CN104906050B - 一种莲心碱脂微球制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种莲心碱脂微球制剂、其制备方法和用途。本发明的莲心碱脂微球制剂包含莲心碱,油相溶剂,乳化剂，含等渗调节剂和pH调节剂，用于制备本发明的莲心碱脂微球制剂的方法，包含以下步骤：（1）混合包含莲心碱、油相溶剂、乳化剂的油相混合物以生成均一油相；（2）混合水相混合物以形成均一水相；（3）将所述油相加入至所述水相中，形成初乳；（4）将所述初乳匀化。本发明还提供了本发明的莲心碱脂微球制剂在用于制备抗心率失常或抗高血压药物中的用途。本发明制备的脂微球包裹药物不仅能够增强药物的稳定性，而且能够使起效更迅速，持续时间更长。

Description

一种莲心碱脂微球制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种莲心碱脂微球制剂及其制备方法及用途。

背景技术

莲心碱(liensinine)是从睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)成熟种子的绿色胚芽中提取出的一种双苄基异喹啉类生物碱，其化学结构式见下式。

莲心碱具有降压、抗心律失常、抗高脂血症、抗脂质过氧化、保护脑缺血等多种心脑血管系统活性。但在实际临床应用过程中，在很多情况下，莲心碱在体内无法达到预期的理想药理活性。这主要是由于莲心碱在体内到达病灶部位之前大部分已降解，而且在心脑血管患者的急救治疗中，亟需药物快速的发挥药效。

脂微球注射剂与传统的口服剂型和粉针剂型、水针剂型相比，药效更强，起效更迅速，持续时间更长，具有显著的临床优势。但其制备，尤其是具有高包封率、良好稳定性的莲心碱脂微球注射剂的制备，至今仍是个公认的难题。

因此亟需一种莲心碱脂微球注射剂，以解决目前的临床需求。本发明的目的是提供一种莲心碱脂微球、其制备方法及用途。

发明内容

针对背景技术中存在的问题，本发明提供了一种莲心碱脂微球制剂，其具体技术方案如下：

一种莲心碱脂微球制剂，包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.1-2.0％(w/v),油相溶剂5.0-25.0％(w/v),乳化剂0.5-3％(w/v)，等渗调节剂1-5％(w/v)和pH调节剂，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5。

作为优选项：一种莲心碱脂微球制剂，包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.2-1.5％(w/v),油相溶剂8.0-22.0％(w/v),乳化剂1.0-2.0％(w/v)，等渗调节剂2.0-2.5％(w/v)和pH调节剂，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5。

一种莲心碱脂微球制剂，包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.5-1.0％(w/v),油相溶剂19.0-21.0％(w/v),乳化剂1.0-1.5％(w/v)，等渗调节剂2.0-2.5％(w/v)和pH调节剂，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5。

所述油相溶剂选自大豆油、花生油、红花油、棉籽油、橄榄油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯中的一种或多种；

所述乳化剂为含有磷脂酰胆碱的大豆磷脂或蛋黄卵磷脂，乳化剂中的磷脂酰胆碱含量为78％-98％；

所述含等渗调节剂为注射用甘油。

本发明还提供制备上述的莲心碱脂微球制剂的方法，步骤如下：

(1)混合油相容剂和乳化剂，搅拌均匀后缓慢加入莲心碱，高速搅拌形成均一的油相；

(2)向注射用水中加入等渗调节剂，高速搅拌，形成均一的水相；

(3)在高速搅拌条件下，将步骤1所得油相缓慢滴入步骤2所得水相中，形成初乳；

(4)向上步所得初乳中加入pH调节剂调节PH值，然后加入注射用水定容；

(5)在温度30-40℃条件下，匀化步骤4定容后的初乳至脂微球平均粒径低于300nm，然后过滤、分装。灭菌即得。

所述步骤(1)可以在高速搅拌条件下进行，例如，搅拌速度为2500-12000rpm，如3000-5000rpm或10000rpm。所述步骤(1)可以在加热条件下进行，优选在70-75℃的温度条件下进行；其中，优选先将所述油相溶剂进行预热。

所述步骤(2)可以在高速搅拌条件下进行，例如，搅拌速度为2500-12000rpm，如3000-5000rpm或10000rpm。所述步骤(2)可以在加热条件下进行，优选在70-75℃的温度条件下进行；在所述实施方案中，优选先将所述水预热。

