”技术、“内芯膨胀系数控制”技术、“人体工程学栓型”技术、“治疗清洁一体化”剂型、“阴道内贴附式给药”技术、“防侧漏栓体设计”六项技术，该膨胀载体可使重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的含药粘膜层与阴道内壁充分接触，并且防止药液外流，还具有清理阴道防止二次感染的功效；苦地丁提取物与重组人干扰素α2b对女性阴道炎症病毒有显著的协同作用，加入苦地丁提取物后，明显增加重组人干扰素α2b对女性阴道 炎症的治疗效果，10万单位重组人干扰素α2b的抗病作用在加入苦地丁提取物后相当于30万单位干扰素的效果，因此在同等治病效果下，可以减少干扰素的用量，从而降低成本，也能降低干扰素带来的各种副作用的困扰；所述山奈酚-3-O-β-D槐花苷和十二烷基硫酸钠的混合物提高了重组人干扰素α2b的稳定性；将磁性铁交联酯化木薯变性淀粉与甲壳素-甲基纤维素的交联物制成的磁性微球加入到含药基质中，增加了重组人干扰素α2b的稳定性，促进其吸收，并起到靶向定位释放的作用，从而提高有效成分的利用度，提高所述栓剂疗效。

附图说明

图1和图2为膨胀值测定方法示意图。

具体实施方式

实施例1

制备方法：

1)将泊洛沙姆和羟丙甲纤维素置于水浴中60℃加热熔融，制得熔融物，并降至38℃待用；

2)将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤1)所得熔融物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

3)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成100枚圆锥形栓剂，每枚重约1.67g。

实施例2

制备方法：按实施例1方法制成150枚棒形栓剂，每枚重约3.8g。

实施例3

制备方法：

1)将泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠置于水浴中70℃加热熔融，混合均匀后制得熔融物；

2)将山奈酚-3-O-β-D槐花苷和十二烷基硫酸钠分别加入到步骤a所制得的熔融物中，混合均匀，所得混合物降至45℃待用；

3)将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤b所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

4)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成80枚棒形栓剂，每枚重约2.46g。

实施例4

制备方法：

1)将苦地丁研碎，加入重量3倍的水煎熬3h,取水煎液后，向残渣内加入苦地丁重量2倍的水再次煎熬3h,去除残渣后合并水煎液，过滤，减压浓缩成膏后，喷雾干燥，制得苦地丁提取物；

2)将泊洛沙姆和羟丙甲纤维素置于水浴中65℃加热熔融，混合均匀后制得熔融物；

3)将山奈酚-3-O-β-D槐花苷、十二烷基硫酸钠和苦地丁提取物分别加入到步骤a所制得的熔融物中，混合均匀，所得混合物降至40℃待用；

4)将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤b所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

5)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成80枚棒形栓剂，每枚重约4.38g。

实施例5

制备方法：

1)将苦地丁研碎，加入重量5倍的无水乙醇蒸馏3h,取蒸馏液后，向残渣内加入苦地丁重量3倍的无水乙醇再次蒸馏3h,去除残渣后合并蒸馏液，过滤，减压浓缩成膏后，喷雾干燥，制得苦地丁提取物；

2)将聚乙二醇400和乌桕酯胶置于水浴中65℃加热熔融，混合均匀后制得熔融物；

3)将山奈酚-3-O-β-D槐花苷、十二烷基硫酸钠和苦地丁提取物分别加入到步骤a所制得的熔融物中，混合均匀，所得混合物降至38℃待用；

4)将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤3)所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

5)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制得所述的重组人干扰素α2а阴道膨胀栓100枚，每枚重约5.86g。

实施例6

制备方法：

1)将苦地丁研碎，加入重量5倍的无水乙醇蒸馏3.5h,取蒸馏液后，向残渣内加入苦地丁重量3倍的无水乙醇再次蒸馏3h,去除残渣后合并蒸馏液，过滤，减压浓缩成膏后，喷雾干燥，制得苦地丁提取物；

2)将磁性铁交联酯化木薯变性淀粉用50％乙醇溶解后置于超声波分散器中，超声震荡30min，制得醇溶液；将交联度为23％的甲壳素和甲基纤维素的交联物加入到上述醇溶液中混合，溶液温度保持50-60℃，磁力搅拌1000r·min^-112h；离心分离，蒸馏水洗涤，室温干燥，得到所述磁性微球；

