CN104873532A

CN104873532A - 树莓多糖在抗肿瘤中的应用

Info

Publication number: CN104873532A
Application number: CN201510169864.0A
Authority: CN
Inventors: 索有瑞; 杨永晶; 叶英; 杨芳
Original assignee: Northwest Institute of Plateau Biology of CAS
Current assignee: Zhonghe Baosang Biotechnology Co ltd
Priority date: 2015-04-04
Filing date: 2015-04-04
Publication date: 2015-09-02
Anticipated expiration: 2035-04-04
Also published as: CN104873532B

Abstract

本发明提供了树莓多糖在制备抗肿瘤药物、保健品或食品中的用途。本发明利用荷瘤鼠模型评价树莓多糖的体内抗肿瘤效果，最终发现树莓多糖对起源于人的皮肤、头颈部、脑、甲状腺、胰腺、食管、结肠或直肠、卵巢、前列腺的肿瘤都有良好的抑制作用，且作用与化疗药物相近似，毒副作用更小，为治疗或预防肿瘤提供了新的选择。

Description

树莓多糖在抗肿瘤中的应用

技术领域

本发明属于医药科技领域，具体涉及树莓多糖在抗肿瘤中的应用。

背景技术

恶性肿瘤仍然是严重威胁人类生命的重大疾病。最近统计资料表明，我国每年新发现的癌症患者约2000万人，其中150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡人数的1/5。

树莓(Rubus idaeus L.)又名山莓、悬钩子、覆盆子等，属蔷薇科悬钩子属。树莓主要分布于北半球温带和寒带，其果实为多浆小聚合果，味甜微酸。树莓含有多糖、有机酸、黄酮、花青素，多酚、维生素、矿质元素、挥发油、鞣质等多种活性成分，具有极高的营养价值和医疗保健作用，被誉为“黄金水果”。目前，国内市场上的树莓产品仍然以食品类为主，如以树莓为主要原料的果汁、果酱、果酒等。而提取树莓活性成分，并将这些有效成分应用于保健品乃至医药科技领域的例子非常少。

目前有专利公开了树莓鞣花酸类提取物能够有效抑制胃癌的报道。然而，目前对树莓多糖却无此方面的研究。

发明内容

本发明的目的在于提供树莓多糖在医药领域的新应用。

具体地，本发明提供了树莓多糖在制备抗肿瘤药物、保健品或食品中的用途。

进一步地，所述肿瘤为原发或继发肿瘤。

更进一步地，所述肿瘤为黑色素瘤、鼻咽癌、脑胶质瘤、甲状腺癌、胰腺癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌或前列腺癌。

其中，所述药物、保健品或食品为口服剂型。

进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服液。

其中，所述树莓多糖中，多糖纯度在50％以上；进一步地，多糖纯度在80％以上；更进一步地，多糖纯度在85％以上；优选地，多糖纯度为85～95％w/w。上述纯度是采用硫酸苯酚法测定。

其中，所述树莓多糖采用水提醇沉法制备得到。

进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：

取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂后，用浓度75％～95％v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，

取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量达到75％～85％，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。

其中，树莓提取前去籽或不去籽。

其中，醇沉过程中，加乙醇至含醇量达到75％即可。

其中，所述树莓为蔷薇科悬钩子属植物的果实。

进一步地，所述树莓选自红树莓或黑树莓，本发明一个具体实施方式中选择使用红树莓。

本发明利用荷瘤鼠模型评价树莓多糖的体内抗肿瘤效果，最终发现树莓多糖对起源于人的皮肤、头颈部、脑、甲状腺、胰腺、食管、结肠或直肠、卵巢、前列腺的肿瘤都有良好的抑制作用，且作用与化疗药物相近似，毒副作用更小，为治疗或预防肿瘤提供了新的选择。

本发明进一步拓展了树莓的开发与利用，为肿瘤治疗提供了新的思路，具有显著的社会价值和市场价值。

附图说明

附图1树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠移植肿瘤生长抑制作用；

附图2树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图3树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图4树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图5树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图6树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

阳图7树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图8树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图9树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的树莓多糖采用常规的多糖提取、纯化方式制备得到，在本发明中具体操作如下：

树莓多糖制备：取干树莓，粉碎去籽后，加5倍石油醚(沸程60～90℃)脱脂，除尽石油醚后加入75％～95％v/v乙醇于60℃回流，将过滤后的滤渣加10倍纯净水超声提取(功率60W，温度：80℃，处理时间：100min)，离心取上清，滤渣按原条件再提取两次，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇使溶液含醇量达75％v/v，于4摄氏度静置24h，过滤收集滤渣，滤渣烘干得树莓多糖。

经测定，本发明制备的树莓多糖得率为10.4％～11.6％，经硫酸苯酚法检测得到多糖纯度为90.8％～91.2％。

实施例1

树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

取对数生长期的黑色素瘤细胞B16F10，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下。5天后用游标卡尺测量小鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至60-90mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。分组及给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次。阳性对照组(多西他赛)采用皮下注射，10mg/kg，每三天给药1次。树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。

肿瘤体积计算公式：TV＝0.52×a×b²，其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式：T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％，T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

表1.树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表1和图1，阳性对照多西他赛10mg/kg对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率为66.49％。树莓多糖低中高剂量组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率分别为7.56％，24.32和60.95％。与阴性对照组相比，多西他赛和树莓高剂量对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(*P＜0.05，**P＜0.01)。但多西他赛毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。树莓多糖对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例2

树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

取对数生长期的肿瘤细胞，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察树莓多糖的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。

给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。肿瘤体积计算同实施例1

表2.树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表2和图2，顺铂10mg/kg组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率为70.38％；树莓多糖低、中、高剂量组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为39.77％，52.36％，65.18％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对实验动物体重无显著性影响。

因此，树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例3

树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。

表3.树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表3和图3，紫杉醇10mg/kg组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率为73.11％；树莓多糖高、中、低剂量组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达78.19％，76.21％，69.73％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中、低剂量组对人脑胶质瘤U87移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例4

树莓多糖人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；5-氟尿嘧啶组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。

表4.树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表4和图4，5-Fu(5-氟尿嘧啶)10mg/kg组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.26％；树莓多糖高、中、低剂量组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达70.81％，62.35％，57.98％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中、低剂量组组对人甲状腺癌SW-579移植瘤的生长的均具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)。与阳性对照组5-Fu相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例5

树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；5-氟尿嘧啶组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。

表5.树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表5和图5，5-Fu 10mg/kg组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率为65.26％；树莓多糖高、中、低剂量组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达69.08％，53.82％，45.31％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有显著性的抑制作用 (*P＜0.05)。与阳性对照组5-Fu相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例6

树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

表6.树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表6和图6，紫杉醇10mg/kg组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.76％；树莓多糖高、中、低剂量组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率达67.55％，50.03％，40.21％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例7

树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表7.树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表7和图7，紫杉醇10mg/kg组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.23％；树莓多糖高、中、低剂量组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为62.88％，53.13％，45.33％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例8

树莓多糖人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg(按多糖计)，采用灌胃给药，每天1次。

表8.树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表8和图8，顺铂10mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.24％树莓多糖高、中、低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为70.13％， 59.87％，48.08％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中剂量组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例9

树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

表9.树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表9和图9，顺铂10mg/kg组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率为71.38％；树莓多糖高、中、低剂量组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为75.31％，55.63％，48.27％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中、低剂量组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重无显著性影响，未见明显的毒副反应。

Claims

1.树莓多糖在制备抗肿瘤药物、保健品或食品中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为原发或继发肿瘤。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为黑色素瘤、鼻咽癌、脑胶质瘤、甲状腺癌、胰腺癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌或前列腺癌。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的用途，其特征在于：所述药物、保健品或食品为口服剂型；进一步地，所述口服剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浸膏剂或口服液。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述树莓多糖中，多糖纯度在50％以上；进一步地，多糖纯度在80％以上；更进一步地，多糖纯度在85％以上；优选地，多糖纯度为85～95％w/w。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓多糖采用水提醇沉法制备得到。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述水提醇沉法具体操作如下：

取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂后，用浓度75％～95％v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量达到75％～85％v/v，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：树莓提取前去籽或不去籽。

9.根据权利要求1～9任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓为蔷薇科悬钩子属植物的果实。

10.根据权利要求1～9任意一项所述的用途，其特征在于：所述树莓选自红树莓或黑树莓。