CN104946539A - 一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用 - Google Patents

一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用 Download PDF

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Abstract

一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用。本发明公开了一株卷枝毛霉(Mucor circinellodies)WJ11及其应用，即利用该菌生产油脂的方法。步骤如下：菌种活化得到活化菌种液后在无菌的条件下，进行种子培养得到种子培养液后发酵培养得发酵培养液过滤后冻干至恒重，得到含油脂的卷枝毛霉WJ11的干菌体后将其研磨，采用氯仿甲醇法提取油脂。本发明的这株卷枝毛霉WJ11具有生长速率快，脂肪酸含量高，达到生物量的30～40％，其脂肪酸含量是对照菌株的2～3倍，生化分析结果显示其与脂肪酸积累相关的酶活显著高于对照组。所述的这株卷枝毛霉用于微生物产油工业以及微生物油脂积累分析，都具有非常广泛的应用前景。

Description

一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用
【技术领域】
本发明属于微生物技术领域，更具体地，本发明涉及一株卷枝毛霉及其用途，特别是一株能够高产脂肪酸的卷枝毛霉及其生产油脂的发酵培养方法。
【背景技术】
微生物油脂又称单细胞油脂，是指微生物在一定条件下(如某种营养物质受限制，如氮源限制)积累的油脂。油脂含量大于20％生物量的微生物则称作产油微生物。
利用微生物生产油脂的研究最早可追溯到第一次世界大战期间，当时德国曾准备利用内孢霉属(Endomyces)和单细胞藻类镰刀属(Fusarium)的某些菌种生产油脂以解决食用油匮乏问题。随后美国、日本等国也开始研究微生物油脂的生产。第二次世界大战前夕，德国科学家筛选到了适于深层培养的菌种，并进行规模生产。后来发现利用微生物生产普通油脂成本太高，无法与动、植物来源的油脂相竞争。有关微生物油脂的探索此后一度集中在获取功能性油脂，如富含多不饱和脂肪酸的油脂。近年来，随着现代生物技术的发展，已获得更多具有高产油能力或其油脂组成中富含稀有脂肪酸的产油微生物资源，提高了微生物产油的效率。日本、德国、美国等国目前已有商品菌油面市。
随着人类社会资源压力和环境问题日益突出，通过微生物转化可再生资源生产油脂及其它相关代谢产品，部分替代化石资源，将是可持续发展的必然。微生物油脂与传统油脂(动植物油脂)相比，还拥有自身的优点，如它们含油量较高，油脂生产周期短，微生物培养条件简单，不像植物依赖季节与气候，还有重要的一点就是微生物油脂的不饱和脂肪酸含量较为丰富。
卷枝毛霉，作为一种产油微生物，含有丰富的不饱和脂肪酸γ-亚麻酸(顺式-6，9，12-十八碳三烯酸)，其在上世纪已被作为生产γ-亚麻酸的模式菌 株。γ-亚麻酸是组成人体各组织生物膜的结构材料，也是合成前列腺素的前体。其在营养保健方面有重要的作用，它能够抗心血管疾病，降血脂，降血糖，抗癌以及美白和抗皮肤老化，其潜在的药用价值受到广泛的关注。然而，由于卷枝毛霉总脂肪酸含量较低，导致其生产γ-亚麻酸成本较高，经济因素导致卷枝毛霉在γ-亚麻酸的工业化受到阻碍。
目前，在已报道的卷枝毛霉中，其在以酒石酸铵为氮源培养条件下脂肪酸含量大约是15～25％(脂肪酸/细胞干重)。已报道的卷枝毛霉菌株的脂肪酸积累能力较低，这严重影响了卷枝毛霉在生产功能性油脂和生物能源方面的应用前景。
因此，获得能够高产脂肪酸的卷枝毛霉菌株具有十分重要的意义。本发明获得一株能够高产脂肪酸的卷枝毛霉WJ11，其脂肪酸含量在以酒石酸铵作为氮源培养条件下达到30～40％，这是目前为止在卷枝毛霉中脂肪酸含量最高的一株。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明提供了一株高产脂肪酸及γ-亚麻酸的卷枝毛霉(Mucor circinelloides)WJ11。
本发明的另一个目的是应用所述卷枝毛霉WJ11生产油脂。 
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及的一株高产脂肪酸的卷枝毛霉WJ11分离自无锡江南大学蠡湖校区土壤。其具体步骤如下：
A.土壤样品的采集
土壤取自无锡江南大学蠡湖校区。先用小铲子去除表面泥土，取离地表5～10cm处的泥土，装入蓝盖瓶4℃保存备用。
B.真菌的分离纯化