3)将苦地丁提取物与步骤2所得的磁性微球混合均匀，制得混合物；

4)将羧甲基纤维素钠和吐温65置于水浴中68℃加热熔融，混合均匀后制得熔融物；

5)将山奈酚-3-O-β-D槐花苷、十二烷基硫酸钠和步骤3)制得的混合物依次加入到熔融物中，混合均匀，所得混合物降至38℃待用；

6)将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤5)所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

6)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成100枚卵形栓剂，每枚重约2.73g。

实施例7

制备方法：按实施例6方法制成100枚鸭嘴形栓剂，每枚重约4.02g。

实施例8

制备方法：按实施例6方法制成100枚鱼雷形栓剂，每枚重约3.37g。

对照例1

制备方法：按实施例3方法制成80枚棒形栓剂，每枚重约2.37g。

试验例1重组人干扰素α2b阴道膨胀栓抗HSV1和HSV2的试验

1材料

1.1 HSV1和HSV2由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，-60℃冻存，取出溶化后为5个TCID₅₀。

1.2按实施例四步骤1)所述的苦地丁水提取物，合并煎液，过滤，除菌后待用；

1.3按实施例4所述的重组人干扰素α2b和苦地丁提取物的比例相混合，制备效价(IU/ml)为1×10⁵，3×10⁵，5×10⁵和1×10⁵的水溶液(灭菌生理盐水稀释)。

1.4 FL(人羊膜细胞)，上海拜力生物科技有限公司提供。

1.5培养液：1640培养液，上海拜力生物科技有限公司提供。

2方法

干扰素病毒同时感染法：

用96孔细胞培养板培养细胞，每孔加入0.1ml细胞悬液，待细胞形成单层后，用于试验。试验组54孔，对照组54个孔，每个条件下三个平行试验，去除生长液，试验组每孔加入0.1ml病毒，0.1ml试验液；对照组每孔加入0.1ml病毒，置于37℃CO²孵箱中，每天观察病变，待对照组出现病变后，按常规方法进行测定和计算TCID₅₀抑制效价，结果见表1。

表1重组人干扰素α2b阴道膨胀栓抗HSV1和HSV2的抑制作用

从表中可以看出，单独苦地丁提取物对HSV病毒无明显体外直接灭活作用，重组人干扰素α2b对HSV病毒有抑制效果，但是将苦地丁提取物与重组人干扰素α2b联合应用，相互协同，明显增加了干扰素对HSV病毒原有的抑制作用，采用10万单位干扰素与苦地丁提取物联合应用可以产生高于30万单位单纯干扰素抗病毒的效果。

试验例2.本发明所述阴道膨胀栓中重组人干扰素α2b体外活性稳定性试验

用TF-1细胞/MTT比色法，取实施例2、实施例3、对照例1所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓和市售的重组人干扰素α2b栓(商品名：安达芬)进行对比试验，效价依次分别为4.3×10⁸IU/枚、3.7×10⁷IU/枚、4.3×10⁷IU/枚、5×10⁵IU/枚，分别在4℃、25℃和37℃条件下考查其重组人干扰素α2b体外活性，考察结果见表2-4。

表2 4℃条件下重组人干扰素α2b体外活性结果

表3 25℃条件下重组人干扰素α2b体外活性结果

表4 38℃条件下重组人干扰素α2b体外活性结果

由如上实验结果可知，4℃条件下，实施例3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓可保存两年，干扰素活性基本无变化，实施例2、对照例1以及对照组重组人干扰素α2b栓剂在12个月后已发生变化；25℃条件下，实施例3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓12个月后仍没有变化，实施例2、对照组及对照例1的重组人干扰素α2b栓剂的干扰素活性于4个月开始就开始明显下降；在38℃条件下，保存24个月后实施例3的活性稍有降低，但均在合格范围内；而实施例2以及对照组、对照例1的生物活性降低较多，12个月后就降低50％以下。实施例3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的稳定性要远优于实施例2所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓和对照组所述栓剂，对照组1所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓中常用保护剂不能够提高重组人干扰素α2b的稳定性。

试验例3膨胀值测定试验

方法一

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓3粒，用游标卡尺测其尾部棉条直径，滚动约90°再测一次，每粒测两次，求出每粒测定的2次平均值Ri；将上述3粒栓用于融变时限测定结束后，立即取出剩余棉条，待水断滴，均轻置于玻璃板上，用游标卡尺测定每个棉条的两端以及中间三个部位，滚动约90°后再测定三个部位，每个棉条共获得六个数据，求出测定的6次平均值r_i，计算每粒的膨胀值P_i，三粒栓的膨胀值均大于1.5。

