CN104987431B

CN104987431B - 一种桑葚活性多糖及其提取方法

Info

Publication number: CN104987431B
Application number: CN201510450270.7A
Authority: CN
Inventors: 扶雄; 陈春; 刘瑞海
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: Guangdong Pulai Health Food Co ltd
Priority date: 2015-07-28
Filing date: 2015-07-28
Publication date: 2017-03-08
Anticipated expiration: 2035-07-28
Also published as: CN104987431A

Abstract

本发明公开了一种桑葚活性多糖及其提取方法。该提取方法先对桑葚烘干后超细粉碎过筛与乙醇脱脂前处理，然后进行冻融破壁处理、热水提取、真空浓缩与蛋白质脱除、乙醇沉淀、冷冻干燥处理，得到一种具有生物活性的桑葚多糖，其分子量在10万至8万之间的含量在60％‑70％，分子量在2000以下的含量在30％‑40％。本发明对桑葚进行了冻融破壁处理，有利于多糖的溶出，同时也重视提取过程中对多糖结构的保护，降低对其活性的影响，保留了其高效的抗氧化及抑制α‑淀粉酶、α‑葡萄糖苷酶的活性，可应用于抗氧化、降血糖保健品的制备。该工艺简单，操作方便，安全性高，成本低，有利于实现工业化应用。

Description

一种桑葚活性多糖及其提取方法

技术领域

本发明涉及活性多糖，特别是涉及一种桑葚活性多糖及其提取方法；属于医药技术领域。

背景技术

糖尿病作为一种慢性代谢疾病，由于其高的发病率和致死率，已经成为世界上第三大威胁人类生命健康的疾病。目前，全球大约有5%的人被诊断患有糖尿病，而且这个人数还在逐年增长，世界卫生组织预测，患糖尿病的人数在2025年将达到30亿 (Jeszka et al.Mulberry leaf extract intake reduces hyperglycaemia in streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats fed high-fat diet [J], Journal of Functional Foods,2014, 8: 9-17)。当前的降糖药物大都是化学合成的，如阿卡波糖，双弧类药物，磺脲类药物等在临床应用的过程中会带来一定的副作用。目前，由于α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶抑制剂可以通过抑制碳水化合物水解来延缓肠道对葡萄糖的吸收，有效的降低血糖，已成为了治疗糖尿病的研究热点。同时，大量的研究已经证实，体内的氧化压力是糖尿病形成的一个重要原因(Liu, et al. Characterization of polysaccharides with antioxidant andhepatoprotective activities from the wild edible mushroom Russula vinosaLindblad [J]. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 62(35): 8858-8866)。因此，天然的具有抗氧化、抑制α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶的活性物质对糖尿病的治疗具有极大的促进作用。

桑葚为桑科植物桑(Morus alba L.) 的果穗，具有滋阴补血及生津润燥的功效，用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣、心悸失眠、须发早白、津伤口渴、内热消渴、肠燥便秘等症（刘胜利，刘晓露，黄锁义等，桑葚多糖提取方法的比较. 安徽农业科学，2012,40（5）：2699-2700）。研究表明桑葚多糖具有较好的抗免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂等活性。但多糖的结构、提取方法对其功能活性有很大的影响。

在工业上，关于植物多糖的提取方法有很多，与传统热水提取相比，酸提取法、碱提取法和超声提取法会对细胞壁造成伤害致其破裂，使得多糖可以充分的溶解出来，大大提高其提取率，因而得到广泛的应用。但多糖的分子量大小是影响其功能活性的一个重要结构特征参数。在提取的过程中，酸、碱和超声会改变多糖的分子结构，致使其降解成小分子，这对其活性产生一定程度的影响。对于多糖抗氧化活性而言，在一定范围内，多糖的分子量越小，其抗氧化活性越强，但其它活性可能降低。目前虽然有关于桑葚多糖热水提取、超声提取及其抗氧化活性的报道，但现有技术的热水提取、超声提取、酸提取法、碱提取法并未发现提取方法对桑葚多糖分子的影响，同时也未发现提取方法对产品抗氧化、抑制α-淀粉酶和抑制α-葡萄糖苷酶的影响也尚未报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种同时具有抗氧化、同时抑制α-淀粉酶和抑制α-葡萄糖苷酶的桑葚多糖，桑葚多糖的分子量在10万至8万之间的含量为60%-70%，分子量在2000以下的含量为30%-40%。

