CN104977380A - 胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法，包括步骤：1)取离体的胎盘组织，加入正己烷/丙酮溶液萃取，得萃取液；2)萃取液用凝胶渗透层析柱净化，用正己烷/二氯甲烷溶液淋洗，加入脂肪、PAHs、PCBs、OCPs和PBDEs的标样，收集80-210mL淋洗液；3)用正己烷/二氯甲烷溶液淋洗并收集0-25mL组分；4)加入内标物进行气相色谱-质谱分析。本发明提出的方法，选取胎盘这一特殊生物组织作为有机污染物附着载体，藉此反应胎儿宫内对多种有机污染物的实际暴露水平。该方法对有机污染物的提取率可达到93％，并精确设定了样品净化步骤的实验参数，可以实现同时检测人体胎盘组织中多种持久性有机污染物的目的。

Description

胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法

技术领域

本发明属于分析领域，具体涉及一种气相色谱和质谱联用检测子宫内污染物的方法。

背景技术

持久性有机污染物(persistant organic pollutants,POPs)是一类在环境中难以降解、能够通过食物链富集并远距离输送的污染物^[1]。POPs对人体有多种毒性作用，包括对免疫系统的危害、内分泌干扰作用、生殖和发育毒性、“三致”作用等(^{[2]，[3]，[4]，[5]}。鉴于其严重的生态与健康效应，2001年全球100多个国家共同签署了《关于持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约》(以下简称《斯德哥尔摩公约》)，规定了12种优先控制的持久性有机污染物；2009年，包括阻燃剂多溴联苯醚(PBDEs)在内的9类污染物被加入《斯德哥尔摩公约》；此外还有众多的污染物，如多环芳烃，虽然未被列入《斯德哥尔摩公约》，但具有POPs的多数特征，其中的16种多环芳烃(PAHs)被US EPA列为优先控制污染物。长期以来，POPs一直是环境科学领域的研究热点，同时也是环境与健康研究领域的重要问题。

由于胎儿在母体的子宫内发育，不与外界直接接触，因此要研究胎儿对于包括POPs在内的污染物暴露必须选择合适的载体。胎盘是妇女怀孕期间存在的连接母体及胎儿的特殊组织，母体和胎儿之间的物质交换需通过具有选择通透作用的胎盘。除了胎儿生长发育所需的营养物质以外，Perera et al.^[6]的研究发现，多种污染物也可以透过胎盘屏障导致胎儿的宫内暴露，对子代健康发育产生影响。PAHs是典型的POPs之一，其暴露会对人体健康造成多种危害，胎儿出生前的PAHs暴露被证实是导致细胞遗传学损伤的危险因素^[7]，会对胎儿的生长发育(头围、身高、体重等)造成不良影响^[8]，还会导致胎儿早产、低体重甚至死亡的危险性明显增加^[9]。Shen et al.^[10]研究发现，有机氯农药(OCPs)在母体内代谢后，可以透过胎盘屏蔽传递给胎儿，造成胎儿的宫内暴露，影响胎儿的正常发育。流行病学调查发现，胚胎期间对OCPs的暴露会导致出生缺陷的发生，如男性生殖系统畸形^[11]等。Salazar-Garcia et al.^[12]的研究还发现，高暴露于DDT的孕妇会导致胎儿发生出生缺陷的危险性明显增加。因此，胎盘中的污染物含量能够充分反映胎儿的暴露水平，是研究胎儿宫内暴露的理想载体^[13]。

到目前为止，国际上开展的人体胎盘中POPs的研究十分有限，这一方面是由于采集人体胎盘样品相对于采集环境样品难度更大；另一方面，人体胎盘组织中的POPs含量很低，而且分析胎盘组织需要繁杂的样品前处理流程，对于实验条件及实验技能要求很高。尽管世界上已经有一些国家开展了人体胎盘中POPs的研究，但所采用的分析方法均是延用分析环境样品的方法或稍加改进，不仅消耗大量的时间，而且在实验过程中存在一定的不足(如回收率偏低、净化不完全等)，直接影响目标物质的提取效果及仪器分析的准确性。目前，国际上尚没有关于人体胎盘组织POPs痕量分析的标准方法。本研究通过大量的条件实验建立了一套完整的人体胎盘中POPs的痕量分析方法。

