CN104940387A - 一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,属于中药研究领域。本发明的治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,其原料组成为松花粉和五味子,并且松花粉和五味子的质量比为1:2~4。中药组合物的制备方法包括1)原料处理;2)浸泡;3)萃取;4)重复萃取;5)冻干。本发明采用亚临界提取工艺,产品的活性成分提取效率增加,周期较短,全程采用水,有机溶剂残留低,满足了现代消费者产品需求。本发明的中药组合物对非酒精性脂肪肝具有较好的治疗作用,且效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物,尤其涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,属于中药研究领域。
背景技术
脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变,脂肪性肝病正严重威胁国人的健康,成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病,已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象,而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状,重者病情凶猛。一般而言,脂肪肝属可逆性疾病,早期诊断并及时治疗常可恢复正常。脂肪肝的形成,一般是由于肝脏内脂肪的分解与合成代谢失去平衡,或运出发生障碍,脂肪就会在肝细胞内过量积聚,当脂肪含量增加至30%以上,则称为脂肪肝。脂肪肝按自身体素质不同、饮食习惯不同等导致脂肪肝的发病原理不同,一般可分为肥胖、过食性脂肪肝,肝炎后脂肪肝,酒精性脂肪肝,营养缺乏性脂肪肝,药物性脂肪肝,糖尿病性脂肪肝,妊娠性脂肪肝和不明原因的隐源性脂肪肝等。
脂肪肝按轻重程度不同又分为轻度脂肪肝、中度脂肪肝和重度脂肪肝。轻度脂肪肝,已成为现代人的普遍问题,轻度脂肪肝是治疗脂肪肝的最佳时期。在某些职业人群中(白领人士、出租车司机、职业经理人、个体业主、政府官员、高级知识分子等)脂肪肝的平均发病率为25%;肥胖人群与Ⅱ型糖尿病患者中脂肪肝的发病率为50%;嗜酒和酗酒者脂肪肝的发病率为58%;在经常失眠、疲劳、不思茶饭、胃肠功能失调的亚健康人群中脂肪肝的发病率约为60%。近年来脂肪肝人群的年龄也不断下降,年龄只有40岁,30岁左右的病人也越来越多,45岁以下男性脂肪肝明显多于女性。其中约25%的患者发生肝纤维化,1.5%~8.0%的患者发展为肝硬化,经济发达地区发病率较高,并且发病有小龄化的趋势,已成为一个严重危害人类健康的常见隐患。因此,防治脂肪肝已引起医学界的高度重视。
由于脂肪肝并非为独立性病种,通过引发肝功能的损伤,引起血液生化指标和酶值的变化。在反应肝细胞损伤的检测项目中,以血清酶值最常见,如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)等。当肝脏发生脂肪变时,由于肝细胞受到损害,细胞变性、坏死,细胞膜破碎或细胞膜的通透性增加,肝细胞中所含的ALT和AST就会被释放到血液中,使血中ALT、AST活性增加。由于ALT、AST主要存在于肝细胞中,当其明显升高时常提示有肝损伤。肝脏发生脂肪变时,常见ALT、AST升高,但多以ALT升高为主。谷丙转氨酶(ALT)是诊断肝细胞实质损害的主要项目,其高低往往与病情轻重相平行。γ-谷氨酰转肽酶是酒精性肝损伤的重要指标,而且非常敏感。
当今脂肪肝的治疗仍以去除病因,积极治疗原发病和坚持合理饮食制度为主,药物仅起辅助治疗作用。所以,对该病的研究已成为国内外研究的共同热点和难点。到目前为止,西药尚无防治脂肪肝的有效药物,以中药长期调理性为好,其中何首乌和山楂最好,能降低血脂,防止胆固醇在肝内沉积。西药常选用保护肝细胞、去脂药物及抗氧化剂等,如维生素B、C、E、卵磷脂、肌苷、辅酶A、还原型谷胱甘肽、牛磺酸、肉毒碱乳清酸盐、肝泰乐,以及某些降脂药物(例如:肝旨清)等等。脂肪肝治疗的中药组合物虽然很多,但大多仍需要进一步验证其疗效以及安全性,因此,应在医生指导下正确选用,切不可滥用。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备和应用。
本发明的技术方案如下:一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,其原料组成为松花粉和五味子,并且松花粉和五味子的质量比为1:2~4。
本发明第二方面公开了前述中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)原料处理:采用气流粉碎法对松花粉进行破壁处理20~30分钟,获得破壁松花粉;对五味子进行超微粉碎处理,获得五味子超微粉;然后将破壁松花粉与五味子超微粉按质量比1:2~1:4混合,获得混合粉料;
