CN104991063A - 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法 - Google Patents

基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104991063A
CN104991063A CN201510359722.0A CN201510359722A CN104991063A CN 104991063 A CN104991063 A CN 104991063A CN 201510359722 A CN201510359722 A CN 201510359722A CN 104991063 A CN104991063 A CN 104991063A
Authority
CN
China
Prior art keywords
quantum dot
carcinomebryonic antigen
antibody
pad
embryonic antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510359722.0A
Other languages
English (en)
Inventor
常津
武玉东
宫晓群
张健
姚颖异
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University
Original Assignee
Tianjin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University filed Critical Tianjin University
Priority to CN201510359722.0A priority Critical patent/CN104991063A/zh
Publication of CN104991063A publication Critical patent/CN104991063A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57473Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/521Single-layer analytical elements
    • G01N33/523Single-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法;通过EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)活化作用,量子点的羧基和癌胚抗原抗体的氨基生成牢固的化学键,探针、癌胚抗原(carcino embryonic antigen CEA)和包埋在试纸条的另一种癌胚抗原抗体通过抗体抗原之间的作用,形成一种类似夹心的结构,定性定量的检测CEA癌胚抗原肿瘤标志物。本发明的特点在于:整个制备过程简单,适合于产业化生产;根据量子点的荧光特性,可定性定量检测癌胚抗原,且特异性良好;整个检测过程,成本低廉且操作非常简便,适合高危人群的社区肿瘤筛选,建立了一种肿瘤检测的新方法。

Description

基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法
技术领域
本发明涉及医药诊断技术领域,更具体的是涉及一种新型基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法。
背景技术
近年来恶性肿瘤的发病率以及死亡率逐年上升,在我国的数据统计中显示,城市人口中恶性肿瘤导致的年死亡人数约占22%,农村人口中恶性肿瘤导致的年死亡人数约占17.25%,并且发病率和死亡率每年都在以很高的速率增长。随着医学的进步和不断发展,对于恶性肿瘤的诊断方法也越来越多样化,世界卫生组织已经作出最新的权威性的结论,恶性肿瘤患者如果能在发病早期发现,治愈率可以达到80%以上,肿瘤的早期诊断与治疗已经成为近年来研究的热点。
在检验诊断学方法中,血清肿瘤标志物的检测已经越来越引起人们的关注,这是因为这种方法具有很多优点,如简便无创,可以重复检测,检测结果直观且可以定量,费用相对较低等等,最重要的一点是对于血清肿瘤标志物可以动态监测,从而可以对恶性肿瘤的诊断、病情发展与疗效等进行判断,在临床上具有很高的应用价值。肿瘤标志物可以是在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的,存在于细胞、组织或体液中,能够用一定方法来定量且能证实肿瘤存在的物质;也可以是由于机体对肿瘤产生反应,导致体内异常产生或升高的,可以反映肿瘤存在和生长的、能够监测肿瘤治疗和预后的一类物质,它包括蛋白质、激素、多胺及癌基因产物等,这些物质在正常人的体内不存在,或者在正常人体内出现的水平显著低于肿瘤患者体内的水平。
癌胚抗原(carcino embryonic antigen CEA)是大肠癌组织产生的一种糖蛋白,可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌,也存在于正常胚胎的消化管组织中,在正常人血清中也可有微量存在。癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物,它能向人们反映出多种肿瘤的存在,对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物。肿瘤标志物可以对高危人群进行筛查,通过检测肿瘤患者治疗前后肿瘤标志物的浓度变化可以判断对肿瘤的治疗是否有效。对生物体内的肿瘤标志物实现高灵敏度的检测是生命科学领域研究的一项重要课题,发展一种新的灵敏度高的检测方法也成为研究者们努力的目标。目前量子点因具有优异的光学性质已经被广泛应用于示踪、成像以及标记等方面,而免疫层析试纸条检测则因为它的简单迅速、价格低廉、可以随时随地等优点在检测领域处于特殊重要的地位。所以本文拟研制癌胚抗原量子点免疫荧光试纸条,对癌胚抗原肿瘤标志物进行检测,建立癌胚抗原肿瘤标志物检测的新方法。
发明内容
鉴于肿瘤标志物在肿瘤检测中的重要地位、量子点这种纳米粒子独特的光学性质以及层析技术简便和价格方面的优势。我们将结合量子点和免疫层析试纸条两种技术,利用量子点羧基和肿瘤标志物相应抗体的氨基反应,制得量子点荧光探针。探针、肿瘤标志物和包埋在试纸条的另一种肿瘤标志物抗体通过抗体抗原之间的作用,形成一种类似夹心的结构。对癌胚抗原(carcino-embryonic antigen CEA),这种广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌中的肿瘤标志物进行定性定量的检测,建立肿瘤标志物检测的新方法,致力于简单迅速、价格低廉、定性定量、操作简便的消化系统肿瘤早期诊断方法。
本发明的技术方案如下:
一种基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法;其步骤如下:
1)将量子点QDs、EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和PBS缓冲液加入反应器,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2~3h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条。
量子点:EDC质量分数配比为1:4000~10000。
所述癌胚抗原抗体质量份数比=1:10~50。
所述PBS缓冲液用以充当反应溶剂和保持癌胚抗原抗体的活性。
所述处理液是蔗糖、牛血清白蛋白BSA、聚乙二醇PEG、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯Tween-20的混合溶液。
在样品垫上滴加不同浓度的标准癌胚抗原CEA,建立标准曲线,定性定量检测癌胚抗原CEA,说明书附图2是定量检测结果,说明书附图3是定性检结果。不同浓度优选0~1000ng/mL(其中0ng/mL对应胎牛血清FBS,作为阴性对照)。
通过EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)的活化作用,量子点的羧基和癌胚抗原标记抗体Ab1(分子量150000~200000)的氨基生成牢固的化学键,离心纯化后分散在含牛血清白蛋白的PBS缓冲液中,得到QDs-Ab1的荧光探针。将癌胚抗原包被抗体Ab2均匀喷在硝酸纤维素膜上作为检测线T,而将羊抗鼠抗体Ab3硝酸纤维素膜上作为质控线C。将试纸条的四个部分样品垫、结合垫、吸水垫以及硝酸纤维素膜组装的一起,最后得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条。滴加检测样品到样品垫上,检测样品会在吸水垫的层析作用下向前移动:如果检测样品有癌胚抗原Ag(carcino-embryonic antigen CEA)存在,探针QDs-Ab1、癌胚抗原和包埋在硝酸纤维素膜上的癌胚抗原包被抗体Ab2通过抗体抗原之间的作用,在T线上形成一种类似夹心的结构QDs-Ab1-Ag-Ab2,而在C线上形成QDs-Ab1-Ab3的结构,此时T线和C线同时亮;如果检测样品没有癌胚抗原Ag存在,则探针QDs-Ab1仅仅和包埋在硝酸纤维素膜上的羊抗鼠抗体,形成QDs-Ab1-Ab3的结构,此时C线亮而T线不亮。
本发明制备的新型基于量子点的免疫层析试纸条优势在于:
1.采用量子点这种具有优异的光学性质,已经被广泛应用于示踪、成像以及标记等方面的纳米材料作为探针荧光来源,将纳米技术应用到肿瘤检测领域。
2.采用免疫层析技术作为检测用的基材,免疫层析技术因为它的简单迅速、价格低廉、可以随时随地等优点在检测领域处于特殊重要的地位。
3.采用量子点的羧基和抗体的氨基之间的反应形成的牢固的化学键,而非传统的静电吸附作用,提高了试纸条抵抗非特异性吸附的能力,量子点荧光强度和癌胚抗原浓度之间的线性关系可同时实现定性定量检测。
附图说明
图1本发明制备的基于量子点的癌胚抗原(CEA)试纸条的量子点透射电镜照片。
图2本发明制备的基于量子点的癌胚抗原(CEA)试纸条的标准曲线。
图3本发明制备的基于量子点的癌胚抗原(CEA)试纸条的紫外照片。
图4本发明制备的基于量子点的癌胚抗原(CEA)试纸条的不同抗原浓度荧光值。
具体实施方式
下面的实施案例中将对本发明作进一步的阐述,但本发明不限于此。
实施案例1:
1)将质量分数配比为1:4000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:10),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加1000ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-a所示,在紫外灯下试纸条C线和T亮同时亮;如图4-a所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条T线荧光强度为35737,C线荧光强度27822,T/C值为1.29。
实施案例2:
1)将质量分数配比为1:4000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:30),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加500ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-b所示,在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮;如图4-b所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条T线荧光强度为24211,C线荧光强度27703,T/C值为0.87。
实施案例3:
1)将质量分数配比为1:4000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:50),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2.5h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加250ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-c所示,在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮;如图4-c所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条T线荧光强度为21763,C线荧光强度36234,T/C值为0.60。
实施案例4:
1)将质量分数配比为1:6000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:10),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2.5h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加125ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-d所示,在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮;如图4-d所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条T线荧光强度为17976,C线荧光强度39930,T/C值为0.45。
实施案例5:
1)将质量分数配比为1:8000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:10),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2.5h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加62.5ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-e所示,在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮;如图4-e所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条的T线荧光强度为13944,C线荧光强度35023,T/C值为0.40。
实施案例6:
1)将质量分数配比为1:10000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:10),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体3h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加31.25ng/mL标准癌胚抗原CEA。
如图3-f所示,在紫外灯下试纸条C线和T线同时亮;如图4-f所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条的T线荧光强度为9439,C线荧光强度32705,T/C值为0.29。
实施案例7:
1)将质量分数配比为1:10000的量子点QDs和EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)加入反应器,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合(量子点和癌胚抗原抗体质量分数配比为1:50),加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体3h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条,在样品垫上滴加胎牛血清FBS(0ng/mL标准癌胚抗原CEA)。
如图3-g所示,在紫外灯下试纸条C线亮而T线不亮;如图4-g所示,量子点免疫荧光检测仪检测得出,试纸条T线荧光强度为7441,C线荧光强度34586,T/C值为0.22。

Claims (7)

1.一种基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法;其特征是步骤如下:
1)将量子点QDs、EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)和PBS缓冲液加入反应器,在旋转混合架上活化量子点的羧基,离心得到免疫量子点;
2)将癌胚抗原抗体和上述免疫量子点混合,加入PBS缓冲液,在旋转混合架上偶联抗体2~3h,离心得到量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针,然后用牛血清白蛋白(BSA)封闭量子点-癌胚抗原标记抗体荧光探针上未反应的羧基,同时用处理液处理样品垫和结合垫并37℃烘干,然后用上述荧光探针处理结合垫并37℃烘干;
3)试纸条制备:将吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫以及结合垫组装在一起,得到癌胚抗原量子点免疫层析试纸条。
2.如权利要求1所述的方法,其特征是将量子点:EDC质量份数配比为1:4000~10000。
3.如权利要求1所述的方法,其特征是量子点:癌胚抗原抗体质量分数比=1:10~50。
4.如权利要求1所述的方法,其特征是选用PBS缓冲液用以保持癌胚抗原抗体的活性。
5.如权利要求1所述的方法,其特征是处理液是蔗糖、牛血清白蛋白BSA、聚乙二醇PEG、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯Tween-20的混合溶液。
6.如权利要求1所述的方法,其特征是根据试纸条夹心结构捕获的量子点荧光强度和癌胚抗原浓度之间的关系,定性定量检测癌胚抗原CEA。
7.如权利要求6所述的方法,其特征是在样品垫上滴加不同浓度的标准癌胚抗原CEA,不同浓度优选0~1000ng/mL,建立标准曲线。
CN201510359722.0A 2015-06-25 2015-06-25 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法 Pending CN104991063A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510359722.0A CN104991063A (zh) 2015-06-25 2015-06-25 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510359722.0A CN104991063A (zh) 2015-06-25 2015-06-25 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104991063A true CN104991063A (zh) 2015-10-21

Family

ID=54302902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510359722.0A Pending CN104991063A (zh) 2015-06-25 2015-06-25 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104991063A (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106198981A (zh) * 2016-06-30 2016-12-07 天津大学 一种基于量子点的ca199免疫层析试纸条的制备方法
CN106290878A (zh) * 2016-09-10 2017-01-04 天津大学 基于量子点的胰腺癌肿瘤标志物ca242免疫层析试纸条的制备方法
CN106405112A (zh) * 2016-09-10 2017-02-15 天津大学 基于量子点的ca15‑3免疫层析试纸条的制备方法
CN106442977A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于量子点的ca125免疫层析试纸条的制备方法
CN106443023A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于量子点的绒毛膜促性腺激素hcg免疫层析试纸条的制备方法
CN109187450A (zh) * 2018-08-01 2019-01-11 傅英 一种基于量子点的生物分子浓度检测方法
CN110082530A (zh) * 2019-04-09 2019-08-02 天津大学 基于量子点和金纳米棒的水凝胶制剂及其制备方法、应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1811449A (zh) * 2006-02-23 2006-08-02 上海交通大学 量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法
WO2008122241A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Diagcor Bioscience Incorporation Limited Rapid protein analyses and the device thereof
CN101290319A (zh) * 2007-04-16 2008-10-22 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 H5n1型高致病性禽流感的纳米量子点检测方法
CN103048460A (zh) * 2012-12-15 2013-04-17 武汉珈源生物医学工程有限公司 一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法
CN103364550A (zh) * 2013-07-16 2013-10-23 天津大学 用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法及装置