取土壤样品5份，每份取20g加入180ml无菌水中，摇匀得到土壤悬浮液；吸取100ul接到PDA平板上，30℃恒温培养5～7天后，挑取平板上菌落形态有差异进行划线分离纯化，获得的菌株转接到PDA斜面，共得到 21株菌，对其编号保藏。
C.产油真菌的筛选
将分离纯化的21株真菌接入氮限制培养基中，于30℃摇床150rpm培养5天，菌丝用布氏漏斗真空抽滤，冷冻干燥，氯仿甲醇提脂。结果显示只有WJ11菌株油脂含量超过生物量的20％，达到30％以上(图1)。
D.产油霉菌WJ11的菌种鉴定 
产油霉菌WJ11，利用18SrDNA序列，形态特征、培养性状和生理生化特征及结果鉴定为卷枝毛霉，18SrDNA序列见序列表，其菌丝体在基物上或基物内能广泛的蔓延，无假根和匍匐菌丝，孢囊梗直接由菌丝体生出，菌丝体无膈，总状分枝，囊轴与孢囊梗相连接处无囊托，孢囊孢子椭圆形。该菌株已于2014年9月17日在中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO：M 2014424，保藏单位地址为中国武汉武汉大学，分类命名为卷枝毛霉WJ11 Mucor circinelloides WJ11。
根据本发明的实施方式，所述的氮限制培养基组成如下：50g/L葡萄糖、2g/L酒石酸铵、7g/L KH2PO4、2g/L Na2HPO4、1.5g/LMgSO4·7H2O、1.5g/L酵母粉、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
本发明涉及一种利用卷枝毛霉WJ11发酵生产油脂的方法。
该方法的步骤如下：
A、菌种活化 
将卷枝毛霉WJ11孢子液按与活化培养基的体积比1∶1000～2000接入装有活化培养基的带挡板三角瓶中，在摇床中温度25～35℃与转速100～200rpm的条件下恒温培养16～30h，得到一种活化菌种液；
B、种子培养 
在无菌的条件下，将步骤A得到的活化菌种液按种子培养基体积的5～15％接入装有种子培养基的带挡板三角瓶中，在摇床中温度25～35℃与转速100～200rpm的条件下恒温培养16～30h，得到一种种子培养液；
C、发酵培养 
在无菌的条件下，将步骤B得到的种子培养液按体积为发酵培养基体积的5～15％接入装有发酵培养基的发酵罐中，在通气流量1～3L/min、pH为5.0～7.0、温度25～35℃与转速500～1000rpm的条件下恒温培养80～120h，得到一种发酵培养液；
D、冷冻干燥 
将步骤C得到的发酵培养液经过滤，然后在冷冻干燥机中冻干至恒重，得到含有油脂的卷枝毛霉WJ11的干菌体。
E、脂肪酸提取 
将步骤D得到的干菌体研磨，采用氯仿甲醇法提取油脂。
根据本发明的实施方式，所述的卷枝毛霉WJ11菌体含有以该菌体总重量计30-40％脂肪酸。 
根据本发明的一种优选实施方式，所述的活化培养基与种子培养基组成如下：30g/L葡萄糖、3.3g/L酒石酸铵、7.0g/L KH2PO4、2.0g/L Na2HPO4、1.5g/L MgSO4·7H2O、1.5g/L酵母粉、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
根据本发明的实施方式，所述的发酵培养基组成如下：50～120g/L葡萄糖，优选80g/L、0.1～5g/L酒石酸铵，优选2g/L、5～10g/L KH2PO4、1～5g/L Na2HPO4、1～5g/LMgSO4·7H2O、0.1～2.0g/L酵母粉、0.1g/LCaCl2·2H2O、 0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/LMnSO4·5H2O。
采用上述培养方法研究了卷枝毛霉WJ11生长、营养消耗、脂肪酸积累、脂肪酸合成关键酶活：
1、卷枝毛霉WJ11的生长
本发明收集上述发酵菌体，冷冻干燥后测得卷枝毛霉WJ11在发酵过程中不同时间点的生物量，卷枝毛霉CBS277.49作为对照，其结果列于图2。这些结果表明，卷枝毛霉WJ11相比较CBS277.49生长速率较快，其中菌株WJ11的最大细胞干重达到14.0g/l，而菌株CBS277.49的最大细胞干重为13.3g/l。
2、卷枝毛霉WJ11营养成分的消耗
营养成分的消耗(碳源、氮源)与菌体生长和脂肪酸积累密切相关，本发明分别测了卷枝毛霉WJ11(图3)和CBS277.49(图4)两株菌不同时间点的发酵上清液中的葡萄糖和铵含量。这些结果表明，两株菌在9h左右氮已耗尽。在卷枝毛霉WJ11中，葡萄糖在96h时还有12.8g/l，而卷枝毛霉CBS277.49在96h时其葡萄糖已经耗尽。
3、卷枝毛霉WJ11总脂肪积累 
