CN1049818C - 苯并噻吩类化合物的制药用途 - Google Patents

Abstract

提高巨噬细胞功能的方法，该方法包含给需要治疗的患者施用有效量的下式化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物，其中R¹和R³独立地为氢、-CH₃、-C-(C₁～C₆烷基)或-C-Ar，这里Ar为任意取代的苯基；R²系选自吡咯烷子基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。本发明还包括治疗免疫减弱患者的方法，该方法包括施用式Ⅰ化合物。

Description

苯并噻吩类化合物的制药用途

通过各种效应器机制(包括与膜有关的和分泌活动)，巨噬细胞在宿主防御中起重要的作用(Gordon等，Gurr.Opin.Immunol.，4，25，1992；Fuller，Brit.Med.J.，48，65，1992)。吞噬作用、趋化性和抗原先露是与宿主生存所必需的免疫防御机制有关的膜相关过程。在人和动物模型中，巨噬细胞在防御微生物、免疫监视、破坏肿瘤细胞以及在清除衰老的红细胞方面的重要性已有报道，其特征在于有选择的消除巨噬细胞(Claassen等，J.Immunol Meth，134，153，1990)。巨噬细胞还通过分泌制菌和杀菌的蛋白质、细胞因子和类脂传递质以及氧和氮活性中间体帮助宿主防御。巨噬细胞的分泌能力对其功能是重要的，因为这些细胞分泌100种以上不同的传递质，并且分布于各种器官中(Nathan，J.Clin.Invest.，79，319，1987)。

虽然巨噬细胞功能的异常激活与自身免疫疾病以及慢性和急性炎性过程有关，但是相反的情况，即抑制巨噬细胞效应器功能与偶发性病原体和非偶发性病原体的再次感染有关，并且成为增加发病率和死亡率的原因之一。与免疫减弱(immuno compromised)状态有关的群体包括烧伤患者、移植、HIV感染的患者、经受化学疗法的癌症患者以及外科手术病人，尤其是那些在胸腹症患者中所观察到的具有较高感染危险的病人。

对上述病人目前的治疗方法包括应用静脉输注由巨噬细胞衍生的细胞因子，特别是菌落刺激因子G-CSF、GM-CSF和M-CSF(Nemunaitis，Transfusion 33：70，1993)。也可应用抗菌素和流体的配合疗法，但是这些方法的局限性已被下列事实证明：在免疫减弱的患者中有连续感染的问题，并且出现抗菌素抗性生物体的更加致死性菌株。此外，尽管有用各种抗菌素的试验计划书，但免疫减弱患者的偶发性病原体感染(包括肺孢子虫属和隐球菌属感染)仍是明显的，并且导致并发症。很显然，在上述患者的临床治疗中，有选择地提高巨噬细胞效应器功能以增进宿主防御能力的新治疗方法将起重要的作用。

据报道雌激素可提高经选择的巨噬细胞效应器功能，包括Fc介导的吞噬作用、II类抗原表达和IL-1分泌。这些观察结果与已知的妇女对各种感染更具有抵抗力的倾向相结合(Ahmed等，Am.J.Path.，121，531，1985)使人想起，类雌激素化合物可以提高巨噬细胞效应器功能，因此对与降低了的宿主防御功能有关的疾病是有利的。

本发明提供了提高巨噬细胞功能的方法，该方法包括给需要治疗的患者施用有效量的式I化合物及其药学上适用的盐和溶剂化物，

其中R¹和R³各自独立地为氢、-CH₃、 (C₁-C₆烷基)或

这里Ar为任意取代的苯基；

R²系选自吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

本发明还包括治疗免疫减弱患者的方法，该方法包括给所述患者施用式I化合物。

本发明涉及发现经选择的2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩类化合物(各种苯并噻吩类)，即式I化合物，可用于提高巨噬细胞功能。据信公开的苯并噻吩类化合物可提高巨噬细胞功能，包括II类抗原表达(因此提高抗原先露)、Fc介导的吞噬作用和/或细胞因子释放。本发明提供的治疗和预防治疗通过给需要治疗或预防的人施用提高巨噬细胞功能有效剂量的式I化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物来实施。

