CN104926897A

CN104926897A - 从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统

Info

Publication number: CN104926897A
Application number: CN201510347295.4A
Authority: CN
Inventors: 王学海; 许勇; 李莉娥; 杨仲文; 杨婷; 余通; 冯芸; 尹海龙; 黄璐; 杨成兵; 黄天赐; 曹儒宾; 谢长
Original assignee: Wuhan Guanggu Humanwell Biological Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Wuhan Guanggu Humanwell Biological Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-06-19
Filing date: 2015-06-19
Publication date: 2015-09-23
Anticipated expiration: 2035-06-19
Also published as: CN104926897B

Abstract

本发明提供了一种提取分离新夏佛塔苷的方法，该方法包括以下步骤：利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，利用第三醇体系对第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。利用本发明的方法从广金钱草中分离提取新夏佛塔苷，工艺简单，生产时间短，收率高，纯度高，能够获得纯度95％以上的新夏佛塔苷。

Description

从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统

技术领域

本发明属于植物化学技术领域，具体的，本发明涉及一种从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统。

背景技术

广金钱草为豆科山蚂蝗属植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其药用部位为干燥地上部分，主要化学成分为黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。具有清热除湿，利尿通淋之功效。用于热淋、沙淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少、黄疸尿赤、尿路结石。新夏佛塔苷(Neo-schaftoside)也叫6-C-葡萄糖-8-C-β-阿拉伯糖洋芹素，为淡黄色粉末；分子式：C₂₆H₂₈O₁₄；分子量：564，其结构式如图1所示。

新夏佛塔苷为广金钱草药材2010版药典规定所用对照品夏佛塔苷的旋光异构体，是广金钱草中重要的药效物质之一，且含量相对较高。但目前市场上无新夏佛塔苷对照品的出售，且现有提取分离该化合物的方法和系统亟待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中的技术问题至少之一或者提供一种商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统，利用该提取分离方法和系统得到的新夏佛塔苷，纯度高，有利于作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品、以及作为广金钱草及其相关药物制剂的质量控制。

依据本发明的一方面，本发明提供一种提取分离新夏佛塔苷的方法，该方法包括以下步骤：利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。

本发明的该方法，利用多级色谱分离，包括组合利用大孔树脂色谱技术，反相中压色谱制备及反相高压色谱技术，采用醇-水体系，从广金钱草提取物中分离提取新夏佛塔苷，该工艺操作简单，生产时间短，产品收率高，纯度高，能够获得纯度达到95％以上的新夏佛塔苷，获得的新夏佛塔苷可作为含量测定用化学对照品。该工艺步骤以及各个步骤的参数条件，是发明人综合考虑、多次调整试验大孔树脂色谱、反相中压色谱和反相高压色谱的组合顺序及其各自的洗脱检测条件对广金钱草中的新夏佛塔苷的分离纯化效果的影响而确定下来的，该提取纯化过程不涉及毒性相对强的有机溶剂，提取分离操作过程及提取物都安全可靠。

图2为本发明的一个实施例中的提取分离图1所示化合物新夏佛塔苷的方法的步骤流程图。根据本发明的实施例，上述本发明一方面的新夏佛塔苷提取分离方法，还可以具有以下技术特征至少之一：

根据本发明的一个实施例，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括：利用浓度50-95％的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液，除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。两次浓度为50-95％乙醇回流提取获得提取物，是发明人经过多次试验摸索确定的，既能充分利用原料也能节省时间，利于规模化生产制备；去除提取液中的乙醇和/或离子，利于排除它们对后续分离纯化的干扰。

根据本发明的一个实施例，所述两次回流提取，其中一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h，另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为1h-2h，任选的为1.5h。回流时，浓度为50-95％乙醇和广金钱草的比例以及回流时间，是发明人经过多次试验检测确定的，能够使原料得到高提取。

根据本发明的一些实施例，所述第一醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-35％，较佳的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-30％，所述第一色谱为大孔树脂。该乙醇-水洗脱体系中乙醇的浓度是发明人结合后续色谱分离条件、多次试验检测洗脱下来的峰中的新夏佛塔苷比例，经过多次调整优化确定的。