所述步骤(3)可以在高速搅拌条件下进行，例如，搅拌速度为2500-12000rpm，如3000-5000rpm或10000rpm。所述步骤(3)可以在加热条件下进行，优选在70-75℃的温度条件下进行。

所述步骤(5)可以在高速搅拌条件下进行，例如，搅拌速度为2500-12000rpm，如3000-5000rpm或10000rpm。所述步骤(5)可以在高压条件下进行，例如，压力条件为400-1200bar，如600-800bar。所述步骤(4)也可以在加热条件下进行，优选在30-40℃的温度条件下进行。

所述步骤5中脂微球平均粒径为100-300nm，尤为优选具有上述平均粒径且粒径范围为100-500nm的脂微球。

所述脂微球制剂的渗透压摩尔浓度比为0.9-1.1。

本发明所得脂微球制剂为注射用制剂，优选为静脉注射用制剂，尤为优选静脉注射用液体制剂。

上述莲心碱脂微球制剂可用于制备抗心率失常或抗高血压药物的用途。

本发明提供了一种包含莲心碱、油相溶剂和乳化剂的脂微球制剂。本发明的脂微球制剂可以是进一步包含水的液体制剂，例如脂微球注射液，或者也可以是去除了水但可在临用前复溶为液体制剂的干燥形式的制剂，例如脂微球冻干制剂或通过其他已知方法脱水的干燥形式的脂微球制剂。在一个具体的方面，本发明提供了一种包含莲心碱、油相溶剂、乳化剂和水的脂微球制剂。

本申请中所使用的“油相溶剂”一般是指可药用的植物油或矿物油，例如，所述油相溶剂可以选自大豆油、花生油、红花油、棉籽油、橄榄油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯中的一种或多种，优选为大豆油。本发明的乳化剂可以是磷脂，优选为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂或其混合物。优选地，所述磷脂——例如大豆磷脂或蛋黄卵磷脂——的磷脂酰胆碱含量为78％～98％。

本发明的脂微球制剂含有pH调节剂和等渗调节剂。所述pH调节剂和等渗调节剂可以是本领域通常使用的pH调节剂或等渗调节剂。所述pH调节剂例如可以是磷酸或其盐、枸橼酸或其盐，或它们的混合物，等等。所述pH调节剂的一个具体实例为磷酸氢二钠—枸橼酸缓冲系。所述的等渗调节剂例如可以是甘油。

同时，无论是使用还是不使用pH调节剂或者等渗调节剂，本发明的脂微球制剂都具有生理上或药学上可接受的pH范围和渗透压范围。例如，本发明的脂微球制剂的pH范围可为6.0-6.5，渗透压摩尔浓度比可为0.9-1.1。

本发明产品是依据药物传递系统概念研究开发的载体药物制剂，脂微球是一种以脂肪油为软基质，外被磷脂膜包封的微粒体分散系，平均直径约为200nm，外膜为磷脂，内层为软基质油，其中包裹药物。

本发明的技术效果为：本发明制备的脂微球包裹药物不仅能够增强药物的稳定性，而且能够使起效更迅速，持续时间更长。

附图说明

图1为本发明制备的一种脂微球制剂(实施例1)的粒径分布图。

具体实施方式

在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种脂微球制剂，包含：莲心碱﹑大豆油﹑大豆磷脂或蛋黄卵磷脂和水。

在一个更优选的实施方案中，本发明提供了一种脂微球制剂，包含：莲心碱、大豆油﹑大豆磷脂或蛋黄卵磷脂、甘油和水。

具体而言，本发明的脂微球制剂可以包含重容百分比为0.1-2.0％(w/v)的莲心碱、重容百分比为5.0-25.0％(w/v)的油相溶剂和重容百分比为0.5-3％(w/v)的乳化剂。

本发明的脂微球制剂优选包含重容百分比为0.2-1.5％(w/v)的莲心碱，更优选0.5-1.0％(w/v)。

本发明的脂微球制剂优选包含重容百分比为8.0-22.0％(w/v)的油相溶剂，更优选19.0-21.0％(w/v)。

本发明的脂微球制剂优选包含重容百分比为1.0-2.0％(w/v)的乳化剂，更优选1.0-1.5％(w/v)。

以上所述各个组分使用范围可根据制剂需要组合使用。在一个具体的优选实施方案中，本发明的脂质微球包含重容百分比为0.5-1.0％(w/v)的莲心碱、重容百分比为19.0-21.0％(w/v)的油相溶剂和重容百分比为1.0-1.5％(w/v)的乳化剂。

本发明的脂微球制剂还可以进一步包含重容百分比为1-5％(w/v)的等渗调节剂，优选2.0-2.5％(w/v)。

本申请中所述的重容百分比(w/v)按所述制剂以液体形式存在时的终体积为基准，表示每100ml终体积中各组分的克数。

本发明的脂微球制剂中的脂微球平均粒径低于300nm，优选平均粒径为100-300nm，尤为优选具有上述平均粒径且粒径范围为 100-500nm的脂微球。

优选地，所述脂微球制剂为注射用制剂，更优选地为静脉注射用制剂。本文中所述的注射用制剂包括注射用液体制剂和注射用干燥形式制剂，具体而言，所述注射用制剂可以是注射液或注射用冻干制剂。所述注射用制剂或静脉注射用制剂尤为优选注射液或静脉注射液的形式。由此，本发明的各组分可以是适合用于注射剂的组分，例如，本发明所述的油相溶剂可为注射用油，所述水可为注射用水，所述渗透压调节剂可为注射用甘油，等等。

在本发明的方法中，所述莲心碱、油相溶剂﹑乳化剂和水以及它们的用量均具有与上文所述相同的含义和范围。由本发明的方法制得的脂微球制剂所含脂微球平均粒径低于300nm，优选平均粒径为100-300nm，尤为优选具有上述平均粒径且粒径范围为100-500nm的脂微球。

本发明的莲心碱脂微球制剂的制备方法，包含以下步骤：(1)混合包含莲心碱、油相溶剂、乳化剂的油相混合物以生成均一油相；(2)混合水相混合物以形成均一水相；(3)将所述油相加入至所述水相中，形成初乳；(4)将所述初乳匀化。

在一个具体实施方案中，本发明提供了一种制备本发明脂微球制剂的方法，包括以下步骤：

(1)向预热的油相溶剂如大豆油中加入乳化剂——例如大豆磷脂和/或蛋黄磷脂——和莲心碱获得油相混合物，将该油相混合物高速搅拌形成均一的油相；

(2)向预热的水中加入等渗调节剂如甘油获得水相混合物，将该水相混合物高速搅拌形成均一的水相；

(3)在高速搅拌条件下，将油相缓慢加入水相中，形成初乳；

(4)将初乳调pH值至6.0-6.5，和

(5)高压匀化至脂微球平均粒径低于300nm。

在实施方案中，优选地，所述步骤(1)至(3)可以在70-75℃的温度下进行，且所述步骤(5)可以在30-40℃的温度下进行；并且/或者，所述步骤(1)至(3)和(5)可以在2500-12000rpm，如3000-5000rpm或10000rpm的搅拌速度下进行；并且/或者，所述步骤(5)可以在400-1200bar的压力条件下进行。

在一个更具体的实施方案中，所述方法包括如下步骤：

(1)按制剂终体积每100ml计算，向预热的8.0-22.0g油相溶剂中加入1.0-2.0g乳化剂和0.2-1.5g莲心碱获得油相混合物，将该油相混合物高速搅拌，例如在3000-5000rpm下搅拌，形成均一的油相；

(2)按制剂终体积每100ml计算，向预热的水中加入1-5g等渗调节剂获得水相混合物，将该水相混合物高速搅拌，例如在3000-5000rpm下搅拌，形成均一的水相；

(3)在高速搅拌条件如在10000rpm搅拌速度下将油相缓慢滴入水相中，搅拌分散形成初乳；

(4)将上述初乳调pH值至6.0-6.5；

(5)匀化步骤(4)所得初乳至脂微球平均粒径低于300nm。

在一个特别具体的实施方案中，所述方法包括如下步骤：

(1)向预热的19.0-21.0g油相溶剂如大豆油中加入1.0-1.5g乳化剂如大豆磷脂和/或蛋黄卵磷脂和0.5-1.0g莲心碱获得油相混合物，例如在加热条件(如70-75℃)下，将该油相混合物高速搅拌，例如在3000-5000rpm下搅拌，形成均一的油相；

(2)向预热的水中加入2.0-2.5g甘油获得水相混合物，例如在加热条件(如70-75℃)下，将该水相混合物高速搅拌，例如在3000-5000rpm下搅拌，形成均一的水相；

(3)例如在加热条件(如70-75℃)下，在高速搅拌条件如在10000rpm搅拌速度下将油相缓慢滴入水相中，搅拌分散形成初乳；

(4)将上述初乳调pH值至6.0-6.5；

(5)在高压条件如600～800bar下，在加热条件如30～40℃下，匀化步骤(4)所得初乳至脂微球平均粒径低于300nm。

上述方法中所使用的物料使用量仅以每100ml液体制剂终体积所需量表示。技术人员可根据实际需要，按照上述步骤及重容百分比制备不同体积的制剂。

上文所述的制备方法还可以进一步包括使用现有技术方法去除所述含水制备物中水分，获得干燥形式制剂的步骤，例如可通过冻干的方法去除含水的液体制备物的水分获得冻干制剂。

以下通过实施例形式举例说明本发明，但不应将此理解为本发明主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中使用的化合物或试剂可通过商业途径购得，或者通过本领域技术人员已知的常规方法制备得到；所使用的实验仪器可通过商业途径购得。

实施例1

将200g注射用大豆油(购自铁岭北亚药用油有限公司)预热至70-75℃，加入15g蛋黄卵磷脂(购自日本Q.P.Corporation,FC Plant)，搅拌均一后缓慢加入10g莲心碱原料药(实验室提取)，以4000rpm的速度搅拌使其均匀溶解形成均一油相；将25g注射用甘油(购自湖南尔康药业有限公司)加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相，在5000rpm条件下搅拌6min，使其均匀溶解于水相；在10000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌10min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.3，稀释定容至1L，转入高压均质机(APV-2000型，丹麦斯必克流体技术有限公司)内，1000bar﹑35℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌12min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

除非另外特别说明，以下实施例中使用的化合物或试剂、仪器的来源和规格均与实施例1一致。

实施例2

将180g注射用大豆油预热至70-75℃，加入12.5g蛋黄卵磷脂，搅拌均匀后缓慢加入6g莲心碱原料药，以5000rpm的速度搅拌使其均匀溶解形成均一的油相；将22.5g注射用甘油加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相，在3000rpm条件下搅拌10min，使其均匀溶解于水相；在8000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌5min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.2，稀释定容至1L，转入高压均质机内，800bar﹑36℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌15min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

实施例3

将190g注射用大豆油预热至70-75℃，加入12g蛋黄卵磷脂，搅拌均匀后缓慢加入8g莲心碱原料药，以10000rpm的速度搅拌使其溶解形成均一的油相；将20g注射用甘油加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相，在5000rpm条件下搅拌5min，使其均匀溶解于水相；在10000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌10min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.1，稀释定容至1L，转入高压均质机内，800bar﹑32℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌8min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

实施例4

将150g注射用大豆油预热至70-75℃，加入12g蛋黄卵磷脂，搅拌均匀后缓慢加入5g莲心碱原料药，以3500rpm的速度搅拌使其溶解形成均一的油相；将20g注射用甘油加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相后缓慢加入15g壳聚糖乳酸盐，在5000rpm条件下搅拌8min，使其均匀溶解于水相；在10000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌10min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.2，稀释定容至1L，转入高压均质机内，800bar﹑32℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌20min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

实施例5

将130g注射用大豆油预热至70-75℃，加入13g蛋黄卵磷脂，搅拌均匀后缓慢加入5g莲心碱原料药，以10000rpm的速度使其溶解形成均一的油相；将22g注射用甘油加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相，在5000rpm条件下搅拌5min，使其均匀溶解于水相；在10000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌10min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.1，稀释定容至1L，转入高压均质机内，500bar﹑35℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌12min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

实施例6

将175g注射用大豆油预热至70-75℃，加入11.8g蛋黄卵磷脂，搅拌均匀后缓慢加入12g莲心碱原料药，以3500rpm的速度搅拌使其溶解形成均一的油相；将21.5g注射用甘油加入适量预热至70-75℃注射用水中，搅拌形成均一的水相后缓慢加入15g壳聚糖乳酸盐，在4000rpm条件下搅拌5min，使其均匀溶解于水相；在10000rpm条件下将油相缓慢滴入水相中，搅拌10min，均匀分散后形成乳白色的初乳；用磷酸氢二钠和枸橼酸作为pH调节剂将初乳调pH值至6.5，稀释定容至1L，转入高压均质机内，800bar﹑38℃条件下，匀化至平均粒径低于300nm；1.0μm的微孔滤膜过滤后，将所得脂微球制剂分装灌封于安瓿瓶中，充氮气，旋转水浴灭菌器121℃灭菌15min，即得略带粘性的白色乳状脂微球制剂。

上述实施例中蛋黄卵磷脂可由大豆磷脂替换，不影响实验效果。

上述实施例中大豆油可替换为花生油、红花油、棉籽油、橄榄油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯中的一种或多种，不影响实验效果。

以下试验例为对上述实施例制备的脂微球制剂进行的理化性质检测及药理试验。

试验例1：实施例制备的莲心碱脂微球注射剂的主要指标测定

对上述实施例制备的莲心碱脂微球注射剂进行检验分析，包括：性状、pH值、平均粒径、90％粒径、过氧化值、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、细菌内毒素、无菌状况、有关物质和含量。

检测方法参照脂微球同类产品质量标准如前列地尔注射液国家标准WS1-(X-041)-2002Z-2008拟定，具体方法描述如下：

1.性状的测定：目测法。

2.pH值的测定：中国药典2010年版二部附录VI H方法；

3.平均粒径、90％粒径的测定：

平均粒径是指粒径分布曲线中累积分布为50％时的最大粒径值。90％累积粒径是指粒径分布曲线中累积分布为90％时的最大粒径值。

使用“动态激光散射粒径测定法”测定平均粒径和90％粒径。粒径测定法是以动态激光光散射计根据动态光散射原理测定乳液中粒径的一种方法。

采用动态光散射粒度仪(英国马尔文公司型号ZS90)进行测定。本测定装置是用光电倍增管测出多普勒振动光，用小孔干涉后产生光子脉冲，根据光子脉冲出现的间隔计算标准脉冲(Hz)。所得标准脉冲数用累积法和直方附图法进行数据分析，求得乳液中粒子的粒径和粒径分布。

取0.1ml样品，用经孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过的水400ml稀释，摇匀，作为供试品溶液。取供试液约1ml沿样品管壁小心加入样品管中，保证无气泡，将样品管放入样品池中，放置数分钟，使供试液温度达到所设定的温度值后，在温度为25℃，散射角为90°的条件下进行测定，求得平均粒径和90％累积粒径值。从小粒子开始，累积含全部粒子50％的分布区域的最大粒径为平均粒径。从小粒子开始，累积含全部粒子90％的分布区域的最大粒径为90％累积粒径。本发明的实施例1制备的莲心碱脂微球注射剂的粒径分布如图1所示。

4.过氧化值：使用滴定法测定过氧化值。取冰醋酸-三氯甲烷(3∶2)混合液30ml，置250ml碘瓶中，通氮气10分钟，密闭瓶塞，精密量取琥乙红霉素乳剂注射剂5.0ml，迅速加入碘瓶中，轻轻振摇，精密加饱和碘化钾溶液0.5ml，密闭瓶塞，准确振摇1分钟，加新沸过的冷水30ml与淀粉指示液2ml，立即用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定至紫蓝色消失，并用空白试验校正。

5.甲氧基苯胺值：参照中国药典2010年版二部附录IV A；

6.溶血磷脂：溶血磷脂是卵磷脂的水解产物，对人体具有溶血性而引起过敏反应。使用高效液相法测定溶血磷脂的含量，检测器为蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)；

精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(配制后2小时内进样)；精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml中含0.06mg的溶液，精密量取5ml，置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取上述对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算。

7.细菌内毒素：取莲心碱脂微球注射剂，参照中国药典2010年版，细菌内毒素符合规定是指依法符合中国药典2010年版二部附录XI E每1mg莲心碱中含内毒素量应小于5EU的规定。

8.无菌检查：取莲心碱脂微球注射剂，除了以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，冲洗液为0.1％的蛋白胨水溶液，冲洗量为300ml(即100ml×3桶)之外，其余均按照中国药典2010年版二部无菌检查法(附录ⅪH)中的薄膜过滤法进行。在33℃下培养细菌、在25℃下培养真菌。目测培养基上是否有菌落，有菌落则无菌检查不合格，反之则符合无菌的规定。

9.有关物质：特指主药降解产生的杂质，使用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定有关物质的含量，步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-冰醋酸(每1000ml加入4g十二烷基磺酸钠)(55：44：1)为流动相；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长为282nm。理论板数以琥乙红霉素峰计算应不低于2000。

(2)供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

(3)测定：精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算有关物质。

10.主药含量：方法同有关物质的测定方法。含量是以标示量为基值(即100％)测定的。

11.包封率：是指被包裹物质(如某药物)在乳剂中占药物总量的百分量。步骤如下：

(1)乳剂上清液：精密吸取制备好的乳剂制剂2.0mL，置于微量超速离心机中，于50000r/min离心机下离心1h。再精密吸取离心后的上清液1mL，置于10mL量瓶中，加入无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀后，精密吸取上述溶液20μL进样分析，经HPLC记录色谱图(方法同含量测定)，计算上清液中的游离药物的含量(W_上清)。

(2)供试品溶液：精密吸取制备好的乳剂制剂1mL，置于10mL的量瓶中，加入无水乙醇，超声5min，并定容至刻度，即得供试品溶液。精密吸取上述溶液20μL进样分析，经HPLC记录色谱图(方法同含量测定)，计算出供试品药物总含量(W_总)。

包封率的计算方法如下：包封率＝(W_总-W_上清)/W_总×100％。

表1：实施例制剂的主要指标测定结果

试验例2：稳定性试验

在温度为25℃的条件下，将比较实施例制备的莲心碱脂微球注射剂放置在药物稳定试验箱(重庆市永生实验仪器厂生产，型号SHH-220SD-2)中3个月，然后对所述琥乙红霉素乳剂注射剂的参数进行检验分析，包括：性状、pH值、平均粒径、90％粒径、过氧化值、甲氧基苯胺值、溶血磷脂、有关物质、细菌内毒素、无菌状况和含量。

表2：实施例加速稳定性试验3个月后主要指标测定结果

由表1和表2可知：本发明制备的莲心碱脂微球注射剂，产品质量及稳定性均较好。

试验例3：本发明制剂对豚鼠全身过敏性试验

试验方法：将动物随机分为阳性对照-蛋清组；阴性对照-0.9％氯化钠注射液组和本发明制备的脂微球制剂(实施例1-6)高、低剂量组。6只/每组。共24只动物；动物进入试验的第1、3和5天，随机分组的动物分别腹腔注射给予相应的阳性对照-10％蛋清，0.2ml/只；阴性对照-0.9％氯化钠注射液0.2ml/只和致敏剂量(低剂量组为2mg/kg，高剂量组为4mg/kg)的本发明制备的脂微球制剂，每次给药后观察动物的行为及状态。在末次致敏给药的第10天，各试验组分别耳静脉注射给予致敏给药的5倍相应药物剂量(激发给药量：低剂量组为10mg/kg，高剂量组为20mg/kg)激发。给药后立即观察动物的状态及行为，根据分级表对动物的表现给予评判。

试验结果：本发明制备的脂微球制剂在激发给药后，阳性对照组动物表现强烈的过敏症状，并致死亡。阴性对照组和受试组未见过敏反应发生，在本次试验条件下本发明制备的脂微球制剂无致敏作用。

试验例4：本发明制剂的溶血性试验

试验方法：本发明制备的脂微球制剂(实施例1-6)在临床用药浓度下，实验体积0.1～0.5ml，与2％家兔红细胞在37℃水浴中孵育，观察15～180min，目测检查未发现该药对红细胞有溶血作用。

试验结果：本发明制备的脂微球制剂在临床用药浓度下，实验体积在0.1～0.5ml范围内，对兔红细胞无溶血作用。

试验例5：本发明制剂的血管刺激性试验

试验方法：受试组：本发明制备的脂微球制剂(实施例1-6，与人临床用药等浓度即1.5mg/kg)；阴性对照组：0.9％氯化钠注射液，共用3只动物；实验组每只动物的左耳均给予0.9％氯化钠注射液为阴性对照，每只家兔右耳静脉推注受试组药物，每日一次，连续给药3天。末次给药后72小时，将动物处死，从兔耳缘静脉部至耳根部，剪下兔耳缘静脉，4％中性福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡包埋后切片，HE染色，病理学检查。观察给药前后和末次给药72小时兔耳的外观变化。观察注射局部部位是否有肿胀，瘀血，血管收缩等刺激症状。末次给药后72小时后，将动物处死，用手术剪下兔耳缘静脉近心端部分，用4％中性福尔马林固定，做病理组织切片检查。

试验结果：本发明制备的脂微球制剂连续三天注射与人临床等剂量药物，对家兔耳缘静脉无刺激性。

Claims (9)

1.一种莲心碱脂微球制剂，其特征在于：包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.1-2.0％(w/v),油相溶剂5.0-25.0％(w/v),乳化剂0.5-3％(w/v)，等渗调节剂1-5％(w/v)和pH调节剂，余量为注射用水，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5；所述莲心碱脂微球制剂是按照下述制备方法制成：步骤如下：

(1)混合油相溶剂和乳化剂，搅拌均匀后缓慢加入莲心碱，高速搅拌形成均一的油相；

(2)向注射用水中加入等渗调节剂，高速搅拌，形成均一的水相；

(3)在高速搅拌条件下，将步骤(1)所得油相缓慢滴入步骤(2)所得水相中，形成初乳；

(4)向上步所得初乳中加入pH调节剂调节PH值，然后加入注射用水定容；

(5)在温度30-40℃条件下，匀化步骤(4)定容后的初乳至脂微球平均粒径低于300nm，然后过滤、分装、灭菌即得。

2.如权利要求1所述的莲心碱脂微球制剂，其特征在于：包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.2-1.5％(w/v),油相溶剂8.0-22.0％(w/v),乳化剂1.0-2.0％(w/v)，等渗调节剂2.0-2.5％(w/v)和pH调节剂，余量为注射用水，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5。

3.如权利要求1所述的莲心碱脂微球制剂，其特征在于：包含如下重容百分比的原料：莲心碱0.5-1.0％(w/v),油相溶剂19.0-21.0％(w/v),乳化剂1.0-1.5％(w/v)，等渗调节剂2.0-2.5％(w/v)和pH调节剂，余量为注射用水，所述莲心碱脂微球制剂的pH范围为6.0-6.5。

4.如权利要求1-3任一所述的莲心碱脂微球制剂，其特征在于：(1)所述油相溶剂选自大豆油、花生油、红花油、棉籽油、橄榄油、中链甘油单酯、中链甘油双酯、中链甘油三酯中的一种或多种；

(2)所述乳化剂为含有磷脂酰胆碱的大豆磷脂或蛋黄卵磷脂，乳化剂中的磷脂酰胆碱含量为78％-98％；

(3)所述等渗调节剂为注射用甘油。

5.一种制备如权利要求1所述的莲心碱脂微球制剂的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)混合油相溶剂和乳化剂，搅拌均匀后缓慢加入莲心碱，高速搅拌形成均一的油相；

(2)向注射用水中加入等渗调节剂，高速搅拌，形成均一的水相；

(3)在高速搅拌条件下，将步骤(1)所得油相缓慢滴入步骤(2)所得水相中，形成初乳；

(4)向上步所得初乳中加入pH调节剂调节pH值，然后加入注射用水定容；

(5)在温度30-40℃条件下，匀化步骤(4)定容后的初乳至脂微球平均粒径低于300nm，然后过滤、分装、灭菌即得。

6.如权利要求5所述的制备莲心碱脂微球制剂的方法，其特征在于：(一)所述步骤(1)中高速搅拌的搅拌速度为2500-12000rpm；所述步骤(1)在70-75℃的温度条件下进行，其中，步骤(1)进行前先将所述油相溶剂预热至70-75℃；

(二)所述步骤(2)中高速搅拌的搅拌速度为2500-12000rpm；所述步骤(2)在70-75℃的温度条件下进行，其中，步骤(2)进行前先将所述注射用水预热至70-75℃；

(三)所述步骤(3)中高速搅拌的搅拌速度为2500-12000rpm；所述步骤(3)在加热条件下进行，在70-75℃的温度条件下进行；(四)所述步骤(4)在加热条件下进行，在30-40℃的温度条件下进行；

(五)所述步骤(5)中高速搅拌的搅拌速度为2500-12000rpm；所述步骤(5)在高压压力条件为400-1200bar条件下进行。

7.如权利要求5所述的制备莲心碱脂微球制剂的方法，其特征在于：所述步骤(5)中脂微球平均粒径范围为100nm以上，300nm以下。

8.如权利要求5所述的制备莲心碱脂微球制剂的方法，其特征在于：所述脂微球制剂的渗透压摩尔浓度比为0.9-1.1。

9.如权利要求1所述的莲心碱脂微球制剂的用途，其特征在于：用于制备抗心率失常或抗高血压药物的用途。