术语“提高巨噬细胞功能”是指提高或增进巨噬细胞功能或活化速率，以增进人的防御能力。

式I化合物可用于治疗(预防性和治疗性的)免疫减弱的患者，尤其可用于胸腹症外科感染、化学疗法后骨髓受抑的患者、烧伤患者、HIV感染的患者以及经受免疫抑制治疗的移植病人。另一用途包括用于预防和治疗再发性的细菌、原生动物和真菌的感染，以及用于其中骨髓细胞大多无功能的脊髓发育不良综合征和再生障碍性贫血患者。可以预料，在应用集落刺激因子的临床单位中，也可以应用式I化合物。

雷洛昔芬是本发明优选的化合物，它是式I化合物(其中R¹和R³为氢且R²为1-哌啶基)的盐酸盐。

一般来讲，可以将至少一个本发明的式I化合物与常用的赋形剂、稀释剂或载体进行配制并且可压制成片剂，或者可以配制成方便口服给药的酏剂或溶液剂，或通过肌内或静脉内途径给药。本发明化合物还可以经皮给药，并且可以配制成缓释剂型等。

可以按照已有的方法制备本发明方法中使用的化合物，如按美国专利4,133,814、4,418,068和4,380,635中所述方法进行制备，所有这些文献均收缩在本发明中作为参考。一般来讲，该方法从带有6-羟基和2-(4-羟基苯基)的苯并[b]噻吩开始。起始化合物被保护、酰化和脱保护，生成式I化合物。以上讨论的美国专利提供了制备上述化合物的实施例。术语“任意取代的苯基”包括苯基和用C₁～C₆烷基、C₁～C₄烷氧基、羟基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基一次或二次取代的苯基。

用于本发明方法中的化合物可以与各种有机和无机酸和碱生成药学上适用的酸和碱加成盐，药学上适用的酸和碱加成盐包括通常用于药物化学中的生理上适用的盐。所述盐也是本发明的一部分。用于生成上述盐的典型的无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、连二磷酸等。也可以应用由有机酸生成的盐，可以应用的有机酸有例如脂肪族一和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸和羟基链烷二酸，以及芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸。因此所述药学上适用的盐包括乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻-乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，4-二酸盐、癸酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、羟基乙酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐(teraphthalate)、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯代苯磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等。优选的盐是盐酸盐。

药学上适用的酸加成盐一般可通过使式I化合物与等摩尔或过量的酸反应制得。反应物通常于互溶剂如乙醚或苯中进行化合。所述盐一般在约1小时～10天内从溶液中析出，并且可以经过滤分离，或者按常规方法除去溶剂。

通常用于生成盐的碱包括氢氧化铵、碱金属和碱土金属氢氧化物、碳酸盐，以及脂肪族伯、仲和叔胺、脂肪族二胺。尤其适用于制备加成盐的碱包括氢氧化铵、碳酸钾、甲胺、二乙胺、乙二胺和环己胺。

与衍生它们的化合物相比较，所述药学上适用的盐一般具有提高溶解度的性质，因此它们通常更适用于配制成液体或乳剂。

药物制剂可以按本领域已知的方法制备。例如，可将所述化合物与常用的赋形剂、稀释剂或载体一起配制，并可配制成片剂、胶囊剂、悬浮液剂、粉剂等。适用于上述制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实例包括如下：填充剂和增量剂如淀粉、糖、甘露糖醇以及硅衍生物；粘合剂如羧甲基纤维素和其他的纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如碳酸钙和碳酸氢钠；阻滞溶解剂如石蜡；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯；吸附载体如高岭土和膨润土；以及润滑剂如滑石、硬脂酸钙和硬脂酸镁以及固体聚乙二醇类。

本发明化合物也可以配制成方便口服的酏剂或溶液剂，或者配制成适于非经胃肠道(如经肌内、皮下或静脉内途径)给药的溶液剂。另外，本发明化合物还非常适用于配制成缓释剂型等。缓释制剂可以这样构成，以使它们仅仅或最好在肠道的特定部位并可能在一定时间内释放活性成分。包衣、包袋和保护基质可以由例如聚合物质或蜡制得。

为提高巨噬细胞功能或治疗免疫减弱患者所需的本发明式I化合物的具体剂量取决于疾病的严重程度、给药途径以及有关的因素，这要由主治医师决定。一般来讲，每天可接受的和有效的剂量为约0.1～约1000mg/天，更一般的是约50～约200mg/天。该剂量每天将对需治疗的患者分一次至约三次施用，或按需要更经常地施用，以便有效地治疗或预防所述疾病或症状。

以酸加成盐的形式施用式I化合物通常是优选的，正如通常施用带有碱基(如哌啶子基环)的药物所常用的那样。女性以及进而老年人(如绝经后的妇女)施用本发明化合物较好。为此目的，可利用下述口服剂型。

制剂

在下述制剂中“活性成分”是指式I化合物。

制剂1：明胶胶囊剂

硬明胶胶囊按下面方法制备：

成分                         用量(mg/胶囊)活性成分                              0.1-1000淀粉，NF                              0-650可流动的淀粉粉末                      0-650聚硅氧烷流体(350厘沲)                 0-15

将上述成分混合，通过美国45号筛并将其装入硬明胶胶囊。

已经制备的雷洛昔芬的具体胶囊剂的实施例包括下述：

制剂2：雷洛昔芬胶囊剂

成分                            用量(mg/胶囊)雷洛昔芬                              1淀粉，NF                              112可流动的淀粉粉末                      225.3聚硅氧烷流体(350厘沲)                 1.7

制剂3：雷洛昔芬胶囊剂

成分                         用量(mg/胶囊)雷洛昔芬                              5淀粉，NF                              108可流动的淀粉粉末                      225.3聚硅氧烷流体(350厘沲)              1.7制剂4：雷洛昔芬胶囊剂

成分                      用量(mg/胶囊)雷洛昔芬                           10淀粉，NF                           103可流动的淀粉粉末                   225.3聚硅氧烷流体(350厘沲)              1.7制剂5：雷洛昔芬胶囊剂

成分                     用量(mg/胶囊)雷洛昔芬                           50淀粉，NF                           150可流动的淀粉粉末                   397聚硅氧烷流体(350厘沲)              3.0

按照所提供的合理的改变，还可以将上述具体的制剂进行变化。

用下述成分制备片剂：

制剂6：片剂

成分                         用量(mg/片)活性成分                         0.1-1000微晶纤维素                       0-650煅制二氧化硅                     0-650硬脂酸                           0-15将上述成分混合并压制成片剂。另外，每片含0.1～1000mg活性成分的片剂可以按下法制备：制剂7：片剂

成分                         用量(mg/片)活性成分                          0.1-1000淀粉                              45微晶纤维素                        35聚乙烯吡咯烷酮(为10％的水溶液)    4羧甲基纤维素钠                    4.5硬脂酸镁                          0.5滑石                              1

将活性成分、淀粉和纤维素通过美国45号筛，并充分地混合。使聚乙烯吡咯烷酮溶液与得到的粉末混合，然后再通过美国14号筛。得到的颗粒于50～60℃干燥并通过美国18号筛。然后将预先通过美国60号筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石加到上述颗粒中，在混合以后将其在压片机上压制成片剂。

每5ml剂量各含0.1～1000mg活性成分的各个悬浮液剂可按下法制备：

制剂8：悬浮液剂

成分               用量(mg/5ml)活性成分               0.1-1000mg羧甲基纤维素钠         50mg糖浆                   1.25mg苯甲酸溶液             0.10ml调味剂                 适量着色剂                 适量纯化水        加至     5ml

将活性成分通过美国45号筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，得到调匀的糊状物。用一些水将苯甲酸溶液、调味剂和着色剂稀释，并在搅拌下加入。再加入足量的水至所需体积。

                               测定法

测定法1

按Freidman等在J.Clin.Invest.，75，162-167(1985)(将该文献收编在本申请中作为参考)中提出的方法进行，并有某些改进。给5-100只小鼠每天口服1-10mg/kg剂量的式I化合物。给药之后收集巨噬细胞，用根据Ragsdale所述方法(J.Immunol Meth，123：259(1989))制备的荧光素偶合的酵母颗粒定量测定免疫(Fc介导的)和非免疫的吞噬作用的变化。对于免疫介导的吞噬作用，将荧光素偶合的酵母与小鼠血清一起进行预培养，以便促进调理作用。巨噬细胞的荧光吸收的增加，用荧光发射的增加来定量，所用激发和发射波长分别为482和520nm。该方法与取自活体的或体外的巨噬细胞培养物一起应用，并且以荧光单位的变化进行定量。

与对照组进行比较，荧光单位的增长表明了式I化合物的活性。

测定法2

按Zuckerman等，在Cell Immunol，103：207(1986)；J.Immunol，140：978(1988)(将这些文献收编在本申请中作为参考)中提出的方法进行。用取自活体的主要腹膜的巨噬细胞和体外鼠巨噬细胞细胞系P388D1测定诱导II类抗原的能力和因而促进抗原先露的能力。将式I化合物给5-100只小鼠施用，收集巨噬细胞，并且探查D单型II类抗原的抗体。用合适的二级抗体通过流动血细胞计数测定增加的II类抗原表达。在体外研究中用流动血细胞计数评价本发明化合物提高基础含量和γ-干扰素诱导的II类抗原表达的效果。II类抗原表达的增加反映巨噬细胞活性的提高。

测定法3

按Seow等在J.Immunol.Meth.，98，113(1987)(将该文献收编在本申请中作为参考)中提出的方法进行。该测定法通过测量2-脱氧葡萄糖吸收来评价巨噬细胞效应器功能的增加。将取自活体或体外的巨噬细胞置于96孔板中，每孔10⁵细胞，并且在有0.78uCi/ml3H-脱氧葡萄糖存在下的磷酸盐缓冲的生理盐水中进行培养，并将式I化合物置于各孔中。细胞外葡萄糖量的减少表示该非代谢的葡萄糖同系物的吸收，因此提供了测定由式I化合物介导的巨噬细胞活性状态的单独测定法。由本发明化合物所致脱氧葡萄糖吸收的增加证明该化合物具有提高巨噬细胞活性的能力。

测定法4

按Zuckerman在Circ Shock，29，279(1989)(将该文献收编在本申请中作为参考)中提出的方法证明式I化合物保护鼠脓毒症和内毒素致死率模型的能力。在脓毒症激发前，给5-100只小鼠口服1-10mg/kg式I化合物1周。用IV内毒素团块注射进行激发，激发剂量(得到LD₁₀₀)为200μg脂多糖。外源的糖肾上腺皮质激素如地塞米松(剂量20mg/kg)在提高存活力方面可以用作正性对照组。还可用包括盲肠结扎法和穿刺术的脓毒症模型测定式I化合物的作用。尽管应用了抗菌素，但革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌所致脓毒症在48小时得到LD₁₀₀。与对照组相比，提高动物存活的数量或延长动物存活的时间均证明了本发明化合物的活性。

测定法5

式I化合物增加细胞因子(如TNF)在体内分泌作用的能力通过用买到的对小鼠TNF特效的TNF ELISAs对血清进行测定而定量测定。在注射致死剂量或亚致死剂量的脂多糖(分别为200和1μg)之前，给5-100只小鼠口服1-10mg/kg式I化合物1周。注射LPS之后1小时，给小鼠放血，并且测定基础和LPS诱导的血清TNF的量。按常规，可观察到在LPS注射之前TNF含量低于10pg/ml，而在LPS注射之后TNF含量达到5～20ng/ml水平。测定所述化合物调节基础或诱导的TNF含量。在化合物治疗的小鼠中，没有引起大量系统的TNF释放的基础TNF的增加，证明该化合物具有促进细胞因子分泌作用的活性。最后，离体和体外测定由体外给予1-5μM化合物的腹膜巨噬细胞释放的TNF，该测量还可通过用ELISA测定由式I化合物介导的细胞因子增加的程度来进行。

测定法6

选择5-50名妇女进行临床试验。这些妇女是免疫受到抑制的。因为这些疾病的特应性和主观特性，因此本研究设安慰剂对照组，即将这些妇女分成两组，其中一组接受式I化合物作为活性药剂，另一组接受安慰剂。给药组的妇女每天接受50-200mg药物。连续治疗3～12个月。准确记录两组出现症状的数量和严重程度，在试验结束时将这些结果进行比较。比较各组成员之间的结果，并将研究开始之前各个病人所述的症状与各个病人治疗后的结果进行比较。

在至少一个上述测定法中所具有的阳性效果表明了式I化合物的效用。

Claims (5)

1.式(I)化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物在制备适用于提高巨噬细胞功能的药物方面的用途，

其中R¹和R³独立地为氢、-CH₃、

(C₁-C₆烷基)或

这里Ar为任意取代的苯基；R²系选自吡咯烷子基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

2.权利要求1所述的用途，其中所述化合物为其盐酸盐。

3.权利要求1所述的用途，其中所述化合物为下式化合物或其盐酸盐，

4.式(I)化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物在制备适用于治疗免疫减弱患者的药物方面的用途，

其中R¹和R³独立地为氢、-CH₃、

(C₁-C₆烷基)或

这里Ar为任意取代的苯基；R²系选自吡咯烷子基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。

5.权利要求4所述的用途，其中所述化合物为下式化合物或其盐酸盐，