CN104962602B - 用于分析总膳食纤维的自动化方法和系统 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于分析总膳食纤维的自动化方法和系统。本发明由用于测定在食品和饲料样品中的总膳食纤维(TDF)及其亚部分不溶性膳食纤维(IDF)和可溶性膳食纤维(SDF)的方法组成，所述方法利用柔性反应/过滤容器，可将该容器分成一个或多个部分，用于单独捕获IDF和SDF部分或作为整体捕获TDF。将每个容器作成袋，其可在多个位置被临时密封以产生多个部分，并且由非多孔和多孔材料制成。使用这些容器消除了将混合物从烧杯转移到过滤器的需求问题，并且大大地改进了过滤过程。

Description

用于分析总膳食纤维的自动化方法和系统
本申请是申请号为201080038625.7母案的分案申请。该母案的申请日为2010年8月18日；发明名称为“用于分析总膳食纤维的自动化方法和系统”。
相关申请的交叉引用
本申请要求2009年8月25日提交的题为“Total Dietary Fiber Analysis System(总膳食纤维分析系统)”的美国临时专利申请序列号61/236,729的优先权。该申请的内容通过全文引用结合到本文中。
技术领域
本发明一般性地涉及纤维的分析，更具体而言，本发明涉及使用可分成一个或多个部分的柔性反应/过滤容器来分析膳食纤维。
背景技术
本发明涉及一种自动化总膳食纤维(TDF)分析系统，所述系统表现出在过滤、劳动和时间上改进的效率，并且不需要玻璃器具和相关的玻璃器具清洁。
已开发了多种用于分析饲料和食品中的纤维的方法。用于分析饲料的动物营养的广泛接受的方法为粗纤维(AOAC方法962.09)和中性洗涤剂纤维和酸性洗涤剂纤维(USDA，Agricultural Handbook No.379)。它们均为重量分析程序，并且依赖过滤来分离纤维部分。已开发新的纤维方法(粗纤维分析，AOCS方法Ba 6a-05和ANKOM专利US 5,370,007)，其使用过滤袋来改进过滤步骤和能进行间歇处理。AOAC是指Association of OfficialAnalytical Chemists(官方分析化学家协会)，AOCS是指American Oil Chemists Society(美国油化学家协 会)。人营养总膳食纤维(TDF)为用于对具有某些营养和消化道益处的纤维组分分类的术语。与动物纤维方法显著不同的是，TDF方法具有使用醇来沉淀水溶性纤维部分的额外要求。因此，在该方法的早期酶阶段中为水溶性的纤维组分后来被醇沉淀，并作为纤维部分的一部分被回收。
AOAC官方方法991.43(一种被批准的TDF方法)通过在缓冲溶液中，首先使用α淀粉酶，接着用蛋白酶，最后，在适当的pH调节之后，用淀粉葡萄糖苷酶(AMG)处理，进行样品中的淀粉和蛋白的酶消化。TDF由两种组分组成：不溶性膳食纤维(IDF)部分和可溶性膳食纤维(SDF)部分。可通过在一个过滤器中共同过滤IDF和SDF部分，或通过单独过滤IDF和SDF部分随后将两个值加在一起，来测定TD。为了单独分析IDF和SDF部分，在酶消化阶段结束时过滤IDF部分。将4倍体积的乙醇加入到滤液中，以沉淀SDF部分。然后通过过滤分离随后的沉淀剂。这些过滤通常耗时并且困难。该过程需要具有一层硅藻土的烧结玻璃坩埚和吸引液体通过过滤器的真空系统。在许多样品中，IDF和SDF倾向于包覆过滤器并抑制液体通过，需要延长的过滤时间。为了促进过滤，硅藻土过滤垫的表面通常需要刮削。