参考文献

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发明内容

针对现有技术存在的不足之处，本发明的目的是提出一种胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法。

实现本发明目的的技术方案为：

一种胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法，包括步骤：

1)取离体的胎盘组织，以10g：10-20mL的质量体积比加入正己烷/丙酮等体积的混合溶液，萃取后离心，分离并收集上清液，得萃取液；

2)萃取液用凝胶渗透层析柱净化，用正己烷/二氯甲烷等体积混合溶液作淋洗液，加入脂肪、PAHs、PCBs、OCPs和PBDEs的标样，收集80-210mL淋洗液；

3)步骤2)收集的淋洗液转移至硅胶柱进行二次净化，用正己烷/二氯甲烷等体积混合溶液作淋洗液并收集0-25mL组分；

4)将淋洗液浓缩后，加入内标物，进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析：

使用Rxi-5MS低极性固定相,Crossbond5％二苯基/95％二甲基聚硅氧烷)(15m×250μm×0.1μm)气相毛细管色谱柱分离PAHs、PCBs、PBDEs和部分有机氯农药；使用DB-5MS(苯基亚芳基聚合物5％/95％二甲基聚硅氧烷；30m×250μm×0.25μm)分离DDT和其代谢产物(DDE和DDD)；

使用电子轰击(EI)电离源测定其中PAHs和DDTs，使用电子捕获负化学(ECNI)电离源测定其中的OCPs、PCBs、PBDEs。

本发明的方法的步骤1)中还包括：取萃取液总体积的8-15％，置于已称重的铝质容器上，称量脂肪重量。

优选地，所述步骤1)中，胎盘组织加入正己烷/丙酮混合溶液后，充分匀浆，经过1000-3000rpm震荡5-15min、超声处理5-15min和再次振荡5-15min，萃取后离心，分离并收集上清液，得萃取液，重复提取2-5次(从加入正己烷/丙酮开始重复2-5次)。

凝胶渗透色谱(gel permeation chromatogram,GPC)，又称体积排阻色谱，是按溶质分子的大小进行分离的一种色谱技术。通过多孔性凝胶固定相,使得样品中的大分子先被洗脱出来,小分子后被洗脱出来，从而达到分离的目的。在本实验中，根据目标化合物与共同提取出的脂肪分子大小的差异，即可达到分离脂肪的目的。

本发明所述步骤2)中，用正己烷/二氯甲烷混合溶液淋洗的速度为3-5mL/min。

本发明方法的步骤2)中具体操作为：加入的标样为脂肪、PCB、OCPs和PBDEs的萃取液，淋洗液用量为200mL，每10mL接一组分；加入的标样为PAHs的萃取液，淋洗液用量为300mL，每10mL接一组分。

进一步地，所述步骤4)的气相色谱分离中，采用不分流进样1μL。所述内标物为PCB-155、BDE-71、d10-ANT、d10-ACE、d10-PHE、d10-PYR、d12-Ba、d12-CHR。

本发明还具体提出气相色谱-质谱联用检测各有机污染物暴露水平的具体检测条件：

所述步骤4)中气相色谱分离PAHs和DDTs条件为：30mDB-5MS毛细柱(0.25mm内径，0.25μm膜厚)。进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1mL/min。升温程序：90℃保留1min，8℃/min到250℃，15℃/min到280℃，保留7min。

电子轰击(EI)电离源测定PAHs和DDTs的条件为：EI源，监测离子(m/z)：o,p’-DDE和p,p’-DDE：318和316；o,p’-DDD、p,p’-DDD、o,p’-DDT和p,p’-DDT：245和247。

所述步骤4)中气相色谱分离PCBs和有机氯农药中的HCHs、HCB、HEOX、endosulfan的条件为：进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1.5mL/min。升温程序：70℃保留1min，6℃/min到235℃，25℃/min到300℃，保留2min。

电子捕获负化学(ECNI)电离源测试条件为：ECNI源、离子源和四级杆温度均为150℃。监测离子(m/z)：α、β和γ-HCH：255、253和257；HCB：284和286；HEOX：237和239；endosulfan：406和408；deca-CB：498，496和500；nona-CBs：464，462和466；Octa-CBs：430，428和432；hepta-CBs：394，396和398；hexa-CBs：360，358和362；penta-CBs：326，324和328。

所述步骤4)中气相色谱分离PAHs的条件为：进样口温度250℃，传输线280℃；升温程序：70℃保留1min，6℃/min到250℃，25℃/min到290℃，保留2min；

电子轰击(EI)电离源测定条件：EI源，监测离子(m/z)：FLU：166和165；PHE和ANT：178和179；FLT和PYR：202和203；BaA和CHR：228和229；BbF、BkF和BaP：252和253；IPY和BPE：276和277；DBA：278和279。

所述步骤4)中气相色谱分离PBDEs的条件为：进样口温度280℃，传输线300℃；升温程序：110℃保留1min，20℃/min到200℃，5℃/min到300℃，保留5min；

电子捕获负化学(ECNI)电离源测试条件为：ECNI源，离子源和四级杆温度均为150℃。监测离子(m/z)：BDE209、208和207：486.5和488.5。

气相色谱分离PAHs和PBDEs中，高纯氦气流速1.5mL/min。其它含溴目标物质监测离子(m/z)：79和81。

本发明的有益效果在于：

(1)选取胎盘这一特殊生物组织作为有机污染物附着载体，藉此反应胎儿宫内对多种持久性有机污染物的实际暴露水平。

(2)该方法对有机污染物的提取率可达到93％，并精确设定了样品净化步骤的实验参数，可以实现同时检测人体胎盘组织中多种持久性有机污染物的目的。

采用本发明的方法，以神经管畸形病患为例，与正常儿童为对照，检测并对比胎儿宫内多种污染物暴露水平，结果表明本发明检测方法正确反映了宫内有机污染物的暴露水平。

附图说明

图1为有机氯农药和多氯联苯GPC淋洗曲线。

图2为多溴联苯醚GPC淋洗曲线。

图3为多环芳烃GPC淋洗曲线。

图4为多环芳烃硅胶柱淋洗曲线。

图5为多溴联苯醚硅胶柱淋洗曲线。

图6为有机氯农药和多氯联苯硅胶柱淋洗曲线。

具体实施方式

以下以具体实施例来进一步说明本发明技术方案。本领域技术人员应当知晓，实施例仅用于说明本发明，不用于限制本发明的范围。

实施例中，如无特别说明，所用技术手段为本领域常规的技术手段。

实施例1：

本实施例选取采自山西省的130个胎盘样品。胎盘样品在孕妇分娩时进行采集，所采集的胎盘样品放入聚氯乙烯袋子，在-20℃冷冻保存。在干冰保护的情况下，由当地医院运送至实验室，并继续在-20℃冷冻保存。

神经管畸形(neural tube defects，NTDs)是一种常见的先天性畸形，在我国发病率较高，特别是在山西省，发病率达到了13.9‰。通过人口出生缺陷监测系统可以对有严重的肉眼可见的出生缺陷儿进行识别，每当确诊一个明显的出生缺陷儿，则在同一医院选择一个没有任何先天缺陷的儿童作为对照。选择的对照与病例性别相同，并且对照的母亲与病例母亲生活在同一地区，其怀孕的日期接近。本实施例共选择了包括80例生育了神经管畸形胎儿的妇女胎盘和50例生育了健康胎儿的妇女胎盘。

采用本发明提出的方法，分析检测了胎盘样品中的PAHs、OCPs、PCBs、PBDEs等四类持久性有机污染物(persistent organic pollutants,POPs)，并统计比较检测结果，验证本发明方法的准确性。

1)本研究所用的胎盘样品采自位于胎儿一侧胎盘的脐带周围2cm以内的10g胎盘组织。由于POPs具有强脂溶性，胎盘中的POPs多存在于脂肪中，因此，只要能够将胎盘中的脂肪提取完全，就可以保证目标物质提取完全。将胎盘样品剪碎，放入大离心瓶中，加入15mL Hex和Ace(V:V,1:1)的混合溶液，用匀浆仪匀浆1min(33,000rpm)，加入回收率指示物，然后漩涡震荡10min(2000rpm)，超声10min，再漩涡震荡10min，置于离心机离心3min(3500rpm)，转移上清液至离心瓶A，重复提取2次，合并上清液。然后再重复提取3次，将上清液转入离心瓶B。萃取液以高纯氮吹至约2mL。

