CN104940387B - 一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，属于中药研究领域。本发明的治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，其原料组成为松花粉和五味子，并且松花粉和五味子的质量比为1：2～4。中药组合物的制备方法包括1)原料处理；2)浸泡；3)萃取；4)重复萃取；5)冻干。本发明采用亚临界提取工艺，产品的活性成分提取效率增加，周期较短，全程采用水，有机溶剂残留低，满足了现代消费者产品需求。本发明的中药组合物对非酒精性脂肪肝具有较好的治疗作用，且效果显著。

Description

一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备和应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，尤其涉及一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，属于中药研究领域。

背景技术

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。脂肪肝的形成，一般是由于肝脏内脂肪的分解与合成代谢失去平衡，或运出发生障碍，脂肪就会在肝细胞内过量积聚，当脂肪含量增加至30％以上，则称为脂肪肝。脂肪肝按自身体素质不同、饮食习惯不同等导致脂肪肝的发病原理不同，一般可分为肥胖、过食性脂肪肝，肝炎后脂肪肝，酒精性脂肪肝，营养缺乏性脂肪肝，药物性脂肪肝，糖尿病性脂肪肝，妊娠性脂肪肝和不明原因的隐源性脂肪肝等。

脂肪肝按轻重程度不同又分为轻度脂肪肝、中度脂肪肝和重度脂肪肝。轻度脂肪肝，已成为现代人的普遍问题，轻度脂肪肝是治疗脂肪肝的最佳时期。在某些职业人群中(白领人士、出租车司机、职业经理人、个体业主、政府官员、高级知识分子等)脂肪肝的平均发病率为25％；肥胖人群与Ⅱ型糖尿病患者中脂肪肝的发病率为50％；嗜酒和酗酒者脂肪肝的发病率为58％；在经常失眠、疲劳、不思茶饭、胃肠功能失调的亚健康人群中脂肪肝的发病率约为60％。近年来脂肪肝人群的年龄也不断下降，年龄只有40岁，30岁左右的病人也越来越多，45岁以下男性脂肪肝明显多于女性。其中约25％的患者发生肝纤维化，1.5％～8.0％的患者发展为肝硬化，经济发达地区发病率较高，并且发病有小龄化的趋势，已成为一个严重危害人类健康的常见隐患。因此，防治脂肪肝已引起医学界的高度重视。

由于脂肪肝并非为独立性病种，通过引发肝功能的损伤，引起血液生化指标和酶值的变化。在反应肝细胞损伤的检测项目中，以血清酶值最常见，如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ－谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)等。当肝脏发生脂肪变时，由于肝细胞受到损害，细胞变性、坏死，细胞膜破碎或细胞膜的通透性增加，肝细胞中所含的ALT和AST就会被释放到血液中，使血中ALT、AST活性增加。由于ALT、AST主要存在于肝细胞中，当其明显升高时常提示有肝损伤。肝脏发生脂肪变时，常见ALT、AST升高，但多以ALT升高为主。谷丙转氨酶(ALT)是诊断肝细胞实质损害的主要项目，其高低往往与病情轻重相平行。γ-谷氨酰转肽酶是酒精性肝损伤的重要指标，而且非常敏感。

当今脂肪肝的治疗仍以去除病因，积极治疗原发病和坚持合理饮食制度为主，药物仅起辅助治疗作用。所以，对该病的研究已成为国内外研究的共同热点和难点。到目前为止，西药尚无防治脂肪肝的有效药物，以中药长期调理性为好，其中何首乌和山楂最好，能降低血脂，防止胆固醇在肝内沉积。西药常选用保护肝细胞、去脂药物及抗氧化剂等，如维生素B、C、E、卵磷脂、肌苷、辅酶A、还原型谷胱甘肽、牛磺酸、肉毒碱乳清酸盐、肝泰乐，以及某些降脂药物(例如：肝旨清)等等。脂肪肝治疗的中药组合物虽然很多，但大多仍需要进一步验证其疗效以及安全性，因此，应在医生指导下正确选用，切不可滥用。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物及其制备和应用。

本发明的技术方案如下：一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物，其原料组成为松花粉和五味子，并且松花粉和五味子的质量比为1：2～4。

