CN103755547B - 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法 - Google Patents

利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103755547B
CN103755547B CN201410029050.2A CN201410029050A CN103755547B CN 103755547 B CN103755547 B CN 103755547B CN 201410029050 A CN201410029050 A CN 201410029050A CN 103755547 B CN103755547 B CN 103755547B
Authority
CN
China
Prior art keywords
silica gel
column chromatography
gel column
concentrated solution
concentrated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201410029050.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103755547A (zh
Inventor
常江
夏燕青
吴应琴
马素萍
雷天柱
孙敏卓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Center for Oil and Gas Resources of Institute of Geology and Geophysics of CAS
Original Assignee
Lanzhou Center for Oil and Gas Resources of Institute of Geology and Geophysics of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Center for Oil and Gas Resources of Institute of Geology and Geophysics of CAS filed Critical Lanzhou Center for Oil and Gas Resources of Institute of Geology and Geophysics of CAS
Priority to CN201410029050.2A priority Critical patent/CN103755547B/zh
Publication of CN103755547A publication Critical patent/CN103755547A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103755547B publication Critical patent/CN103755547B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C51/487—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
    • C07C51/493—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification whereby carboxylic acid esters are formed
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B01D15/206—Packing or coating
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
    • B01D15/424—Elution mode
    • B01D15/426—Specific type of solvent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C51/47—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明涉及一种利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，该方法包括以下步骤：⑴将固体天然产物粉碎得样品粉末；⑵样品粉末经抽提、浓缩后得到总类脂化合物浓缩液；⑶用二氯甲烷湿法装柱得到硅胶层析柱A；⑷将总类脂化合物浓缩液加到硅胶层析柱A得到洗脱液A；⑸倒出硅胶层析柱A中的所有硅胶颗粒，分次加入氢氟酸，直至所有硅胶颗粒完全溶蚀后萃取，得到极性馏分，该极性馏分浓缩后得到浓缩液A；⑹在浓缩液A中加三氟化硼/甲醇络合物溶液甲酯化，得到酯化液，该酯化液萃取浓缩后得到浓缩液B；⑺用乙酸乙酯湿法装柱得到硅胶层析柱B；⑻将浓缩液B加到硅胶层析柱B内经洗脱、旋蒸后即得到脂肪酸组分。本发明工艺简便、易操作。

Description

利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法
技术领域
本发明涉及天然产物分离纯化技术领域，尤其涉及利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法。
背景技术
脂肪酸是一类广泛存在于天然产物中的有机化合物，目前已发现的天然脂肪酸有200多种。很多植物及种子等现代产物中，富含着人体不可或缺、但又无法自身合成的多不饱和脂肪酸（如ѡ-3，ѡ-6），它们在降血脂、抗肿瘤、营养以及免疫功能方面起着重要的平衡作用。所以，准确获取里面脂肪酸的组成信息，对医学以及制药行业具有重要的参考标准。此外，脂肪酸作为一类生物标志化合物，在环境科学、地球科学等领域也有着重要的研究价值。如煤、泥炭、油页岩等沉积物中，脂肪酸组分在揭示石油天然气的母质来源、成熟度、油气运移等方面也提供着主要信息和参考依据。因此，脂肪酸的研究越来越为研究者们所重视，那么如何能够科学、有效、快捷、充分地提取脂肪酸就成为了一个亟待解决的科学问题。
脂肪酸传统的分离纯化技术主要有皂化萃取法、薄层色谱法、液相色谱法、柱层析法等。虽均有一定特点和优点，但缺点也十分明显。如皂化萃取法，虽能得到样品中较纯净的脂肪酸馏分，满足定性定量等科研分析要求，但由于皂化后的脂肪酸盐是一类既亲水又亲油的双亲分子，这种特性使得大量中长链脂肪酸盐在有机溶剂萃取后，由于巨大烃链基团的亲油作用，反而使它们更易溶解在有机相或过渡相中，被研究者们当成了污物或不可皂化物而大量丢失（201110364831.3）。
再如上述那些色谱类分离技术，其原理相似，都是利用混合物中不同馏分在固定相和流动相之间分配能力的不同达到分离的目的。研究者们通常利用不同极性的溶剂将混合物按着极性的强弱依次洗脱出来，所以只能满足定性分析的要求，对于定量分析或者更深入的同位素研究则无能为力。尤其柱层析法，本身更是存在着很严重的问题：那些被滞留在柱填料孔洞或缝隙中的中长链脂肪酸，单纯依靠溶剂的洗脱始终无法获得，造成脂肪酸定性分析的严重偏差。
因此，亟需探索一种损失小、能真实反映样品中脂肪酸系列原始构成、并满足定性定量以及同位素分析等要求的提取方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简便、易操作的利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法。
为解决上述问题，本发明所述的利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，包括以下步骤：
⑴将固体天然产物粉碎至100~200目，得到样品粉末；
⑵将所述样品粉末经氯仿抽提、浓缩后，得到总类脂化合物浓缩液； 所述样品粉末与所述氯仿的质量体积比为1 g：3 mL ~5 mL；
⑶装柱：将4g硅胶颗粒置于50mL二氯甲烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱内备用，得到硅胶层析柱A；
⑷洗脱：将所述总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到所述硅胶层析柱A内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入所述硅胶层析柱A后，再用2mL二氯甲烷沿着所述硅胶层析柱A内表面冲三次；之后使用100mL二氯甲烷作为洗脱剂以1~2mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液A；待所述硅胶层析柱A中的溶剂挥发完，将所述硅胶颗粒全部倒出；
⑸溶蚀：在所述步骤⑷所得的硅胶颗粒中分次加入50mL体积浓度为20%的氢氟酸，直至所有所述硅胶颗粒完全溶蚀，得到极性馏分，该极性馏分用50mL氯仿萃取三次，得到萃取液A，该萃取液A浓缩至3~5mL，得到浓缩液A；
⑹衍生化：在所述浓缩液A中加10mL质量浓度为14%的三氟化硼/甲醇络合物溶液，并在温度为60~70℃的条件下甲酯化1~2h，得到含脂肪酸甲酯的酯化液，该酯化液用20mL二氯甲烷萃取三次，得到萃取液B，该萃取液B浓缩至3~5mL，得到浓缩液B；
⑺再次装柱：将4g硅胶颗粒置于50mL乙酸乙酯中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱内备用，得到硅胶层析柱B；
⑻洗脱与收集：将所述浓缩液B用滴管滴加到所述硅胶层析柱B内，待该浓缩液B全部进入所述硅胶层析柱B后，再用2mL二氯甲烷沿着所述硅胶层析柱B内表面冲三次；使用150mL二氯甲烷作为洗脱剂以1~2mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液B，该洗脱液B收集在圆底烧瓶内，浓缩至恒重后即得到脂肪酸组分。
所述步骤⑵、步骤⑸、步骤⑹或步骤⑻中的浓缩条件是指采用旋转蒸发仪，在温度30~33℃、压力为0.04~0.06MPa的条件下旋蒸3~5min。
所述步骤⑶和所述步骤⑺中的硅胶颗粒尺寸为100~200目。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明较传统柱层析方法，采用了溶蚀硅胶填料的方法。完全释放出那些被滞留在硅胶颗粒孔洞或缝隙中、无法洗脱出来的中长链脂肪酸，最大程度地避免了损失，完整保留了样品中脂肪酸系列的原始构成。如此获得的脂肪酸，在定性及定量方面，较传统柱层析方法都有很大的提高，为脂肪酸的应用和研究提供了真实可靠的实验数据，属于开创性研究。
2、本发明采用两次柱色层洗脱的工艺完成脂肪酸的分离。第一次洗脱的目的是除去弱极性馏分，在硅胶柱内保留含脂肪酸的极性馏分。硅胶填料溶蚀后萃取、酯化，将脂肪酸衍生成了脂肪酸甲酯，极性降低。经过第二次装柱洗脱，便可与其余极性馏分分离，得到高纯度的脂肪酸甲酯馏分，也方便了后续GC/MS的检测。该方法获得的脂肪酸馏分，纯度高、回收率高、碳数范围大，极大地提高了实验室提取脂肪酸的效率，也为各个领域内脂肪酸的研究提供了新的参考标准。
3、本发明均采用湿法装柱。第一次使用二氯甲烷来饱和硅胶，目的是尽量使二氯甲烷占据硅胶的孔洞或缝隙，待再用二氯甲烷洗脱时，那些弱极性馏分便随着二氯甲烷一并洗脱出来，不会滞留在硅胶柱内；第二次使用乙酸乙酯来饱和硅胶，目的是尽量使其占据硅胶的孔洞或缝隙，洗脱时，那些与乙酸乙酯有着相似化学结构的脂肪酸甲酯馏分便能完全洗脱出来，不会滞留在硅胶柱内造成损失。如此，便可减少损失，提高脂肪酸分离纯度，属于开创性研究。
4、为证实本发明方法的先进性和有效性，将本发明方法与传统柱层析法分别对现代产物决明子种子油中脂肪酸、黄县褐煤中脂肪酸、泥炭中脂肪酸进行提纯对比实验，并对提取出的脂肪酸进行定性和定量方面的对比研究。
4.1 对现代产物决明子种子油中脂肪酸进行提纯对比实验：
4.1.1将现代产物决明子按本发明实施例 1的方法进行实验。
4.1.2 将现代产物决明子按传统柱层析法进行实验，实验步骤如下：
⑴将决明子种子粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵精确称重10.3459g粉末经400mL氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度30℃、压力为0.04MPa的条件下旋蒸5min进行浓缩后，得到总类脂化合物；恒重后以重量的1/25加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL正己烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱。
⑷洗脱与收集：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱后，再用2mL正己烷沿着硅胶层析柱内表面冲下可能残留在玻璃壁上的浓缩液，共三次。之后使用200mL正己烷作为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为饱和烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL二氯甲烷为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为芳烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL甲醇为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为非烃馏分，收集到圆底烧瓶中。流速均为1~2mL/min。
⑸衍生化：将上述非烃馏分的洗脱液浓缩至3~5mL，加10mL三氟化硼/甲醇络合物溶液（14%）60℃下甲酯化2h后，用20mL二氯甲烷萃取三次，得到脂肪酸甲酯馏分，进行GC/MS分析。
从定性的角度分析（参见图1~2），本发明较传统柱层析方法在提取含羟基、甲氧基脂肪酸方面表现出了明显的优势。除多得到了两种含三个甲氧基的脂肪酸（9.10.12-三甲氧基-18烷酸和10.11.13-三甲氧基-18烷酸）外，其余几种脂肪酸（8,10-二甲氧基-18烷酸、12,14-二甲氧基-22烷酸、反式-10羟基-6-甲氧基-10-18烯酸、反式-11羟基-5-甲氧基-11-18烯酸、顺-10羟基-6-甲氧基-10-18烯酸和顺-11羟基-5-甲氧基-11-18烯酸）也表现出了明显高峰。而传统柱层析方法中，这些脂肪酸都有可能是由于含有羟基、甲氧基等复杂结构而被滞留在硅胶颗粒中未能洗脱出来。
从定量的角度分析（参见表1，数据均转换成单位质量样品所得），传统柱层析方法只能得到4.513mg的脂肪酸，而本发明得到了43.80mg的脂肪酸，是前者的9.705倍。且单个脂肪酸也呈现出数十倍，甚至数百倍的增长，尤其是提取到了那些比饱和脂肪酸更具生理活性的含羟基、甲氧基的脂肪酸，为决明子在制药、医学领域内的应用提供了全新的参考依据。
表1. 两种方法提取决明子中脂肪酸的结果对比
注：“-”表示未检出。
4.2对黄县褐煤中脂肪酸进行提纯对比实验：
4.2.1将黄县褐煤按本发明实施例 2的方法进行实验。
4.2.2将黄县褐煤按传统柱层析法进行实验，实验步骤如下：