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1811449A (zh) * 2006-02-23 2006-08-02 上海交通大学 量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法
WO2008122241A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Diagcor Bioscience Incorporation Limited Rapid protein analyses and the device thereof
CN101290319A (zh) * 2007-04-16 2008-10-22 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 H5n1型高致病性禽流感的纳米量子点检测方法
CN103048460A (zh) * 2012-12-15 2013-04-17 武汉珈源生物医学工程有限公司 一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法
CN103364550A (zh) * 2013-07-16 2013-10-23 天津大学 用量子点标记的免疫层析试纸条快速定量检测肿瘤标志物的方法及装置

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106198981A (zh) * 2016-06-30 2016-12-07 天津大学 一种基于量子点的ca199免疫层析试纸条的制备方法
CN106290878A (zh) * 2016-09-10 2017-01-04 天津大学 基于量子点的胰腺癌肿瘤标志物ca242免疫层析试纸条的制备方法
CN106405112A (zh) * 2016-09-10 2017-02-15 天津大学 基于量子点的ca15‑3免疫层析试纸条的制备方法
CN106442977A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于量子点的ca125免疫层析试纸条的制备方法
CN106443023A (zh) * 2016-09-10 2017-02-22 天津大学 基于量子点的绒毛膜促性腺激素hcg免疫层析试纸条的制备方法
CN109187450A (zh) * 2018-08-01 2019-01-11 傅英 一种基于量子点的生物分子浓度检测方法
CN109187450B (zh) * 2018-08-01 2020-10-27 傅英 一种基于量子点的生物分子浓度检测方法
CN110082530A (zh) * 2019-04-09 2019-08-02 天津大学 基于量子点和金纳米棒的水凝胶制剂及其制备方法、应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104991063A (zh) 基于量子点的癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法
Weigum et al. Cell-based sensor for analysis of EGFR biomarker expression in oral cancer
US20200124595A1 (en) Devices, systems, and methods for the detection of a target analyte using magnetic focus lateral flow immunoassay techniques
CN103018231A (zh) 一种复合纳米材料纸芯片电化学发光免疫传感器的制备方法及应用
CN105044339A (zh) 一种新型的乳腺癌量子点免疫层析试纸条的制备方法
KR20220104043A (ko) G-17, pgi, pgii 연합 검출장치 및 그 제조방법
CN103487578A (zh) 一种crp/pct联合诊断试纸及其制备方法
CN102778561A (zh) 壳核纳米材料构建的肿瘤标志物免疫传感器的制备及应用
CN104407140B (zh) 一种基于γ-聚谷氨酸接枝多巴胺壳聚糖复合胶束的免疫传感器的制备方法
CN113514512B (zh) 一种基于g-C3N4-CoPd的电化学发光传感器的制备及应用
CN104568923A (zh) 电化学发光检测外周血循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒
CN104316685A (zh) 一种二乙酰精胺的检测试剂盒及制备方法和应用
Wang et al. Ultrasensitive and non-labeling fluorescence assay for biothiols using enhanced silver nanoclusters
CN105717303A (zh) 一种用荧光免疫层析法检测磷酯酰肌醇蛋白聚糖3的方法及其试剂盒
CN106596937A (zh) 一种同步检测胰腺癌标记物的量子点试剂盒
CN109061200A (zh) 胃泌素17时间分辨微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN107966560A (zh) 一种基于壳聚糖-金杂化粒子的免疫传感器的制备方法
CN104297479A (zh) 检测肿瘤标志物电致化学发光免疫传感器的制备及应用
Zhou et al. In-situ visual and ultrasensitive detection of phosmet using a fluorescent immunoassay probe
CN105044340A (zh) 一种基于量子点的前列腺特异抗原免疫层析试纸条的制备方法
CN114966016A (zh) 基于量子点荧光微球构建的新冠抗体检测试剂盒
Selwyna et al. Development of electrochemical biosensor for breast cancer detection using gold nanoparticle doped CA 15-3 antibody and antigen interaction
CN109568269A (zh) 一种具有诊疗功能外泌体及其制备方法
CN106198981A (zh) 一种基于量子点的ca199免疫层析试纸条的制备方法
Dumke et al. Monocentric evaluation of Ki-67 labeling index in combination with a modified RPA score as a prognostic factor for survival in IDH-wildtype glioblastoma patients treated with radiochemotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20151021