本发明第二方面公开了前述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)原料处理：采用气流粉碎法对松花粉进行破壁处理20～30分钟，获得破壁松花粉；对五味子进行超微粉碎处理，获得五味子超微粉；然后将破壁松花粉与五味子超微粉按质量比1:2～1:4混合，获得混合粉料；

2)浸泡：向步骤1)的混合粉料中按料液比1：2～10加水，获得的混合料液浸泡15～40min；

3)萃取：将混合料液补水至料液比为1：20～50，采用亚临界水萃取法进行萃取，萃取条件为：萃取温度100～250℃，萃取压力0.1～10Mpa，萃取时间10～30min；萃取结束后将萃取液降温至50℃以下，过滤，分离出浸提液；

4)重复萃取：取过滤后剩余的滤渣重复步骤3)的萃取操作2～3次，合并多次萃取的浸提液，获得中药组合物提取液；

5)冻干：对前述中药组合物提取液体依次进行真空浓缩、真空冷冻干燥处理，获得中药组合物。

在上述技术方案的基础上，本发明的制备方法还可以做如下改进。

进一步，步骤1)中所述五味子超微粉的粒径范围为100～200目。

本发明方法获得的中药组合物中，粗多糖含量维持在20％～30wt％，五味子总素控制在10％～15wt％。

现有松花粉、五味子等中提取物的方法多是采用传统的超声、蒸煮、回流等方法，整体工艺生产周期较长，品质较难控制。此外，在常见的提取过程中，为了增加有效成分的含量，在工艺中加入有机溶剂等物质或在生产中加入过大孔树脂等工艺，导致提取物的溶剂残留以及树脂残留都较难控制，影响了终端产品的质量。本发明采用亚临界提取工艺，产品的活性成分提取效率增加，周期较短，全程采用水，有机溶剂残留低，满足了现代消费者产品需求。

本发明第三方面公开了一种治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂，其有效成分为前述中药组合物，所述中药制剂中还包括辅料。

进一步，所述辅料为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于)糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素)，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油，多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化剂(如Tween)，润湿剂(如月桂基硫酸钠)，着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水，等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等。辅料可根据需要提高配方的稳定性、活性及生物有效性等，或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

更进一步，所述辅料为微晶纤维素、糊精、淀粉、糖醇中的一种或两种以上的混合。

进一步，所述治疗非酒精性脂肪肝的中药制剂的剂型为胶囊剂、粉剂或颗粒剂。

本发明第四方面公开了前述中药组合物、前述中药制剂制备脂肪肝治疗药物的应用。

进一步，所述中药组合物的给药量为0.5～1g/天。

本发明的有益效果是：本发明通过混合提取工艺对松花粉及五味子进行提取，获得的中药组合物对非酒精性脂肪肝具有较好的治疗作用，且效果显著。

附图说明

图1为小鼠肝组织切片经HE染色后在显微镜下观察照片(其中，A为空白对照组、B为模型对照组、C为阳性药物组、D为复方组、E为松花粉组、F为五味子组)。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1中药组合物的制备

1.原料处理：

松花粉进行破壁处理，经气流粉碎破壁处理20分钟，获得破壁后松花粉。将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理，获得粒径为100目的五味子超微粉。将破壁松花粉与五味子超微粉按照比例1:2进行混合，成混合原料。

2.浸泡：

混合后，置于亚临界水萃取的萃取罐中，以水为溶剂，控制料液比例为1:2，浸泡15min，搅拌。

3.萃取：

补水使萃取罐中的料液比达到1:50，控制萃取温度100℃，萃取压力为10Mpa，萃取时间为30min，停止加热，待提取液温度降至50℃以下。过滤，得到松花粉、五味子混合提取物溶液，放置于存储罐储存。

4.重复萃取

在萃取罐中的剩余原料，依照上述操作，连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。

5.冻干

真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到提取物粉末，经检测，中药组合物中，粗多糖含量为25％，五味子总素控制在12％。

实施例2中药组合物的制备

1.原料处理：

松花粉进行破壁处理，经气流粉碎破壁处理30分钟，获得破壁后松花粉。将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理，获得粒径为200目的五味子超微粉。将破壁松花粉与五味子超微粉按照比例1:4进行混合，成混合原料。

2.浸泡：

混合后，置于亚临界水萃取的萃取罐中，以水为溶剂，控制料液比例为1:10，浸泡40min，搅拌。

3.萃取：

补水使萃取罐中的料液比达到1:20，控制萃取温度250℃，萃取压力为0.1Mpa，萃取时间为15min，停止加热，待提取液温度降至50℃以下。过滤，得到松花粉、五味子混合提取物溶液，放置于存储罐储存。

4.重复萃取

在萃取罐中的剩余原料，依照上述操作，连续浸提3次。收集得到液体放置于存储罐中。

5.冻干

真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到提取物粉末，经检测，中药组合物中，粗多糖含量为23.5％，五味子总素控制在12.5％。

实施例3动物试验

1.试验试剂

1)护肝片，购自葵花药业集团有限公司。

2)松花粉提取物：松花粉经气流粉碎破壁处理20分钟，获得破壁后松花粉后，置于亚临界水萃取的萃取罐中，以水为溶剂，控制料液比例为1:2，浸泡25min，搅拌，然后，补水使萃取罐中的料液比达到1:50，用于后续萃取。控制萃取温度125℃，萃取压力为5Mpa，萃取时间为30min，停止加热，待提取液温度降至50℃以下。过滤，得到松花粉提取物溶液，放置于存储罐储存。在萃取罐中的剩余原料，依照上述操作，连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到松花粉提取物粉末。

3)五味子提取物：将五味子药材经过超微高速万能粉碎机方法进行超微粉碎破壁处理，获得五味子超微粉后，置于亚临界水萃取的萃取罐中，以水为溶剂，控制料液比例为1:2，浸泡25min，搅拌，然后，补水使萃取罐中的料液比达到1:50，用于后续萃取。控制萃取温度125℃，萃取压力为5Mpa，萃取时间为30min，停止加热，待提取液温度降至50℃以下。过滤，得到五味子提取物溶液，放置于存储罐储存。在萃取罐中的剩余原料，依照上述操作，连续浸提2次。收集得到液体放置于存储罐中。真空浓缩、真空冷冻干燥处理得到五味子提取物粉末。

2.实验对象

取72只四周龄昆明种小鼠，自由饮水摄食，适应一周。随机取12只小鼠作为空白对照组，剩余60只作为实验组，将其随机分为5组，每组12只，分别为模型对照组，阳性药物组(护肝片，葵花药业集团有限公司)，复方组、松花粉组，以及五味子组。实验组(空白对照组除外)小鼠高脂饲料连续喂养六周建立高脂模型；六周后每天上午九点灌胃，连续三周；其中，复方组灌胃实施例1制备的中药组合物，用量为2.0mg/(只·d)，连续灌胃治疗三周。阳性药物组灌胃药物11.5g/(kg·d)、松花粉组和五味子组分别灌胃松花粉提取物、五味子提取物8mg/kg；空白对照组和模型对照组灌胃生理盐水(0.9％NaCl)，灌胃体积均为0.2mL，分别作为空白对照和实验对照，同样连续三周。实验动物自由饮水，记录每天鼠粮消耗情况，小鼠每日饮食正常，每隔一天记录小鼠体重。

2.样品收集与处理

末次给药24h后，小鼠乙醚麻醉，摘眼球取血，收集于EP管中，室温放置1h，4℃冰箱过夜，第二天取出，离心，取上层血清-20℃保存，待测。10％肝脏匀浆的制备：准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水制成组织匀浆，2500rpm，离心10分钟，取上清液待测。按试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)说明书方法测定AST、ALT、SOD活性及MDA、TC、TG、LDL-C、HDL-C含量。

3.数据分析

采用SPSS 17.0统计软件分析，实验结果均采用表示，组间比较采用单因素方差分析。两组间差异的比较用t检验，P<0.05(或P<0.01)表示差异有统计学意义。

4.实验结果

4.1复方对小鼠血清中TG、TC、AST和ALT含量的影响

复方组与模型对照组组相比，TC、TG含量都显著降低(P＜0.05)。但是三个组之间的结果布局差异性。由表1可知，模型对照组相比于空白对照组其AST、ALT水平都显著上升(P＜0.01)。而复方治疗后，两种转氨酶水平显著下降(P＜0.05)；单独松花粉、五味子对小鼠进行喂养后，TC、TG以及两种转氨酶水平有所下降，但与模型组的不成显著性差异，表明复方组的效果比松花粉组和五味子组的效果更优，两者起到了协同增效的作用。

表1 复方小鼠血清中TG、TC、AST和ALT含量的影响(x±s，n＝10)

注:*P＜0.05与空白对照组比较，**P＜0.01与空白对照组比较；P＜0.05与高脂模型组比较，##P＜0.01与高脂模型组比较。

4.2、复方对小鼠血清中LDL-C、HDL-C及肝脏组织SOD活性及MDA含量的影响

由表2可知，相较于空白对照组,模型对照组小鼠血清中LDL-C明显升高(P＜0.01)，HDL-C显著降低(P＜0.01)。而经复方治疗后，高、低密度脂蛋白代谢得到明显改善；单独采用松花粉、五味子喂养对模型小鼠的LDL-C、HDL-C的含量不成显著性差异，其表明复方组效果较单独的松花粉组和单独的五味子组更显著。

表2 复方对小鼠血清中LDL-C、HDL-C含量的影响(x±s，n＝10)

注:*P＜0.05vs Normal control，**P＜0.01vs Normal control；P＜0.05vs HFmodel，##P＜0.01vs HF model。

由表3可知，与空白对照组相比，模型对照组小鼠血清及肝脏匀浆中SOD活性显著性降低(P＜0.01)。复方治疗后SOD的活性都得以升高(P＜0.05)。由表3可知，与空白对照组相比，模型对照组MDA含量显著升高(P＜0.01)。复方中MDA含量降低显著(P＜0.05)，说明复方对于肝组织受损引起的MDA含量升高，具有明显的改善作用；而单独采用松花粉、五味子喂养对模型小鼠的SOD、MDA的含量均有一定的改善作用，但不成显著性差异表象，说明复方组治疗效果要优于单独的松花粉组和单独的五味子组。

表3 复方对小鼠血清和肝组织SOD活性及MDA含量的影响(x±s，n＝10)

注:*P＜0.05vs Normal control，**P＜0.01vs Normal control；#P＜0.05vs HFmodel，##P＜0.01vs HF model。

5.组织切片染色实验

5.1实验方法

取小鼠肝左叶组织以10％福尔马林固定，流水冲洗6～12个小时，经脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(厚约7μm)、脱蜡、HE染色、脱水、封片，在400倍观光镜下观察。

5.2结果分析

各组小鼠肝脏切片，经HE染色后在显微镜下观察如下图1所示，空白对照组(A)(Normal control)小鼠肝脏小叶结构正常，肝细胞形态正常。模型组肝组织(B)坏死，组织中可见细胞脂质病变，同时可观察到不同形态的脂质空泡。单独的松花粉组(D)和单独的五味子组(E)肝组织弥漫性肝细胞脂肪病变较模型组相对减轻，肝细胞仍然肿胀，肝细胞浆内可见圆形脂质空泡。护肝片组(C)和复方组(F)中肝组织中细胞脂质病变程度明显减轻，病变的面积缩小，细胞中可观察到少数圆形脂质空泡。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种治疗非酒精性脂肪肝的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)原料处理：采用气流粉碎法对松花粉进行破壁处理20～30分钟，获得破壁松花粉；对五味子进行超微粉碎处理，获得五味子超微粉；然后将破壁松花粉与五味子超微粉按质量比1:2～1:4混合，获得混合粉料；

2)浸泡：向步骤1)的混合粉料中按料液比1：2～10加水，获得的混合料液浸泡15～40min；

3)萃取：将混合料液补水至料液比为1：20～50，采用亚临界水萃取法进行萃取，萃取条件为：萃取温度100～250℃，萃取压力0.1～10MPa，萃取时间10～30min；萃取结束后将萃取液降温至50℃以下，过滤，分离出浸提液；

4)重复萃取：取过滤后剩余的滤渣重复步骤3)的萃取操作2～3次，合并多次萃取的浸提液，获得中药组合物提取液；

5)冻干：对前述中药组合物提取液体依次进行真空浓缩、真空冷冻干燥处理，获得中药组合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述五味子超微粉的粒径范围为100～200目。