从离心瓶A、B中分别取出10％(体积分数)加入已称重的铝盒A和铝盒B，待有机溶剂挥发干后，称取脂肪重。其中B瓶的脂肪提取效率可以达到93.35％。

2)凝胶渗透色谱净化

取35g GPC填料于烧杯，加入150mL正己烷和二氯甲烷(V:V,1:1)混合溶液，用铝箔覆盖烧杯，放入通风橱静置24h，使填料充分膨胀。将填料搅拌均匀，沿玻璃棒流入GPC柱(30cm×25mm i.d.)，中间可打开四氟阀放掉多余的溶剂。待全部转移完毕后，上部留有约10cm溶剂，加磨口塞密封后，将柱体倒置并震荡，使填料充分混匀，然后将柱体缓慢扶正，并打开磨口塞，让填料均匀沉降，确保柱体无断层、气泡和沉降分阶层。用500mL正己烷和二氯甲烷(V:V,1:1)混合溶液淋洗，流速控制在4mL/min，使柱体稳定备用。

在制备好的GPC色谱柱上分别加入脂肪、PAHs、PCBs、OCPs和PBDEs的标样，用正己烷和二氯甲烷(V:V,1:1)混合溶液淋洗，脂肪、OCPs、PCB和PBDEs淋洗液用量为200mL，每10mL接一组分；PAHs淋洗液用量为300mL，每10mL接一组分。脂肪淋洗液用称重法测量，其余淋洗液浓缩后进行GC-MS测试。淋洗曲线见图1至图3。从图1至图3峰的分布可以看出，目标物质与脂肪在90mL即可很好分离，210mL目标物质基本洗脱完毕。

将浓缩的提取液转移至GPC柱上端，用Hex和DCM混合溶剂(V:V,1:1)淋洗，分别用5mL混合溶剂淋洗两次后加入大量的淋洗溶剂，收集90-210mL淋洗液。

3)硅胶柱净化

硅胶在使用前放入烘箱在130℃条件下活化24h。

采用正己烷湿法装柱，在柱子(10cm×0.9cm i.d.)中从下到上依次装入玻璃棉、4g硅胶(约10cm)、1cm无水硫酸钠。填充柱用50mL正己烷和二氯甲烷混合溶液(V:V,1:1)淋洗后备用。

将步骤2)收集的淋洗液转移至硅胶柱，用Hex和DCM混合溶剂(V:V,1:1)淋洗，收集0-25mL淋洗液。净化完毕后，将淋洗液置于旋转蒸发仪，旋蒸至约2mL，再氮吹至约0.5mL，加入内标物(InternalStandard,IS)，转移至加衬管的样品瓶中，冷冻待测。内标物为PCB-155、BDE-71、d10-ANT、d10-ACE、d10-PHE、d10-PYR、d12-Ba、d12-CHR。

从图4至图6峰分布结果可知，25mL淋洗液即可将目标物质完全洗脱出来。

说明书及附图中，各英文缩写含义如下：HCH六氯环己烷，HEPT七氯，Endo-1硫丹-1，DDE 1,1-双(对氯苯基)-2,2-二氯乙烯(滴滴伊)，DDD四氯二苯乙烷，PCB多氯联苯，Lipid脂类，BDE十溴联苯醚，Bep苯并(e)芘，Phe菲，Bap苯并(a)芘，Daa二苯并(a,h)蒽，11p茚苯(1,2,3-cd)芘，Bgp苯并(ghi)苝。

4)GC/MS检测：使用Rxi-5MS(15m×250μm×0.1μm)色谱柱分离PAHs、PCBs、PBDEs和部分有机氯农药；使用DB-5MS(30m×250μm×0.25μm)分离DDT和其代谢产物(DDE和DDD)。PAHs和DDTs使用电子轰击(EI)电离源，其它OCPs、PCBs、PBDEs使用电子捕获负化学(ECNI)电离源。具体仪器分析条件如下。