根据上述膨胀值测定方法测定实施例1-8所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的膨胀值如表5所示。

表5实施例1-8重组人干扰素α2а阴道膨胀栓的膨胀值

方法二

如图1和图2所示，阴道膨胀栓的检测方法：

1)膨胀值测定方法：

a.先沿所述阴道膨胀栓端面的径向选取C1、C2、C3三个点，用游标卡尺测定所述膨胀载体的初始长度H1、H2、H3后，再滚动90°测量，沿所述阴道膨胀栓端面的径向选取C1、C4、C5三个点用游标卡尺测定所述膨胀载体的初始长度H4、H5、H6后，求H1、H2、H3、H4、H5和H6的平均值Hi；

b.所述阴道膨胀栓进行融变时限检测后，用游标卡尺测定在a步中所选的C1、C2、C3三个位置处膨胀载体膨胀后长度h1、h2、h3；再滚动90°，用游标卡尺测定在a步中所选的C1、C4、C5三个位置处膨胀载体膨胀后长度h4、h5、h6，求h1、h2、h3、h4、h5和h6的平均长度，即为膨胀后平均长度hi；

c.计算所述膨胀值时，按照I式计算；

其中，pi表示轴向的膨胀值、hi表示膨胀后平均长度、Hi表示平均初始长度；

或，膨胀值测定方法：

d.先在一个角度沿所述阴道膨胀栓的轴向选取A1、A2和A3三个点，用游标卡尺测定所述膨胀载体的初始直径R1、R2和R3后，再滚动90°，沿所述阴道膨胀栓的轴向选取B1、B2和B3三个点，用游标卡尺测定所述膨胀载体的初始直径R4、R5和R6后，求R1、R2、R3、R4、R5和R6六个初始直径的平均值Ri；

e.所述阴道膨胀栓进行融变时限检测后，测定在d步中所选的A1、A2和A3位置处膨胀载体膨胀后直径分别为r1、r2和r3，；再滚动90°测量d步中所选的B1、B2和B3位置处膨胀载体膨胀后直径分别为r4、r5和r6，求r1、r2、r3、r4、r5和r6的平均值，得膨胀后平均直径ri；

f.计算所述膨胀值时，按II式计算；

其中，Pi表示径向的膨胀值、ri表示膨胀后平均直径、Ri表示平

均初始直径。

其中所述融变时限测定方法(现行中国药典二部附录)包括：取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓3粒，在室温放置1小时后，分别放在3个金属架的下层圆板上，装入各自的套管内，并用挂钩固定。除另有规定外，将上述装置分别垂直浸入盛有不少于4L的37.0±0.5℃水的容器中，其上端位置应在水面下90mm处，容器中装一转动器，每隔10分钟在溶液中翻转该装置一次。以上数值范围不应理解为对本发明的限制，不在上述数值范围内的技术方案也在本发明的保护范围内。

试验例4重量差异测定试验

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓10粒，分别精密称定重量，轻刮下含药基质(不得损失棉条)，将棉条置于60-70℃的300ml乙醇 中，并在80KHz频率超声清洗5分钟，使棉条表面残余的基质溶解脱除，取出棉条用力挤干，再用滤纸吸3遍，于105℃干燥2小时，取出，室温放置1小时后，分别精密称定棉条重量，求出每粒含基质和含药粘膜层总重量与相对于总粒数的平均的基质和含药粘膜层总重量，并对二者进行比较，超出平均重量±10％的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。

重复上述操作，检测实施例1-8所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其重量差异均符合标准。

试验例5临床试验

一、研究方法

(一)研究方案参照中华人民共和国卫生部新药临床指导原则有关“妇产科生殖道炎症局部用药的临床验证”内容而制定。

(二)诊断标准

1、宫颈炎症状：白带增多，呈脓性或乳白色，呈黏液状或白带中夹有血丝，或性交出血，伴下腹不适，外阴瘙痒，腰骶部疼痛，经期加重伴腰痛；

2、妇科检查：宫颈充血水肿，或有不同程度的糜烂，有脓性分泌物白宫颈管排出，触动宫颈时可有疼痛感；宫颈有肥大、息肉、腺体囊肿、外翻等表现，或见宫颈口有脓性分泌物，触诊宫颈较硬，或有接触性出血；