根据本发明的一些实施例，所述第二醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为5-30％，所述第二色谱为反向色谱，较佳的，选择的反向色谱为反向中压色谱，更佳的，选择ODS柱，其柱压为1-10bar，洗脱流速为5～30ml/min。该乙醇-水洗脱体系中的乙醇浓度是发明人结合第一流份中目标成分的比例，以及第一色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。

根据本发明的一个实施例，所述利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，包括：利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一流份进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[a,b]的乙醇-水体系对所述第一流份进行梯度洗脱200min，收集以获得所述第二流份，其中，a的取值范围为5-12％，b的取值范围为25-30％。先利用一个浓度的乙醇-水体系等度洗脱，再进行梯度洗脱，能够提高分离提取效率；等度洗脱和梯度洗脱的乙醇浓度或浓度范围，以及洗脱时间，是发明人考虑收率、时间、回收的流份的复杂度、流份中目标成分的比例等，多次试验确定的。

根据本发明的另一个实施例，所述第三醇体系为纯甲醇，所述第三色谱为反相色谱，较佳的，选择的反向色谱为反向高压色谱，较佳的，选择C18柱(10×250mm，5μm)，其柱压为2800-3200psi，流速为4-5mL/min。

根据本发明的一个实施例，所述利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括：利用甲醇浓度为c的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱d min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份。其中，c的取值范围为22-30％，d的取值范围为25-38。该甲醇-水洗脱体系中的甲醇浓度是发明人结合第二流份中目标成分的比例，以及第二色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。

如图3所示，根据本发明的另一个实施例，所述利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括：利用甲醇浓度为e的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱f min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，接着用甲醇浓度为e的甲醇-水体系将纯度为90％～98％的流份进行等度洗脱，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份。再将经第三色谱分离得到的纯度98％以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末。其中，e的取值范围为22-30％，f的取值范围为25-38。该甲醇-水洗脱体系中的甲醇浓度是发明人结合第二流份中目标成分的比例，以及第二色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。

依据本发明的另一方面，本发明提供一种提取分离新夏佛塔苷的系统，该系统能够用以实施上述本发明一方面或者任一实施例中的新夏佛塔苷提取分离方法，该系统包括：回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括，第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离单元相连，用于利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。图4显示本发明的一个实施例中的提取分离系统1000的结构，包括回流提取装置100和色谱分离装置200，色谱分离装置包括第一色谱分离单元202、第二色谱分离单元204和第三色谱分离单元206。上述对本发明一方面的新夏佛塔苷提取分离方法的技术特征和优点的描述，同样适用本发明这一方面的系统，在此不再赘述。本领域技术人员可以理解，该系统还能包括其它的装置、子装置或者功能单元来实施上述的相应的实施例。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示新夏佛塔苷的化学结构式；

图2显示本发明的一个实施例中的提取分离新夏佛塔苷的方法的步骤流程；

图3显示本发明的一个实施例中的提取分离新夏佛塔苷的方法的步骤流程；

图4显示本发明的一个实施例中的提取分离新夏佛塔苷的系统的结构示意图；

图5显示本发明的一个实施例中的提取分离新夏佛塔苷的方法的流程图；

图6显示本发明一个实施例中新夏佛塔苷的ESI-MS质谱图；

图7显示本发明一个实施例中新夏佛塔苷的H¹-NMR谱图；以及

图8显示本发明一个实施例中新夏佛塔苷的C¹³-NMR谱图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

图5显示本发明方法的一般流程。

1.原料：选用豆科植物广金钱草45000-50000重量份，切成5-10cm小段，饮用水清洗掉泥沙，沥干，投料。

2.乙醇提取：80％乙醇回流提取两次，第一次12倍量2h，第二次10倍量1.5h；合并两次醇提液，回收乙醇至无醇味。

3.减压浓缩：提取浓缩液加水稀释至药材重量的5倍体积；200目滤布过滤；得上柱液；将事先用95％乙醇处理过的净品树脂装柱，纯化水替换；将上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完毕后，静置2h；用纯化水冲洗，洗脱流速3-4BV/h，洗脱量10BV；再用60％乙醇洗脱，洗脱流速2-3BV/h，洗脱量5BV；60％洗脱液合并，打入浓缩罐，回收乙醇至无醇味，至真空干燥箱中50-70℃干燥，得广金原料药300-400重量份。