(1)有机氯农药中的DDTs：

30m DB-5MS毛细柱(0.25mm内径，0.25μm膜厚)。不分流进样1μL，进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1mL/min。升温程序：90℃保留1min，8℃/min到250℃，15℃/min到280℃，保留7min。EI源，监测离子(m/z)：o,p’-DDE和p,p’-DDE：318和316；o,p’-DDD、p,p’-DDD、o,p’-DDT和p,p’-DDT：245和247。

(2)PCBs和有机氯农药中的HCHs、HCB、HEOX、endosulfan等：

15m Rxi-5MS毛细柱(0.25mm内径，0.10μm膜厚)。不分流进样1μL，进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1.5mL/min。升温程序：70℃保留1min，6℃/min到235℃，25℃/min到300℃，保留2min。ECNI源，离子源和四级杆温度均为150℃。监测离子(m/z)：α、β和γ-HCH：255、253和257；HCB：284和286；HEOX：237和239；endosulfan：406和408；deca-CB：498，496和500；nona-CBs：464，462和466；Octa-CBs：430，428和432；hepta-CBs：394，396和398；hexa-CBs：360，358和362；penta-CBs：326，324和328。

(3)PAHs：

15m Rxi-5MS毛细柱(0.25mm内径，0.10μm膜厚)。不分流进样1μL，进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1.5mL/min。升温程序：70℃保留1min，6℃/min到250℃，25℃/min到290℃，保留2min。EI源，监测离子(m/z)：FLU：166和165；PHE和ANT：178和179；FLT和PYR：202和203；BaA和CHR：228和229；BbF、BkF和BaP：252和253；IPY和BPE：276和277；DBA：278和279。

(4)PBDEs：

15m Rxi-5MS毛细柱(0.25mm内径，0.10μm膜厚)。不分流进样1μL，进样口温度280℃，传输线300℃，高纯氦气流速1.5mL/min。升温程序：110℃保留1min，20℃/min到200℃，5℃/min到300℃，保留5min。ECNI源，离子源和四级杆温度均为150℃。监测离子(m/z)：BDE209、208和207：486.5和488.5；其它含溴目标物质：79和81。

在实验中，每7个胎盘样品作为一组，每组加一个空白样品以排除实验过程的干扰因素。

实验数据全部经过了严格的甄选，具体来讲，首先我们对130个胎盘样品和19个空白样品的实验数据进行了T检验，若胎盘样品的数据显著高于空白样品的数据，则该数据保留，否则该数据被剔除。对于被保留的数据，在胎盘中的浓度均高于空白样品中浓度的4倍以上。本实验中5种回收率指示物：d10-phenathane(d10-菲)、d12-chrysense(d10-屈)、d12-perylene(d12-二萘嵌苯)、d6-α-HCH(d6-α-六六六)和PCB-65(多氯联苯-65)的回收率分别为84±7％、88±12％、86±13％、96±5％和93±14％。本报告中的数据全部以脂肪重为基准，数据未经回收率及空白校正。

在研究中，采用了双盲的方法以避免实验过程的人为因素的影响。即在胎盘样品采集、制备及分析全过程中，实验人员均不知胎盘样品是病例样品还是对照样品。

5)数据分析

由于多数污染物的浓度数据均不符合正态分布，我们采用中位数和浓度范围对数据的偏态分布情况进行描述。组间的差异采用Pearson卡方检验。病例组与对照组中位数的比较采用非参数检验的方法。在剂量-反应关系分析中，某一种污染物的浓度或某一类污染物的浓度之和的四分位数被用作分界点。由于污染物暴露而引起的NTDs发病率采用OR(95％CI)值进行估计。数据分析采用SPSS 13.0进行。双侧检验P<0.05被认为有统计学意义。

(1)胎盘中PAHs和OCPs的浓度水平

表1 病例组与对照组胎盘样品中PAHs和OCPs浓度(ng/g lipid)

n.检出样本数.bn.d.未检出.cP.与对照组相比，Mann-Whitney U test.(曼-惠特尼U检验)。d包括fluorene(芴FLU)，phenanthrene(菲PHE)，anthracene(蒽ANT)，fluoranthene(荧蒽FLT)，pyrene(芘PYR)，benzo[a]anthracene(苯并[a]蒽BaA)，chrysene(苯并[b]荧蒽CHR)，benzo[b]fluoranthene(苯并Bbf)，benzo[k]fluoranthene([k]荧蒽,Bkf)和benzo[g,h,i]perylene(BPE苯并[g，H，I]苝).

10种PAHs组分在胎盘中的检出率非常高，检出率介于80％-100％。在病例组和对照组胎盘中浓度最高的PAHs组分均为Phe，其次是FLU、FLT、PYR和ANT。所有10种PAHs组分在病例组胎盘中的浓度的中位数均高于对照组胎盘，除BaA和BPE外，其余8种PAHs组分在两组间的差异均有统计学意义。10种PAHs组分在病例组胎盘中的浓度的中位数与对照组胎盘中的浓度的中位数的比值范围在1.2(Baa)-1.9(Pyr)之间。另外，病例组胎盘中10种PAHs浓度之和的中位数远高于对照组，且具有统计学意义(P<0.001)。

OCPs在胎盘样品中的检出率介于78％-100％之间，p,p'-DDE的浓度是所测ocPs中浓度最高的。DDT及其代谢产物在大多数病例组和对照组胎盘中均可检出。值得注意的是o,p'-DDT及其代谢产物(o,p'-DDE和o,p'-DDD)在病例组胎盘中的浓度均明显高于对照组胎盘。而p,p'-DDT及其代谢产物(p,p'-DDE和p,p'-DDD)在病例组胎盘和对照组胎盘中的浓度均无明显差异。另外，DDT及其代谢产物浓度之和在病例组与对照组胎盘之间没有显著性差异。然而，病例组胎盘中o,p'-DDT及其代谢产物浓度之和的中位数(中位数:4.3；范围:0.8-25.4)要明显高于对照组胎盘(中位数:2.7；范围:0.7-12.8)(P＝0.001)。

α-HCH和β-HCH在所有病例组和对照组胎盘中均可检出，γ-HCH在病例组和对照组胎盘中的检出率均为98％。α-HCH、β-HCH、γ-HCH在病例组胎盘中的浓度均高于对照组胎盘，其中α-HCH和γ-HCH具有统计学意义，而β-HCH没有统计学意义。另外，三种异构体的浓度之和在病例组与对照组之间没有统计学差异。HCB在130个胎盘样品中100％检出，但是在病例组与胎盘组间没有显著性差异。α-endosulfan在病例组胎盘中的浓度的中位数高于对照组胎盘，但是没有达到显著性水平。

(2)胎盘样品中PCBs和PBDEs的浓度

在本研究中，我们共分析了27种PCB化合物和39种PBDE化合物，但是大多数化合物由于其浓度太低未能检出，部分化合物的数据由于未能通过空白检测而被删除。合格的数据包括PCB-105,-118,-156,-157,-167,-189,-206,-209,和PBDE-47,-66,-99,-100,-153,-154。表2列出了病例组、对照组及全部胎盘样品中PCBs和PBDEs的浓度、检出样品数、单一污染物浓度中位数及非参数检验结果。

对于8种PCB同系物，在病例组胎盘样品中的检出率在71.3％到97.5％之间，而在对照组胎盘样品中的检出率为66％到100％。对于6种PBDE同系物，在病例组胎盘样品中的检出率在53.8％到97.5％之间，而在对照组胎盘样品中的检出率为34％到100％。在130个胎盘样品中，∑8PCBs的浓度最高为9.8ng/g lipid，最低为未检出；∑6PBDEs的浓度最高为11.1ng/g lipid，最低为未检出。从表4-7可以看出，除PCB-209外，其余污染物在病例组胎盘中的浓度均稍高于对照组胎盘，但这种差异没有达到显著性水平。具体浓度数据见表2。

以上的实施例仅仅是对本发明的具体实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，本领域技术人员在现有技术的基础上还可做多种修改和变化，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种胎儿宫内多种污染物暴露水平的分析检测方法，其特征在于，包括步骤：

1)取离体的胎盘组织，以10g：10-20mL的质量体积比加入正己烷/丙酮等体积的混合溶液，萃取后离心，分离并收集上清液，得萃取液；

2)萃取液用凝胶渗透层析柱净化，用正己烷/二氯甲烷等体积混合溶液作淋洗液，加入脂肪、PAHs、PCBs、OCPs和PBDEs的标样，收集80-210mL淋洗液；

3)步骤2)得到的淋洗液转移至硅胶柱进行二次净化，用正己烷/二氯甲烷等体积混合溶液作淋洗液并收集0-25mL组分；

4)将淋洗液浓缩后，加入内标物，进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析：

使用固定相5％二苯基/95％二甲基聚硅氧烷的气相毛细管色谱柱分离PAHs、PCBs、PBDEs和部分有机氯农药；使用固定相为苯基亚芳基聚合物5％/苯基95％二甲基聚硅氧烷的气相毛细管色谱柱分离DDT、DDE和DDD；

使用电子轰击(EI)电离源测定其中PAHs和DDTs，使用电子捕获负化学(ECNI)电离源测定其中的OCPs、PCBs、PBDEs。

2.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，在步骤1)中，取萃取液总体积的8-15％，置于已称重的铝质容器上，称量脂肪重量。

3.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，胎盘组织加入正己烷/丙酮混合溶液后，充分匀浆，经过1000-3000rpm震荡5-15min、超声处理5-15min和再次振荡5-15min，萃取后离心，分离并收集上清液，得萃取液；重复提取2-5次。

4.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，用正己烷/二氯甲烷混合溶液淋洗的速度为3-5mL/min。

5.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，加入的标样为脂肪、PCB、OCPs和PBDEs的萃取液，淋洗液用量为200mL，每10mL接一组分；加入的标样为PAHs的萃取液，淋洗液用量为300mL，每10mL接一组分。

6.根据权利要求1-5任一所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤4)的气相色谱分离中，采用不分流进样1μL；所述内标物为PCB-155、BDE-71、d10-ANT、d10-ACE、d10-PHE、d10-PYR、d12-Ba、d12-CHR。

7.根据权利要求1-5任一所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤4)中气相色谱分离PAHs和DDTs条件为：进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1mL/min；升温程序：90℃保留1min，8℃/min到250℃，15℃/min到280℃，保留7min；

电子轰击(EI)电离源测定PAHs和DDTs的条件为：EI源，监测离子(m/z)：o,p’-DDE和p,p’-DDE：318和316；o,p’-DDD、p,p’-DDD、o,p’-DDT和p,p’-DDT：245和247。

8.根据权利要求1-5任一所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤4)中气相色谱分离PCBs和有机氯农药中的HCHs、HCB、HEOX、endosulfan的条件为：进样口温度250℃，传输线280℃，高纯氦气流速1.5mL/min；升温程序：70℃保留1min，6℃/min到235℃，25℃/min到300℃，保留2min；

电子捕获负化学(ECNI)电离源测试条件为：ECNI源、离子源和四级杆温度均为150℃；监测离子(m/z)：α、β和γ-HCH：255、253和257；HCB：284和286；HEOX：237和239；endosulfan：406和408；deca-CB：498，496和500；nona-CBs：464，462和466；Octa-CBs：430，428和432；hepta-CBs：394，396和398；hexa-CBs：360，358和362；penta-CBs：326，324和328。

9.根据权利要求1-5任一所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤4)中气相色谱分离PAHs的条件为：进样口温度250℃，传输线280℃；升温程序：70℃保留1min，6℃/min到250℃，25℃/min到290℃，保留2min；

电子轰击(EI)电离源测定条件：EI源，监测离子(m/z)：FLU：166和165；PHE和ANT：178和179；FLT和PYR：202和203；BaA和CHR：228和229；BbF、BkF和BaP：252和253；IPY和BPE：276和277；DBA：278和279。

10.根据权利要求1-5任一所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤4)中气相色谱分离PBDEs的条件为：进样口温度280℃，传输线300℃，升温程序：110℃保留1min，20℃/min到200℃，5℃/min到300℃，保留5min；

电子捕获负化学(ECNI)电离源测试条件为：ECNI源，离子源和四级杆温度均为150℃；监测离子(m/z)：BDE209、208和207：486.5和488.5。