3、实验室检查：宫颈刮片示巴氏Ⅱ级。

(三)试验病例标准

患者83例，年龄在21-50岁，符合细菌诊断的已婚妇女，其中检测出感染HPV病毒的有58例。

(四)治疗方法

1、治疗组1：使用本发明实施例3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行治疗，每日一粒，7天为一疗程。

2、治疗组2：使用本发明实施例5所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行治疗，每日一粒，7天为一疗程。

3、治疗组3：使用本发明实施例6所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行治疗，每日一粒，7天为一疗程。

4、对照组：使用市售的重组人干扰素α2b栓(商品名：安达芬)治疗，每日一粒，7天为一疗程。

(五)观察项目

治疗性观察

(1)症状：分泌物的量、颜色、状态；

(2)妇科检查：包括阴道分泌物检查及宫颈检查；

(3)实验室检查：包括宫颈刮片检查。

(六)疗效判定标准

1、痊愈：症状消失，妇科检查和实验室检查正常；

2、显效：症状明显减轻，妇科检查和实验室检查明显好转；

3、有效：症状有所减轻，妇科检查和实验室检查好转；

4、无效：治疗前后无变化。

二、治疗结果

(一)宫颈炎的治疗效果比较见表6

(二)宫颈炎的治疗时间比较见表7。

表6宫颈炎的治疗效果比较

表7宫颈炎的治疗时间比较

三、结论

由上述临床试验可知，本发明所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓对宫颈炎的治疗效果要优于市售的重组人干扰素α2b栓(商品名：安达芬)，其中实施例6所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓治疗宫颈炎有效率可达95.6％，疗效优于实施例5所述的阴道膨胀栓，疗效相对弱一些的为实施例3所述的阴道膨胀栓。另外，对治疗组1、治疗组2和对照组痊愈病例的治疗时间做了监控，发现治疗组2的患者痊愈时间较快，在10疗程时已经病患痊愈率以达到89％，同期治疗组1的痊愈率为41％，对照组为12.5％，说明本发明所述的重组人干扰素α2b栓不但治疗效果好，且见效快，是一种优良的治疗宫颈炎的外用药物栓剂。

在验证其疗效过程中，未发现毒副作用，对皮肤粘膜无刺激性，安全可靠；使用本发明所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行治疗，HPV阳转阴率达100％，有效治疗宫颈炎，并对宫颈癌有较好的预防作用。

Claims (9)

1.一种重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其特征在于，所述膨胀栓包括含药基质和可膨胀的膨胀载体；所述含药基质主要由重组人干扰素α2b和基质制成，含药基质涂敷在膨胀载体表面，所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1.1，所述膨胀栓各成分的重量份数为：

重组人干扰素α2b 0.03-0.65

基质 87-180

膨胀载体 80-390

所述基质选自聚乙二醇1500、聚乙二醇4000与海藻酸的组合物、羧甲基纤维素钠与泊洛沙姆的组合物、羟丙甲纤维素与泊洛沙姆的组合物、聚乙二醇400与乌桕脂的组合物、羧甲基纤维素钠与吐温65的组合物或甘油明胶与海藻酸钠的组合物中的一种；

所述含药基质还包括重量份数为0.015-0.18的苦地丁提取物；

所述苦地丁提取物由如下方法制备而成：

将苦地丁研碎，加入重量3-5倍的溶剂处理3-3.5h,取处理液后，向残渣内加入苦地丁重量2-3倍的溶剂再次处理3h,去除残渣后合并处理液，过滤，减压浓缩成膏后，喷雾干燥，制得苦地丁提取物；

其中溶剂选自水或无水乙醇，所述处理选自水煎熬或蒸馏。

2.如权利要求1所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其特征在于，所述基质为泊洛沙姆和羟丙甲纤维素的混合物，所述膨胀栓各成分的重量份数为：

3.如权利要求1所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其特征在于，所述含药基质还包括重量份数为10-15的质量比为3:1.3的山奈酚-3-O-β-D槐花苷和十二烷基硫酸钠的混合物。

4.如权利要求3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其特征在于，所述含药基质还包括重量份数为12-15份的磁性铁交联酯化木薯变性淀粉和1-3份的甲壳素-甲基纤维素交联物；所述交联物的交联度为23-45％，所述磁性铁交联酯化木薯变性淀粉与甲壳素-甲基纤维素交联物形成磁性微球。