4.三级色谱分离

(1)将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂20:80,30:70,45:55,65:35梯度洗脱，每个梯度冲到接近无色即可，合并各流份，分别得20％，30％，45％，65％共四个部位。

(2)将色谱分离I得到的20％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ，具体为：用乙醇-水，条件为5％等度30min，5-25％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

(3)将色谱分离Ⅱ得到的20-30流份合并，进一步用C18高压液相色谱分离，即色谱分离Ⅲ，具体为：用甲醇-水，条件为22％甲醇-水等度38min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，纯度为90％～98％的流份再经C18高效液相色谱精制即可将纯度提高至98％以上。将色谱分离Ⅲ纯度98％以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末，HPLC纯度98.5％。

其中，(1)对应上述所称的第一色谱分离，(2)对应上述所称的第二色谱分离，(3)对应上述所称的第三色谱分离。

5.结构鉴定

经电喷雾电离质谱(ESI-MS)和光谱法(H¹-NMR和C¹³-NMR)对得到的淡黄色粉末进行鉴定，结合ESI-MS、H¹-NMR和C¹³-NMR信息推断该化合物的分子式位C₂₆H₂₈O₁₄，确定本发明所述从广金钱草中提取分离出的黄色粉末为新夏佛塔苷，经HPLC纯度检验，纯度达到98％以上，其作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品，以及广金钱草及其相关药物制剂例如广金钱草总黄酮胶囊的质量控制用。

图6为对上述淡黄色粉末新夏佛塔苷进行电喷雾电离质谱的质谱图，显示黄色物质中各成分的分子量，主成分的分子量为ESI-MS m/z:565[M+H]⁺。

图7显示上述淡黄色粉末新夏佛塔苷的H¹-NMR谱图，1H-NMR(DMSO，600HZ)δH 13.61(1H,s),7.99(2H,d,J＝8.4Hz,H-2’,6’),6.90(2H,d,J＝8.4Hz,H-3’,5’),6.82(1H,s,H-3)。

图8显示上述淡黄色粉末新夏佛塔苷的C¹³-NMR谱图，13C-NMR(DMSO,125HZ)δC 162.9(C-2),102.3(C-3),182.0(C-4),160.8(C-5),109.2(C-6),159.9(C-7),103.4(C-8),152.7(C-9),102.3(C-10),121.1(C-1’),128.5(C-2’6’),116.0(C-3’5’),161.2(C-4’),71.4(C-1”of Ara),72.4(C-2”of Ara),70.0(C-3”of Ara),63.1(C-4”of Ara),67.0(C-5”of Ara),73.1(C-1”’of Glc),69.8(C-2”’of Glc),79.1(C-3”’of Glc),70.9(C-4”’of Glc),81.7(C-5”’of Glc),61.7(C-6”’of Glc)。其中所述Ara代表阿拉伯糖，Glc代表葡萄糖。

实施例2

1.进行实施例1的步骤1-3，获得广金钱草原料药。2.三级色谱分离

(1)将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂25:75,35:65,45:55,65:35梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得25％，35％，45％，65％共四个部位。

(2)将色谱分离I得到的35％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ，用乙醇-水，条件为8％等度30min，8-30％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每100-150体积份收集一份，共收集40-50个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

(3)将色谱分离Ⅱ得到的25-40流份合并，进一步用高压液相色谱分离，即色谱分离Ⅲ，用甲醇-水，条件为25％甲醇-水等度洗脱35min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集目标流份。减压浓缩去除溶剂，即得到淡黄色粉末新夏佛塔苷。利用电喷雾电离质谱(ESI-MS)和光谱法(H¹-NMR和C¹³-NMR)对得到黄色粉末进行鉴定，鉴定其为新夏佛塔苷，纯度91.7％。

