CN105012387A - 一种注射用丹参提取物的快速制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属中药制药领域，涉及一种注射用丹参提取物的快速制备方法。本发明采用粉碎后的丹参与活性炭混合柱层析提取技术，以碱水为流动相进行柱层析，所得粗提液经管式高速离心机处理后减压浓缩，加乙醇至85%沉淀一次，上清液离心后浓缩即得注射用丹参提取物。本方法可以有效的获得注射用丹参提取物，工艺流程简单，可操作性强，产品得率高，有效成分含量高，生产成本低，适用于批量生产。
Description
技术领域
本发明涉及注射用丹参提取物的制备方法，其特点是能有效提高产品得率和有效成分含量，降低生产成本，属于中药制药领域。
技术背景
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。全国大部分地区都有分布。又名赤参、大红袍、红根等。始载于《神农本草经》，味苦，微寒，无毒。归心、肝经。具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。在临床主要用于治疗心血管、高血压、脑缺血等疾病。现代研究发现其化学成分主要为两大类，即水溶性丹参酚酸类和脂溶性丹参酮(Tanshinone)类。前者水溶性丹参酚酸类成分(如原儿茶醛等)是丹参注射液的主要活性成分，后者脂溶性丹参酮(如丹参酮IIA等)是丹参口服制剂的主要活性成分。
丹参注射液是我国基本药物目录中治疗心脑血管疾病的重要治疗药物，由四川省药品检验所起草制定的质量标准中记载了其制法(标准编号：WS3-B-3766-98)。取丹参1500g，加水煎煮三次，第一次2h，第二、三次各1.5h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至750mL。加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为75％，第二次使含醇量为85％，每次均冷藏放置后滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至约250mL，加注射用水至400mL，混匀，冷藏放置，滤过，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，煮沸0.5h，滤过，加注射用水至1000mL，灌封，灭菌，即得。
由于不同厂家的生产设备和生产条件不同，按照此工艺所生产出的产品有效成分含量差异较大，质量不稳定。有研究表明高温对于水溶性酚酸类成分影响较大，工艺中高温时间越长所得提取物有效成分含量越低。该制法中注射用丹参提取物的制备过程包括3次水煎煮、3次减压浓缩和3次过滤，制备过程十分繁琐，且耗时费力，多次高温加热会导致部分有效成分降解，降低提取物得率和有效成分含量，造成药用植物资源的浪费并消耗大量的能源和人力。减少生产过程中的高温环节是提高提取物得率和有效成分含量最直接的方法。
《国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020)》明确提出“加快建立并完善国家医药创制技术平台，推进重大新药的自主创新研制”作为人口与健康领域的战略突破口，应用新技术有效提高药品质量、降低生产成本，是降低药品价格、提高医疗保障水平的重要手段之一。以注射用丹参提取物为目标，开展中药大品种的二次开发，建立一种质量更加稳定可控，工艺更加节能环保，成本更加低廉易行的制备方法，具有重要的应用价值。
目前丹参注射液所用提取物采用的制备方法以热回流提取法为主，提取液保持高温时间很长，对于冷却条件不好的企业更加严重，接触罐体的部分药材会因为局部过热导致有效成分降解严重，影响提取效率，同时可能出现导致不良反应的降解产物。为了最大程度的保持提取物与原植物成分一致，如果能建立一种注射用丹参提取物的快速制备方法，简化样品提取步骤，减少样品提取时的高温时间，提高提取物质量，可帮助企业生产时提高生产效率的同时降低生产成本，提升丹参注射液的内在品质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种注射用丹参提取物的快速制备方法，解决了传统分析样品制备方法提取时间长、提取温度高、有效成分制备过程损失多、提取物得率低等问题。该方法具有高效、快速、提取温度低、有机溶剂消耗少、能源消耗低的特点，最大程度的减少有效成分的损失。
本发明方法采用粉碎后的丹参与活性炭混合装柱，以碱水为流动相进行柱层析，所得粗提液经管式高速离心机处理后减压浓缩，加乙醇至85％沉淀一次，上清液离心后浓缩即得注射用丹参提取物。该方法全过程仅有2次减压浓缩温度较高，其他步骤均可在室温下进行，操作步骤简单，工艺周期较原方法缩短，所得注射用丹参提取物得率和有效成分含量高于原工艺。
本发明方法的特征在于，包括下列步骤：
1、将丹参药材和活性炭以10:1-5:1的比例混合，使用粉碎机打成细粉。
2、混合细粉装进不锈钢柱里，不锈钢柱内径为50-75cm，可加压洗脱。
3、上述柱使用装柱细粉重量(公斤)的10-15倍量的碱水(升)W/V洗脱，收集到的洗脱液即为丹参水溶性有效部位粗提部分，所述的碱水为0.5-3％的氢氧化钠水溶液。
4、洗脱液减压浓缩至1-2倍量体积后，使用管式离心机处理，离心转速为12000-16000rpm，流速8-12L/min。
5、上清液加95％乙醇调节至乙醇含量为85％，置于夹套内可通冷冻水的醇沉罐中，静置沉淀6-12h，冷冻水温度0-10℃。
6、醇沉结束后将溶液通过管式离心机处理，离心转速为12000-16000rpm，流速8-12L/min。
7、上清液经减压浓缩至0.1-0.2倍细粉重量，即得注射用丹参提取物浸膏，可用于丹参注射液的生产。
本发明提取丹参中水溶性有效成分的方法，该方法相比于原工艺操作简便、提取效率高、过程高温步骤少、重现性好、回收率高、有机溶剂用量少、能源消耗低。应用本方法能更加快速的获得注射用丹参提取物，提升丹参注射液制剂的质量，可帮助企业提高生产效率并降低成本。
具体实施方式
下面提供的实施例，仅为进一步说明本发明，对本发明并不构成任何限制。
实施例1：注射用丹参注射液提取物浸膏制备
取20kg丹参药材和3kg活性炭混合，使用自动筛粉机收集40-50目细粉，共获得细粉22.5kg。将细粉装入预先定制好的不锈钢柱内，不锈钢柱直径为75cm，柱高3m。使用50L 1％氢氧化钠水溶液浸泡细粉2h，随后使用220L 1％氢氧化钠水溶液洗脱，流速控制为1L/min。洗脱液使用双效浓缩罐回收，获得30L浓缩液，收集到的浓缩液使用管式离心机处理，离心转速为15000rpm，流速8L/min，共获得上清液27.5L，加入95％乙醇235L，置于醇沉罐中，冷冻水温度为5℃。静置8h后，使用管式离心机处理醇沉液，离心转速为16000rpm，流速10L/min。上清液使用双效浓缩罐回收，获得约3.3L浓缩浸膏，备用。
取上述浸膏0.3L减压干燥后，获得提取物83.7g，浸膏得率5.58％。
取同批次丹参20kg，按照标准制法制备提取物，取丹参加水煎煮三次，第一次2h，第二、三次各1.5h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至10L。加乙醇沉淀二次，第一次使含醇量为75％，第二次使含醇量为85％，每次均冷藏放置后滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至约3.3L。
取上述浸膏0.3L减压干燥后，获得提取物71.8g，浸膏得率4.79％。
应用本发明制备注射用丹参提取物可提高得率16.5％。
表1 两种方法制备丹参提取物得率比较
| 指标 | 本发明方法 | 原工艺方法 |
| 得率(％) | 5.58 | 4.79 |
实施例2：不同工艺所得提取物制备丹参注射液的比较
1、应用本发明方法制备丹参注射液
注射用丹参提取物制备操作同实施例1。
取250mL浸膏按照标准注射液制法制备丹参注射液，加注射用水至400ml，混匀，冷藏放置，滤过，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，煮沸0.5h，滤过，加注射用水至1000mL，灌封，灭菌，即得。
2、原工艺方法制备丹参注射液
注射用丹参提取物制备操作同实施例1。
取250mL浸膏按照标准注射液制法制备丹参注射液，加注射用水至400ml，混匀，冷藏放置，滤过，用10％氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，煮沸0.5h，滤过，加注射用水至1000mL，灌封，灭菌，即得。
以上述两种方法所得丹参注射液为对象，按照丹参注射液质量标准中的含量测定项进行检测。以儿茶醛为对照品，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2mol/L醋酸铵(用硫酸调节pH值至2.2)(12:88)为流动相，检测波长为280nm。取装量差异项下的上述提取物，精密量取2mL，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定两种样品中的儿茶醛含量。本品每1mL含原儿茶醛(C7H6O3)不得少于0.2mg。
表2 两种方法制备丹参注射液的含量比较
| 检测指标 | 本发明方法 | 原工艺方法 |
| 儿茶醛(mg/mL) | 0.32±0.04 | 0.25±0.03 |
本发明采用的混合柱层析提取技术，可以有效的获得注射用丹参提取物，工艺流程简单，可操作性强，产品得率高，有效成分含量高，生产成本低，适用于批量生产。
Claims (5)
1.一种注射用丹参提取物的快速制备方法，其特征在于，采用粉碎后的丹参与活性炭混合装柱，以碱水为流动相进行柱层析，所得粗提液经管式高速离心机处理后减压浓缩，加乙醇至85%沉淀一次，上清液离心后浓缩即得注射用丹参提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其包括下述步骤：
(1) 将丹参药材和活性炭以10:1-5:1的比例混合，使用粉碎机打成细粉；
(2) 混合细粉装进不锈钢柱里，不锈钢柱内径为50-75cm，可加压洗脱；
(3) 上述柱使用装柱细粉重量（公斤）的10-15倍量的碱水（升）W/V洗脱；
(4) 洗脱液减压浓缩至1-2倍量体积后，使用管式离心机处理；
(5) 上清液加95%乙醇调节至乙醇含量为85%，醇沉；
(6) 醇沉结束后将溶液通过管式离心机处理；
(7) 上清液经减压浓缩至0.1-0.2倍细粉重量，即得。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述的碱水为0.5-3%的氢氧化钠水溶液。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述的管式离心机转速为12000-16000rpm，流速8-12L/min。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述的静置沉淀时间为6-12h，冷冻水温度0-10℃。
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