5.如权利要求1-4任一所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，其特征在于，所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1.5，所述膨胀值为径向的膨胀值；所述膨胀载体为棉条；所述基质呈半包围式涂敷在所述膨胀载体的前端1/5-4/5处，所述膨胀载体的后端连有拉线；所述膨胀载体吸水后，每粒的最大吸水量不小于1.5毫升。

6.如权利要求3所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)含药基质的制备：

a.将基质置于水浴中60-70℃加热熔融，制得熔融物；

b.将山奈酚-3-O-β-D槐花苷、十二烷基硫酸钠和苦地丁提取物分别加入到步骤a所制得的熔融物中，混合均匀，所得混合物降至38-45℃待用；

c.将重组人干扰素α2b缓慢加入步骤b所得混合物中，同时缓慢搅拌均匀，尽量避免气泡产生，制得含药基质；

2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，冷却定型，制成栓剂。

7.如权利要求1-4任一所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下至少一种方法：

1)膨胀值测定方法如下：

a.沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓端面的径向选取一点或若干点，测定所述膨胀载体的初始长度H；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓饱和吸水后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后长度h；

c.计算所述膨胀值时，按照I式计算；

其中，p表示轴向的膨胀值、h表示膨胀后长度、H表示初始长度；

或，膨胀值测定方法如下：

a.沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的轴向选取一处或若干位置，测定所述膨胀载体的初始直径R；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓饱和吸水后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后直径r；

c.计算所述膨胀值时，按II式计算；

其中，P表示径向的膨胀值、r表示膨胀后直径、R表示初始直径；

2)重量差异测定方法：

a.取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，称取重量M；

b.取刮下含药基质的所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓中的膨胀载体，干燥，称取重量m，按照如III式计算所述含药基质的重量X：

X＝M-m

(Ⅲ)。

8.如权利要求1-4任一所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下至少一种方法：

1)膨胀值测定方法如下：

a.先沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓端面的径向选取一点或若干点，测定所述膨胀载体的初始长度H后，再滚动不同角度测量若干次，求平均值Hi；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行融变时限检测后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后长度h；再滚动不同角度测量若干次，求膨胀后平均长度hi；

c.计算所述膨胀值时，按照I式计算；

其中，pi表示轴向的膨胀值、hi表示膨胀后平均长度、Hi表示平均初始长度；

或，膨胀值测定方法如下：

a.先在一个角度沿所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的轴向选取一处或若干位置，测定所述膨胀载体的初始直径R后，再滚动不同角度测量若干次，求平均值Ri；

b.所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓进行融变时限检测后，测定在a步中所选位置处膨胀载体膨胀后直径r；再滚动不同角度测量若干次，求膨胀后平均直径ri；

c.计算所述膨胀值时，按II式计算；

其中，Pi表示径向的膨胀值、ri表示膨胀后平均直径、Ri表示平均初始直径；

2)重量差异测定方法：

a.取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓，称取重量M；

b.刮下含药基质，将膨胀载体置于20-90℃有机溶剂中，取出，于50-150℃干燥1-10h，称取重量m,按照如Ⅲ式计算所述含药基质的重量X

X＝M-m(Ⅲ)

其中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇或异丙醇中的一种或多种。

9.如权利要求8所述的重组人干扰素α2b阴道膨胀栓的检测方法，其特征在于，所述膨胀载体为棉条，所述检测包括如下至少一种方法：

1)膨胀值测定方法：

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓3粒，用游标卡尺测其尾部棉条直径，滚动90°再测一次，每粒测两次，求出每粒测定的2次平均值Ri；将上述3粒栓用于融变时限测定结束后，立即取出剩余棉条，待水断滴，均轻置于玻璃板上，用游标卡尺测定每个棉条的两端以及中间三个部位，滚动90°后再测定三个部位，每个棉条共获得六个数据，求出测定的6次平均值r_i，计算每粒的膨胀值P_i，三粒栓的膨胀值均应大于1.5；

2)重量差异测定方法：

取所述重组人干扰素α2b阴道膨胀栓10粒，分别精密称定重量，轻刮下含药基质，不得损失棉条，将棉条置于50-80℃的200-400ml乙醇中，并在80KHz频率超声清洗5min，使棉条表面残余的基质溶解脱除，取出棉条用力挤干，再用滤纸吸3遍，于105℃干燥2h，取出，室温放置1小时后，分别精密称定棉条重量，求出每粒含药基质重量与平均含药基质重量，每粒含药基质重量与平均含药基质重量比较，超出平均含药基质重量±10％的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。