在分析期间将全部样品在两个不同的时间定量地转移(一次转移到IDF过滤器，一次转移到SDF过滤器)是关键的。SDF部分的细微沉淀包覆烧杯壁并需要物理去除。技术人员必须很小心地刮削和漂洗烧杯壁，以便将所有的纤维转移到过滤坩埚中。在过滤坩埚中回收IDF和SDF部分二者。通过干燥坩埚、称重、减去坩埚(以及硅藻土过滤垫)的重量和校正样品的灰分和蛋白，来按重量分析法测定它们的量。本领域技术人员将理解，校正样品的灰分涉及燃烧一式双份样品并测量剩余的灰分。校正蛋白涉及使用Kjeldahl或Dumas方法分析一式双份样品，以测量样品中的蛋白的量。基于灰分和蛋白值调节IDF和SDF重量值。在校正其灰分和蛋白之后，通过将IDF和SDF值相加，可计算总膳食纤维。
由以上描述可见，膳食纤维的分析是一项长期和费力的程序，其中转移和过滤步骤有问题。技术人员需要准确控制条件和仔细定量转移，以产生准确和精确的结果。必须将在消化烧瓶中的每一个颗粒转移到过滤坩埚，并且在转移期间硅藻土过滤垫必须保持完整，以便有效捕获细微颗粒。许多样品的过滤缓慢，即使辅助强真空亦是如此。一些样品可能需要刮削过滤垫，以更新一些过滤器表面，从而完成过滤过程。必须在不暴露坩埚的过滤场釉料(course filtering frit)下来完成刮削过程。与该方法相关的许多精度问题涉及转移和过滤过程的困难。
发明内容
本发明的申请可适用于多个批准的TDF方法(例如，AOAC991.43和985.29)。就说明的目的而言，本发明集中于AOAC 991.43。本发明基于可采用利用两个过滤容器的新的程序来代替上述标准体外过程的发现。现有技术的耗时、设备密集的过滤方法在本发明中被采用柔性过滤袋形式的两个消耗性容器代替。第一个袋为由非多孔膜组成的IDF袋，在袋的下部具有多孔过滤器。由于使用临时密封或其他临时分离结构可将单个袋分成反应部分和过滤部分，通过排除技术人员将混合物从烧杯手动转移到过滤装置的步骤，解决了现有技术的转移问题。(应注意到，在不同的实施方案中，密封可由压紧结构、夹具、Smart ZipTM密封、易碎的膜或允许将容器的一部分与另一部分临时分隔开的任何其他结构完成。)通过恰好在过滤器之上临时密封，在酶温育期间将上部部分隔离。为了帮助温育，从袋的外部搅拌和加热上部部分。在完成温育后，将密封释放，使液体通过过滤器直接进入SDF袋。通过对IDF袋加压可帮助过滤。
第二个袋为也由非多孔膜组成的SDF袋，在袋的下部具有多孔过滤器。通过在过滤器之上临时密封，SDF袋具有用作沉淀隔室的上部部分和用作过滤器隔室的下部部分。将SDF袋的上部部分和下部 部分临时彼此隔离，直至完成沉淀过程。由于使用临时密封或其他临时分离结构可将单个袋分成沉淀部分和过滤部分，通过排除技术人员将混合物从烧杯手动转移到过滤装置的步骤，解决了现有技术的转移问题。
更具体而言，所述方法涉及在温度和pH受控的环境中IDF袋内样品的酶消化。在样品被消化后，将压紧结构释放，使混合物流动进入袋的过滤器部分。施加压力，在过滤器中捕获IDF部分，同时含有可溶性SDF部分的滤液直接流动进入优选预装有热乙醇的SDF袋的上部非多孔部分。当与乙醇溶液接触后，可溶性纤维沉淀并保持60分钟，以完成沉淀。纤维沉淀后，将压紧结构释放，使混合物流动进入袋的过滤器部分。施加压力，并在袋的过滤器部分中捕获沉淀(SDF部分)。将两个过滤袋漂洗和干燥，以确保仅相应的纤维保留在袋中。一式双份样品用于测定蛋白和灰分含量。使用对灰分和蛋白含量校正的重量计算最终的IDF和SDF值。当单独计算IDF和SDF部分时，通过将校正的IDF和SDF部分加在一起测定总膳食纤维。还可在没有首先测定IDF和SDF级分的情况下测定总膳食纤维。在这种情况下，IDF袋仅用于酶消化。在消化完成后，将压紧结构释放，全部混合物流动进入SDF袋，而不过滤IDF部分。在SDF沉淀阶段后，将混合物过滤和漂洗。随后将SDF袋干燥和称重。一式双份样品用于测定蛋白和灰分含量。在这种情况下，最终的TDF值为对蛋白和灰分含量校正的TDF残余物的重量。
通过排除转移到过滤坩埚的需要，IDF和SDF袋均改进分析过程。通过在袋中掺入优良的过滤介质和较大的过滤表面积，还改进过滤器性质。
本发明的主要优点在于：(1)不需要技术人员将样品从烧杯转移到过滤器；和(2)改进的过滤能力消除了技术人员介入过滤过程的需要。这两个优点均使实现该方法的节约成本的自动化以及潜在的改进的精度。
附图说明
图1为说明适用于进行本发明的装置的侧视截面图。
图2A-2E各图示意性说明图1的装置如何用于本发明的过程的各步骤。
图3A-3B各图说明适用于进行本发明的另一种装置，该装置由具有多个用于将容器分隔成为多个部分的压点的单个反应/过滤容器组成。
图4的图示意性说明图3的装置如何用于自动化执行AOAC方法991.43。
图5A-5F各图示意性说明图3的装置如何被分成三部分容器以及如何用于AOAC方法991.43的各步骤。
图6A-6F各图示意性说明图3的装置如何设置成为单部分容器以及如何用于粗纤维方法(AOCS方法Ba 6a-05)的各步骤。
具体实施方式
图1显示为了测定在AOAC方法991.43中指定的IDF、SDF和TDF，可用于进行样品的消化、沉淀和过滤的过程的装置。该装置包括可拆卸的IDF袋1，该IDF袋1由聚合物薄膜制成的上部部分2和多孔过滤介质制成的下部部分3组成。将IDF袋放置在消化容器4中，袋的上部保持敞开并在容器凸缘上折叠。盖10在容器凸缘上关闭，在袋的上部和容器之间产生密封。通过孔8将缓冲液和酶引入到袋中。孔9用作通风口或引入压力以帮助过滤。搅拌桨11用于混合样品和酶。带式加热器12和冷却盘管13用于保持和控制容器的温度在60℃和95℃。压紧结构15临时封闭将容器4中的液体与SDF袋5分离的柔性管14。SDF袋5由聚合物薄膜制成的上部部分6和多孔过滤介质制成的下部部分7组成。SDF袋5临时悬挂在歧管19上。通过孔18向SDF袋5中施加压力以帮助过滤。当通过孔17引入乙醇 时，孔18也用作通风孔。压紧结构16临时将上部部分6与下部部分7分离。
图2A-2E各图示意性说明图1的装置如何用于本发明的过程的各步骤。在图2A中，将IDF袋1放置在消化容器4中，袋的上部保持敞开并在容器的顶部上折叠。将压紧结构15关闭，将样品20预先称重，并与缓冲溶液21一起插入IDF袋中。SDF袋5与歧管19连接，将压紧结构16关闭，以从下部部分7密封上部部分6。图2B-图2D中的“x”物体示意性说明不溶性纤维，而图2D和图2E中的圆形物体说明可溶性纤维。
图2B说明将盖10关闭以密封IDF袋。通过用桨11混合，将样品分散在缓冲溶液中，并使其在整个袋中自由移动。通过孔8将淀粉酶加入到容器中，将混合物温度在95℃下保持30分钟。随后将温度降至60℃。通过孔8加入蛋白酶之后，将混合物温育30分钟。通过孔8加入HCl，由此随后将pH降至4.0-4.7的范围。随后通过孔8加入淀粉葡萄糖苷酶，最终温育30分钟。在这些酶消化结束时，除了不溶性纤维残余物以外，所有组分在溶液中。
图2C说明液体从IDF袋1转移到SDF袋5的上部部分6。这通过打开压紧结构15并通过孔9施加压力以增强通过过滤器部分3的溶液转移来进行。在溶液中的非纤维和可溶性纤维组分通过过滤器部分3，而仅不溶性纤维被保留。通过孔8用70℃H2O、78％乙醇和95％乙醇漂洗保留的纤维。IDF袋的上部部分2提供了平滑的壁以容纳纤维固体，而不截留它们。由于纤维倾向于滑落薄膜壁并在下部过滤器部分3中收集，故可有效进行漂洗。由于SDF袋5的上部部分6由非多孔聚合物薄膜组成，故其保留溶液。
图2D说明通过孔17以足够的速度向SDF袋5中加入95％乙醇以混合溶液。加入流体引起袋改变形状。在60分钟的时间段内，使纤维部分沉淀并在袋的壁和底部上收集。如图2E所示，在沉淀完成后，将压紧结构16打开，使混合物流动进入SDF袋5的下部过滤器 部分7。已沉淀的纤维部分被保留在上部部分6的壁上和下部过滤器部分7中，而液体滤液流动通过过滤器和流出袋的外部。通过孔17使用78％乙醇和95％乙醇漂洗壁和过滤器，以从纤维部分中除去外来的可溶性物质。由于纤维部分非常细，在许多情况下，其倾向于粘附于SDF袋5的壁上。然而，由于在后来的步骤中处理和称重整个SDF袋5，故不必从壁上除去纤维。将IDF袋和SDF袋(含有残余物)移除，干燥，并称重。对一式双份IDF袋和SDF袋分析灰分和蛋白。通过从袋中干燥的IDF和SDF残余物的重量中减去灰分和蛋白重量，计算最终的IDF和SDF值。
图3显示由聚合物薄膜制成的可拆卸的柔性容器的两个不同视图，在该容器的底部部分中具有多孔过滤介质26。在该图中，显示容器在三个不同的位置(22、24和27)被压紧，以产生不同的部分(23和25)。虽然该图显示两个不同的部分，但是本领域技术人员应理解的是，在本发明中描述的容器可由一个、两个、三个或多个部分组成。
可使用可产生由非多孔聚合物薄膜制成的具有连接的多孔过滤介质的容器的任何技术来生产用于本发明的容器，该过滤介质提供细微颗粒保留，同时允许快速液体通过。取决于应用，多孔过滤介质可与聚合物薄膜的内部连接(使能容纳过滤过程)或包含容器的底部部分作为其外部壁，使得容器的顶部为聚合物薄膜并且容器的底部为过滤材料(使所有的滤液能够自由流出容器)。为了在分析期间执行它们的功能，容器还必须具有以下特性，包括：1)被临时密封以形成一个或多个部分的能力，和2)在分析的温度和压力条件下耐化学分解的能力，同时具有在测定样品的灰分和蛋白含量所需的过程期间被消耗的能力。用于袋的薄膜部分的合适的材料包括聚丙烯、聚乙烯和聚酯。用于袋的过滤器部分的合适的材料包括玻璃纤维、TeflonTM(特氟纶)、聚丙烯和聚酯。在一个实施方案中，聚丙烯用于薄膜部分，并且熔体喷射的聚对苯二甲酸丁二酯与聚丙烯薄膜的内部连接并用作过滤材料。典型的袋的重量高达约100g，并且能保持高达约1000cc的材料。
虽然本发明主要用于测定食品中的IDF、SDF和TDF，但是应理解的是，本发明还可用于测定饲料中的IDF、SDF和TDF。此外，本发明可用于其中固体由液体形成并且需要定量分离的任何应用，比如各种形式的沉淀、晶体形成、胶态溶液和絮凝。实例包括通过盐析的蛋白纯化、由于温度或浓度变化的糖的晶体形成以及由于加入絮凝剂的细菌絮凝。
实施例
图4显示自动化TDF系统30的示意图，其中歧管31通过适当的管子与不同的液体储器(单独标记)连接，液体储器通过与加热器33和泵34互连的管子32将所需的化学物质和水供应给IDF和SDF袋。在操作中，通过使用本领域技术人员公知的常规的电-机械电路和硬件(未全部示出)，该系统自动执行AOAC方法991.43，以：1)关闭压紧结构(以产生适当的容器部分)，2)加入所需的化学物质(通过包括加热器33和泵34的管道系统将它们从储器中移动)，3)加热和将样品与化学物质混合(使用在容器外部的加热器/混合器35)，和4)打开压紧结构以过滤固体和在容器的各部分之间转移液体。在图中，该自动化系统显示一个IDF袋和一个SDF袋。然而，该系统可设置成为同时处理多于一个IDF袋和多于一个SDF袋，以允许并行分析多个样品(如图中延伸出加热器的短线36所示)。为了执行AOAC991.43，使用该自动化仪器，在由聚丙烯薄膜制成的预先干燥和配衡的IDF袋中称重1±0.005g食品样品，该袋具有能过滤小至3-5微米的颗粒的熔体喷射的聚对苯二甲酸丁二酯过滤器。在仪器的顶部插入IDF袋，在仪器的下部插入SDF袋。通过关闭压紧结构39，将消化部分38与IDF过滤器部分40分离。通过关闭压紧结构43，将沉淀部分42与SDF过滤器部分44分离。向仪器储器填充MES-TRIS缓冲液、α淀粉酶、蛋白酶、HCl、AMG、H2O、78％乙醇和95％乙醇。使用开/关电源开关(未示出)开启仪器和随后按压控制面板显示器上 的“Start(开始)”(未示出)，开始自动化AOAC 991.43方法。仪器设计为自动加入溶液、保持温度、混合样品和将溶液从IDF袋转移到SDF袋。在保持适当温度和pH用于最佳活性的IDF袋部分38的内部，仪器进行酶消化。在消化阶段完成之前，向SDF袋沉淀部分42中引入热乙醇。在消化阶段结束时，将使消化部分38与过滤器部分40分离的压紧结构39打开，在一些压力辅助(在图中如N2所示)下过滤混合物。纤维残余物保留在IDF过滤袋部分40中，滤液流动进入SDF沉淀部分42。(应注意到，一将滤液引入到预装有乙醇的SDF沉淀部分42，就开始沉淀，即使IDF方法没有完全完成。)使用70℃H2O、78％乙醇和95％乙醇漂洗IDF。当IDF过程完成时，将压紧结构41关闭。1小时沉淀阶段后，将压紧结构43打开，使混合物流动进入SDF过滤器部分44。在压力帮助(在图中如N2所示)下滤液通过过滤器，SDF保留在过滤器中。使用78％乙醇和95％乙醇漂洗已沉淀的纤维。将IDF和SDF袋从仪器中移除，用丙酮漂洗，在烘箱中干燥，随后称重。一式双份样品用于测定蛋白和灰分含量。使用对灰分和蛋白含量校正的重量计算最终的IDF和SDF值。在该实施例中，可通过将校正的IDF和SDF值相加来计算TDF。
除了用于前面讨论的IDF和SDF程序以外，本发明的概念原理可在以下实施例说明的其他分析技术中得到证明。
本领域技术人员应理解的是，在本发明中描述的反应/过滤容器可分成一个或多个部分。在本发明的一个应用中，可在通过压紧结构隔离的分成三部分的一个柔性过滤袋组件(图5)中进行AOAC 991.43TDF分析。在该实施例中，上部部分45用作消化/反应隔室，中间部分46用作沉淀隔室，下部部分47用作过滤器隔室。在图5A中，将底部压紧结构48关闭，将热乙醇加入到容器中。这样做是为了在沉淀阶段期间消除辅助混合的需要。在图5B中，将中间压紧结构49关闭，将适当的化学物质加入到部分45。在图5C中，将顶部压紧结构50关闭，通过外部来源将部分45加热并搅拌，持续进行三种酶消 化所需的时间。当酶消化完成时，将中间压紧结构49打开，将消化混合物滴至热乙醇中(图5D)。在可溶性纤维完全沉淀(图5E)之后，将下部压紧结构48打开(图5F)。过滤器保留IDF和SDF，而液体通过。通过顶部压紧结构50，通过增加压力(在图中如N2所示)，可辅助过滤。在漂洗程序完成后，将整个袋干燥并称重。在确定对灰分和蛋白的合适的校正后，可计算TDF值。
在另一个应用中，反应/过滤袋53可设置成为一个部分的容器，内部含有过滤材料用于分析粗纤维(AOAC方法Ba 6a-05)。在图6中，这通过将过滤材料54下方的压紧结构51关闭完成。这样使能够连续处理固体样品。对于粗纤维分析，可将样品与酸性溶液一起放置在袋中，并且将袋在52处密封。可将混合物加热并搅拌适当量的时间。当时间过去后，将压紧结构51打开(图6C)，使液体流出。随后在过滤器下方将压紧结构51再次关闭(图6D)。将碱性溶液加入到袋中，将压紧结构52关闭，将混合物再次搅拌并加热适当量的时间(图6E)。当时间过去后，加入压力帮助(在图中如N2所示)，并将过滤器下方的压紧结构51打开，使液体流出(图6F)。漂洗后，将袋干燥，通过重量分析测定粗纤维。
在另一个应用中，反应/过滤袋可用于测定啤酒的发酵程度(AOAC方法950.06)。将啤酒(250ml)与1g活性压缩啤酒酵母加入到袋的上部部分，并在15-25℃下发酵24-48小时。在顶部将上部部分向左轻微打开，使得压力释放。将在上部部分中的反应与下部过滤器部分分离的压紧密封打开，固体被保留，而将液体在单独的烧瓶中收集。测定啤酒发酵前后的比重差。发酵糖等同于该差值乘以0.82。
在另一个应用中，在AOAC方法973.21的变通方法中，反应/过滤袋可用于测定在炒咖啡中的水溶性固体。将炒咖啡样品(10g)与200ml水放置在上部部分中。在上部部分之上和之下将袋密封，并从外部加热至100℃。使压力升至2-4psi以抑制沸腾。在该温度下5分钟后，将在上部部分的底部的密封打开。将固体在下部过滤器部分中 收集。通过干物质消失测定水溶性咖啡部分。将袋及其内含物在105℃下干燥并称重。通过样品重量的损失，测定提取的可溶性部分的量。
在另一个应用中，反应/过滤袋可在用于分析饲料中的carbodox的分光光度程序(AOAC方法977.35)的准备阶段中使用。将5g样品放置在上部部分中，加入10ml水以湿润样品。5分钟后，将氯仿和甲醇的3∶1混合物(140ml)加入到上部部分。将该部分加热至其沸点保持1小时。使内含物冷却至室温，随后使其通过过滤器。将滤液进一步处理，并在520nm下测量吸光度，以测定carbodox的量。
在另一个应用中，在AOAC方法992.17的变通方法中，反应/过滤袋可在用于分析马铃薯中的敌草快和百草枯残余物的液相色谱程序的准备阶段中使用。将5g浸软的马铃薯与5ml 2N HCl加入到袋的上部部分。使用压紧密封在上部部分之上和之下将袋密封，加热至100℃，并搅拌1小时。将上部部分的底部处的密封打开，将固体在下部部分过滤器中收集。随后使用6ml H2O漂洗在过滤器中捕获的固体，并通过对上部部分加压增强过滤。随后机械关闭延伸经过过滤器的不渗透的薄膜的底部部分，加入另外的5ml 2N HCl，加热，搅拌30分钟。将在过滤器下方的密封释放，将溶液过滤，将滤液进一步处理，以准备用于层析。使用紫外检测器(254nm和313nm过滤器)在聚(苯乙烯-二乙烯基苯)柱上完成分析。
虽然参考附图中说明的优选方式具体显示和描述了本发明，但是本领域技术人员应理解的是，在不偏离权利要求所限定的本发明的精神和范围的条件下可实现不同的细节变化。

Claims (5)

1.一种用于测定膳食纤维的方法，所述方法包括：
(a) 提供柔性袋形式的消耗性容器，所述容器包括上部非多孔消化部分、中间非多孔沉淀部分和下部过滤器部分，所述下部部分由过滤材料制成或包括过滤材料；
(b)关闭用于所述容器的中间压紧结构以将所述上部非多孔消化部分与所述中间沉淀部分临时分隔开；
(c) 关闭用于所述容器的下部压紧结构以将所述中间沉淀部分与所述下部过滤器部分临时分隔开；
(d) 将食品样品放置在所述容器的所述上部消化部分中，并将所述样品暴露于酶，持续足以产生包括IDF部分、SDF部分和所述样品的非纤维组分的消化混合物的时间；
(e) 使用在所述容器外部的加热器/混合器自动加热和混合在所述容器的上部消化部分中的样品；
(f) 自动打开用于所述容器的中间压紧结构使含有所述样品的SDF部分的消化混合物通过到所述容器的中间沉淀部分；
(g) 在所述容器的中间沉淀部分中，从所述消化混合物沉淀SDF部分；
(h) 自动打开所述用于所述容器的下部压紧结构来使所述已沉淀的SDF部分通过到所述下部过滤器部分，该下部过滤器部分捕获IDF和SDF部分；和
(i) 漂洗IDF和SDF部分以除去任何残余物。
2.权利要求1的方法，所述方法包括干燥和称重消耗性容器的步骤。
3.权利要求1的方法，所述方法包括测定在消耗性容器内的蛋白含量的步骤。
4.权利要求1的方法，所述方法包括测定在消耗性容器内的灰分含量的步骤。
5.权利要求1的方法，其中所述方法以自动化方式进行。
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