CN104950069A - 一种解郁顺心片质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种解郁顺心片质量检测方法，爱护与中药药剂检测领域，包括分别以丹酚酸B、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、石菖蒲对照药材提取液、远志对照药材提取液、郁金对照药材提取液、盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参、柴胡、石菖蒲、远志、郁金、黄连成分；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹酚酸B的含量。本发明具有准确率高，能够严格控制产品质量，能够对解郁顺心片进行全面有效的质量控制，监控生产工艺的稳定性，保证其质量的均一、稳定、可靠。

Description

一种解郁顺心片质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂检测方法，尤其是解郁顺心片的质量检测方法。

背景技术

申请号为201110405141.8的发明公开一种治疗抑郁症的药物，解郁顺心片，由柴胡、丹参、石菖蒲、远志、 郁金、 黄连、龙骨、 牡蛎、 青礞石按照一定比例组成，常用解郁顺心片其配方包括柴胡6g  丹参30g  石菖蒲6g  远志6g  郁金10g  黄连3g  龙骨10g  牡蛎10g  青礞石10g。方中丹参、柴胡共为君药，柴胡辛行苦泄，性善调达肝气，疏肝解郁，如柴胡疏肝散(《景岳全书》)，逍遥散(《和剂局方》)，丹参入心经，既可清热凉血，又可除烦安神，既能活血又能养血以安神定志，如天王补心丹(《摄生秘剖》)；龙骨、牡蛎质重能镇，用治心神不宁，心悸失眠，健忘多梦等症，常相须为用，如桂枝甘草龙骨牡蛎汤(《伤寒论》)，或与石菖蒲、远志等同用，如孔圣枕中丹(《千金方》)；石菖蒲有开窍醒神豁痰之功，郁金能解郁开窍，清心热，远志能安神益智，祛痰开窍，三者常配伍同用，如开心散(《千金方》)，菖蒲郁金汤(《温病全集》)等，以上均共为臣药；佐以黄连清心泄火，青礞石消痰化气。诸药共用肝气得疏，气血痰郁而化，阴虚火旺而能消。功能主治：疏肝理气，清心除烦，重镇安神，开窍化痰泄火。用于肝郁化火，痰热扰心所致的抑郁症。症见精神抑郁，烦躁易怒，胸胁胀痛，心悸不宁，头痛眩晕，失眠健忘，多梦易醒，舌红，苔黄腻，脉滑数。该药方是基于中医理论对抑郁症发病机理的认识和治疗原则，结合多年诊疗本病的临床经验而成。认为其病因系肝气郁结，失于调达以及心神渐伤，营血暗耗。肝气不舒，气滞易致血瘀，血瘀反之加重气滞，气血失调，入而化痰，导致痰浊蒙蔽，精神抑郁，气郁化火，加重营血耗损，阴虚火旺，出现情志不畅、心悸易惊、头痛眩晕、夜难入寐等症状。长期实践中具有良好的疗效，因此广受患者欢迎。但是缺乏针对该药物的检测方法，导致不能有效的控制药物的质量，严重影响了中药制剂的安全性和有效性，不能满足社会对现代中药的生产质量控制，药品经营质量控制等环节的要求。

发明内容

所要解决的问题：针对以上问题，本发明提供一种解郁顺心片质量检测方法，准确率高，能够严格控制产品质量，能够对解郁顺心片进行全面有效的质量控制，监控生产工艺的稳定性，保证其质量的均一、稳定、可靠。为广大患者提供质量稳定安全有保障的解郁顺心片。

本发明是通过如下技术手段予以实现的，一种解郁顺心片质量检测方法，所述的检测方法包括:

以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分；

以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分；

以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液,采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分；

以远志对照药材提取液作为对照药材溶液，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分；

以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分；

以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分；

以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹参含量。

所述的以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，称取约2g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；

另取丹酚酸B对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

另按处方中的比例和制备工艺制成缺丹参的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺丹参的阴性对照溶液；

取丹参对照药材1g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，制成丹参对照药材溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、丹参对照药材溶液和丹参阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸按照体积比为2：3：4：0.5：2为展开剂，依次进行展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。

所述的以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分的方法包括以下步骤：取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为供试品溶液；

取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的混合对照品溶液，作为对照品溶液；

取柴胡对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为柴胡对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺柴胡的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺柴胡的阴性对照溶液；按照薄层色谱法中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、柴胡对照药材溶液和柴胡阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：乙醇：水按照体积比8:2:1为展开剂，预平衡15min，上行展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛和40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置366nm下检视。

所述的以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分的方法包括以下步骤：取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加60~90℃石油醚20mL，加热回流1 h，过滤，滤液蒸干，残渣加60~90℃石油醚1mL使溶解，作为供试品溶液；

取石菖蒲对照药材0.2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺石菖蒲的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺石菖蒲的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和石菖蒲阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时，置紫外灯光366 nm下检视。

所述的以远志对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分的方法包括以下步骤：取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加10%盐酸无水乙醇溶液20mL，加热回流30min，放冷，过滤，滤液加水30mL，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液；

取远志对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺远志的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺远志的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和远志阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时；置紫外灯光366 nm下检视。

所述的以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加无水乙醇25mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

取郁金对照药材0.5g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺郁金的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺郁金的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和郁金阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷：乙酸乙酯按照体积比为17:3为展开剂，预饱和15min，上行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯光366nm下检视。

所述的以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇25mL，超声处理30min，过滤，取滤液作为供试品溶液；

取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

取黄连对照药材0.25g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，过滤，取滤液作为黄连对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺黄连的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺黄连的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述供试品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、黄连对照药材溶液和黄连阴性对照溶液各1uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水体积比为6:3:2:1.5:0.5为展开剂，一侧槽中加入展开剂，另一槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15min，展开，取出，晾干，置紫外灯366nm下检视。

 所述的以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹酚酸B含量的方法包括以下步骤：

1）制备丹酚酸B标准贮备液，其步骤包括：精密称取丹酚酸B对照品11.4mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹酚酸B标准贮备液1.14mg·mL^-1；

2）制备供试品溶液，其步骤包括：取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入80%甲醇50mL，超声工作频率40KHz，功率500W处理40min，取出，放冷，用80%甲醇补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

3）色谱条件：色谱柱：YMC-ODS C₁₈柱，规格4.6×250mm，5μm；柱温：35℃；

流动相：0.1%甲酸水-乙腈；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：286nm；进样量：10μL。

有益效果：

解郁顺心片其配方包括柴胡、 丹参、 石菖蒲、 远志、 郁金、黄连、龙骨、牡蛎、青礞石，具有疏肝理气，清心除烦，重镇安神，开窍化痰泄火的作用。用于肝郁化火，痰热扰心所致的抑郁症。由此可见，该药物中每味药都发挥其独特的作用，各药性相辅相成协调统一才能达到所需要的治疗效果。对于一个药物成分复杂的要去检测，其检测方法的准确度和可行性显得尤为重要。本发明提供一种解郁顺心片质量检测方法，准确率高，能够严格控制产品质量，能够对解郁顺心片进行全面有效的质量控制，监控生产工艺的稳定性，保证其质量的均一、稳定、可靠。为广大患者提供质量稳定安全有保障的解郁顺心片。

1本发明提供的技术方案指标量相对较多，检测结果可信度高，经回归分析得丹酚酸B的回归方程：Y=936326X-225864，R² =0.9995，线性范围：0.18~5.71mg·mL^-1；测定方法精密性良好，方法重复性良好，具有一定的准确性。本发明提供的技术方案在临床上能够帮助控制药品质量。可控性强，重现性稳定，可操作性强，药物损耗量小，而且反应灵敏，准确率高，显著提高了对中药安全性和有效性的监控，确保药品药性的稳定性，对不同批次的药物能够起到监控的作用，对使用该检测方法达不到检测要求的产品应当予以销毁处理，保证临床用药的安全性和有效性。

2本发明提供的技术方案是根据该药方中药物的特性，有针对性的选择了几种药物成分作为该药材的检测标准，采用定性加定量的方式检测药物，省时省力，准确率高，可以帮助甄别药物真伪和有效成分，控制该药品的质量，并且能够直接根据检测结果调整药物原材料，查找制备环节上的疏漏，达到全面监控药物制备过程的目的；监控生产工艺的稳定性，保证其质量的均一、稳定、可靠。

3本发明提供的检测方法对于准确检测解郁顺心片有效成分有重要意义，为对该药物和该领域药物的研发和制备具有重要意义。

4本发明提供的技术方案中对解郁顺心片的高效液相色谱供试液的制备，是溶解其有效成分的优化方案，丹参在处方中为君药，在治疗的过程中起着主导作用，故在建立质量标准的过程中选择丹参作为判断其质量的标准，能够得到准确度高效液相色谱结果，从而帮助检测判断解郁顺心片中药物成分是否达标，保证临床使用该药的安全和稳定性。本发明提供的薄层色谱检测法中对照品和供试品制备的技术方案包括但不限于药品的选择、制备条件的选择、检测条件的选择均是有针对性的，实验结果表达良好。准确度高，误差小，操作性强，能够对解郁顺心片中药物成分做除准确的定性分析。

附图说明

图1为实施例1解郁顺心片中丹参薄层色谱检测结果；

图2为实施例1解郁顺心片中柴胡薄层色谱检测结果；

图3实施例1解郁顺心片中为石菖蒲薄层色谱检测结果；

图4实施例1解郁顺心片中为郁金薄层色谱检测结果；

图5实施例1解郁顺心片中为黄连薄层色谱检测结果；

图6为解郁顺心片高效液相色谱图谱；

图7为解郁顺心片提取溶剂考察结果；

图8为解郁顺心片提取时间考察结果；

图9为丹酚酸B与解郁顺心片中丹参线性考察结果；

图10为丹酚酸B与解郁顺心片中丹参线性考察结果；

图11为丹酚酸B与解郁顺心片中丹参含量精密度测试结果；

图12为丹酚酸B与解郁顺心片中丹参含量重复性试验结果；

图13为丹酚酸B与解郁顺心片中丹参含量稳定性试验结果；

图14为丹酚酸B加样回收率实验结果。

具体实施例

实施例1

如图1、2、3、4、5、6所示一种以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分；柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分；以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分；以远志对照药材提取液作为对照药材溶液对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分；以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分；以盐酸小檗碱对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分；以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹参含量。

所述的检测方法包括，以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分的方法为：

取解郁顺心片5片，研细，称取约2g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。

另取丹酚酸B对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

另按处方中的比例和制备工艺制成缺丹参的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺丹参的阴性对照溶液。取丹参对照药材1g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，制成丹参对照药材溶液。

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、丹参对照药材溶液和丹参阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸按照体积比为2：3：4：0.5：2为展开剂，依次进行展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 结果如图1所示,A1为丹酚酸B、A2为丹参对照药材溶液、A3为供试品、A4为供试品、A5为供试品、A6丹参阴性对照溶液。

所述的以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分检测方法包括：取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为供试品溶液；

取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的混合对照品溶液，作为对照品溶液；

柴胡对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为柴胡对照药材溶液。

按处方中的比例和制备工艺制成缺柴胡的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺柴胡的阴性对照溶液；按照薄层色谱法中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、柴胡对照药材溶液和柴胡阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：乙醇：水按照体积比8:2:1为展开剂，预平衡15min，上行展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛和40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置366nm下检视。供试品溶液在与对照品色谱相应的位置上有相同颜色的斑点。结果如图2所示。B1柴胡皂苷a、d混合物对照品溶液、B2柴胡对照药材溶液、B3、B4、B5供试品、B6柴胡阴性对照溶液。

   所述的以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分步骤包括：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加60~90℃石油醚20mL，加热回流1 h，过滤，滤液蒸干，残渣加60~90℃石油醚1mL使溶解，作为供试品溶液。

取石菖蒲对照药材0.2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

按处方中的比例和制备工艺制成缺石菖蒲的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺石菖蒲的阴性对照溶液。

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和石菖蒲阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时，置紫外灯光366 nm下检视。供试品溶液在与对照品色谱相应的位置上有相同颜色的斑点。如图3所示，C1石菖蒲对照药材溶液，C2、C3、C4分别为供试品，C5石菖蒲阴性对照溶液。

   所述的以远志对照药材提取液作为对照药材溶液对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分步骤包括：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加10%盐酸无水乙醇溶液20mL，加热回流30min，放冷，过滤，滤液加水30mL，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。

取远志对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺远志的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺远志的阴性对照溶液。

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和远志阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时；置紫外灯光366 nm下检视。

所述的以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分步骤包括：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加无水乙醇25mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

取郁金对照药材0.5g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺郁金的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺郁金的阴性对照溶液。

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和郁金阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷：乙酸乙酯按照体积比为17:3为展开剂，预饱和15min，上行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯光366nm下检视。如图4所示，D1郁金对照药材溶液，D2、D3、D4分别为供试品，D5郁金阴性对照溶液。

所述的以盐酸小檗碱对照品采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分步骤包括：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇25mL，超声处理30min，过滤，取滤液作为供试品溶液。

取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

按处方中的比例和制备工艺制成缺黄连的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺黄连的阴性对照溶液。

取黄连对照药材0.25g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，过滤，取滤液作为黄连对照药材溶液。

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述供试品溶液、盐酸小檗碱、黄连对照药材溶液和对照品溶液和黄连阴性对照溶液各1uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水体积比为6:3:2:1.5:0.5为展开剂，一侧槽中加入展开剂，另一槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15min，展开，取出，晾干，置紫外灯366nm下检视。如图5所示，E1盐酸小檗碱标准品，E2黄连对照药材溶液，E3、E4、E5分别为供试品，E6黄连阴性对照溶液。

所述的以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹参含量步骤包括：

1）制备丹酚酸B标准贮备液，其步骤包括为精密称取丹酚酸B对照品11.4mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹酚酸B标准贮备液(1.14mg·mL^-1)

2）制备供试品溶液，其步骤包括：取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入80%甲醇50mL，超声工作频率40KHz，功率500W处理40min，取出，放冷，用80%甲醇补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

3）分别吸取丹酚酸B标准贮备液、供试品溶液10μL进样，色谱条件：色谱柱：YMC-ODS C₁₈柱，规格为4.6×250mm，5μm；柱温：35℃；

流动相：0.1%甲酸水-乙腈；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：286nm； 高效液相色谱显示如图6所示。

实施例2

取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、100%乙醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、100%甲醇各50 mL，分别超声工作频率40KHz，功率500W处理30min，取出，放冷，用提取溶剂补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，过滤，进样分析。结果见图7。

结果显示10种提取溶剂存在显著性差异，以80%甲醇提取率较高，且用甲醇提取作为供试品溶液，杂质峰小，干扰小，故采用甲醇作为供试品溶液的提取溶剂。

实施例3

取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入80%甲醇50mL，分别超声(工作频率40KHz，功率500W)处理10min、20min、30min、40min、50min、60min，取出，放冷，用80%甲醇补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，进样分析。结果见图8。

结果显示提取40min已基本提取完全，故确定提取时间为40min。

实施例4

按照以下检测方式进行试验：

1）制备丹酚酸B标准贮备液，其步骤包括为精密称取丹酚酸B对照品11.4mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹酚酸B标准贮备液(1.14mg·mL^-1)

2）制备供试品溶液，其步骤包括：取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入80%甲醇50mL，超声(工作频率40KHz，功率500W)处理40min，取出，放冷，用80%甲醇补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

3）色谱条件：色谱柱：YMC-ODS C₁₈柱(4.6×250mm，5μm)；柱温：35℃；

流动相：0.1%甲酸水-乙腈；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：286nm；进样量：10μL。

精密量取丹酚酸B对照品贮备液，配制对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，分别精密量取上清液10μl注入高效液相色谱仪测定，按上述第3步项下的条件测定，测定结果见图9。经回归分析得丹酚酸B的回归方程：Y=936326X-225864，R² =0.9995，线性范围：0.18~5.71mg·mL^-1，见图10。

精密吸取对照品溶液10μL，按照上述上述1、2、3步连续6次进样测定；测得丹酚酸B的色谱峰峰面积的RSD为0.17%(n = 6)，表明精密性良好。测定结果见图11。；

精密称取本品6份，每份约0.5g，按上述1、2、3步进行含量测定，计算含量，测得样品中丹酚酸B峰面积的RSD = 2.9%，表明方法重复性良好。结果见图12。

    精密量取同一供试品溶液10μl，按照上述1、2、3条件在0、2、4、6、8h分别测定，结果见图13。结果RSD为1.2%，表明供试品溶液在12h内稳定。

取同一批解郁顺心片6份，研碎，每份约0.5g，精密称定，置容量瓶中，加入对照品适量，精密加入60%甲醇10mL，按上述第2步制备供试品溶液，按上述3步色谱条件测定，结果见图14，显示：丹酚酸B平均回收率为99.79%，RSD =1.91 %(n = 6)，表明测定方法具有一定的准确性。

Claims (8)

1.一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括，

以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分；

以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分；

以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液,采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分；

以远志对照药材提取液作为对照药材溶液，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分；

以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分；

以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分；

以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹酚酸B的含量。

2.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以丹酚酸B为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有丹参成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，称取约2g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；

另取丹酚酸B对照品，加75％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；

取丹参对照药材1g，加75％甲醇25ml，加热回流1小时，过滤，滤液浓缩至1ml，制成丹参对照药材溶液；

另按处方中的比例和制备工艺制成缺丹参的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺丹参的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、丹参对照药材溶液和丹参阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸按照体积比为2：3：4：0.5：2为展开剂，依次进行展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。

3.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有柴胡成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为供试品溶液；

取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的混合对照品溶液，作为对照品溶液；

取柴胡对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理20min，过滤，滤液浓缩至约5mL，作为柴胡对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺柴胡的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺柴胡的阴性对照溶液；

按照薄层色谱法中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、柴胡对照药材溶液、和柴胡阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：乙醇：水按照体积比8:2:1为展开剂，预平衡15min，上行展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛和40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置366nm下检视。

4.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以石菖蒲对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有石菖蒲成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加60~90℃石油醚20mL，加热回流1 h，过滤，滤液蒸干，残渣加60~90℃石油醚1mL使溶解，作为供试品溶液；

取石菖蒲对照药材0.2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺石菖蒲的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺石菖蒲的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和石菖蒲阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时，置紫外灯光366 nm下检视。

5.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以远志对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有远志成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加10%盐酸无水乙醇溶液20mL，加热回流30min，放冷，过滤，滤液加水30mL，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液；

取远志对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺远志的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺远志的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和远志阴性对照溶液各2uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯按照体积比4:1为展开剂，上行展开，取出，晾干，放置约1小时；置紫外灯光366 nm下检视。

6.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以郁金对照药材提取液作为对照药材溶液采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有郁金成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加无水乙醇25mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

取郁金对照药材0.5g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺郁金的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺郁金的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液和郁金阴性对照溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷：乙酸乙酯按照体积比为17:3为展开剂，预饱和15min，上行展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯光366nm下检视。

7.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以盐酸小檗碱为对照品，采用薄层色谱法鉴别解郁顺心片中是否含有黄连成分的方法包括以下步骤：

取解郁顺心片5片，研细，取约2g，加甲醇25mL，超声处理30min，过滤，取滤液作为供试品溶液；

取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；

取黄连对照药材0.25g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，过滤，取滤液作为黄连对照药材溶液；

按处方中的比例和制备工艺制成缺黄连的空白片剂，同供试品溶液的制备方法制得缺黄连的阴性对照溶液；

按照中国药典一部标准附录2010版附录Ⅵ B中薄层色谱法，吸取上述供试品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、黄连对照药材溶液和黄连阴性对照溶液各1uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水体积比为6:3:2:1.5:0.5为展开剂，一侧槽中加入展开剂，另一槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15min，展开，取出，晾干，置紫外灯366nm下检视。

8.根据权利要求1所述的一种解郁顺心片质量检测方法，其特征在于，以丹酚酸B为对照品，采用高效液相色谱法鉴别解郁顺心片中丹参含量的方法包括以下步骤：

1）制备丹酚酸B标准贮备液，其步骤包括：精密称取丹酚酸B对照品11.4mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹酚酸B标准贮备液1.14mg·mL^-1；

2）制备供试品溶液，其步骤包括：取解郁顺心片5片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，精密加入80%甲醇50mL，超声工作频率40KHz，功率500W处理40min，取出，放冷，用80%甲醇补足定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

3）色谱条件：色谱柱：YMC-ODS C₁₈柱，规格4.6×250mm，5μm；柱温：35℃；

流动相：0.1%甲酸水-乙腈；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：286nm；进样量：10μL。