实施例3

(1)将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂20：80,30:70,40:60,60:40梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得20％，30％，40％，60％共四个部位。

(2)将色谱分离I得到的20％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ，用乙醇-水，条件为12％等度30min，12-30％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

(3)将色谱分离Ⅱ得到的25-36流份合并，进一步用高压液相色谱分离，即色谱分离Ⅲ，用甲醇-水，条件为30％甲醇-水等度30min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集目标流份。减压浓缩去除溶剂，得到淡黄色粉末。利用电喷雾电离质谱(ESI-MS)和光谱法(H¹-NMR和C¹³-NMR)对得到黄色粉末进行鉴定，鉴定其为新夏佛塔苷，纯度90.0％。

实施例4

1.进行实施例1的步骤1-3，获得广金钱草原料药。

2.三级色谱分离

(2)将色谱分离I得到的30％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ，具体为：用乙醇-水，条件为5％等度30min，5-25％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

(3)将色谱分离Ⅱ得到的20-30流份合并，进一步用C18高压液相色谱分离，即色谱分离Ⅲ，具体为：用甲醇-水，条件为30％甲醇-水等度25min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，纯度为90％～98％的流份再经C18高效液相色谱精制即可将纯度提高至98％以上。将色谱分离Ⅲ纯度98％以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末，经鉴定其为新夏佛塔苷，HPLC纯度98.1％。

实施例5

1.进行实施例1的步骤1-3，获得广金钱草原料药。

2.三级色谱分离

(2)将广金原料药300-400重量份用AB-8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂25:75,35:65,45:55,65:35梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得25％，35％，45％，65％共四个部位。

(2)将色谱分离I得到的25％部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离Ⅱ，具体为：用乙醇-水，条件为5％等度30min，5-25％梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。

(3)将色谱分离Ⅱ得到的20-30流份合并，进一步用C18高压液相色谱分离，即色谱分离Ⅲ，具体为：用甲醇-水，条件为25％甲醇-水等度32min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，纯度为90％～98％的流份再经C18高效液相色谱精制即可将纯度提高至98％以上。将色谱分离Ⅲ纯度98％以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末，HPLC纯度98.5％。

实施例2和3的工艺条件生产出的新夏佛塔苷，纯度明显低于实施例1、实施例4以及实施例5分离提取的新夏佛塔苷。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种提取分离新夏佛塔苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；

利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括，

利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，

利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，

利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括：

利用浓度50-95％的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液，

除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述两次回流提取，其中

一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h，

另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为1h-2h，任选的为1.5h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一醇体系为乙醇-水体系，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-35％，

优选的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-30％，

所述第一色谱为大孔树脂。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二醇体系为乙醇-水体系，

所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为5-30％，

所述第二色谱为反向色谱。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反向色谱为反向中压色谱，

任选的，所述反向中压色谱为C18柱，其柱压为1-10bar，洗脱流速为5～30ml/min。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，包括：

利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一流份进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[a,b]的乙醇-水体系对所述第一流份进行梯度洗脱200min，收集以获得所述第二流份，其中，

a的取值范围为5-12％，b的取值范围为25-30％。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三醇体系为甲醇-水体系，所述第三色谱为反相色谱，

任选的，所述反向色谱为反相高压色谱，色谱柱为C18柱(10×250mm，5μm)，流速为4-5mL/min，其柱压为2800～3200psi。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括：

利用甲醇浓度为c的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱d min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，其中c的取值范围为22-30％，d的取值范围为25-38；

利用甲醇浓度为e的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱f min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份，接着用甲醇浓度为e的甲醇-水体系将纯度为90％～98％的流份进行等度洗脱，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98％以上流份。再将经第三色谱分离得到的纯度98％以上的流份合并，减压浓缩，其中e的取值范围为22-30％，f的取值范围为25-38。

10.一种提取分离新夏佛塔苷的系统，其特征在于，包括：

回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；

色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括，

第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，

第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，

第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离单元相连，用于利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。