CN104928262B - 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法 - Google Patents

一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104928262B
CN104928262B CN201510280426.1A CN201510280426A CN104928262B CN 104928262 B CN104928262 B CN 104928262B CN 201510280426 A CN201510280426 A CN 201510280426A CN 104928262 B CN104928262 B CN 104928262B
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
complex enzyme
culture
vegetable fat
aqueous enzymatic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510280426.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104928262A (zh
Inventor
曾哲灵
王健宇
肖彥骏
曾诚
余平
文学方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanchang University
Original Assignee
Nanchang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanchang University filed Critical Nanchang University
Priority to CN201510280426.1A priority Critical patent/CN104928262B/zh
Publication of CN104928262A publication Critical patent/CN104928262A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104928262B publication Critical patent/CN104928262B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法，按以下步骤：(1)将保存好的解淀粉芽孢杆菌Z16‑1接种到营养琼脂培基中，36～38℃活化培养24～42h；(2)从营养琼脂培养基中挑取一环活化好的菌株，接种到肉汤培养基中，36～38℃、200～240r/min摇瓶培养22～26h，制得种子液；(3)以2％～4％的接种量将种子液加入到发酵培养中，36～38℃、200～240r/min摇瓶培养42～46h，制得发酵液；将发酵液6000～8000r/min离心8～12min，所得上清液即为复合酶酶液。本发明具有生产工艺简单、生产周期短、节能环保等优点，而且获得的复合酶，酶系丰富、中性蛋白酶活力高、无脂肪酶活力，能有效提高水酶法提取植物油脂工艺中的油脂提取率和水解蛋白提取率。

Description

一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法
技术领域
本发明属于生物工程发酵技术领域，具体涉及通过解淀粉芽孢杆菌发酵生产复合酶的方法。
背景技术
出于对食品安全、环境保护和油料资源综合利用等方面的深度需求，水酶法提取植物油脂技术已成为国内外研究前沿。水酶法提取植物油脂的原理是：油料经过机械破碎后，加入生物酶充分破坏油料细胞组织释放油脂，最后经离心分离得到植物油脂和水解蛋白质。能够破坏植物油料细胞组织的生物酶(如蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶、淀粉酶等)都可应用于水酶法提取植物油脂，多种生物酶的复合水解更有利于植物油脂的释放。目前水酶法使用的复合酶基本上都是由几种纯种酶制剂按一定比例配置而成，该方法制得的复合酶生产工艺复杂、成本高。因此，研究选育酶系丰富、产酶量大且不产脂肪酶的菌株，并由该菌株生产成本低、酶系全面、酶活力较高的复合酶制剂是当前水酶法提取植物油脂技术实用化的迫切任务。
本发明使用解淀粉酶芽孢杆菌发酵来生产复合酶。该菌株分离自樟树籽仁油生产废渣，易于培养，对人畜无毒无害，由解淀粉酶芽孢杆菌制成的菌制剂已获得我国农业部的认可。我们将该菌株生产的酶制剂用于水酶法提取樟树籽仁油工艺中，可显著提高樟树籽仁油与水解蛋白的得率。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提出一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法。
本发明所使用的菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Z16-1CGMCC No.10727，已于2015年4月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCC No.10727。
本发明的技术方案：通过解淀粉芽孢杆菌液体发酵生产复合酶，其过程包括菌种活化培养、种子培养、摇床发酵培养和复合酶制剂的制备。
本发明的具体步骤为：
(1)菌株活化培养：将保存好的解淀粉芽孢杆菌Z16-1接种到营养琼脂培基中，36～38℃培养24～42h。
(2)种子培养：挑取一环活化好的菌株，接种到肉汤培养基中，36～38℃、200～240r/min摇瓶培养22～26h，制得种子液。
(3)发酵培养及酶液制备：以2％～4％的接种量将种子液加入到发酵培养中，36～38℃、200～240r/min摇瓶培养42～46h，制得发酵液。将发酵液6000～8000r/min离心8～12min，所得上清液即为复合酶酶液，可用于制作水酶法提取植物油脂用的复合酶制剂。
本发明制得的复合酶酶液中：中性蛋白酶活力为8594±2％U/mL，淀粉酶活力为19±2％U/mL，糖化酶活力为9017±2％U/mL，果胶酶活力为1644±2％U/mL，纤维素酶活力为5±2％U/mL，无脂肪酶活力，最适酶解温度为40℃。
蛋白酶活力的定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸，定义为一个蛋白酶活力单位。采用GB/T 23527-2009蛋白酶制剂酶活力测方法测定。
果胶酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1h分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个果胶酶酶活力单位。采用轻工业标准QB1502-92中规定的碘量法测定。
糖化酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1h水解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个糖化酶活力单位。采用国标GB 8276-2006中规定的碘量法测定。
纤维素酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，每分钟水解滤纸片，产生1.0μg的葡萄糖，即为1个纤维素酶活单位。采用国标GB 23881-2009中规定的滤纸片法测定。
淀粉酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个淀粉酶活力单位。采用国标GB 24401-2009中规定的碘比色法测定。
脂肪酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1min水解底物产生1μmol可滴定脂肪酸，即为1个酶活力单位。采用国标GB 23535-2009中规定的酸碱滴定法测定。
本发明制备水酶法提取植物油脂用复合酶的优点：本发明方法制备水酶法提取植物油脂用复合酶具有生产工艺简单、生产周期短、节能环保等优点，而且获得的复合酶，酶系丰富、中性蛋白酶活力高、无脂肪酶活力，能有效提高水酶法提取植物油脂工艺中的油脂提取率和水解蛋白提取率。
具体实施方式
本发明通过一下实施例作进一步说明。
以下实施例所用的营养琼脂配方为：牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，琼脂2.0g，去离子水100mL，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min。
肉汤培养基配方为：牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，去离子水100mL，pH7.0～7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。
发酵培养基的优化配方为：玉米粉45g，麸皮25g，豆粕40g，CaCl2 3g，KH2PO4 0.3g，Na2HPO4·12H2O 4g，水1000mL，pH 7.5，，121℃灭菌20min。
实施例1。
1、从菌斜面上取一环解淀粉芽孢杆菌Z16-1接种到营养琼脂培养基中，36℃划线培养42h，选取生长良好的单菌落用于种子液培养。
2、将活化好的菌株接种到肉汤培养基(50mL肉汤培养基装在250mL的锥形瓶中)，36℃、240r/min摇瓶培养26h，制得种子液。
3、以4％(v/v)的接种量将种子液接种到发酵培养基中(100mL发酵培养基装在500mL锥形瓶中)，36℃、240r/min摇瓶培养46h。
4、将获得的发酵液6000r/min离心12min，上清液即为适用于水酶法提取樟树籽仁油的复合酶酶液。该酶液中：中性蛋白酶活力为9027±2％U/mL，淀粉酶活力为15.6±2％U/mL，糖化酶活力为8535±2％U/mL，果胶酶活力为1506±2％U/mL，纤维素酶活力为3.4±2％U/mL，无脂肪酶活力，最适酶解温度为40℃。
实施例2。
1、从菌斜面上取一环解淀粉芽孢杆菌Z16-1接种到固体培养基中，37℃划线培养36h，选取生长良好的单菌落用于种子液培养。
2、将活化好的菌株接种到肉汤培养基(50mL肉汤培养基装在250mL的锥形瓶中)，37℃、220r/min摇瓶培养24h，制得种子液。
3、以3％(v/v)的接种量将种子液接种到发酵培养基中(100mL发酵培养基装在500mL锥形瓶中)，37℃、220r/min摇瓶培养44h。
4、将获得的发酵液7000r/min离心10min，上清液即为适用于水酶法提取樟树籽仁油的复合酶酶液。该酶液中：中性蛋白酶活力为8594±2％U/mL，淀粉酶活力为19±2％U/mL，糖化酶活力为9017±2％U/mL，果胶酶活力为1644±2％U/mL，纤维素酶活力为5±2％U/mL，无脂肪酶活力，最适酶解温度为40℃。
实施例3。
1、从菌斜面上取一环解淀粉芽孢杆菌Z16-1接种到固体培养基中，38℃划线培养24h，选取生长良好的单菌落用于种子液培养。
2、将活化好的菌株接种到肉汤培养基(50mL肉汤培养基装在250mL的锥形瓶中)，38℃、200r/min摇瓶培养22h，制得种子液。
3、以2％(v/v)的接种量将种子液接种到发酵培养基中(100mL发酵培养基装在500mL锥形瓶中)，38℃、200r/min摇瓶培养42h。
4、将获得的发酵液6000r/min离心12min，上清液即为适用于水酶法提取樟树籽仁油的复合酶酶液。该酶液中：中性蛋白酶活力为7411±2％U/mL，淀粉酶活力为29±2％U/mL，糖化酶活力为10727±2％U/mL，果胶酶活力为1411±2％U/mL，纤维素酶活力为6.3±2％U/mL，无脂肪酶活力，最适酶解温度为40℃。

Claims (1)