为了研究卷枝毛霉WJ11脂肪酸积累的特性，本发明采用有机溶剂提取与气相色谱分析的方法，对发酵菌体的总脂肪酸进行了分析，得到在不同时间点下卷枝毛霉WJ11总脂肪酸的含量，同时以卷枝毛霉CBS277.49作为对照，其结果列于图5。这些结果表明，在相同培养条件下，卷枝毛霉WJ11总脂肪酸含量达到其生物量的36％，而卷枝毛霉CBS277.49其总脂肪含量不足其生物量的15％。
4、卷枝毛霉WJ11脂肪酸组分 
由表1的数据可知，卷枝毛霉WJ11含有丰富的不饱和脂肪酸如油酸(C18：1)，亚油酸(C18：2)以及γ-亚麻酸(C18：3)，其中在发酵后期γ-亚麻酸含量达到总脂肪酸的14～15％
表1卷枝毛霉WJ11不同时间点的脂肪酸组分
5、卷枝毛霉WJ11脂肪酸相关酶活的影响
为了分析卷枝毛霉WJ11和CBS277.49脂肪酸积累差异的原因。本发明研究了两株菌在发酵过程中脂肪积累相关酶活的活力，其结果列于图6～15。结果表明，与低产脂菌株CBS277.49相比，高产脂菌株WJ11的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸萄萄糖脱氢酶活力较高，从而提高更多的还原力NADPH来合成脂肪酸。另外一方面，高产脂菌株WJ11下调了三羧酸循环的调控酶(异柠檬酸脱氢酶，柠檬酸合成酶)，从而下调了三羧酸循环的活力，这促进了碳源流向脂肪酸合成方向。卷枝毛霉WJ11的柠檬酸裂解酶和柠檬酸裂解酶活力相比较菌株CBS277.49，在脂肪酸积累过程中也是显著提高。这些酶活的差异影响了卷枝毛霉WJ11脂肪酸的积累。
[有益效果]
本发明的有益效果是：本发明的卷枝毛霉WJ11菌体生物量达到12～20g/L，与对照菌株卷枝毛霉CBS277.49相比略高，其生长速率快，脂肪酸积累速度快，产孢能力强，培养条件简单，对培养环境要求低。本发明的卷枝毛霉WJ11总肪酸含量达到30～40％，与对照组卷枝毛霉CBS277.49相比提高了100～160％，其中γ-亚麻酸含量丰富。本发明得到一株高产脂肪酸的卷枝毛霉WJ11，其在功能微生物油脂的生产和生物燃料的应用方面具有广阔的前景。
【附图说明】
图1为从江南大学土壤分离纯化的21株真菌的脂肪酸含量。
图2为不同发酵时间点的卷枝毛霉WJ11(◆)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(◇)的细胞干重(g/L)。
图3为卷枝毛霉WJ11(a)发酵上清液中的葡萄糖和铵含量。
图4为图3中卷枝毛霉WJ11(a)对照组--卷枝毛霉CBS277.49(b)发酵上清液中的葡萄糖和铵含量。
图5为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)总脂肪占菌体干重的含量。
图6为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为柠檬酸裂解酶的活力。
图7为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为苹果酸酶的活力。
图8为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活力。
图9为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活力。
图10为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为NAD-异柠檬酸脱氢酶的活力。
图11为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为NADP-异柠檬酸脱氢酶的活力。
图12为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为柠檬酸合成酶的活力。
图13为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为己糖激酶的活力。
图14为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为磷酸果糖激酶的活力。
图15为发酵过程中卷枝毛霉WJ11(●)和其对照组卷枝毛霉CBS277.49(○)关键酶为脂肪酸合成酶的活力。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：
A、菌种活化 
在无菌条件下，从-80℃超低温冰箱中取出卷枝毛霉WJ11(或者CBS277.49)孢子甘油管，吸取100μL接入盛有150mL下述活化培养基的带挡板三角瓶中，在由上海智诚分析仪器制造有限公司以商品名ZHWY-2102型回转式恒温摇床销售的摇床中，在温度30℃与转速150rpm的条件下恒温培养恒温培养24h，得到一种活化菌种液。
B、种子培养 
在无菌的条件下，按照在步骤A得到的活化菌种液体积为种子培养基体积的10％，将所述的活化菌种液接入装有150mL种子培养基的带挡板三角瓶中，在所述的摇床中在温度30℃与转速150rpm的条件下恒温培养24h，得到一种种子培养液。
所述的活化培养基与种子培养基组成如下：30g/L葡萄糖、3.3g/L酒石酸铵、7.0g/LKH2PO4、2.0g/L Na2HPO4、15g/L MgSO4·7H2O、1.5g/L酵母粉、0.1g/LCaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
C、发酵培养 
在无菌的条件下，按照在步骤B得到的种子培养液体积为发酵培养基体积的10％，将所述的种子培养液接入装有4L下述发酵培养基的由New Brunswick公司以商品名BF-115销售的发酵罐中，在通气流量2L/min、pH6.0、温度30℃与转速700rpm的条件下恒温培养96h，得到一种发酵培养液。
所述的发酵培养基组成如下：90g/L萄萄糖、2g/L酒石酸铵、1.5g/L酵母粉、7.0g/L KH2PO4、2.0g/LNa2HPO4、1.5g/LMgSO4·7H2O、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
D、冷冻干燥 
将步骤C得到的发酵培养液经过滤，然后在冷冻干燥机冻干，得到含有油脂的卷枝毛霉菌体。
E、脂肪酸提取 
将步骤D得到的干菌体研縻，利用氯仿甲醇法提取油脂，再用气相测脂肪酸组分。
采用本说明书中描述的方法，卷枝毛霉WJ11生物量达到14.0g/L，对照菌株CBS277.49生物量为13.3g/L。前者相比较后者提高了5％。而卷枝毛霉WJ11脂肪酸占生物量的36％，对照组卷枝毛霉CBS277.49脂肪酸含量只占生物量的15％，前者比后者提高了1.4倍。
实施例2：
A、菌种活化 
在无菌条件下，从-80℃超低温冰箱中取出卷枝毛霉WJ11(或者CBS277.49)孢子甘油管，吸取100μL接入盛有100mL下述活化培养基的带挡板三角瓶中，在由上海智诚分析仪器制造有限公司以商品名ZHWY-2102型回转式恒温摇床销售的摇床中，在温度30℃与转速200rpm的条件下恒温培养恒温培养16h，得到一种活化菌种液。
B、种子培养 
在无菌的条件下，按照在步骤A得到的活化菌种液体积为种子培养基体积的10％，将所述的活化菌种液接入装有150mL种子培养基的带挡板三角瓶中，在所述的摇床中在温度30℃与转速150rpm的条件下恒温培养16h，得到一种种子培养液。
所述的活化培养基与种子培养基组成与实施例1的相同
C、发酵培养 
在无菌的条件下，按照在步骤B得到的种子培养液体积为发酵培养基体积的5％，将所述的种子培养液接入装有4L下述发酵培养基的由New Brunswick公司以商品名BF-115销售的发酵罐中，在摇床中在通气流量2L/min、pH6.0、温度30℃与转速700rpm的条件下恒温培养120h，得到一种发酵培养液。
所述的发酵培养基组成如下：80g/L葡萄糖、2.0g/L酒石酸铵、7.0g/L  KH2PO4、2.0g/L Na2HPO4、1.5g/L MgSO4·7H2O、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
D、冷冻干燥 
将步骤C得到的发酵培养液经过滤，然后在冷冻干燥机冻干，得到含有油脂的卷枝毛霉菌体。
E、脂肪酸提取 
将步骤D得到的干菌体研磨，利用氯仿甲醇法提取油脂，再用气相测脂肪酸组分。
采用本说明书中描述的方法，卷枝毛霉WJ11生物量达到14.5g/L，对照菌株CBS277.49生物量为13.7g/L。前者相比较后者提高了6％。而卷枝毛霉WJ11脂肪酸占生物量的38％，对照组卷枝毛霉CBS277.49脂肪酸含量只占生物量的15％，前者比后者提高了1.5倍。
实施例3：
A、菌种活化 
在无菌条件下，从-80℃超低温冰箱中取出卷枝毛霉WJ11(或者CBS277.49)孢子甘油管，吸取100μL接入盛有100mL下述活化培养基的带挡板三角瓶中，在由上海智诚分析仪器制造有限公司以商品名ZHWY-2102型回转式恒温摇床销售的摇床中，在温度30℃与转速200rpm的条件下恒温培养恒温培养16h，得到一种活化菌种液。
B、种子培养 
在无菌的条件下，按照在步骤A得到的活化菌种液体积为种子培养基体积的5％，将所述的活化菌种液接入装有150mL种子培养基的带挡板三角瓶中，在所述的摇床中在温度30℃与转速150rpm的条件下恒温培养24h，得到一种种子培养液。
所述的活化培养基与种子培养基组成与实施例1的相同
C、发酵培养 
在无菌的条件下，按照在步骤B得到的种子培养液体积为发酵培养基体积的5％，将所述的种子培养液接入装有4L下述发酵培养基的由New  Brunswick公司以商品名BF-115销售的发酵罐中，在摇床中在通气流量2L/min、pH6.0、温度30℃与转速500rpm的条件下恒温培养80h，得到一种发酵培养液。
所述的发酵培养基组成如下：70g/L葡萄糖、2.0g/L酒石酸铵、7.0g/L KH2PO4、2.0g/L Na2HPO4、1.5g/L MgSO4·7H2O、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/L Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
D、冷冻干燥 
将步骤C得到的发酵培养液经过滤，然后在冷冻干燥机冻干，得到含有油脂的卷枝毛霉菌体。
E、脂肪酸提取 
将步骤D得到的干菌体研磨，利用氯仿甲醇法提取油脂，再用气相测脂肪酸组分。
采用本说明书中描述的方法，卷枝毛霉WJ11生物量达到13.5g/L，对照菌株CBS277.49生物量为12.7g/L。前者相比较后者提高了6％。而卷枝毛霉WJ11脂肪酸占生物量的35％，对照组卷枝毛霉CBS277.49脂肪酸含量只占生物量的14％，前者比后者提高了1.5倍。

Claims (6)

1.一株卷枝毛霉(Mucor circinelloides)WJ11，该菌株已于2014年9月17日在中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO：M2014424。
2.根据权利要求1所述的卷枝毛霉WJ11生产油脂的发酵培养方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、菌种活化
将卷枝毛霉WJ11孢子液按与活化培养基的体积比1∶1000～2000接入装有活化培养基的带挡板三角瓶中，在摇床中温度25～35℃与转速100～200rpm的条件下恒温培养16～30h，得到一种活化菌种液；
B、种子培养
将步骤A得到的活化菌种液按种子培养基体积的5～15％接入装有种子培养基的带挡板三角瓶中，在摇床中温度25～35℃与转速100～200rpm的条件下恒温培养16～30h，得到一种种子培养液；
C、发酵培养
在无菌的条件下，将步骤B得到的种子培养液按体积为发酵培养基体积的5～15％接入装有发酵培养基的发酵罐中，在通气流量1～3L/min、pH为5.0～7.0、温度25～35℃与转速500～1000rpm的条件下恒温培养80～120h，得到一种发酵培养液；
D、冷冻干燥
将步骤C得到的发酵培养液经过滤，然后在冷冻干燥机中冻干至恒重，得到含有油脂的卷枝毛霉WJ11的干菌体；
E、脂肪酸提取
将步骤D得到的干菌体研磨，采用氯仿甲醇法提取油脂。
3.根据权利要求2所述的发酵培养方法，其特征在于所述的活化培养基与种子培养基组成如下：30g/L萄萄糖、3.3g/L酒石酸铵、7.0g/L KH2PO4、2.0g/L Na2HPO4、1.5g/L MgSO4·7H2O、1.5g/L酵母粉、0.1g/L CaCl 2·2H2O、0.008g/L FeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/Ｌ Co(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
4.根据权利要求2所述的发酵培养方法，其特征在于所述的发酵培养基组成如下：50～120g/L葡萄糖、0.1～5g/L酒石酸铵、5～10g/L KH2PO4、1～5g/LNa2HPO4、1～5g/L MgSO4·7H2O、0～2g/L酵母粉、0.1g/L CaCl2·2H2O、0.008g/LFeCl3·6H2O、0.001g/L ZnSO4·7H2O、0.0001g/L CuSO4·5H2O、0.0001g/LCo(NO3)2·6H2O与0.0001g/L MnSO4·5H2O。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的卷枝毛霉WJ11发酵菌体生物量达12～20g/L。
6.根据权利要求2或5所述的方法，其特征在于所述的卷枝毛霉WJ11菌体含有以该菌体总重量计30～40％脂肪酸。
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