2)浸泡:向步骤1)的混合粉料中按料液比1:2~10加水,获得的混合料液浸泡15~40min;
3)萃取:将混合料液补水至料液比为1:20~50,采用亚临界水萃取法进行萃取,萃取条件为:萃取温度100~250℃,萃取压力0.1~10Mpa,萃取时间10~30min;萃取结束后将萃取液降温至50℃以下,过滤,分离出浸提液;
4)重复萃取:取过滤后剩余的滤渣重复步骤3)的萃取操作2~3次,合并多次萃取的浸提液,获得中药组合物提取液;
5)冻干:对前述中药组合物提取液体依次进行真空浓缩、真空冷冻干燥处理,获得中药组合物。
在上述技术方案的基础上,本发明的制备方法还可以做如下改进。
进一步,步骤1)中所述五味子超微粉的粒径范围为100~200目。
本发明方法获得的中药组合物中,粗多糖含量维持在20%~30wt%,五味子总素控制在10%~15wt%。
现有松花粉、五味子等中提取物的方法多是采用传统的超声、蒸煮、回流等方法,整体工艺生产周期较长,品质较难控制。此外,在常见的提取过程中,为了增加有效成分的含量,在工艺中加入有机溶剂等物质或在生产中加入过大孔树脂等工艺,导致提取物的溶剂残留以及树脂残留都较难控制,影响了终端产品的质量。本发明采用亚临界提取工艺,产品的活性成分提取效率增加,周期较短,全程采用水,有机溶剂残留低,满足了现代消费者产品需求。
本发明第三方面公开了一种治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂,其有效成分为前述中药组合物,所述中药制剂中还包括辅料。
进一步,所述辅料为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂,包括(但不限于)糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖),淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉),纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素),黄蓍胶粉末,麦芽,明胶,滑石,固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁),硫酸钙,植物油,如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油,多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇),海藻酸,乳化剂(如Tween),润湿剂(如月桂基硫酸钠),着色剂,调味剂,压片剂、稳定剂,抗氧化剂,防腐剂,无热原水,等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等。辅料可根据需要提高配方的稳定性、活性及生物有效性等,或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
更进一步,所述辅料为微晶纤维素、糊精、淀粉、糖醇中的一种或两种以上的混合。
进一步,所述治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂的剂型为胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
本发明第四方面公开了前述中药组合物、前述中药制剂制备脂肪肝治疗药物的应用。
进一步,所述中药组合物的给药量为0.5~1g/天。
本发明的有益效果是:本发明通过混合提取工艺对松花粉及五味子进行提取,获得的中药组合物对非酒精性脂肪肝具有较好的治疗作用,且效果显著。
附图说明
图1为小鼠肝组织切片经HE染色后在显微镜下观察照片(其中,A为空白对照组、B为模型对照组、C为阳性药物组、D为复方组、E为松花粉组、F为五味子组)。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
实施例1中药组合物的制备
1.原料处理:
松花粉进行破壁处理,经气流粉碎破壁处理20分钟,获得破壁后松花粉。将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理,获得粒径为100目的五味子超微粉。将破壁松花粉与五味子超微粉按照比例1:2进行混合,成混合原料。
2.浸泡:
混合后,置于亚临界水萃取的萃取罐中,以水为溶剂,控制料液比例为1:2,浸泡15min,搅拌。
3.萃取:
补水使萃取罐中的料液比达到1:50,控制萃取温度100℃,萃取压力为10Mpa,萃取时间为30min,停止加热,待提取液温度降至50℃以下。过滤,得到松花粉、五味子混合提取物溶液,放置于存储罐储存。
4.重复萃取
在萃取罐中的剩余原料,依照上述操作,连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。
5.冻干
真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到提取物粉末,经检测,中药组合物中,粗多糖含量为25%,五味子总素控制在12%。
实施例2中药组合物的制备
1.原料处理:
松花粉进行破壁处理,经气流粉碎破壁处理30分钟,获得破壁后松花粉。将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理,获得粒径为200目的五味子超微粉。将破壁松花粉与五味子超微粉按照比例1:4进行混合,成混合原料。
2.浸泡:
混合后,置于亚临界水萃取的萃取罐中,以水为溶剂,控制料液比例为1:10,浸泡40min,搅拌。
3.萃取:
补水使萃取罐中的料液比达到1:20,控制萃取温度250℃,萃取压力为0.1Mpa,萃取时间为15min,停止加热,待提取液温度降至50℃以下。过滤,得到松花粉、五味子混合提取物溶液,放置于存储罐储存。
4.重复萃取
在萃取罐中的剩余原料,依照上述操作,连续浸提3次。收集得到液体放置于存储罐中。
5.冻干
真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到提取物粉末,经检测,中药组合物中,粗多糖含量为23.5%,五味子总素控制在12.5%。
实施例3动物试验
1.试验试剂
1)护肝片,购自葵花药业集团有限公司。
2)松花粉提取物:松花粉经气流粉碎破壁处理20分钟,获得破壁后松花粉后,置于亚临界水萃取的萃取罐中,以水为溶剂,控制料液比例为1:2,浸泡25min,搅拌,然后,补水使萃取罐中的料液比达到1:50,用于后续萃取。控制萃取温度125℃,萃取压力为5Mpa,萃取时间为30min,停止加热,待提取液温度降至50℃以下。过滤,得到松花粉提取物溶液,放置于存储罐储存。在萃取罐中的剩余原料,依照上述操作,连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到松花粉提取物粉末。
3)五味子提取物:将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理,获得五味子超微粉后,置于亚临界水萃取的萃取罐中,以水为溶剂,控制料液比例为1:2,浸泡25min,搅拌,然后,补水使萃取罐中的料液比达到1:50,用于后续萃取。控制萃取温度125℃,萃取压力为5Mpa,萃取时间为30min,停止加热,待提取液温度降至50℃以下。过滤,得到五味子提取物溶液,放置于存储罐储存。在萃取罐中的剩余原料,依照上述操作,连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到五味子提取物粉末。
2.实验对象
取72只四周龄昆明种小鼠,自由饮水摄食,适应一周。随机取12只小鼠作为空白对照组,剩余60只作为实验组,将其随机分为5组,每组12只,分别为模型对照组,阳性药物组(护肝片,葵花药业集团有限公司),复方组、松花粉组,以及五味子组。实验组(空白对照组除外)小鼠高脂饲料连续喂养六周建立高脂模型;六周后每天上午九点灌胃,连续三周;其中,复方组灌胃实施例1制备的中药组合物,用量为2.0mg/(只·d),连续灌胃治疗三周。阳性药物组灌胃药物11.5g/(kg·d)、松花粉组和五味子组分别灌胃松花粉提取物、五味子提取物8mg/kg;空白对照组和模型对照组灌胃生理盐水(0.9%NaCl),灌胃体积均为0.2mL,分别作为空白对照和实验对照,同样连续三周。实验动物自由饮水,记录每天鼠粮消耗情况,小鼠每日饮食正常,每隔一天记录小鼠体重。
2.样品收集与处理
末次给药24h后,小鼠乙醚麻醉,摘眼球取血,收集于EP管中,室温放置1h,4℃冰箱过夜,第二天取出,离心,取上层血清-20℃保存,待测。10%肝脏匀浆的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水制成组织匀浆,2500rpm,离心10分钟,取上清液待测。按试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)说明书方法测定AST、ALT、SOD活性及MDA、TC、TG、LDL-C、HDL-C含量。
3.数据分析
采用SPSS 17.0统计软件分析,实验结果均采用表示,组间比较采用单因素方差分析。两组间差异的比较用t检验,P<0.05(或P<0.01)表示差异有统计学意义。
4.实验结果
4.1复方对小鼠血清中TG、TC、AST和ALT含量的影响
复方组与模型对照组组相比,TC、TG含量都显著降低(P<0.05)。但是三个组之间的结果布局差异性。由表1可知,模型对照组相比于空白对照组其AST、ALT水平都显著上升(P<0.01)。而复方治疗后,两种转氨酶水平显著下降(P<0.05);单独松花粉、五味子对小鼠进行喂养后,TC、TG以及两种转氨酶水平有所下降,但与模型组的不成显著性差异,表明复方组的效果比松花粉组和五味子组的效果更优,两者起到了协同增效的作用。
表1 复方小鼠血清中TG、TC、AST和ALT含量的影响(x±s,n=10)
注:*P<0.05与空白对照组比较,**P<0.01与空白对照组比较;P<0.05与高脂模型组比较,##P<0.01与高脂模型组比较。
4.2、复方对小鼠血清中LDL-C、HDL-C及肝脏组织SOD活性及MDA含量的影响
由表2可知,相较于空白对照组,模型对照组小鼠血清中LDL-C明显升高(P<0.01),HDL-C显著降低(P<0.01)。而经复方治疗后,高、低密度脂蛋白代谢得到明显改善;单独采用松花粉、五味子喂养对模型小鼠的LDL-C、HDL-C的含量不成显著性差异,其表明复方组效果较单独的松花粉组和单独的五味子组更显著。
表2 复方对小鼠血清中LDL-C、HDL-C含量的影响(x±s,n=10)
注:*P<0.05vs Normal control,**P<0.01vs Normal control;P<0.05vs HFmodel,##P<0.01vs HF model。
由表3可知,与空白对照组相比,模型对照组小鼠血清及肝脏匀浆中SOD活性显著性降低(P<0.01)。复方治疗后SOD的活性都得以升高(P<0.05)。由表3可知,与空白对照组相比,模型对照组MDA含量显著升高(P<0.01)。复方中MDA含量降低显著(P<0.05),说明复方对于肝组织受损引起的MDA含量升高,具有明显的改善作用;而单独采用松花粉、五味子喂养对模型小鼠的SOD、MDA的含量均有一定的改善作用,但不成显著性差异表象,说明复方组治疗效果要优于单独的松花粉组和单独的五味子组。
表3 复方对小鼠血清和肝组织SOD活性及MDA含量的影响(x±s,n=10)
注:*P<0.05vs Normal control,**P<0.01vs Normal control;#P<0.05vs HFmodel,##P<0.01vs HF model。
5.组织切片染色实验
5.1实验方法
取小鼠肝左叶组织以10%福尔马林固定,流水冲洗6~12个小时,经脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(厚约7μm)、脱蜡、HE染色、脱水、封片,在400倍观光镜下观察。
5.2结果分析
各组小鼠肝脏切片,经HE染色后在显微镜下观察如下图1所示,空白对照组(A)(Normal control)小鼠肝脏小叶结构正常,肝细胞形态正常。模型组肝组织(B)坏死,组织中可见细胞脂质病变,同时可观察到不同形态的脂质空泡。单独的松花粉组(D)和单独的五味子组(E)肝组织弥漫性肝细胞脂肪病变较模型组相对减轻,肝细胞仍然肿胀,肝细胞浆内可见圆形脂质空泡。护肝片组(C)和复方组(F)中肝组织中细胞脂质病变程度明显减轻,病变的面积缩小,细胞中可观察到少数圆形脂质空泡。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物,其原料组成为松花粉和五味子,并且松花粉和五味子的质量比为1:2~4。
2.权利要求1所述中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)原料处理:采用气流粉碎法对松花粉进行破壁处理20~30分钟,获得破壁松花粉;对五味子进行超微粉碎处理,获得五味子超微粉;然后将破壁松花粉与五味子超微粉按质量比1:2~1:4混合,获得混合粉料;
2)浸泡:向步骤1)的混合粉料中按料液比1:2~10加水,获得的混合料液浸泡15~40min;
3)萃取:将混合料液补水至料液比为1:20~50,采用亚临界水萃取法进行萃取,萃取条件为:萃取温度100~250℃,萃取压力0.1~10Mpa,萃取时间10~30min;萃取结束后将萃取液降温至50℃以下,过滤,分离出浸提液;
4)重复萃取:取过滤后剩余的滤渣重复步骤3)的萃取操作2~3次,合并多次萃取的浸提液,获得中药组合物提取液;
5)冻干:对前述中药组合物提取液体依次进行真空浓缩、真空冷冻干燥处理,获得中药组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述五味子超微粉的粒径范围为100~200目。
4.一种治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂,其有效成分为权利要求1所述中药组合物,所述中药制剂中还包括辅料。
5.根据权利要求4所述的中药制剂,其特征在于,所述辅料为微晶纤维素、糊精、淀粉、糖醇中的一种或两种以上的混合。
6.根据权利要求4所述的中药制剂,其特征在于,所述治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂的剂型为胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
7.权利要求1所述中药组合物、权利要求4-6任一权利要求所述中药制剂制备脂肪肝治疗药物的应用。
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |