CN104892726A - 一种普那霉素iia单组份的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种普那霉素IIA单组份的制备方法，该方法包括以下步骤：a、将普那霉素IIA粗品采用二元液相分离系统，采用反相填料层析，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱，收集普那霉素IIA纯度大于98.5%的洗脱液；b、步骤（a）所得洗脱液经浓缩、过滤、干燥，得到的普那霉素IIA单组份。本发明采用工业色谱分离技术手段，得到了高纯度的普那霉素IIA单组份，工艺简洁，质量可控，适于工业化生产。

Description

一种普那霉素IIA单组份的制备方法
技术领域
本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体地说是涉及一种普那霉素IIA单组份的制备方法。
背景技术
普那霉素(pristinamycin)属链阳性菌类抗生素，主要由约30%的普那霉素PIA和约70%的普那霉素PIIA两类化合物组成。普那霉素对各种感染均有很好的疗效作用，包括传染性肺炎、医院获得性肺炎、皮肤和软组织感染、脓毒血症、菌血症和心内膜炎等。美国FDA的专家小组推荐普那霉素可用于治疗医院获得性肺炎，皮肤、软组织感染和万古霉素耐药屎肠球菌(VREF)的急性感染，很多是用在急症时。普那霉素号称“人类对付致病菌的最后一道屏障”,是继万古霉素、替考拉宁之后的又一个抗多重耐药菌的抗生素，而且它还具有较长的抗生素后效应、耐药性低和不良反应少等优点。
目前关于普那霉素IIA单组份的制备方法未见报道。文献和专利中报道过的普那霉素的提取方法主要包括有机溶剂萃取、双水相萃取和高速逆流色谱法等。美国专利US3154475中采用溶剂萃取方法得到普那霉素粗品，再进行粉末活性炭层析得到纯品，收率低，溶剂用量大，不适合工业化生产。双水相萃取和高速逆流色谱法还停留在实验室研究阶段。中国专利CN102558302A中，采用大孔树脂吸附，纳滤，溶媒结晶等步骤得到黄色普那霉素产品，该工艺成本较高，色素去除不理想。
工业化生产的普那霉素经纯化后还含有20%的杂质，无法满足一些国家在药品注册方面的法规要求，再加上普那霉素IIA的不稳定性，增加了其纯化难度，从而致使多年来的研究都无法克服纯化步骤这个瓶颈，产品难以工业化生产。
本发明所得普那霉素IIA单组份纯度高，与普那霉素IA单组份协同作用后，表现出更强的抗菌活性，其生物效价达到10000U/mg以上，生物活性比对照药高近30%。该工艺操作简单，产品纯度和收率高，适于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度普那霉素IIA单组份的制备方法，该方法工艺流程短、产品质量可控、易操作，适于工业化生产。
为实现本发明目的，本发明提供了一种普那霉素IIA单组份的制备方法，该方法包括以下步骤：
a、将普那霉素IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液；
b、将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱，收集纯度大于98.5%的普那霉素IIA洗脱液；
c、将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素IIA单组份。
本发明步骤（a）所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇中任意一种，用量为每克普那霉素IIA粗品用3~10mL有机溶剂，优选为DMF。
本发明步骤（b）所述反相层析填料为C18。
本发明步骤（b）所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意一种。
本发明步骤（b）所述盐水为KH2PO4或NaH2PO4的水溶液，浓度为每1000 mL水中含0.2~1.0g KH2PO4或NaH2PO4，即浓度为0.2~1.0‰（g/mL），优选0.4~0.6‰。
本发明步骤（b）所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂所占体积百分比为43%~47%，优选45%。
本发明步骤（c）所述浓缩是在40~50℃下减压浓缩。
本发明步骤（c）所述干燥是将湿粉置于40~45℃，真空度≥0.08MPa条件下，真空干燥5~12h。
本发明优势：1、采用二元液相分离系统，使用反相填料层析，只一步层析就可以得到纯度大于98.5%的普那霉素IIA单组份，制备收率大于75%。2、所述方法工艺流程短，克服了普那霉素IIA易降解的缺点，且具有易操作、可控性强的优点，适于工业化生产。
附图说明
图1  普那霉素IIA粗品HPLC图谱。
图2  普那霉素IIA精制品HPLC图谱。
具体实施方式
下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
本发明所使用的普那霉素IIA粗品（含量65.8%），华北制药集团新药研究开发有限责任公司生产；对照药（批号14N0400，效价8000u/mg），PYOSTACINE公司生产。反相填料C18，苏州纳微生物科技有限公司；二元液相分离系统，汉邦科技有限责任公司；高效液相色谱仪（SPD-M20A型紫外检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CTO-10AS柱温箱），岛津公司；甲醇、乙醇和乙腈为制备级；其他试剂为分析纯。
实施例1
将上述普那霉素IIA粗品（HPLC图谱见附图1）10.0g，用50mL乙腈溶解，得到上样液。
将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用43%乙腈-盐水（1.0‰的KH2PO4）进行洗脱，收集HPLC含量大于98.5%的洗脱液。
将收集的洗脱液，40℃减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素IIA浓缩液，将浓缩液过滤、水洗，得到普那霉素IIA湿粉。将湿粉置于40℃，真空度≥0.08Mpa的烤箱中，真空干燥5h，得到普那霉素IIA精制品（HPLC图谱见附图2）5.0g，纯度99.2%，制备收率75.4%。
实施例2
将上述普那霉素IIA粗品50.0g，用500mL乙醇溶解，得到上样液。
将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙醇-盐水（0.2‰的KH2PO4）进行洗脱，收集HPLC含量大于98.5%的洗脱液。
将收集的洗脱液，45℃减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素IIA浓缩液，将浓缩液过滤、水洗，得到普那霉素IIA湿粉。将湿粉置于45℃，真空度≥0.08Mpa的烤箱中，真空干燥8h，得到普那霉素IIA精制品25.5g，纯度98.7%，制备收率76.5%
实施例3
将上述普那霉素IIA粗品100.0g，用300mL甲醇溶解，得到上样液。
将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用47%甲醇-盐水（0.5‰的NaH2PO4）进行洗脱，收集HPLC含量大于98.5%的洗脱液。
将收集的洗脱液，50℃减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素IIA浓缩液，将浓缩液过滤、水洗，得到普那霉素IIA湿粉。将湿粉置于40℃，真空度≥0.08Mpa的烤箱中，真空干燥10h，得到普那霉素IIA精制品50.3g，纯度98.9%，制备收率75.6%
实施例4
将上述普那霉素IIA粗品200.0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水（0.4‰的KH2PO4）进行洗脱，收集HPLC含量大于98.5%的洗脱液。
将收集的洗脱液，40℃减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素IIA浓缩液，将浓缩液过滤、水洗，得到普那霉素IIA湿粉。将湿粉置于45℃，真空度≥0.08Mpa的烤箱中，真空干燥12h，得到普那霉素IIA精制品102g，纯度98.8%，制备收率76.6%。
实施例5
将上述普那霉素IIA粗品200.0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水（0.6‰的KH2PO4）进行洗脱，收集HPLC含量大于98.5%的洗脱液。
将收集的洗脱液，40℃减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素IIA浓缩液，将浓缩液过滤、水洗，得到普那霉素IIA湿粉。将湿粉置于45℃，真空度≥0.08Mpa的烤箱中，真空干燥12h，得到普那霉素IIA精制品103g，纯度99.0%，制备收率77.2%。
实施例6
普那霉素生物效价测定：精密称定对照品及样品适量置称量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺溶解，制成每１mL中约含40000U普那霉素的溶液，摇匀，静置，备用。
选择40*40的平板大盘放置于水平平面上，将300mL培养基I均匀平铺于平板内，待底层凝固后再加入300mL培养基I，适当冷却后均匀加入0.2%的试验菌液，凝固后放置无菌小钢管。将标准品与样品用缓冲液分别稀释至200U/mL和100U/mL。在双碟的4个钢管中分别成对角滴加对照品（S）及供试品（T）高（H）、低（L）两种浓度的溶液，滴加顺序：SH→TH→TL→SL。滴注完毕后，盖上盘盖，在35～37℃恒温培养箱中培养18～20小时。培养结束后，量取抑菌圈直径，用生物检定统计软件BS2000，对测定结果进行可靠性测验、计算效价及实验误差。
其中所述试验菌为：枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63 501〕
其中所述培养基I的制备方法为：蛋白胨 5g，磷酸二氢钾 3g，牛肉浸出粉 3g，琼脂 14g，水1000mL，pH6.5～pH6.6，115℃灭菌30min。
其中所述缓冲溶液的配制方法为：磷酸二氢钾 8g，磷酸氢二钾 2g，用蒸馏水定容至1000 mL，pH6.0。
用本发明所得普那霉素IIA精制品与普那霉素IA精制品（自制，纯度98.6%）按质量比7:3配制普那霉素原料。按以上方法测定对照药及自制原料的效价。结果显示，自制原料生物活性高于对照药近30%，详见表1。
表1   普那霉素生物效价测定结果                   
名称 对照药 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
效价（U/mg） 8000 10562 10017 10826 10450

Claims (10)

1.一种普那霉素IIA单组份的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：
a、将普那霉素IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液；
b、将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱，收集纯度大于98.5%的普那霉素IIA洗脱液；
c、将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素IIA单组份。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（a）所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇中任意一种，用量为每克普那霉素IIA粗品用3~10mL有机溶剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其中步骤（a）所述有机溶剂为DMF。
4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b）所述反相层析填料为C18。
5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b）所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意一种。
6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b）所述的盐水为KH2PO4或NaH2PO4的水溶液，浓度为每1000 mL水中含0.2~1.0g KH2PO4或NaH2PO4。
7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤（b）所述盐水的浓度为每1000 mL水中含0.4~0.6g KH2PO4或NaH2PO4。
8.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b）所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂所占体积百分比为43%~47%。
9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c）所述浓缩是在40~50℃下减压浓缩。
10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c）所述干燥是将湿粉置于40~45℃，真空度≥0.08MPa条件下，真空干燥5~12h。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101169394A (zh) * 2007-02-09 2008-04-30 广东省保化检测中心有限公司 化妆品中克林霉素的高效液相色谱检测方法
CN101726553A (zh) * 2009-12-22 2010-06-09 扬州大学 一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法
CN102558302A (zh) * 2011-12-15 2012-07-11 北京科朗宏达科技有限责任公司 一种分离纯化普那霉素的方法
CN102675427A (zh) * 2012-05-22 2012-09-19 江西兴鼎科技有限公司 恩拉霉素标准品的高压液相制备方法
CN102898510A (zh) * 2012-11-04 2013-01-30 乐占线 一种分离恩拉霉素a和恩拉霉素b的方法
CN104610434A (zh) * 2013-11-01 2015-05-13 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 一种高纯度盐酸万古霉素的分离纯化方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101169394A (zh) * 2007-02-09 2008-04-30 广东省保化检测中心有限公司 化妆品中克林霉素的高效液相色谱检测方法
CN101726553A (zh) * 2009-12-22 2010-06-09 扬州大学 一种同时检测鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的方法
CN102558302A (zh) * 2011-12-15 2012-07-11 北京科朗宏达科技有限责任公司 一种分离纯化普那霉素的方法
CN102675427A (zh) * 2012-05-22 2012-09-19 江西兴鼎科技有限公司 恩拉霉素标准品的高压液相制备方法
CN102898510A (zh) * 2012-11-04 2013-01-30 乐占线 一种分离恩拉霉素a和恩拉霉素b的方法
CN104610434A (zh) * 2013-11-01 2015-05-13 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 一种高纯度盐酸万古霉素的分离纯化方法

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