⑴将黄县褐煤粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵精确称重5.5873g粉末经400mL氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度33℃、压力为0.06MPa的条件下旋蒸3min进行浓缩后，得到总类脂化合物；恒重后以重量的1/30加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL正己烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱。
⑷洗脱与收集：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱后，再用2mL正己烷沿着硅胶层析柱内表面冲下可能残留在玻璃壁上的浓缩液，共三次。之后使用200mL正己烷作为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为饱和烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL二氯甲烷为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为芳烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL甲醇为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为非烃馏分，收集到圆底烧瓶中。流速均为1~2mL/min。
⑸衍生化：将上述非烃馏分的洗脱液浓缩至3~5mL，加10mL三氟化硼/甲醇络合物溶液（14%）70℃下甲酯化1h后，用20mL二氯甲烷萃取三次，得到脂肪酸甲酯馏分，进行GC/MS分析。
从定性的角度分析（参见图3~4），传统柱层析方法只能得到C14：0~C28：0的一元脂肪酸，呈单峰型分布，其中C16：0是主峰。而本发明得到了C14：0~C32：0的一元脂肪酸，不但扩大了碳数范围，主峰也变为C26：0。自然，对于地球化学领域内关于石油天然气母质来源方面的分析判断也会产生很大的不同。
从定量的角度分析（参见表2，数据均转换成单位质量样品所得），传统柱层析法只能得到57.01mg的脂肪酸，而本发明得到了405.1mg的脂肪酸，是前者的7.104倍。且大部分单个脂肪酸也呈现出数倍、数十倍的增长，尤其是获得了较高含量的中长链脂肪酸。
综上所述，本发明较传统柱层析方法提取出的脂肪酸，在定性定量方面表现出了明显的优势。不但扩大了碳数范围，峰型发生较大变化，单个脂肪酸的含量也有很大提高，能完全满足同位素等高精度分析的要求。
表2. 两种方法提取黄县褐煤中脂肪酸的结果对比
注：“-”表示未检出。
4.3 对泥炭中脂肪酸进行提纯对比实验：
4.3.1将泥炭按本发明实施例 3的方法进行实验。
4.3.2将泥炭按传统柱层析法进行实验，实验步骤如下：
⑴将泥炭粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵精确称重103.1g粉末经400mL氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度31℃、压力为0.05MPa的条件下旋蒸4min进行浓缩后，得到总类脂化合物；恒重后以重量的1/30加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL正己烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱。
⑷洗脱与收集：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱后，再用2mL正己烷沿着硅胶层析柱内表面冲冲下可能残留在玻璃壁上的浓缩液，共三次。之后使用200mL正己烷作为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为饱和烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL二氯甲烷为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为芳烃馏分，收集到圆底烧瓶中。使用100mL甲醇为洗脱剂进行洗脱，洗脱液为非烃馏分，收集到圆底烧瓶中。流速均为1~2mL/min。
⑸衍生化：将上述非烃馏分的洗脱液浓缩至3~5mL，加10mL三氟化硼/甲醇络合物溶液（14%）65℃下甲酯化1.5h后，用20mL二氯甲烷萃取三次，得到脂肪酸甲酯馏分，进行GC/MS分析。
从定性的角度分析（参见图5~6），本发明提取出来的脂肪酸呈双峰分布，前峰以C16：0为主峰，后峰以C24：0为主峰。而传统柱层析只得到了以C16：0为主峰的单峰分布，损失了大量中长链脂肪酸。
从定量的角度分析（参见表3，数据均转换成单位质量样品所得），传统柱层析方法只能得到3.116mg的脂肪酸，而本发明得到了33.92mg的脂肪酸，是前者的10.89倍。且单个脂肪酸也呈现出数倍、数十倍的增长。
综上所述，本发明较传统柱层析方法提取出来的脂肪酸，在定性定量方面很有优势。不但改变了脂肪酸峰型的分布，还获得了较高含量的长链脂肪酸。为有机地球化学以及环境科学领域内的分析判断提供了新的参考依据。
表3. 两种方法提取泥炭中脂肪酸的结果对比
5、本发明工艺路线简便，易操作，设备简单，适用于任何固体类天然样品。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明提取决明子种子油中脂肪酸的总离子流图。
图2为传统柱层析法提取决明子种子油中脂肪酸的总离子流图。
图3为本发明提取黄县褐煤中脂肪酸的总离子流图。
图4为传统柱层析法提取黄县褐煤中脂肪酸的总离子流图。
图5为本发明提取泥炭中脂肪酸的总离子流图。
图6为传统柱层析法提取泥炭中脂肪酸的总离子流图。
具体实施方式
实施例 1 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，包括以下步骤：
⑴将固体天然产物粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵将样品粉末经氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度30℃、压力为0.04MPa的条件下旋蒸5min进行浓缩，得到总类脂化合物浓缩液。恒重后以重量的1/30加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
其中：样品粉末与氯仿的质量体积比为1 g：3 mL。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL二氯甲烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱A。
⑷洗脱：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱A内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱A后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱A内表面冲三次，使得可能残留在壁上的有机组分也一并进入硅胶柱内；之后使用100mL二氯甲烷作为洗脱剂以1mL/min的流速进行洗脱，冲下极性较弱的组分，得到洗脱液A；待硅胶层析柱A中的溶剂挥发完，将硅胶颗粒全部倒出。
⑸溶蚀：在步骤⑷所得的硅胶颗粒中分次加入50mL体积浓度为20%的氢氟酸，直至所有硅胶颗粒完全溶蚀，得到极性馏分，该极性馏分用50mL氯仿萃取三次，得到萃取液A，该萃取液A采用旋转蒸发仪在温度30℃、压力为0.04MPa的条件下旋蒸5min，使其浓缩至3mL，得到浓缩液A。
⑹衍生化：在浓缩液A中加10mL质量浓度为14%的三氟化硼/甲醇络合物溶液，并在温度为60℃的条件下甲酯化1h，得到含脂肪酸甲酯的酯化液，该酯化液用20mL二氯甲烷萃取三次，得到萃取液B，该萃取液B采用旋转蒸发仪在温度30℃、压力为0.04MPa的条件下旋蒸5min，使其浓缩至3mL，得到浓缩液B。
⑺再次装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL乙酸乙酯中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱B。
⑻洗脱与收集：将浓缩液B用滴管滴加到硅胶层析柱B内，待该浓缩液B全部进入硅胶层析柱B后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱B内表面冲三次；使用150mL二氯甲烷作为洗脱剂以1mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液B，该洗脱液B收集在圆底烧瓶内，采用旋转蒸发仪在温度30℃、压力为0.04MPa的条件下旋蒸5min，使其旋干至恒重后即得到脂肪酸组分。待GC/MS分析。
实施例 2 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，包括以下步骤：
⑴将固体天然产物粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵将样品粉末经氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度33℃、压力为0.06MPa的条件下旋蒸3min进行浓缩，得到总类脂化合物浓缩液。恒重后以重量的1/30加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
其中：样品粉末与氯仿的质量体积比为5 mL。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL二氯甲烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱A。
