CN104884090A - 细胞凋亡诱导剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供用于在细胞中有效地诱导细胞凋亡和/或增殖抑制的组合物及使用该组合物的方法。本发明涉及用于诱导细胞凋亡的药剂、含有该药剂的医药组合物、使用了该药剂的伴随着细胞凋亡的异常的疾病的处置方法等，所述药剂含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。

Description

细胞凋亡诱导剂
技术领域
本发明涉及新型的细胞凋亡诱导剂、细胞增殖抑制剂、自噬抑制剂、含有该细胞凋亡诱导剂、细胞增殖抑制剂或自噬抑制剂的医药组合物、以及伴随着细胞凋亡、细胞增殖或自噬的异常的疾病的新型治疗方法等。
背景技术
癌是人类所面对的最重要且最难对付的疾病之一，为了对其进行治疗进行了大量的研究努力。癌是由于基因的突变或表基因的异常等而使细胞失去控制地进行增殖的疾病。关于癌的基因异常已有很多报告(例如非专利文献1等)，其中很多被认为与细胞的增殖、分化、生存相关的信号传递有某些关联。另外，由于这样的基因异常，由正常分子构成的细胞内的信号传递发生异常，由此导致特定的信号级联的活化或灭活，最终有时会成为引起细胞异常增殖的一个因素。初期的癌治疗主要着眼于对细胞增殖本身的抑制，但由于该治疗也抑制生理性地正常增殖的细胞的增殖，因此会伴随着脱发、消化系统疾病、骨髄抑制等副作用。因此，为了抑制所述副作用，基于以癌特有的基因异常或信号传递异常为靶的分子靶向药等的新想法的癌治疗药的开发不断进展。
作为催化谷胱甘肽结合的酶之一的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、特别是GST-π(glutathione S-transferase pi，也称为GSTP1)的表达在各种癌细胞中增加，表明其可能是对部分抗癌剂产生抗性的一个原因。实际上已知，当使针对GST-π的反义DNA或GST-π抑制剂作用于过量表达GST-π并显示药物抗性的癌细胞系时，药剂抗性得到抑制(非专利文献2～4)。此外，最近的报告中报告了，当使针对GST-π的siRNA作用于过量表达GST-π的雄激素非依赖性前列腺癌细胞系时，其增殖得到抑制、细胞凋亡增加(非专利文献5)。另外还报告了，当使针对GST-π的siRNA作用于KRAS存在变异的癌细胞系时，Akt的活化得到抑制且自噬增加，但细胞凋亡的诱导为中等程度(非专利文献6)。
但是，关于GST-π与细胞增殖或细胞凋亡之间的关系、GST-π的分子机理、GST-π在各种细胞内信号传递中的作用等还几乎未弄清楚。细胞内的信号传递极其复杂，不仅常有1种分子影响多种分子的作用、或相反1种分子受到多种分子的影响的情况，而且常有即使抑制了某种分子的作用，其它的信号级联也活化，从而无法获得期望效果的情况。因此，为了开发更为优异的分子靶向药，需要弄清楚复杂地交织在一起的细胞的信号传递机理，但是尽管经过了多年研究也不过弄清楚了其中的极小一部分，因此还需要进一步的研究努力。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Futreal et al.，Nat Rev Cancer.2004；4(3)：177-83
非专利文献2：Takahashi and Niitsu，Gan To Kagaku Ryoho.1994；21(7)：945-51
非专利文献3：Ban et al.，Cancer Res.1996；56(15)：3577-82
非专利文献4：Nakajima et al.，J Pharmacol Exp Ther.2003；306(3)：861-9
非专利文献5：Hokaiwado et al.，Carcinogenesis.2008；29(6)：1134-8
非专利文献6：Nishita et al.，AACR 102nd Annual Meeting，Abstact No.1065
发明内容
发明要解决的课题
本发明的目的在于提供用于在细胞中有效地诱导细胞凋亡和/或增殖抑制的组合物及使用该组合物的方法。
用于解决课题的手段
本发明者们为了弄清楚GST-π的分子机理不断地进行刻苦研究，结果发现了当同时抑制GST-π和Akt的表达时，与仅抑制两者中的任一者的表达时相比，细胞增殖被进一步强力抑制、细胞死亡也进一步被强烈诱导，并且进一步发现了由GST-π的表达抑制而被诱导的自噬通过同时抑制Akt的表达而显著地得到抑制，从而完成了本发明。
即本发明涉及以下内容。
(1)一种用于诱导细胞凋亡的药剂，其含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。
(2)一种用于抑制细胞增殖的药剂，其含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。
(3)一种用于在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的药剂，其含有抑制Akt的药物作为活性成分。
(4)一种用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的药剂，其含有抑制Akt的药物作为活性成分。
(5)根据(1)～(4)中任一项所述的药剂，其中，活性成分选自由RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体组成的组。
(6)一种医药组合物，其含有(1)～(5)中任一项所述的药剂。
(7)根据(6)所述的医药组合物，其为细胞的异常增殖引起的疾病的治疗用。
(8)根据(6)所述的医药组合物，其为癌的治疗用。
发明效果
由于本发明的细胞凋亡诱导剂与以往的药剂相比能够更有效地诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖，因此作为医药组合物是极其有用的。特别是在癌的治疗中，由于能够通过细胞凋亡杀死癌细胞，因此不仅可期待阻止癌发展的效果，而且可期待使癌退缩的效果。
附图说明
图1为表示PANC-1细胞中的由GST-π或Akt的敲减(knockdown)产生的细胞增殖抑制效果的图。
图2为表示A549细胞中的由GST-π或Akt的敲减产生的细胞增殖抑制效果的图。
图3为表示PANC-1细胞中的由GST-π及Akt的双敲减产生的细胞增殖抑制效果的图。
图4为表示A549细胞中的由GST-π及Akt的双敲减产生的细胞增殖抑制效果的图。
图5为表示由GST-π siRNA与Akt抑制剂并用产生的细胞增殖抑制效果的图。*P<0.05、**P<0.01。
图6为表示由GST-π及Akt的双敲减产生的自噬抑制效果的图。
具体实施方式
本发明涉及用于抑制细胞增殖的药剂或组合物(以下也称为“细胞增殖抑制剂”或“细胞增殖抑制用组合物”)及用于诱导细胞凋亡的药剂或组合物(以下也称为“细胞凋亡诱导剂”或“细胞凋亡诱导组合物”)，它们含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。
在本说明书中使用的情况下，GST-π是指由GSTP1基因编码的对谷胱甘肽结合(glutathione conjugation)进行催化的酶。GST-π存在于包括人在内的各种动物，其序列信息也是公知的(例如人：NP_000843(NM_000852)、大鼠：NP_036709(NM_012577)、小鼠：NP_038569(NM_013541)等。编号表示NCBI数据库的登录号，括号外为氨基酸序列的编号、括号内为碱基序列的编号)。
在本说明书中使用的情况下，Akt是指由Akt基因编码的具有PH区域的丝氨酸/苏氨酸激酶。Akt已知有Akt1～3这3种异型，但与PI3K/AKT/mTOR路径相关的是Akt1，因此在本说明书中，只要没有特别说明，则Akt是指Akt1。Akt存在于包括人在内的各种动物，其序列信息也是公知的(例如人：NP_005154(NM_005163)等。编号表示NCBI数据库的登录号，括弧外为氨基酸序列的编号、括弧内为碱基序列的编号)。
由于生物个体间有可能发生不影响蛋白的生理学功能的基因序列或氨基酸序列的变异，因此本发明中的GST-π或GSTP1基因、或者Akt或Akt基因并不限于与公知序列具有相同序列的蛋白或核酸，可具有相对于该序列有1个或2个以上、典型地有1个或数个、例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个不同的氨基酸或碱基的序列，另外可以包含与上述公知的GST-π或Akt具有同等功能的序列。关于GST-π及Akt的具体功能，如后所述。
需要说明的是，本说明书中，“在本说明书中使用的情况下”、“本说明书中使用的”、“本说明书中”、“本说明书中记载的”等表述只要没有特别说明，则表示其后的记载适用于本说明书中记载的全部发明。另外，只要没有另外地定义，本说明书中使用的全部技术用语及科学用语具有与本领域技术人员通常理解的相同的含义。本说明书中参照的全部专利、公报及其它出版物它们整体引用到本说明书中。
对本说明书中使用的“抑制GST-π的药物”没有限定，例如包括抑制GST-π的产生和/或活性的药物、促进GST-π的分解和/或灭活的药物等。作为抑制GST-π的产生的药物，对其没有限定，可列举出例如针对编码GST-π的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体等。
作为抑制GST-π的活性的药物，对其没有限定，可列举出例如与GST-π结合的物质、例如谷胱甘肽、谷胱甘肽类似物(例如WO 95/08563、WO96/40205、WO 99/54346、非专利文献4等中记载的物质)、酮洛芬(非专利文献2)、吲哚美辛(Hall et al.，Cancer Res.1989；49(22)：6265-8)、依他尼酸、伊洛前列素(iloprost)(Tew et al.，Cancer Res.1988；48(13)：3622-5)、抗GST-π抗体、GST-π的显性失活突变体等。这些药物可从市售获得，也可基于公知的技术适当制造。
作为抑制GST-π的产生或活性的药物，从特异性高、副作用的可能性低出发，优选针对编码GST-π的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体。
GST-π的抑制可通过与不使GST-π抑制剂发挥作用的情况相比，细胞中GST-π的表达、活性受到抑制来确定。GST-π的表达可通过已知的任意方法来进行评价，没有限定，例如利用了抗GST-π抗体的免疫沉降法、EIA、ELISA、IRA、IRMA、蛋白免疫印迹法、免疫组化法、免疫细胞化学法、流式细胞法、利用了与编码GST-π的核酸或其独特的片段或该核酸的转录产物(例如mRNA)或剪接(splicing)产物特异性地杂交的核酸的、各种杂交反应法、Northern blot法、Southern blot法、各种PCR法等。
另外，GST-π的活性可以通过采用已知的任意方法、例如免疫沉降法、蛋白免疫印迹法、质量分析法、拉下法(pull-down method)、表面等离体激元共振(SPR)法等对GST-π的已知活性、没有限定、例如与Raf-1(特别是磷酸化Raf-1)、EGFR(特别是磷酸化EGFR)等蛋白的结合性等进行分析来评价。
对本说明书中使用的“抑制Akt的药物”没有限定，例如包括抑制Akt的产生和/或活性的药物、促进Akt的分解和/或灭活的药物等。作为抑制Akt的产生的药物，对其没有限定，可列举出例如针对编码Akt的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体等。
作为抑制Akt的活性的药物，对其没有限定，可列举出例如与Akt结合的物质、例如Merck Millipore公司的Akt Inhibitor(Akt Inhibitor、AktInhibitor II～XIII)、MK-2206、Perifosine、GSK690693、AT7867、CCT128930、PHT-427、Palomid 529、PF-04691502、曲西立滨、磷酸曲西立滨(NSC-280594)、A-674563、sc-221226、抗Akt抗体、Akt的显性失活突变体等。这些药物可从市售获得，也可基于公知的技术适当制造。
作为抑制Akt的产生或活性的药物，从特异性高、副作用的可能性低出发，优选针对编码Akt的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体。
Akt的抑制可通过与不使Akt抑制剂发挥作用的情况相比，细胞中Akt的表达、活性受到抑制来确定。Akt的表达可通过已知的任意方法来进行评价，没有限定，例如利用了抗Akt抗体的免疫沉降法、EIA、ELISA、IRA、IRMA、蛋白免疫印迹法、免疫组化法、免疫细胞化学法、流式细胞法、利用了与编码Akt的核酸或其独特的片段或该核酸的转录产物(例如mRNA)或剪接(splicing)产物特异性地杂交的核酸的、各种杂交反应法、Northernblot法、Southern blot法、各种PCR法等。
另外，Akt的活性可以通过采用已知的任意方法、例如免疫沉降法、蛋白免疫印迹法、质量分析法、拉下法(pull-down method)、表面等离体激元共振(SPR)法等对Akt的已知活性、没有限定、例如与mTOR等蛋白的结合性等进行分析来评价。
在本说明书中使用的情况下，RNAi分子是指引起RNA干扰的任意分子，没有限定，包括siRNA(small interfering RNA，小干扰RNA)、miRNA(micro RNA，微RNA)、shRNA(short hairpin RNA，短发夹RNA)、ddRNA(DNA-directed RNA，DNA指导的RNA)、piRNA(Piwi-interacting RNA，与Piwi蛋白相作用的RNA)、rasiRNA(repeat associated siRNA，重复相关siRNA)等双链RNA及它们的修饰基因等。这些RNAi分子可从市售获得，或基于公知的序列信息等进行设计、制作。
另外，在本说明书中使用的情况下，反义核酸包括RNA、DNA、PNA或它们的复合物。
在本说明书中使用的情况下，DNA/RNA嵌合多核苷酸没有限定，包括例如日本特开2003-219893中记载的由抑制靶基因表达的DNA和RNA构成的双链多核苷酸。
抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物可以包含在单一制剂中，也可以分别包含在2个以上的制剂中。后者的情况下，各制剂可同时给予，也可以隔开时间间隔地给予。在隔开时间间隔地给予的情况下，可以将含有抑制GST-π的药物的制剂在含有抑制Akt的药物的制剂之前给予，也可以在之后给予。
本发明还涉及用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的药剂或组合物(以下也称为“细胞凋亡诱导增强剂”、“细胞增殖抑制增强”、“细胞凋亡诱导增强用组合物”或“细胞增殖抑制增强用组合物”)，它们含有抑制Akt的药物作为活性成分。
关于本发明的药剂或组合物中的活性成分的配合量，可以是当给予药剂或组合物时细胞凋亡得到诱导和/或细胞增殖得到抑制的量。另外，优选为不产生超过给予所带来的好处的不良影响的量。所述量可以是公知的，或者可以通过使用了培养细胞等的体外试验、或通过在小鼠、大鼠、狗或猪等动物模型中进行的试验来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员熟知的。细胞凋亡的诱导可通过各种已知的方法、例如检测DNA片段化、膜联蛋白V在细胞膜上的结合、线粒体膜电位的变化、胱天蛋白酶的活化等细胞凋亡特有的现象、或通过TUNEL染色等来进行评价。另外，细胞增殖的抑制可通过各种已知的方法、例如经时性的活细胞数的计数、肿瘤的大小、体积或重量的测定、DNA合成量的测定、WST-1法、BrdU(溴脱氧尿苷)法、3H胸腺嘧啶脱氧核苷摄入法等来进行评价。活性成分的配合量可以根据药剂或组合物的给药方式的不同而变化。例如，当1次给予中使用几个单位的组合物时，组合物1单位中配合的有效成分的量可以为1次给予所需要的有效成分的量的几分之一。所述配合量的调整是本领域技术人员能够适当进行的。
本发明还涉及：制造用于诱导细胞凋亡或抑制细胞增殖的药剂或组合物的方法，其包含将抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分进行配合；抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物在制造用于诱导细胞凋亡或抑制细胞增殖的药剂或组合物中的用途；细胞凋亡的诱导或细胞增殖的抑制中使用的抑制GST-π的药物与抑制Akt的药物的组合；以及，诱导细胞凋亡或抑制细胞增殖的方法，其包含给予有效量的抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物。
本发明还涉及：制造用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的药剂或组合物的方法，其包含将抑制Akt的药物作为活性成分进行配合；抑制Akt的药物在制造用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的药剂或组合物中的用途；用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制中使用的抑制Akt的药物；以及，增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的方法，其包含给予有效量的抑制Akt的药物。
关于上述制造方法或用途中的药物和/或其配合量如已在上文所述的。各药物的配合可以按照已知的任意方法来进行。
上述细胞凋亡诱导或细胞增殖抑制方法均可以是体外的方法，也可以是体内的方法。另外，关于该方法中的药物如已在上文所述的，药物的有效量可以是在所给予的细胞中细胞凋亡得到诱导、或细胞增殖得到抑制的量。另外，优选不产生超过给予所带来的好处的不良影响的量。该量可以是公知的，或可以通过使用了培养细胞等的体外试验等来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员熟知的。细胞凋亡的诱导或细胞增殖的抑制可以通过包含上述方法在内的各种已知方法来进行评价。关于上述有效量，当将药物给予某细胞集团时，可以不必是诱导该细胞集团的全部细胞发生细胞凋亡或增殖抑制的量。例如，上述有效量可以是引起细胞集团中的细胞的1％以上、2％以上、3％以上、4％以上、5％以上、6％以上、8％以上、10％以上、12％以上、15％以上、20％以上、进而25％以上等发生细胞凋亡或增殖抑制的量。
本发明的细胞凋亡诱导及细胞增殖抑制剂即使在细胞增殖存在异常的细胞等中也能够有效地诱导细胞凋亡或增殖抑制，作为医药组合物的成分是有效的。因此，本发明的一个方面包括含有本发明的细胞凋亡诱导剂或细胞增殖抑制剂的医药组合物。
本发明的医药组合物在处置细胞凋亡存在异常的疾病方面特别有效。因此，本发明的一个方式涉及用于处置细胞凋亡存在异常的疾病的医药组合物，其含有上述细胞凋亡诱导剂。在本说明书中使用的情况下，关于细胞凋亡存在异常的疾病，对其没有限定，包括例如细胞的异常增殖所引起的疾病、KRAS的变异所引起的疾病、GST-π的过量表达所引起的疾病等。作为细胞的异常增殖所引起的疾病，没有限定，包括例如良性或恶性肿瘤、增生、瘢痕疙瘩、Cushing’s综合征、原发性醛固酮增多症、红斑症、真性红细胞增多症、白斑症、增生性瘢痕、扁平苔癣及着色斑病等。作为KRAS的变异所引起的疾病，没有限定，包括例如良性或恶性肿瘤(也称为癌、恶性新生物)等。作为GST-π的过量表达所引起的疾病，没有限定，包括例如良性或恶性肿瘤、特别是药物抗性(例如对美法仑、环磷酰胺等烷化剂、阿霉素等蒽环类抗肿瘤性抗生素、顺铂等铂络合物、依托泊甙等产生抗性)的恶性肿瘤等。本发明的一个方式中，细胞凋亡存在异常的疾病为癌。
作为本发明中的癌，没有限定，可列举出例如纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、kaposi肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤等肉瘤、脑肿瘤、头颈部癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指肠癌、阑尾癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、胆嚢癌、胆管癌、肛门癌、肾癌、输尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、阴茎癌、睾丸癌、子宫癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、皮肤癌等肿瘤、以及白血病、恶性淋巴瘤等。需要说明的是，本发明中，“癌”包括上皮性恶性肿瘤及非上皮性恶性肿瘤。本发明中的癌可存在于身体的任意部位，例如脑、头颈部、胸部、四肢、肺、心脏、胸腺、食道、胃、小肠(十二指肠、空肠、回肠)、大肠(结肠、盲肠、阑尾、直肠)、肝脏、胰脏、胆嚢、肛门、肾、输尿管、膀胱、前列腺、阴茎、睾丸、子宫、卵巢、外阴、阴道、皮肤、横纹肌、平滑肌、滑膜、软骨、骨、甲状腺、肾上腺、腹膜、肠系膜、骨髄、血液、血管系统、淋巴结等淋巴系统、淋巴液等。
本发明的一个方式中，癌包含具有上述定义的变异型KRAS的癌细胞。本发明的一个方式中，癌包含显示激素或生长因子非依赖性的增殖的癌细胞。本发明的一个方式中，癌包含显示GST-π的过量表达的癌细胞。本发明的一个方式中，癌为药剂抗性的。本发明的一个方式中，癌具有对选自由美法仑、环磷酰胺等烷化剂、阿霉素等蒽环类抗肿瘤性抗生素、顺铂等铂络合物、依托泊甙组成的组中的药剂具有抗性。本发明的一个方式中，癌对选自由美法仑、环磷酰胺、阿霉素、顺铂、依托泊甙组成的组中的药剂具有抗性。
本发明还涉及：用于处置细胞凋亡存在异常的疾病的医药组合物，其含有抑制GST-π的药物及抑制Akt的药物作为活性成分；用于处置细胞凋亡存在异常的疾病的医药组合物的制造方法，其包含将抑制GST-π的药物及抑制Akt的药物作为活性成分进行配合；抑制GST-π的药物及抑制Akt的药物在制造用于处置细胞凋亡存在异常的疾病的医药组合物中的用途；在处置细胞凋亡存在异常的疾病中使用的抑制GST-π的药物与抑制Akt的药物的组合；以及，用于处置细胞凋亡存在异常的疾病的方法，其包含将所述医药组合物的有效量给予需要的对象。
关于上述制造方法或用途中的药物或配合量、细胞凋亡存在异常的疾病，如已在上文所述的。另外，各药物的配合可以按照已知的任意方法来进行。
本发明的细胞凋亡诱导剂、细胞增殖抑制剂及含有这些药剂的组合物还可以与其他有效成分并用。这里，并用包括例如将其他有效成分分别制成制剂进行给予、及将其他有效成分制成与至少1种其他药剂的合剂来进行给予等。以分开的制剂进行给予时，将含有其他有效成分的制剂在其他制剂之前、与其他制剂同时、或在其他制剂之后给予。
作为所述其他有效成分，可列举出对作为对象的疾病的处置有效的成分。例如，要处置的疾病为癌时，可以并用抗癌剂。作为抗癌剂例子，可列举出例如异环磷酰胺、盐酸尼莫司汀、环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、雷莫司汀等烷化剂，盐酸吉西他滨、依诺他滨、阿糖胞苷·十八烷基磷酸钠、阿糖胞苷制剂、替加氟·尿嘧啶、替加氟·吉莫斯特·氧嗪酸钾配合剂(例如TS-1)、去氧氟尿苷、羟基脲、氟尿嘧啶、氨甲喋呤、巯基嘌呤等抗代谢剂，盐酸依达比星、盐酸表柔比星、盐酸柔红霉素、柠檬酸柔红霉素、盐酸阿霉素、盐酸吡柔比星、盐酸博来霉素、硫酸培洛霉素、盐酸米托蒽醌、丝裂霉素C等抗肿瘤性抗生素，依托泊甙、盐酸伊立替康、酒石酸长春瑞滨、多西他赛水合物、紫杉醇、硫酸长春新碱、硫酸长春地辛、硫酸长春碱等生物碱，阿那曲唑、柠檬酸他莫昔芬、柠檬酸托瑞米芬、比卡鲁胺、氟他胺、磷酸雌莫司汀等激素疗法剂，铂尔定、顺铂(CDDP)、奈达铂等铂络合物，沙利度胺、新伐司他、贝伐单抗等新生血管抑制剂，L-门冬酰胺酶等
作为其他有效成分的另外例子，可列举出抑制自噬的药物。在本说明书中使用的情况下，自噬可包括巨自噬、微自噬、分子伴侣介导的自噬等，典型地是指巨自噬。因此，本发明中的“自噬”这一用语只要没有特别说明，是指“巨自噬”。
自噬是也被称为“自食”的细胞内蛋白分解机理之一，负责细胞内的蛋白分解、循环。自噬在包括酵母、哺乳动物在内的广泛的生物种中可见，大致伴随有包括(a)PAS(phagophore assembly site，吞噬泡组装位置)的形成、(b)将要分解的蛋白包围的吞噬泡(隔离膜)的伸长及增大、和由此的将要分解的蛋白内包的自噬体的形成、(c)通过自噬体与溶酶体的融合的自溶酶体的形成、(d)自溶酶体内的蛋白的分解的一连串过程。
上述(a)～(c)的过程与特有的自噬相关因子相关。自噬相关因子最初在酵母中进行研究，到目前为止被鉴定为以Atg1～27为代表的多种物质(Klionsky et al.，Dev Cell.2003；5(4)：539-45)，但在哺乳动物中的研究也在进展，也鉴定了多种同源物，自噬的核分子机理也在逐渐变得清楚(Yang and Klionsky，CurrOpin Cell Biol.2010；22(2)：124-31)。
作为哺乳动物中的与自噬的核分子机理相关的自噬相关因子，可列举出例如与PAS的形成相关的VMP1、TP53INP2、mAtg9、ULK复合物(由ULK1、ULK2、mAtg13、FIP200构成)、PI3K复合物(由Beclin1、hVps34、p150、Ambra1、Atg14L构成的Atg14L复合物、及由Beclin1、hVps34、p150、Bif-1、UVRAG构成的UVRAG复合物)、与吞噬泡的伸长相关的LC3-II、Atg12-Atg5-Atg16L复合物等。
因此，作为抑制自噬的药物，没有限定，可列举出例如抑制包括上述因子在内的自噬相关因子(在相关因子为复合物的情况下，不仅包括该复合物本身，还包括构成该复合物的各个成分)的产生和/或活性的药物、促进自噬相关因子的分解和/或灭活的药物等。作为抑制自噬相关因子的产生的药物，可列举出针对编码自噬相关因子的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体等。
作为抑制自噬相关因子的活性的药物，对其没有限定，可列举出例如PI3K的抑制剂(例如渥曼青霉素等)、特别是Class III PI3K的抑制剂(例如3-MA(3-甲基腺嘌呤)等)、抑制自噬体与溶酶体的融合的物质(例如巴佛洛霉素A1等)、抑制自溶酶体中的蛋白分解的物质(例如氯喹、亮肽素等)、与自噬相关因子结合的物质(例如抗自噬相关因子的抗体等)、自噬相关因子的显性失活突变体等。这些药物可以从市售获得，也可以基于公知的技术适当制造。
作为抑制自噬的药物，从特异性高、副作用低的角度出发，优选针对编码自噬相关因子的DNA的RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体。
自噬的抑制可通过与不使本发明的自噬抑制剂发挥作用的情况相比，细胞中自噬得到抑制来确定。自噬的抑制可基于已知的任意方法，没有限定，例如利用电子显微镜法的自噬体的检测、自噬标记物(例如Atg5、Atg12、LC3、特别是LC3-II等)的检测等来进行评价。关于LC3-II，没有限定，可以例如用抗LC3-II的特异性抗体检测，也可以在用电泳将试样分离后，使用与LC3-II或者与LC3-I和LC3-II这两者反应的抗体通过蛋白免疫印迹法等对分为与LC3-I不同的条带的LC3-II进行检测。另外，由于LC3-I散在于细胞质内，而LC3-II局部分布在隔离膜、自噬体、自溶酶体等自噬特有的结构中，因此也可以通过利用与LC3-II反应的抗体(包括与LC3-I和LC3-II这两者反应的抗体)的免疫染色等使其显现出来，将显示这些结构的点状信号的存在、数量作为自噬的指标。
本发明还涉及用于在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的药剂或组合物(也称为“自噬抑制剂”或“自噬抑制组合物”)，其包含抑制Akt的药物作为活性成分。
本发明中，自噬的抑制可通过与不使本发明的药剂或组合物发挥作用的情况相比，细胞中自噬得到抑制来确定。关于自噬的评价方法，如上所述。
在本说明书中使用的情况下，“GST-π得到抑制”包括例如在有GST-π表达的细胞中GST-π得到抑制的状态。作为所述状态，可列举出例如将抑制GST-π的药物(例如上述的药物等)向有GST-π表达的细胞给予后的状态等。
某细胞中是否有GST-π表达可以是文献学上已知的，或可以通过实际地对细胞中的GST-π的表达进行检测来确定。GST-π的表达可以使用包括已在上文描述过的方法在内的已知的任意方法来进行检测。
本发明进一步涉及：用于在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的药剂或组合物的制造方法，其包含将抑制Akt的药物进行配合的工序；抑制Akt的药物在制造用于在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的药剂或组合物中的用途；GST-π得到抑制的细胞中的自噬抑制中使用的抑制Akt的药物；以及，在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的方法，其包含给予有效量的抑制Akt的药物。
本发明的用于抑制自噬的药剂或组合物对于在GST-π得到抑制的状况下处置伴随着自噬的亢进的状态等是有用的。作为所述状态，没有限定，可列举出例如GST-π的表达、活性降低的状态、给予了抑制GST-π的表达、活性的药物的状态等。
因此，本发明还涉及：用于对在GST-π得到抑制的状况下的伴随着自噬的亢进的状态进行处置的医药组合物，其含有抑制Akt的药物作为活性成分；用于对在GST-π得到抑制的状况下的伴随着自噬的亢进的状态进行处置的医药组合物的制造方法，其包含将抑制Akt的药物进行配合的工序；抑制Akt的药物在制造用于对在GST-π得到抑制的状况下的伴随着自噬的亢进的状态进行处置的医药组合物中的用途；在GST-π得到抑制的状况下的伴随着自噬的亢进的状态的处置中使用的抑制Akt的药物；以及，对在GST-π得到抑制的状况下的伴随着自噬的亢进的状态进行处置的方法，其包含将有效量的抑制Akt的药物给予需要其的对象。
关于自噬的抑制中的本发明的上述药剂或组合物中的活性成分的配合量，当给予该药剂或组合物时，可以是实现自噬的抑制的量。另外，优选为不产生超过给予所带来的好处的不良影响的量。所述量可以是公知的，或者可以通过使用了培养细胞等的体外试验、或通过在小鼠、大鼠、狗或猪等动物模型中进行的试验来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员熟知的。自噬的抑制可通过包括上述方法在内的各种已知的方法进行评价。活性成分的配合量可以根据药剂或组合物的给药方式的不同而变化。例如，当1次给予中使用几个单位的组合物时，组合物1单位中配合的有效成分的量可以为1次给予所需要的有效成分的量的几分之一。所述配合量的调整是本领域技术人员能够适当进行的。
关于自噬的抑制中的上述药剂或组合物的制造方法或用途中的药物或其配合量，已如上所述。各药物的配合也可以按照已知的任意方法进行。
自噬的抑制中的上述方法均可以是体外方法，也可以是体内方法。另外，上述方法中的药物的有效量可以是在投与了细胞中实现所期望的效果(即自噬的抑制)的量。另外，优选不产生超过给予所带来的好处的不良影响的量。该量可以是公知的，或可以通过使用了培养细胞等的体外试验等来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员熟知的。所期望的效果的实现可以通过包含上述方法在内的各种已知方法来进行评价。关于上述有效量，当将药物给予某细胞集团时，可以不必是诱导该细胞集团的全部细胞实现所期望的效果的量。例如，上述有效量可以是诱导细胞集团中的细胞的1％以上、2％以上、3％以上、4％以上、5％以上、6％以上、8％以上、10％以上、12％以上、15％以上、20％以上、进而25％以上等实现所期望的效果的量。
当本说明书中记载的本发明的各种药剂、组合物、处置方法等中的活性成分为核酸、例如RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸等时，这些活性成分可以作为单独的核酸直接利用，也可以载持到各种载体上后利用。作为载体，可以利用质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、粘粒载体、病毒载体等公知的任意载体。载体优选至少包含增加所载持的核酸的表达的启动子，此时，所述核酸优选与所述启动子以可发挥功能的方式连接。核酸与启动子以可发挥功能的方式连接是指，在启动子的作用下，该核酸与启动子按照合适地产生该核酸所编码的蛋白的方式配置。载体可以是在宿主细胞内能够复制的，另外，基因的转录可以是在宿主细胞的细胞核外进行，也可以在细胞核内进行。在后者的情况下，核酸被整合到宿主细胞的基因组中。
另外，有效成分也可以载持在各种非病毒性脂质或蛋白载体上。作为所述载体，没有限定，可列举出例如胆固醇、脂质体、抗体原体(antibodyprotomer)、环糊精纳米粒子、融合肽、适体(aptamer)、生物降解性聚乳酸共聚物、聚合物等，能够提高向细胞内摄入的效率(例如参照Pirollo andChang，Cancer Res.2008；68(5)：1247-50等)。特别是阳离子脂质体、聚合物(例如聚乙烯亚胺等)是有用的。关于作为所述载体有用的聚合物的进一步的例子，可列举出例如US 2008/0207553、US 2008/0312174等中记载的载体等。
本说明书中记载的本发明的各种医药组合物中，只要不影响活性成分的效果，还可以将活性成分与其它任意成分组合。作为这样的任意成分，可列举出例如其它的化学治疗剂、药理学上容许的载体、赋形剂、稀释剂等。另外，根据给予途径、药物释放方式等，还可以将上述组合物用合适的材料、例如肠溶性包衣剂、限时崩解性材料包覆，另外，还可以纳入合适的药物释放体系。
本说明书中记载的本发明的各种药剂及组合物(包括各种医药组合物)可以通过包括经口及非经口这两者的各种路径给予，例如没有限定，经口、静脉内、肌肉内、皮下、局部、肿瘤内、直肠、动脉内、门静脉内、心室内、经粘膜、经皮、鼻内、腹腔内、肺内及子宫内等路径，也可以制成适合各给予途径的剂型。所述剂型及制剂方法可以适当采用任意的公知的剂型及制剂方法(例如参照標準薬剤学、渡辺喜照ら編、南江堂、2003年等)。
例如，作为适合经口给予的剂型，没有限定，可列举出散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体制剂、悬浮剂、乳剂、凝胶剂、糖浆剂等，另外作为适合非经口给予的剂型，可列举出溶液性注射剂、悬浮性注射剂、乳浊性注射剂、用时制备型注射剂等注射剂。非经口给予用制剂可以为水性或非水性的等渗性无菌溶液或悬浮液的形态。
本说明书中记载的本发明的各种药剂或组合物(包括各种医药组合物)可以靶向化为以特定的组织、细胞为靶。靶向化可以通过已知的任意方法实现。当期望向癌递送时，没有限定，可以使用例如通过将制剂制成适合表现EPR(增强性透过与滞留，enhanced permeability and retention)效果的直径为50～200μm、特别是75～150μm等大小的被动靶向、或使用CD19、HER2、转铁蛋白受体、叶酸受体、VIP受体、EGFR(Torchilin，AAPS J.2007；9(2)：E128-47)、RAAG10(日本特表2005-532050)、PIPA(日本特表2006-506071)、KID3(日本特表2007-529197)等配体、或具有RGD基序、NGR基序的肽、以F3、LyP-1(Ruoslahti et al.，J Cell Biol.2010；188(6)：759-68)等为靶向剂的主动靶向等方法。另外，类视黄醇或其衍生物由于已知作为针对癌细胞的靶向剂是有用的(WO 2008/120815)，因此还可以利用含有类视黄醇作为靶向剂的载体。所述载体除了上述文献外，在WO2009/036368、WO2010/014117、WO 2012/170952等中有记载。
本说明书中记载的本发明的各种药剂或组合物(包括各种医药组合物)可以以任意形态供给，从保存稳定性的观点出发，也可以以可用时制备的形态提供，例如在医疗现场或其附近由医师和/或药剂师、护士、或其他辅助医务人员等制备得到的形态。该形态当本发明的药剂或组合物含有脂质和/或蛋白、核酸等难以稳定保存的成分时特别有用。此时，本发明的药剂或组合物可以以包含这些必须构成要素中的至少一个的1个或2个以上的容器形式提供，在使用之前，例如使用前24小时以内、优选使用前3小时以内、并且更优选即将使用前制备。制备时，可以适当使用进行制备的场所中通常能够获得的试剂、溶剂、调剂器具等。
因此，本发明还涉及组合物的制备试剂盒，其包含单独或组合地包含本发明的各种药剂或组合物中可含有的活性成分的1个或2个以上的容器；以及以这样的试剂盒形式提供的各种药剂或组合物的必要构成要素。本发明的试剂盒除了上述容器外，还可以包含记载有本发明的各种药剂或组合物的制备方法、给予方法等的说明，例如说明书、CD、DVD等电子记录介质等。另外，本发明的试剂盒可以包含用于完成本发明的各种药剂或组合物的全部构成要素，但也可以不一定要含有全部构成要素。因此，本发明的试剂盒可以不含有在医疗现场、实验室等中通常可获得的试剂、溶剂，例如无菌水、生理盐水、葡萄糖溶液等。
本说明书中记载的本发明的各种处置方法中的有效量是例如减轻疾病的症状，或使疾病的进展延缓或停止的量，优选为抑制或使疾病治愈的量。另外，优选为不产生超过给予所带来的好处的不良影响的量。所述量可以通过使用了培养细胞等的体外试验、或通过在小鼠、大鼠、狗或猪等动物模型中的试验来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员熟知的。另外，本发明的处置方法中使用的药物的用量可以是本领域技术人员公知的，也可以通过上述试验等来适当确定。
本说明书中记载的本发明的处置方法中给予的活性成分的具体用量可以考虑与需要处置的对象有关的各种条件，例如症状的严重程度、对象的一般健康状态、年龄、体重、对象的性别、饮食、给予的时期及频率、并用的药物、对治疗的反应性、剂型及对治疗的依从性等来确定。
作为给予途径包括包含经口及非经口这两者的各种路径，例如经口、静脉内、肌肉内、皮下、局部、肿瘤内、直肠、动脉内、门静脉内、心室内、经粘膜、经皮、鼻内、腹腔内、肺内及子宫内等路径。
关于给予频率，根据所用药剂、组合物的性状、包括上述条件在内的对象的条件的不同而不同，例如可以为1日多次(即1日2、3、4次或5次以上)、1日1次、数日(即2、3、4、5、6、7日等)1次、1周1次、数周1次(即2、3、4周1次等)。
在本说明书中使用的情况下，用语“对象”表示任意的生物个体，优选为动物，进一步优选为哺乳动物，进一步优选为人的个体。本发明中，对象可以是健康的，也可以患有某种疾病，当期望处置特定的疾病时，典型地是指患有所述疾病，或者具有患病风险的对象。
另外，用语“处置”在本说明书中使用的情况下，是包含以疾病的治愈、暂时的缓解或预防等为目的的医学上容许的全部种类的预防性和/或治疗性介入。例如，“处置”这一用语包括疾病进展的延缓或停止、病变的退缩或消失、发病的预防或再发的防止等，包含各种目的的医学上容许的介入。
实施例
通过以下的例子对本发明进一步详细地进行说明，但这些例子不过是示例，并不是对本发明进行限定。
例1：利用siRNA的GST-π及Akt的敲减
将1×106个PANC-1细胞播种到10cm培养皿中，在添加了10％胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS)和5％L-谷氨酰胺的Roswell Park MemorialInstitute 1640(RPMI 1640，Sigma公司)中培养18小时。培养条件只要没有特别说明，则是在37℃、5％CO2下进行。另外，将1×106个A549细胞播种到10cm培养皿中，在添加了10％FBS和10％L-谷氨酰胺的Dulbecco’smodified Eagle’s medium(DMEM，Sigma公司)中培养18小时。分别更换培养基，2小时后，用Lipofectamine RNAiMAX(Life Technologies公司)向铺满至20～30％的PANC-1或A549细胞中转染GST-π siRNA和/或AktsiRNA。
转染用的Lipofectamine/siRNA混合溶液如下制作。首先，制备混合有35μL的Lipofectamine RNAiMAX和965μL的OPTI-MEM(Sigma公司)的Lipofectamine溶液。接着，制备用OPTI-MEM将规定量的10μM siRNA稀释至1mL的siRNA溶液(例如，在制作终浓度为30nM的要使用的siRNA溶液时，将36μL的10μM siRNA与964μL的OPTI-MEM混合)，将其与上述lipofectamine溶液混合，在室温下静置15分钟。其中，siRNA使用下述物质。
GST-π siRNA：
正义链：GGGAGGCAAGACCUUCAUUtt(序列编号1)
反义链：AAUGAAGGUCUUGCCUCCCtg(序列编号2)
(其中大写字母表示RNA、小写字母表示DNA)
Akt siRNA：Akt siRNA I(Cell Signaling Technology公司，#6211)
对照siRNA：AllStars Neg.Control siRNA 1027281(QIAGEN公司)
为了使siRNA的浓度最优化，将GST-π siRNA或Akt siRNA添加到终浓度为10～50nM、用10mL OPTI-MEM更换了的包含PANC-1细胞或A549细胞的培养皿中，在室温下培养5小时，然后更换培养基(PANC-1细胞使用加有5％FBS的RPMI 1640，A549细胞使用加有10％FBS的DMEM)，培养2小时。作为对照，使用以30nM的终浓度添加了对照siRNA的细胞。将这些细胞用胰蛋白酶处理并从10cm培养皿剥离、采集，每个1×105个地重新播种到6cm培养皿中。之后，每24小时将细胞用胰蛋白酶处理、从培养皿剥离、采集，计数细胞数。将从转染至4天后的结果示于图1及2。从这些结果可知，由各siRNA产生的细胞增殖抑制效果在30nM的终浓度时基本达到平稳。
为了验证使GST-π siRNA和Akt siRNA同时发挥作用时的效果，与上述同样地向各细胞中添加混合了GST-π siRNA和Akt siRNA的Lipofectamine/siRNA混合溶液，对细胞数进行计数。作为对照，使用以30nM的终浓度添加了对照siRNA的细胞。其中，作为siRNA溶液，使用混合了36μL的10μM GST-π siRNA、36μL的10μM Akt siRNA和928μL的OPTI-MEM的溶液，采用与上述同样的方法制作上述Lipofectamine/siRNA混合溶液。从图3及4所示的结果可知，将GST-π和Akt两者均敲减时，与仅将任一方敲减时相比，细胞增殖抑制效果增大。
另外，当对细胞的形态进行观察时，可见将GST-π敲减时的肥大化且不增殖的细胞为20～30％左右。特别是，在PANC-1中还可见大量不仅肥大化而且浮起的细胞(死细胞)。当将Akt敲减时，可见大量死细胞。当将GST-π和Akt这两者敲减时，PANC-1、A549均与将任一方敲减时相比，死细胞数增加。这些观察结果启示，通过敲减GST-π或Akt，细胞凋亡得到诱导，当将两者敲减时，细胞凋亡进一步被强力诱导。
例2：GST-π siRNA与Akt抑制剂的并用
使用小分子的Akt Inhibitor VIII(Merck#124018，1,3-二氢-1-(1-((4-(6-苯基-1H-咪唑并[4,5-g]喹喔啉-7-基)苯基)甲基)-4-哌啶基)-2H-苯并咪唑-2-酮)作为Akt抑制剂对是否使用除siRNA以外的物质也能得到同样的结果进行了研究。其中，已知Akt Inhibitor VIII与Akt的Pleckstrinhomology(PH)区域结合后引起变构抑制，虽不抑制Akt3，但选择性地阻断Akt1及Akt2的磷酸化和活性化(Barnett，S.F.，et al.2005.Biochem.J.385：399-408；Lindsley，C.W.，et al.2005.Bioorg.Med.Chem.Lett.15：761-764；Zhao，Z.，et al.2005.Bioorg.Med.Chem.Lett.15：905-909)。
将1×106个PANC-1细胞播种到10cm培养皿中，在添加了10％FBS和5％L-谷氨酰胺的RPMI 1640中培养24小时。将培养基更换成10mL的OPTI-MEM，将与例1同样制备的GST-π siRNA以50nM的终浓度添加到培养皿中，在室温下培养5小时后，将培养基更换为加有5％FBS的RPMI1640，培养2小时。作为对照，使用以同浓度添加了杂乱siRNA(ScramblesiRNA)的细胞。杂乱siRNA使用以下序列的物质(北海道System science公司)。
正义链：CGAUUCGCUAGACCGGCUUCAUUGCAG(序列编号3)
反义链：GCAAUGAAGCCGGUCUAGCGAAUCGAU(序列编号4)
将这些细胞用胰蛋白酶处理，从10cm培养皿剥离、采集，每个1×105个地重新播种到6cm培养皿中，以1μM的终浓度添加Akt Inhibitor VIII。之后，每24小时将细胞用胰蛋白酶处理、从培养皿剥离、采集，对细胞数进行计数。检验使用Bonferroni/Dunn法。将结果示于图5。从该结果可知，即使使用除siRNA以外的物质作为Akt抑制剂，通过抑制GST-π和Akt这两者，与抑制GST-π和Akt中的任一个相比，细胞增殖抑制效果增大。
例3：由GST-π和Akt的双敲减产生的自噬的抑制
对GST-π和Akt的双敲减会对自噬产生怎样的影响进行了研究。
将1×106个PANC-1细胞播种到10cm培养皿中，在添加了10％FBS和5％L-谷氨酰胺的RPMI 1640中培养24小时。将培养基更换成10mL的OPTI-MEM，将与例1同样制备的GST-π siRNA、Akt siRNA、或GST-πsiRNA与Akt siRNA的混合溶液按照各siRNA达到10nM的终浓度的方式添加到培养皿中，在室温下培养5小时，然后将培养基更换为加有5％FBS的RPMI 1640，培养3天。将培养皿的细胞用冰冷PBS洗涤后，加入冰冷Lysis buffer，将细胞破碎。Lysis buffer是通过将NP-40Alternative、PROTEINGRADE(R)Detergent、10％Solution、Sterile-Filtered(CALBIOCHEM公司)100μL、1M Tris-HCl(pH为7.5)500μL、5M NaCl 300μL、0.5M EDTA 20μL、灭菌水9.08μL混和而制备的。用细胞刮棒收集细胞破碎液，冰冷30分钟。在此期间，每隔10分钟进行颠倒混合。将得到的溶液在15000rpm、4℃下离心15分钟，采集上清，制成细胞提取液。将该细胞提取液供于Western印迹分析。作为一次抗体，使用抗LC3B抗体(Sigma公司)，使其与转印膜在4℃下反应16小时。在与HRP标记二次抗体反应后，用化学发光试剂进行LC3分子的检测。通过向LC3的I型(18kDa)和II型(16kDa)的转移评价自噬是否得到诱导。
从图6所示的结果可知，由敲减GST-π诱导的自噬通过同时敲减Akt而基本完全地被抑制。

Claims (8)

1.一种用于诱导细胞凋亡的药剂，其含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。
2.一种用于抑制细胞增殖的药剂，其含有抑制GST-π的药物和抑制Akt的药物作为活性成分。
3.一种用于在GST-π得到抑制的细胞中抑制自噬的药剂，其含有抑制Akt的药物作为活性成分。
4.一种用于增强由抑制GST-π的药物引起的细胞凋亡的诱导和/或细胞增殖的抑制的药剂，其含有抑制Akt的药物作为活性成分。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的药剂，其中，活性成分选自由RNAi分子、核酶、反义核酸、DNA/RNA嵌合多核苷酸及表达它们的载体组成的组。
6.一种医药组合物，其含有权利要求1～5中任一项所述的药剂。
7.根据权利要求6所述的医药组合物，其为细胞的异常增殖引起的疾病的治疗用。
8.根据权利要求6所述的医药组合物，其为癌的治疗用。
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