本发明的另一目的在于提供桑葚多糖的制备方法，联合冻融破壁处理技术，改善了传统热水提取多糖提取率低的缺点，使得桑葚多糖的提取率为2.08%-2.23%，该方法操作简单，对桑葚多糖的结构影响较小，安全系数高，生产成本低。

申请人发现，桑葚多糖易受酸提取法、碱提取法和超声提取法的影响，在提取的过程中会产生很大程度的降解；而传统的热水提取的提取率很低；发明人通过首次采用冻融破壁技术有效解决现有技术的难题，实现高提取率和高分子量的活性桑葚多糖的提取，尤其是可以控制所得桑葚多糖是一种分子量在10万至8万之间含量为60-70%，分子量在2000以下含量为30%-40%的复合物。研究表明小分子多糖是多糖抗氧化活性的主要成分，故分子量在2000以下的小分子桑葚多糖使得此复合物具有了抗氧化活性，而分子量在10万至8万之间的桑葚多糖，保留了桑葚大分子多糖结构的完整性，避免了其降血糖功能受损，使得此复合物具有了抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性。此外，在所获得的桑葚多糖复合物中，分子量在2000以下占30%-40%，分子量在10万至8万之间占60-70%，这种比例的分布不仅使得桑葚多糖的抗氧化活性强，而且也保证了桑葚多糖在抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性时的高效。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种桑葚活性多糖的提取方法，包括以下步骤：

（1）前处理：将桑葚洗净，在40-60 ℃条件下烘干，控制水分质量含量在8%以下，超细粉碎后，过筛，得桑葚粉，加入乙醇溶液，在70-80℃条件下加热，并搅拌2-4 h，过滤，将滤渣在40-60℃条件下烘干备用；

（2）冻融破壁处理：称取步骤（1）处理过的桑葚滤渣，加入30-40倍桑葚滤渣质量的水，在-60℃至-70℃条件下冻结4-6 h，25℃-30℃条件下解冻2-3 h；

（3）提取：将步骤（2）解冻处理后的桑葚与水混合液在80-90℃水浴中加热并搅拌2-3h，经离心、过滤得到滤液；

（4）脱蛋白：将步骤（3）中的滤液浓缩，添加Sevag试剂，振荡，以4000-5000r/min速度离心10-20min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10-15次；

（5）醇沉：向将步骤（4）中的脱蛋白提取液添加无水乙醇，使溶液中乙醇的最终质量浓度为75-85%，在0-4℃条件下放置12-24h；离心，收集沉淀物；

（6）冷冻干燥：将步骤（5）中多糖溶解在去离子水中，在-50℃以下冷冻干燥，得桑葚多糖。

为进一步实现本发明目的，优选地，所述在-60℃至-70℃条件下冻结的时间为4-5h；所述25℃-30℃条件下解冻的时间为2h。

优选地，所述乙醇的加入量为桑葚粉质量的10-20倍。

优选地，所述乙醇的质量浓度为90%以上。

优选地，所述步骤（1）中搅拌的转速为100-200r/min。

优选地，所述Sevag试剂中氯仿与正丁醇的体积比为4:1。

优选地，所述滤液浓缩至原滤液体积的1/8-1/10。

优选地，所述添加Sevag试剂的体积为原滤液体积的1/3-1/4；所述振荡的时间为10-20min。

一种桑葚活性多糖，所述的活性桑葚多糖的分子量在10万Da至8万Da之间的含量在60%-70%，分子量在2000Da以下的含量在30%-40%，具有抗氧化活性，同时对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶具有抑制作用。

本发明的显著优点在于：

（1）本发明提取方法所用实际安全无毒，绿色环保，且对设备要求不高，生产成本低，非常有利于工业化生产。

（2）本发明提取方法与现有的酸法、减法、超声提取相比，对桑葚多糖的分子结构影响较小，使其未被降解。

（3）本发明在提取的过程中对桑葚进行冻融破壁处理，有利于桑葚多糖的溶出；可以控制桑葚多糖的分子量在10万至8万之间的含量为60-70%，分子量在2000以下的含量为30%-40%

（4）本发明提取方法所得到的桑葚多糖，不仅具有超强的抗氧化性，而且还具高效的抑制α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶活性的作用，这在当前有关桑葚多糖的研究中首次出现，弥补了该方面研究的补足。

具体实施方式

为更好地理解本发明，下面结合实施例进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不仅局限于实施例表述的范围。

检测方法

（1）多糖提取率的测定

采用苯酚硫酸法，准确称取105℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖 20mg，溶于蒸馏水，用容量瓶定容至500mL，分别吸取 0、0.5、1.0、1.5、2.0mL 各以蒸馏水补至 2.0mL，然后加入6%的苯酚 1mL及浓硫酸5mL，立即混匀，静置 20min，用分光光度计在 490nm 处测定其吸光度。以葡萄糖含量为横坐标，以 A490为纵坐标，得标准曲线。准确称取提取物样品，加适量水稀释至标准曲线浓度范围内（使吸光度值在 0.3左右，即相当于稀释的样品 1.0mL 中含有 40ug 左右的多糖）。准确吸取稀释液1mL，按上述步骤操作测吸光度值，用标准曲线计算提取物中多糖的含量。多糖提取率（%）=（提取物中多糖质量/原料的质量）×100

（2）分子量分布

以超纯水配制0.02mol/L的KH₂PO₄溶液（pH 6.0）作为流动相，将已知分子量的葡聚糖标准品和样品分别用流动相配制成 1.0mg/mL的溶液，采用凝胶渗透色谱法（GPC）测定多糖的分子量。色谱条件：色谱柱为 TSK-GEL G-5000PWXL凝胶柱和 G-3000 PWXL凝胶柱（串联）；流动相为流速 0.6mL/min；进样量20µL；柱温 35℃；检测器为 Waters2414示差检测器；以Dextran 系列葡聚糖为标准品。

（3）ORAC评价

在96孔酶标板最外周加入200ul的磷酸缓冲液，测量孔中依次加入20ul的样品和200ul的0.0956 μM荧光素钠溶液，37℃预热20min后，加入20ulAAPH开始荧光猝灭反应。其中空白组以20ul缓冲液代替样品，对照组以20ul不同浓度的Trolox溶液代替样品。结果以Trolox含量作为当量来表示ORAC值。测量条件如下：激发波长485nm，发射波长528nm，测定循环次数为35次，循环周期为3.5min。

（4）抑制α-淀粉酶活性实验

将α-淀粉酶和马铃薯淀粉分别溶解于0.1M磷酸缓冲液(pH6.9)，使酶浓度达到1U/mL，马铃薯淀粉浓度达到1%。取500ul的α-淀粉酶溶液，再加入各种稀释度的多糖或阿卡波糖500ul。将混合溶液置于 37℃水浴锅中，孵育10min。然后往该溶液里加入500ul马铃薯淀粉溶液(1%)，37℃恒温浴10 min。最后在加入1 mL的DNS试剂，并将反应液置于100℃沸水放置5 min，冷却后，在520 nm处测其吸光度（A_s），以磷酸缓冲液代替马铃薯淀粉测吸光度(A_b)，磷酸缓冲液代替样品测吸光度（A_c）。清除率按以下公式计算：α-淀粉酶抑制率（%）=[1-(A_s-A_b)/A_c]×100。

（5）制α-葡萄糖苷酶活性实验

以0.1M的磷酸缓冲液（pH6.8）作为溶剂，将α-葡萄糖苷酶配成0.35U/mL，将对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷配成1.5mmol/L。将 50μL样品与50μL的α-葡萄糖苷酶混合均匀，在37℃条件下孵育10min，再加入100ul的对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液，置于 37℃孵育20min。最后加入1mL的碳酸钠（1 M）终止反应，在400 nm处检测吸光度（A_s）。以磷酸缓冲液代替对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液测吸光度（A_b），以磷酸缓冲液代替样品测吸光度（A_c）。α-葡萄糖苷酶抑制率（%）=[1-(A_s-A_b)/A_c]×100。

实施例1

选取黑桑葚，在40℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过80目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入20倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在80℃条件下，加热并搅拌2h，过滤，将滤渣在60℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加30倍质量的水，在-60℃条件下冻结4 h，25℃条件下解冻2 h。将解冻处理后的桑葚与水混合液在80℃水浴中加热并搅拌3h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/3浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡10min，以4000r/min速度离心20min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复15次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为85%，在0℃条件下放置12h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖的提取率为2.11%，分子量在10万Da至8万Da之间的含量为69.8%，分子量在2000Da以下的含量在30.2%。本实施例获得的桑葚多糖的ORAC值为2501 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.28mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.01mg/ml。

实施例2

选取黑桑葚，在60℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过60目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入10倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在70℃条件下，加热并搅拌4h，过滤，将滤渣在40℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加40倍质量的水，在-70℃条件下冻结6h，30℃条件下解冻3 h。将解冻处理后的桑葚与水混合液在90℃水浴中加热并搅拌2h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/4浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡20min，以5000r/min速度离心10min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为80%，在4℃条件下放置24h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖提取率为2.08%，分子量在10万Da至8万Da之间的含量为67%，分子量在2000Da以下的含量在33%。以上述方法获得的桑葚多糖的ORAC值为2643umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为3.07mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.42mg/ml。

实施例3

选取黑桑葚，在50℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过60目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入10倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在70℃条件下，加热并搅拌3h，过滤，将滤渣在40℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加30倍质量的水，在-60℃条件下冻结6h，25℃条件下解冻3 h。将解冻处理后的桑葚与水混合液在80℃水浴中加热并搅拌3h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/5浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡20min，以5000r/min速度离心10min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为75%，在0℃条件下放置24h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖提取率为2.23%，分子量在10万Da至8万Da之间的含量为61.84%，分子量在2000以下的含量在38.16%。以上述方法获得的桑葚多糖的ORAC值为2812 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为4.78mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为1.97mg/ml。

对比例1

选取黑桑葚，在60℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过60目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入10倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在70℃条件下，加热并搅拌4h，过滤，将滤渣在40℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加40倍质量的0.1mol/L的HCl溶液，90℃水浴中加热并搅拌2h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/4浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡20min，以5000r/min速度离心10min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为80%，在4℃条件下放置24h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖提取率为1.93%，分子量在1230Da的含量为49.05%，在914Da的含量为34.63%，在220Da的含量为16.23%。以上述方法获得的桑葚多糖的ORAC值为1256 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为10.63mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为3.91mg/ml。

对比例2

选取黑桑葚，在60℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过60目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入10倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在70℃条件下，加热并搅拌4h，过滤，将滤渣在40℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加40倍质量的0.1mol/L的NaOH溶液，90℃水浴中加热并搅拌2h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/4浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡20min，以5000r/min速度离心10min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为80%，在4℃条件下放置24h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖提取率为2.25%，分子量在1312Da的含量为29.49%，在730Da的含量为37.02%，在312Da的含量为33.49%。以上述方法获得的桑葚多糖的ORAC值为2010 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为21.08mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.29mg/ml。

对比例3

选取黑桑葚，在60℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过60目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入10倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在70℃条件下，加热并搅拌4h，过滤，将滤渣在40℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加40倍质量的水，至于超声设备中，调节超声功率为190w，在90℃条件下超声2h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/4浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡20min，以5000r/min速度离心10min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复10次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为80%，在4℃条件下放置24h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖提取率为2.97%，分子量在963.4Da的含量为36.24%，在694.3Da的含量为22.89%，在314.2Da的含量为40.87%。以上述方法获得的桑葚多糖的ORAC值为2171 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为7.43mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为10.08mg/ml。

对比例4

选取黑桑葚，在40℃条件下烘干至水分含量低于8%，粉碎过80目筛，得到桑葚粉。称取50g的桑葚粉，加入20倍桑葚粉质量的90wt.% 乙醇溶液，在80℃条件下，加热并搅拌2h，过滤，将滤渣在60℃条件下烘干。向烘干的滤渣添加30倍质量的水，在80℃水浴中加热并搅拌3h，经离心、过滤得到滤液，再将滤液浓缩至200ml，添加1/3浓缩液体积的Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1，v/v），振荡10min，以4000r/min速度离心20min，收集上清液，再经Sevag法脱蛋白，重复15次。添加无水乙醇使溶液中乙醇的最终质量浓度为85%，在0℃条件下放置12h，离心，将沉淀物溶解在去离子水中，在-50℃条件下冷冻干燥得桑葚多糖。

通过检测，所制备桑葚多糖的提取率为1.58%，分子量在10万Da至8万Da之间的含量为62.3%，分子量在2000Da以下的含量在37.72%。本实施例获得的桑葚多糖的ORAC值为2549 umol Tx/mg，对α-淀粉酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.08mg/ml，对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.27mg/ml。

桑葚作为一种药食两用的食材，具有延缓衰老，美容养颜，降血糖等功效，其中桑葚多糖在这些功能活性中起着重要的作用。多糖分子的大小与其活性有着密切的联系，对桑葚多糖而言，发明人发现其分子大小极易受提取方法的影响。从实施例1、2、3与对比例1、2、3可以看出，酸法、减法与超声在提取过程中对桑葚多糖都有很大的降解作用，分子量都在1500Da以下，使其抗氧化、抑制α-淀粉酶和抑制α-葡萄糖苷酶的活性受到较大程度的影响；而本发明改进的热水浸提未破坏桑葚多糖的分子大小，得到桑葚多糖的分子量在10万至8万之间的含量为60%-70%，分子量在2000以下的含量为30%-40%，保留了超强的抗氧化活性，其ORAC值为2501-2812 umol Tx/mg，与我国规定的可食用抗氧化剂Vc的抗氧化效果相当（2856 umol Tx/mg），同时对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶抑制作用达到降血糖药物阿卡波糖的70%。此外，从实施例1、2、3与对比例4可以看出，与传统热水提取多糖相比，采用冻融破壁处理技术可以显著提高桑葚多糖的提取率，从1.58%提高到2.23%，高于酸提1.93%，与碱提相当2.25%，仅仅略逊于超声提取2.97%。

Claims

1.一种桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

（2）冻融破壁处理：称取步骤（1）处理过的桑葚滤渣，加入30-40倍桑葚滤渣质量的水，在-60℃至-70℃条件下冻结4-6h，25℃-30℃条件下解冻2-3 h；

2.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述在-60℃至-70℃条件下冻结的时间为4-5h；所述25℃-30℃条件下解冻的时间为2h。

3.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中乙醇的加入量为桑葚粉质量的10-20倍。

4.根据权利要求2所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中乙醇的质量浓度为90%以上。

5.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中搅拌的转速为100-200r/min。

6.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述Sevag试剂中氯仿与正丁醇的体积比为4:1。

7.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述滤液浓缩至原滤液体积的1/8-1/10。

8.根据权利要求1所述桑葚活性多糖的提取方法，其特征在于，所述添加Sevag试剂的体积为原滤液体积的1/3-1/4；所述振荡的时间为10-20min。

9.一种桑葚活性多糖，其特征在于其由权利要求1-8任一项所述提取方法制得，所述的活性桑葚多糖的分子量在10万Da至8万Da之间的含量在60%-70%，分子量在2000Da以下的含量在30%-40%，具有抗氧化活性，同时对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶具有抑制作用。