⑷洗脱：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱A内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱A后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱A内表面冲三次，使得可能残留在壁上的有机组分也一并进入硅胶柱内；之后使用100mL二氯甲烷作为洗脱剂以2mL/min的流速进行洗脱，冲下极性较弱的组分，得到洗脱液A；待硅胶层析柱A中的溶剂挥发完，将硅胶颗粒全部倒出。
⑸溶蚀：在步骤⑷所得的硅胶颗粒中分次加入50mL体积浓度为20%的氢氟酸，直至所有硅胶颗粒完全溶蚀，得到极性馏分，该极性馏分用50mL氯仿萃取三次，得到萃取液A，该萃取液A采用旋转蒸发仪在温度33℃、压力为0.06MPa的条件下旋蒸3min，使其浓缩至5mL，得到浓缩液A。
⑹衍生化：在浓缩液A中加10mL质量浓度为14%的三氟化硼/甲醇络合物溶液，并在温度为70℃的条件下甲酯化2h，得到含脂肪酸甲酯的酯化液，该酯化液用20mL二氯甲烷萃取三次，得到萃取液B，该萃取液B采用旋转蒸发仪在温度33℃、压力为0.06MPa的条件下旋蒸3min，使其浓缩至5mL，得到浓缩液B。
⑺再次装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL乙酸乙酯中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱B。
⑻洗脱与收集：将浓缩液B用滴管滴加到硅胶层析柱B内，待该浓缩液B全部进入硅胶层析柱B后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱B内表面冲三次；使用150mL二氯甲烷作为洗脱剂以2mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液B，该洗脱液B收集在圆底烧瓶内，采用旋转蒸发仪在温度33℃、压力为0.06MPa的条件下旋蒸3min，使其旋干至恒重后即得到脂肪酸组分。待GC/MS分析。
实施例 3 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，包括以下步骤：
⑴将固体天然产物粉碎至100~200目，得到样品粉末。
⑵将样品粉末经氯仿抽提72h后，采用旋转蒸发仪在温度31℃、压力为0.05MPa的条件下旋蒸4min进行浓缩，得到总类脂化合物浓缩液。恒重后以重量的1/30加入芥酸作为内标（经分析该样品中不含芥酸组分）。
其中：样品粉末与氯仿的质量体积比为4mL。
⑶装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL二氯甲烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱A。
⑷洗脱：将总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到硅胶层析柱A内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入硅胶层析柱A后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱A内表面冲三次，使得可能残留在壁上的有机组分也一并进入硅胶柱内；之后使用100mL二氯甲烷作为洗脱剂以1.5mL/min的流速进行洗脱，冲下极性较弱的组分，得到洗脱液A；待硅胶层析柱A中的溶剂挥发完，将硅胶颗粒全部倒出。
⑸溶蚀：在步骤⑷所得的硅胶颗粒中分次加入50mL体积浓度为20%的氢氟酸，直至所有硅胶颗粒完全溶蚀，得到极性馏分，该极性馏分用50mL氯仿萃取三次，得到萃取液A，该萃取液A采用旋转蒸发仪在温度31℃、压力为0.05MPa的条件下旋蒸4min，使其浓缩至4mL，得到浓缩液A。
⑹衍生化：在浓缩液A中加10mL质量浓度为14%的三氟化硼/甲醇络合物溶液，并在温度为65℃的条件下甲酯化1.5h，得到含脂肪酸甲酯的酯化液，该酯化液用20mL二氯甲烷萃取三次，得到萃取液B，该萃取液B采用旋转蒸发仪在温度31℃、压力为0.05MPa的条件下旋蒸4min，使其浓缩至4mL，得到浓缩液B。
⑺再次装柱：将100~200目的硅胶颗粒4g置于50mL乙酸乙酯中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱（450 mm×9mm I.D.）内备用，得到硅胶层析柱B。
⑻洗脱与收集：将浓缩液B用滴管滴加到硅胶层析柱B内，待该浓缩液B全部进入硅胶层析柱B后，再用2mL二氯甲烷沿着硅胶层析柱B内表面冲三次；使用150mL二氯甲烷作为洗脱剂以1.5mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液B，该洗脱液B收集在圆底烧瓶内，采用旋转蒸发仪在温度31℃、压力为0.05MPa的条件下旋蒸4min，使其旋干至恒重后即得到脂肪酸组分。待GC/MS分析。

Claims (3)

1.利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，包括以下步骤：
⑴将固体天然产物粉碎至100~200目，得到样品粉末；
⑵将所述样品粉末经氯仿抽提、浓缩后，得到总类脂化合物浓缩液； 所述样品粉末与所述氯仿的质量体积比为1 g：3 mL ~5 mL；
⑶装柱：将4g硅胶颗粒置于50mL二氯甲烷中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱内备用，得到硅胶层析柱A；
⑷洗脱：将所述总类脂化合物浓缩液用滴管滴加到所述硅胶层析柱A内，待该总类脂化合物浓缩液全部进入所述硅胶层析柱A后，再用2mL二氯甲烷沿着所述硅胶层析柱A内表面冲三次；之后使用100mL二氯甲烷作为洗脱剂以1~2mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液A；待所述硅胶层析柱A中的溶剂挥发完，将所述硅胶颗粒全部倒出；
⑸溶蚀：在所述步骤⑷所得的硅胶颗粒中分次加入50mL体积浓度为20%的氢氟酸，直至所有所述硅胶颗粒完全溶蚀，得到极性馏分，该极性馏分用50mL氯仿萃取三次，得到萃取液A，该萃取液A浓缩至3~5mL，得到浓缩液A；
⑹衍生化：在所述浓缩液A中加10mL质量浓度为14%的三氟化硼/甲醇络合物溶液，并在温度为60~70℃的条件下甲酯化1~2h，得到含脂肪酸甲酯的酯化液，该酯化液用20mL二氯甲烷萃取三次，得到萃取液B，该萃取液B浓缩至3~5mL，得到浓缩液B；
⑺再次装柱：将4g硅胶颗粒置于50mL乙酸乙酯中，搅拌，排除气泡，静置1h，使其充分溶胀后，将其置于玻璃层析柱内备用，得到硅胶层析柱B；
⑻洗脱与收集：将所述浓缩液B用滴管滴加到所述硅胶层析柱B内，待该浓缩液B全部进入所述硅胶层析柱B后，再用2mL二氯甲烷沿着所述硅胶层析柱B内表面冲三次；使用150mL二氯甲烷作为洗脱剂以1~2mL/min的流速进行洗脱，得到洗脱液B，该洗脱液B收集在圆底烧瓶内，浓缩至恒重后即得到脂肪酸组分。
2.如权利要求1所述的利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，其特征在于：所述步骤⑵、步骤⑸、步骤⑹或步骤⑻中的浓缩条件是指采用旋转蒸发仪，在温度30~33℃、压力为0.04~0.06MPa的条件下旋蒸3~5min。
3.如权利要求1所述的利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法，其特征在于：所述步骤⑶和所述步骤⑺中的硅胶颗粒尺寸为100~200目。
CN201410029050.2A 2014-01-22 2014-01-22 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法 Expired - Fee Related CN103755547B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410029050.2A CN103755547B (zh) 2014-01-22 2014-01-22 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410029050.2A CN103755547B (zh) 2014-01-22 2014-01-22 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103755547A CN103755547A (zh) 2014-04-30
CN103755547B true CN103755547B (zh) 2015-05-27

Family

ID=50522912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410029050.2A Expired - Fee Related CN103755547B (zh) 2014-01-22 2014-01-22 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103755547B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108195975A (zh) * 2018-02-06 2018-06-22 陕西中烟工业有限责任公司 一种烟草类脂物的提取及柱色层族组成分离方法
CN110687234B (zh) * 2019-09-27 2021-07-20 同济大学 烃源岩中水溶性、脂溶性和难溶性有机酸分离定量方法
CN112574825A (zh) * 2020-11-20 2021-03-30 余海龙 一种高纯度不饱和脂肪酸的提取工艺

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4486301A (en) * 1983-08-22 1984-12-04 Tennessee Valley Authority Method of beneficiating high carbonate phosphate ore
CN1709284A (zh) * 2005-06-23 2005-12-21 南京大学医学院附属鼓楼医院 从土鳖虫提取抗肿瘤有效部位脂肪酸
CN1775728A (zh) * 2005-11-21 2006-05-24 吉林农业大学 植物种子中ω－6多不饱和脂肪酸的提取方法
CN101206199A (zh) * 2006-12-18 2008-06-25 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一种大豆脂肪酸的微量检测方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2502148A1 (en) * 2002-10-16 2005-02-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for increasing the efficacy of biologically-active ingredients

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4486301A (en) * 1983-08-22 1984-12-04 Tennessee Valley Authority Method of beneficiating high carbonate phosphate ore
CN1709284A (zh) * 2005-06-23 2005-12-21 南京大学医学院附属鼓楼医院 从土鳖虫提取抗肿瘤有效部位脂肪酸
CN1775728A (zh) * 2005-11-21 2006-05-24 吉林农业大学 植物种子中ω－6多不饱和脂肪酸的提取方法
CN101206199A (zh) * 2006-12-18 2008-06-25 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一种大豆脂肪酸的微量检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
鳖甲、龟板中脂肪酸的GC—MS比较分析;方文忠等;《内蒙古中医药》;20130630(第17期);第43-45页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103755547A (zh) 2014-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102161611B (zh) 一种以烟草为原料制备角鲨烯的方法
CN106872233A (zh) 一种5‑羟甲基糠醛‑半胱氨酸加合物及其制备方法与应用和检测方法
CN103755547B (zh) 利用硅胶柱层析提取天然产物中脂肪酸的新方法
CN103901129A (zh) 一种磁分离-气相色谱检测十种有机磷农药方法
CN107200767A (zh) 一种降血糖活性成分科罗索酸的制备方法
CN105503580A (zh) 一种神经酸的提取分离方法
CN104592323A (zh) 一种双水相萃取苹果渣中根皮苷的方法
CN108693262B (zh) 一种化妆品中多种防腐剂的测定方法
CN104230858B (zh) 一种从红豆杉枝叶或树皮中分离纯化紫杉醇的方法
CN103450145A (zh) 一种利用高速逆流色谱从苏木中分离制备巴西木素和原苏木素b的方法
CN105445407A (zh) 一种山桐子中脂肪酸和维生素e的检测方法
CN104997840A (zh) 一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法及其应用
CN102955008A (zh) 一种加压毛细管电色谱检测鳗鱼中磺胺类药物残留的方法
CN110526952A (zh) 一种粗糙凤尾蕨中提取黄酮苷的制备方法
CN102086220A (zh) 一种荔枝果皮中根皮苷的提取和纯化方法
CN104725455B (zh) 一种灵芝酸t的制备方法
CN105061169A (zh) 一种巨大戟醇及其制备方法
CN103254165A (zh) 一种白术内酯ii的制备方法
CN102552476B (zh) 一种金樱根的检测方法
CN103901143B (zh) 一种用于少量生物血清中四溴双酚a分析的前处理方法
CN103524342B (zh) 采用可调三元溶剂体系快速分离款冬酮的方法
CN101885747B (zh) 一种脑苷脂和神经酰胺类化合物的分离纯化方法
CN103275054A (zh) 一种雏菊叶龙胆酮的制备方法
CN104215494B (zh) 一种利用花粉作为固相萃取剂的样品前处理方法
CN107721857A (zh) 一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150527

Termination date: 20160122

EXPY Termination of patent right or utility model