1.一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法，其特征是按以下步骤：
（1）将保藏编号为CGMCC No. 10727的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Z16-1接种到营养琼脂培基中，36~38 ℃培养24~42 h；
（2）从营养琼脂培养基中挑取一环活化好的菌株，接种到肉汤培养基中，36~38 ℃、200~240 r/min摇瓶培养22~26 h，制得种子液；
（3）以2%~4%的接种量将种子液加入到发酵培养中，36~38 ℃、200~240 r/min摇瓶培养42~46 h，制得发酵液；将发酵液6000~8000 r/min离心8~12 min，所得上清液即为复合酶酶液。
CN201510280426.1A 2015-05-28 2015-05-28 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法 Active CN104928262B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510280426.1A CN104928262B (zh) 2015-05-28 2015-05-28 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510280426.1A CN104928262B (zh) 2015-05-28 2015-05-28 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104928262A CN104928262A (zh) 2015-09-23
CN104928262B true CN104928262B (zh) 2018-10-19

Family

ID=54115689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510280426.1A Active CN104928262B (zh) 2015-05-28 2015-05-28 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104928262B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106676023A (zh) * 2015-11-05 2017-05-17 中国科学院天津工业生物技术研究所 一株高产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1683520A (zh) * 2005-03-17 2005-10-19 江南大学 一株产复合酶的菌株及用该菌株发酵生产复合酶的方法
CN103627556A (zh) * 2013-11-27 2014-03-12 江南大学 一种处理高辅料比啤酒酿造原料的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102010030609A1 (de) * 2010-06-28 2011-12-29 Henkel Ag & Co. Kgaa Neue Proteasen und diese enthaltende Mittel

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1683520A (zh) * 2005-03-17 2005-10-19 江南大学 一株产复合酶的菌株及用该菌株发酵生产复合酶的方法
CN103627556A (zh) * 2013-11-27 2014-03-12 江南大学 一种处理高辅料比啤酒酿造原料的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Genes for Alkaline Protease and Neutral Protease from Bacillus amyloliquefaciens Contain a Large Open Reading Frame Between the Regions Coding for Signal Sequence and Mature Protein;N. VASANTHA et.al.;《JOURNAL OF BACTERIOLOGY》;19840930;第159卷(第3期);第811-819页 *
淀粉液化芽孢杆菌BS5582中性蛋白酶的研究;万岩松;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20120715(第07期);第7-8页，第10页Table3-1 *
温度对淀粉液化芽孢杆菌5582产蛋白酶的影响;郝秋娟等;《中国酿造》;20081231(第11期);第37-39页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104928262A (zh) 2015-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102559506B (zh) 一种草酸青霉菌及其应用
CN101565683B (zh) 一种多粘类芽孢杆菌及利用其制备光学纯r,r型2,3-丁二醇的方法
CN102851239B (zh) 一株壳聚糖酶生产菌株及应用该菌株生产壳寡糖的方法
CN103352062B (zh) 一种制备单葡萄糖醛酸基甘草次酸的方法
CN101717728B (zh) 一株青霉菌及其用于催化水解木质纤维素的用途
CN107285815A (zh) 一种复合氨基酸肥料及其生产方法
CN108823191A (zh) 一种提高芽孢杆菌产蛋白酶的发酵方法
CN101617828B (zh) 虾青素食品的制备方法
CN103053787A (zh) 一种微生物固态发酵花生粕制备花生肽的方法
CN103013961A (zh) 利用木薯渣发酵生产中性蛋白酶和饲料添加剂的方法
CN105602917A (zh) 一种橙皮苷酶的生产方法及应用
CN102071176A (zh) 一种新型碱性脂肪酶的制备方法
CN104928262B (zh) 一种水酶法提取植物油脂用复合酶的制备方法
CN104946375B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌z16-1水酶法提取樟树籽仁油的方法
US9605247B2 (en) Strain and a method to produce cellulase and its use
CN110527634A (zh) 一株西藏来源生产纤维素酶的哈茨木霉菌株及其应用
CN102676395A (zh) 一株宇佐美曲霉突变菌株及其在制备酸性蛋白酶中的应用
CN114409826B (zh) 一种从美洲大蠊药渣中提取甲壳素的方法
CN104911126B (zh) 解淀粉芽孢杆菌z16-1
CN108796027A (zh) 一种生产类胡萝卜素的方法
CN108658698A (zh) 一种新型微生物复合肥的制备方法
CN103667075B (zh) 一种降解白酒酒糟纤维素的扩展青霉菌株
CN102250859A (zh) 通过添加槐糖脂进行诱导发酵生产纤维素酶的方法
CN101575623B (zh) 微生物发酵联产花生四烯酸和壳聚糖的方法
CN102433274B (zh) 一株高产褐藻酸裂解酶的嗜盐白蚁菌及其应用方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Zeng Zheling

Inventor after: Wang Jianyu

Inventor after: Xiao Yanjun

Inventor after: Zeng Cheng

Inventor after: Yu Ping

Inventor after: Wen Xuefang

Inventor before: Zeng Zheling

Inventor before: Xiao Yanjun

Inventor before: Zeng Cheng

Inventor before: Yu Ping

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant