CN104758270A - 一种树莓多糖泡腾片及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种树莓多糖泡腾片，它是由如下重量配比的原辅料制备而成：树莓多糖粉40％～70％，甜味剂0％～20％，碱剂5％～30％，可食用有机酸5％～30％，润滑剂0.5％～10％。本发明还提供了该泡腾片的用途。本发明研究发现，树莓多糖具有良好的抗癌活性，能够有效降低化疗药物的毒副作用，并且还具有降血糖和抗疲劳功效，因此，本发明以树莓多糖为活性成分制备的泡腾片具有良好的使用前景和社会意义。

Description

一种树莓多糖泡腾片及其用途

技术领域

本发明属于医药科技领域，具体涉及一种树莓多糖泡腾片及其制备方法，还涉及树莓多糖泡腾片的用途。

背景技术

恶性肿瘤仍然是严重威胁人类生命的重大疾病。最近统计资料表明，我国每年新发现的癌症患者约2000万人，其中150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡人数的1/5。

树莓(Rubus idaeus L.)又名山莓、悬钩子、覆盆子等，属蔷薇科悬钩子属。树莓主要分布于北半球温带和寒带，其果实为多浆小聚合果，味甜微酸。树莓含有多糖、有机酸、黄酮、花青素，多酚、维生素、矿质元素、挥发油、鞣质等多种活性成分，具有极高的营养价值和医疗保健作用，被誉为“黄金水果”。目前，国内市场上的树莓产品仍然以食品类为主，如以树莓为主要原料的果汁、果酱、果酒等。而提取树莓活性成分，并将这些有效成分应用于保健品乃至医药科技领域的例子非常少。

目前有专利公开了树莓鞣花酸类提取物能够有效抑制胃癌的报道。然而，目前对树莓多糖却无此方面的研究。

发明内容

本发明在于提供一种树莓多糖泡腾片，本发明的另一目的在于提供该泡腾片的用途。

具体地，本发明提供了一种树莓多糖泡腾片，它是由如下重量配比的原辅料制备而成：

树莓多糖粉40％～70％，甜味剂0％～20％，碱剂5％～30％，可食用有机酸5％～30％，润滑剂0.5％～10％。

进一步地，它是由如下重量配比的原辅料制备而成：

树莓多糖粉54％～60％，甜味剂7％～8％，碱剂15％～16％，可食用有机酸15％～20％，润滑剂3％。

其中，所述润滑剂选自聚乙二醇6000或硬脂酸镁；所述甜味剂选自木糖醇；所述碱剂选自碳酸氢钠；所述可食用有机酸选自柠檬酸。

其中，泡腾片的制备方法如下：

1)按比例称取各原辅料；

2)将树莓多糖过筛后与有机酸混合，用乙醇均匀润湿，制粒，干燥，再过筛整粒得酸粒；

3)将碱剂用乙醇均匀润湿，制粒，干燥，再过筛整粒得碱粒；

4)混合酸粒和碱粒，加入甜味剂和润滑剂混合，压片成型，即得泡腾片。

其中，所述树莓多糖中，多糖纯度在50％以上；进一步地，多糖纯度在80％以上；更进一步地，多糖纯度在85％以上；优选地，多糖纯度为85～95％w/w。

其中，所述树莓多糖采用水提醇沉法制备得到；进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：

取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂后，用浓度75～95％v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量达到75％～85％，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。

其中，树莓提取前去籽或不去籽。

其中，所述树莓为蔷薇科悬钩子属植物的果实；进一步地，所述树莓选自红树莓或黑树莓。

本发明还提供了上述树莓多糖泡腾片在制备抗肿瘤或者预防或治疗化疗药物所致毒副作用的食品、药品或保健品中的用途。

进一步地，所述肿瘤为黑色素瘤、鼻咽癌、肝癌、肺癌、脑胶质瘤、甲状腺癌、胰腺癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌或前列腺癌。

本发明中，所述毒副作用为器官损伤，本发明具体实施方式中，所述器官为肝、脾或肾。

其中，所述化疗药物选自紫杉醇、顺铂或/和多西他赛。

其中，所述化疗药物采用注射剂型。其中，所述注射剂型可以选自皮下注射、肌肉注射或静脉注射等各种肿瘤治疗过程中的常用方式。

本发明还提供了上述树莓多糖泡腾片在制备降血糖或抗疲劳的药物、保健品或食品中的用途。

进一步地，所述药物、保健品或食品是预防或治疗I型或II型糖尿病的药物、保健品或食品。

进一步地，所述药物、保健品或食品是改善糖尿病患者血脂异常的药物、保健品或食品。

更进一步地，所述药物、保健品或食品是降低糖尿病患者TC、TG和LDL水平，提高HDL水平的药物、保健品或食品。

进一步地，所述药物、保健品或食品是降低血清尿素氮、乳酸、肌酸激酶水平，提高血糖、乳酸脱氢酶水平的药物、保健品或食品。

本发明利用荷瘤鼠模型评价树莓多糖的体内抗肿瘤效果，最终发现树莓多糖对起源于人的皮肤、头颈部、脑、甲状腺、胰腺、食管、结肠或直肠、卵巢、前列腺的肿瘤都有良好的抑制作用，且作用与化疗药物相近似，毒副作用更小，为治疗或预防肿瘤提供了新的选择。

人体在使用化疗药物后，的确会产生毒副作用，如肝脏、肾脏或/和脾脏损伤等，本发明研究发现，使用树莓多糖能够有效降低化疗药物带来的上述器官损伤等毒副作用，甚至可增强化疗药物的抗癌作用，为癌症患者的临床用药提供了新的选择。

综上，本发明研究发现，树莓多糖具有良好的抗癌活性，能够有效降低化疗药物的毒副作用，并且还具有降血糖和抗疲劳功效，因此，本发明以树莓多糖为活性成分制备的泡腾片具有良好的使用前景和社会意义。

附图说明

附图1树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠移植肿瘤生长抑制作用；

附图2树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图3树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图4树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图5树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图6树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图7树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图8树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用；

附图9树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用。

附图10多西他赛～树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠移植肿瘤生长抑制作用；

附图11顺铂～树莓多糖对人肺癌H460裸鼠异种移植瘤生长抑制作用；

附图12紫杉醇～树莓多糖对人肝癌Bel～7402裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用；

附图13化疗药物～树莓多糖联合对荷瘤小鼠肝脏组织形态的影响；

附图14化疗药物～树莓多糖联合对荷瘤小鼠肾脏组织形态的影响；

附图15化疗药物～树莓多糖联合对C57BL/6小鼠脾脏指数的影响。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的树莓多糖采用常规的多糖提取、纯化方式制备得到，在本发明中具体操作如下：

树莓多糖制备：取干树莓，粉碎去籽后，加5倍石油醚(沸程60～90℃)脱脂，除尽石油醚后加入75～95％v/v乙醇于60℃回流，将过滤后的滤渣加10倍纯净水超声提取(功率60W，温度：80℃，处理时间：100min)，离心取上清，滤渣按原条件再提取两次，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/4，加入95％v/v乙醇，使溶液含醇量达75％，于4摄氏度静置24h，过滤收集滤渣，滤渣烘干得树莓多糖。

经测定，本发明制备的树莓多糖得率为10.4％～11.6％，经硫酸苯酚法检测得到多糖纯度为90.8％～91.2％。

本发明各实施例中，树莓多糖剂量均以多糖计。

实施例1

树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

取对数生长期的黑色素瘤细胞B16F10，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下。5天后用游标卡尺测量小鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至60-90mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。分组及给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次。阳性对照组(多西他赛)采用皮下注射，10mg/kg，每三天给药1次。树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

肿瘤体积计算公式：TV＝0.52×a×b²，其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式：T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％，T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

表1.树莓多糖对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表1和图1，阳性对照多西他赛10mg/kg对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率为66.49％。树莓多糖低中高剂量组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率分别为7.56％，24.32和60.95％。与阴性对照组相比，多西他赛和树莓高剂量对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(*P＜0.05，**P＜0.01)。但多西他赛毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。树莓多糖对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例2

树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

取对数生长期的肿瘤细胞，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察树莓多糖的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。

给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。肿瘤体积计算同实施例1

表2.树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表2和图2，顺铂10mg/kg组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率为70.38％；树莓多糖低、中、高剂量组对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为39.77％，52.36％，65.18％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对实验动物体重无显著性影响。

因此，树莓多糖对人鼻咽癌CNE裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人鼻咽癌CNE移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例3

树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表3.树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表3和图3，紫杉醇10mg/kg组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率为73.11％；树莓多糖高、中、低剂量组对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达78.19％，76.21％，69.73％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人脑胶质瘤U87裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中、低剂量组对人脑胶质瘤U87移植瘤的生长均具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例4

树莓多糖人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；5-氟尿嘧啶组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表4.树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表4和图4，5-Fu(5-氟尿嘧啶)10mg/kg组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.26％；树莓多糖高、中、低剂量组对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达70.81％，62.35％，57.98％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人甲状腺癌SW-579裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中、低剂量组组对人甲状腺癌SW-579移植瘤的生长的均具有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)。与阳性对照组5-Fu相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例5

树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；5-氟尿嘧啶组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表5.树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表5和图5，5-Fu 10mg/kg组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率为65.26％；树莓多糖高、中、低剂量组对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达69.08％，53.82％，45.31％。但5-Fu毒性较大，动物体重下降，实验过程中动物有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人胰腺癌SW-1990裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人胰腺癌SW-1990移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组5-Fu相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例6

树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表6.树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表6和图6，紫杉醇10mg/kg组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率为69.76％；树莓多糖高、中、低剂量组对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤的抑瘤率达67.55％，50.03％，40.21％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人食管癌Ec109裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人食管癌Ec109移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例7

树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表7.树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表7和图7，紫杉醇10mg/kg组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.23％；树莓多糖高、中、低剂量组对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为62.88％，53.13％，45.33％。但紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中剂量组对人结肠癌HT-29移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组紫杉醇相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例8

树莓多糖人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表8.树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表8和图8，顺铂10mg/kg组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.24％树莓多糖高、中、低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为70.13％，59.87％，48.08％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人卵巢癌SK-OV-3裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高、中剂量组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖低剂量组对人卵巢癌SK-OV-3移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例9

树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，采用皮下注射，每周给药1次；树莓多糖低中高剂量组分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，采用灌胃给药，每天1次。

表9.树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表9和图9，顺铂10mg/kg组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率为71.38％；树莓多糖高、中、低剂量组对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为75.31％，55.63％，48.27％。但顺铂毒性较大，动物体重下降明显，试验过程中有死亡。而树莓多糖对裸鼠体重没有显著性影响。

因此，树莓多糖对人前列腺癌DU-145裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，树莓多糖高剂量组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(**P＜0.01)，树莓多糖中、低剂量组对人前列腺癌DU-145移植瘤的生长有显著性的抑制作用(*P＜0.05)。与阳性对照组顺铂相比，树莓多糖对实验动物的体重无显著性影响，未见明显的毒副反应。

本发明从抑瘤作用、减毒增效和免疫调节三个方面对树莓多糖泡腾片的主要成分树莓多糖进行了辅助肿瘤化疗的药效学研究：

实施例10

多西他赛～树莓多糖联合对黑色素瘤B16F10小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

取对数生长期的黑色素瘤细胞B16F10，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于C57BL/6小鼠右侧腋窝皮下。5天后用游标卡尺测量小鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至60～90mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试药物的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。分组及给药方式如下：多西他赛组采用皮下注射，10mg/kg，每三天给药1次。多西他赛～树莓多糖低中高联合给药组，多西他赛采用皮下注射，10mg/kg，每三天给药1次，树莓多糖采用灌胃，给药剂量分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，每天给药1次。阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次。肿瘤体积计算公式：TV＝0.52×a×b²，其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式：T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％，T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

表10.多西他赛～树莓多糖联合用药对C57BL/6小鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表10和图10，多西他赛10mg/kg组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率为66.49％联合给药组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的抑瘤率分别为40.95％，70.90％和74.30％。联合使用时对黑色素瘤的抑制效果高于多西他赛单独使用。并且多西他赛毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。两者联合使用后，实验动物体重无明显下降，且实验过程中未出现动物死亡。

因此，黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，各个给药组组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(*P＜0.05，**P＜0.01)。多西他赛～树莓多糖低中高联合给药组对黑色素瘤B16F10小鼠移植瘤的生长具有显著性的抑制作用，且多西他赛～树莓多糖高联合给药组的抑制效果高于多西他赛单独用药组(^ΔP＜0.05)。说明树莓多糖能增强多西他赛的抗肿瘤能力。此外，与多西他赛相比，树莓多糖对实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例11

顺铂～树莓多糖联合对人肺癌H460裸鼠异种移植瘤生长抑制试验

取对数生长期的肿瘤细胞，在无菌条件下制备成5×10⁷/ml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100～200mm³后动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天1次，每次测量同时还需称量鼠重。给药方式如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；顺铂组10mg/kg，每周给药1次；顺铂～树莓多糖低中高联合给药组，顺铂采用皮下注射，10mg/kg，每周给药1次，树莓多糖采用灌胃，给药剂量分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，每天给药1次。肿瘤体积计算公式：

TV＝0.52×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

T/C(％)＝T_RTV/C_RTV×100％

T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV

表11.顺铂～树莓多糖联合用药对人肺癌H460裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表11和图11，顺铂10mg/kg组对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑瘤率为61.49％；顺铂～树莓多糖联合低、中、高剂量组对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为40.95％，65.90％，72.30％。其中，顺铂～树莓多糖高联合给药组的抑制效果高于顺铂单独用药组。此外，顺铂毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。两者联合使用后，实验动物体重无明显下降，且实验过程中未出现动物死亡。

因此，对人肺癌H460裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，顺铂10mg/kg组、顺铂～树莓多糖高中联合给药组对人肺癌H460移植瘤的生长具有极显著性的抑制作用(*P＜0.05，**P＜0.01)。与阳性对照顺铂相比，顺铂～树莓多糖高联合给药组对H460移植瘤的生长具有显著性的抑制作用(^ΔP＜0.05)，且实验动物的体重无明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例12

紫杉醇～树莓多糖联合对人肝癌Bel～7402裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验

具体实施方案参照实施例2。给药方案如下：阴性对照组注射等量生理盐水，每天1次；紫杉醇组10mg/kg，每周给药1次；紫杉醇～树莓多糖低中高联合给药组，紫杉醇采用皮下注射，10mg/kg，每周给药1次，树莓多糖采用灌胃，给药剂量分别为100mg/kg，200mg/kg、400mg/kg，每天给药1次。

表12.紫杉醇～树莓多糖对人肝癌Bel～7402裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用

结果：见表12和图12，紫杉醇10mg/kg组对人肝癌Bel～7402裸鼠移植瘤的抑瘤率为68.55％；紫杉醇～树莓多糖联合低、中、高剂量组对人肝癌Bel～7402裸鼠移植瘤的抑瘤率分别达45.31％，72.47％，76.47％。其中，紫杉醇～树莓多糖高中联合给药组的抑制效果高于紫杉醇单独用药组(^ΔP＜0.05)。且紫杉醇毒性较大，动物体重下降明显，实验过程中动物有死亡。两者联合使用后，实验动物体重无明显下降，且实验过程中未出现动物死亡。

因此，紫杉醇～树莓多糖对人肝癌Bel～7402裸鼠移植瘤生长抑制试验结果表明，与阴性对照组相比，紫杉醇10mg/kg组、紫杉醇～树莓多糖高中联合给药组对人肝癌Bel～7402移植瘤的生长有极显著性的抑制作用(*P＜0.05，**P＜0.01)。与阳性对照组紫杉醇相比，紫杉醇～树莓多糖高中联合给药对实验动物的体重没有明显影响，未见明显的毒副反应。

实施例13

树莓多糖对荷瘤小鼠肝脏、肾脏组织形态的影响

将实施例10～12抗肿瘤实验中的各组荷瘤小鼠麻醉后，分离肝脏和肾脏。将肝脏、肾脏浸泡于10％的甲醛溶液中固定。将固定好的组织经乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片贴片，二甲苯脱蜡，HE染色，脱水透明，封固后于光学显微镜下观察并拍照。

各组小鼠的肝组织切片如图13所示，正常小鼠的肝细胞边缘清晰，细胞质充盈，细胞核清晰，细胞排列整齐。相比之下，化疗药物组小鼠的肝细胞高度肿胀，部分区域肝组织灶性坏死，间质灶性炎细胞浸润。而化疗药物～树莓多糖联合组小鼠的肝细胞有明显恢复，其中化疗药物～树莓多糖高剂量联合组小鼠的肝细胞与正常小鼠肝细胞相似。可见，树莓多糖对化疗药物造成的荷瘤小鼠肝损伤有一定的修复作用。

各组小鼠的肾组织切片如图14所示，正常小鼠的肾小球形状规则，肾小球囊间隙小，肾小球基底膜完整。相比之下，化疗药物组小鼠的肾小球出现一定的退化和损伤，具体表现在肾小球基底膜扭曲，肾小囊间隙明显加宽。化疗药物～树莓多糖联合组小鼠的肾小球恢复非常明显，主要表现在肾小囊间隙较化疗药物组明显变小。可见，树莓多糖对化疗药物造成的荷瘤小鼠肾损伤也有一定的修复作用。

以上结果说明，树莓多糖能修复化疗药物治疗后引起的肝肾损伤，化疗药物与树莓多糖联合使用后毒副作用有所减小。

实施例14

树莓多糖对荷瘤小鼠脾脏指数的影响

实施例10～12抗肿瘤实验结束后，将小鼠麻醉，分离肿瘤组织和脾脏，称重。根据称重结果计算脾脏指数。计算公式：脾脏指数＝脾脏重量(g)/净体重(kg)，其中，净体重＝体重～瘤重。试验得到的结果以mean±SD表示，并进行统计T检验，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异(*：与阴性对照组相比，#与化疗药物组相比)。

结果见图15。与化疗药物组相比，化疗药物～树莓多糖低中高联合给药组的脾脏指数均显著增加。

实施例15

树莓多糖对糖尿病大鼠血糖和血脂的影响

本发明利用链脲霉素(STZ)诱导的大鼠糖尿病模型来评价树莓多糖胶囊主要成分树莓多糖的降血糖和降血脂的作用。

模型建立过程如下：造模前大鼠尾静脉取血测血糖，称体重。之后禁食12小时，在大鼠空腹状态下按60mg/kg的浓度一次性腹腔注射STZ(溶于pH4.2的0.1mol/L的柠檬酸盐缓冲液，于避光条件下现用现配)。96小时后尾静脉取血测血糖，血糖值≥16.7mmol/L的即认为糖尿病造模成功。将造模成功的大鼠随机分为5组，每组10只，分别是模型组、阳性对照组、树莓多糖低剂量组、树莓多糖中剂量组合树莓多糖高剂量组。另取10只同批健康大鼠作为正常对照组。大鼠分组当天称体重并灌胃给药，给药剂量如下：正常对照组：纯水；模型组：纯水；阳性药组：格列本脲片20mg/kg；树莓多糖低、中、高组给药剂量分别为：75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg。连续给药28天，每7天测量血糖并称体重。

(1)树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠基本体征的影响

表13.树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠体重的影响

^*p＜0.05vs模型组；^**p＜0.01vs模型组；^##p＜0.01vs正常组

如表13，造模后各组糖尿病大鼠的体重较正常大鼠均极显著下降(^##p＜0.01vs正常组)，垫料较正常大鼠的潮湿，符合糖尿病的基本体征。正常组大鼠的毛色有光泽，垫料干燥，体重稳步增长。模型组大鼠的毛色枯槁，轻度脱毛，垫料潮湿，随时间增长体重下降明显。各给药组大鼠的毛色较模型组好，垫料潮湿情况较模型组有所减轻，随给药时间增长平均体重虽有一定下降，但下降趋势比模型组平缓，其中阳性对照组大鼠最后一次测量的体重较模型组有显著性差异(^*p＜0.05vs模型组)，树莓多糖各剂量组大鼠最后一次测量的体重较模型组有极显著性差异(^*p＜0.05vs模型组)。与阳性药格列本脲相比，树莓多糖能更有效地防止糖尿病大鼠体重的减轻。

(2)树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠血糖的影响

表14.树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠血糖的影响

^**p＜0.01vs模型组；^##p＜0.01vs正常组

如表14所示，造模后，正常组大鼠的血糖无明显变化，各组糖尿病大鼠血糖较正常大鼠均极显著升高(^##p＜0.01vs正常组)治疗后，各给药组大鼠的血糖较模型组均有极显著性下降(^**p＜0.01vs模型组)，且树莓多糖的降血糖作用呈剂量依赖性。树莓多糖高剂量组大鼠最后一次测量的平均血糖值为17.84±1.41mmol/L，比阳性对照组大鼠最后一次测量的的平均血糖18.87±2.22还要低。

(3)树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的影响

实验第28天，大鼠腹腔注射水合氯醛溶液全身麻醉后，分离颈总动脉并插管收集血液。血液凝固后3000r/min离心10分钟获取血清样本。

表15.树莓多糖对STZ致糖尿病大鼠血脂的影响

^**p＜0.01vs模型组；^##p＜0.01vs正常组

如表15所示，与正常组相比，模型组大鼠血清中的TC、TG和LDL均极显著的增加，HDL极显著的下降(^##p＜0.01vs正常组)。治疗后，与模型组相比，各个治疗组大鼠血清中的TC、TG和LDL均极显著的下降，HDL极显著的增加(^**p＜0.01vs模型组)。其中，树莓多糖的降血脂的效果随剂量的增加而加强。树莓多糖中、高剂量组的降血脂效果甚至好于阳性对照药格列本脲片。

实施例16抗疲劳实验

本发明利用体内药效学实验来评价树莓多糖的抗疲劳能力。具体实验方法如下：将昆明种雄性健康小鼠(体重：25±3g，年龄：2～3周)分为4组，分别是空白对照组和树莓多糖高、中、低剂量组。树莓多糖高、中、低剂量组的给药剂量分别为200mg/kg，100mg/kg和50mg/kg，采用灌胃给药，每天一次。空白对照组给予等量蒸馏水。连续给药14天。各组小鼠于给药第7天开始进行适应性游泳训练，游泳时间由10分钟/天开始，逐天递增5分钟。实验最后一天，给药30分钟后，将小鼠置于水深30cm的游泳箱中游泳，水温控制在25℃左右，游泳90分钟。休息60分钟后立即摘除眼球取血，将取得的血液样品在室温放置片刻后离心(4℃，2000转，15分钟)，获得血清样品，于-80℃冰箱冻存备用。

(1)树莓多糖对小鼠血清尿素氮的影响

表16.树莓多糖对小鼠血清尿素氮的影响

*P＜0.05，**P＜0.01vs空白对照组

血清尿素氮是机体蛋白代谢的重要标志之一。运动使血清尿素氮升高，它是评价机体在体力负荷时承受能力的一项非常灵敏的指标。机体对负荷适应能力越差，血清尿素氮的增加就越明显。如表16所示，树莓多糖能显著降低小鼠血清的尿素氮含量，并呈现剂量依赖关系。其中，树莓多糖中剂量组与空白对照相比具有显著性差异(*P＜0.05vs空白对照)；树莓多糖高剂量组与空白对照相比具有极显著性差异(**P＜0.01vs空白对照组)。

(2)树莓多糖对小鼠血清中肌酸激酶的影响

表17.树莓多糖对小鼠血清中肌酸激酶的影响

*P＜0.05，**P＜0.01vs空白对照组

肌酸激酶与能量代谢密切相关，它参与糖酵解的控制、线粒体呼吸机肌肉收缩供能。研究表明，大量运动后，血清中的肌酸激酶活性显著升高。血清中肌酸激酶的变化能反映机体对运动的适应程度，适应程度越高，血清肌酸激酶活性会降低甚至恢复正常水平。由表17可见，树莓多糖能明显降低小鼠血清中肌酸激酶的含量，并呈现剂量依赖关系。其中，树莓多糖中剂量组与空白对照相比具有显著性差异(*P＜0.0.5vs空白对照)；树莓多糖高剂量组与空白对照相比具有极显著性差异(**P＜0.01vs空白对照组)。

(3)树莓多糖对小鼠血糖的影响

表18.树莓多糖对小鼠血清中血糖的影响

**P＜0.01vs空白对照组

如表18所示，树莓多糖能明显增加小鼠血清血糖的含量，并呈现剂量依赖关系。其中，树莓多糖高中剂量组与空白对照相比具有极显著性差异(**P＜0.01vs空白对照组)。

(4)树莓多糖对小鼠血清中乳酸(LD)含量的影响

表19.树莓多糖对小鼠血清中乳酸的影响

**P＜0.01vs空白对照组

乳酸由无氧代谢产生，其存在破坏了机体内环境的稳定性，影响心血管系统、骨骼肌系统功能的正常发挥，导致疲劳的产生。见表19，树莓多糖各均能极显著降低小鼠血清的乳酸含量(**P＜0.01vs空白对照组)，并呈现剂量依赖关系。

(5)树莓多糖对小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响

表20.树莓多糖对小鼠血清中乳酸脱氢酶的影响

**P＜0.01vs空白对照组

乳酸脱氢酶能分解体内的乳酸，及时清除体内乳酸对于疲劳的消除有非常积极的作用。如表20所示，树莓多糖能明显增加小鼠血清中乳酸脱氢酶的含量，并呈现剂量依赖关系。其中，树莓多糖高中剂量组与空白对照相比具有极显著性差异(**P＜0.01vs空白对照组)。

上述实验均表明，树莓多糖具有良好的抗疲劳功效。

实施例17泡腾片的制备

1)配比：

树莓多糖粉	60％
		柠檬酸	15％
碳酸氢钠	15％
		木糖醇	7％
聚乙二醇6000	3％

2)按比例称取各原料。将树莓多糖粉过400目筛后与有机酸混合，用乙醇均匀润湿，过20目筛制粒，将湿颗粒在45℃干燥，再过筛整粒得酸粒；将碱剂用乙醇均匀润湿，过20目筛制粒，将湿颗粒在45℃干燥，再过筛整粒得碱粒；混合酸粒和碱粒，加入甜味剂和润滑剂混合，压片成型。

实施例18泡腾片的制备

1)配比：

树莓多糖粉	54％
		柠檬酸	16％
碳酸氢钠	20％
		木糖醇	8％
聚乙二醇6000	3％

2)按比例称取各原料。将树莓多糖粉过400目筛后与有机酸混合，用乙醇均匀润湿，过20目筛制粒，将湿颗粒在45℃干燥，再过筛整粒得酸粒；将碱剂用乙醇均匀润湿，过20目筛制粒，将湿颗粒在45℃干燥，再过筛整粒得碱粒；混合酸粒和碱粒，加入甜味剂和润滑剂混合，压片成型。

Claims (10)

1.一种树莓多糖泡腾片，其特征在于：它是由如下重量配比的原辅料制备而成：

树莓多糖粉40％～70％，甜味剂0％～20％，碱剂5％～30％，可食用有机酸5％～30％，润滑剂0.5％～10％。

2.根据权利要求1所述的树莓多糖泡腾片，其特征在于：它是由如下重量配比的原辅料制备而成：

树莓多糖粉54％～60％，甜味剂7％～8％，碱剂15％～16％，可食用有机酸15％～20％，润滑剂3％。

3.根据权利要求1或2所述的树莓多糖泡腾片，其特征在于：所述润滑剂选自聚乙二醇6000或硬脂酸镁；所述甜味剂选自木糖醇；所述碱剂选自碳酸氢钠；所述可食用有机酸选自柠檬酸。

4.根据权利要求1～3任意一项所述树莓多糖泡腾片，其特征在于：其制备方法如下：

1)按比例称取各原辅料；

2)将树莓多糖过筛后与有机酸混合，用乙醇均匀润湿，制粒，干燥，再过筛整粒得酸粒；

3)将碱剂用乙醇均匀润湿，制粒，干燥，再过筛整粒得碱粒；

4)混合酸粒和碱粒，加入甜味剂和润滑剂混合，压片成型，即得泡腾片。

5.根据权利要求1～4任意一项所述树莓多糖泡腾片，其特征在于：所述树莓多糖中，多糖纯度在50％以上；进一步地，多糖纯度在80％以上；更进一步地，多糖纯度在85％以上；优选地，多糖纯度为85～95％w/w。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的树莓多糖泡腾片，其特征在于：所述树莓多糖采用水提醇沉法制备得到；进一步地，所述水提醇沉法具体操作如下：

取干燥树莓，石油醚或乙醚脱脂后，用浓度75～95％v/v乙醇提取，过滤，滤渣加水提取，取水提液浓缩后，加乙醇至含醇量达到75％～85％，冷却、静置，取固形物即为树莓多糖。

7.根据权利要求6所述的树莓多糖泡腾片，其特征在于：树莓提取前去籽或不去籽。

8.根据权利要求1～7任意一项所述的树莓多糖泡腾片，其特征在于：所述树莓为蔷薇科悬钩子属植物的果实；进一步地，所述树莓选自红树莓或黑树莓。

9.权利要求1～8任意一项所述树莓多糖泡腾片在制备抗肿瘤或者预防或治疗化疗药物所致毒副作用的食品、药品或保健品中的用途；

进一步地，所述肿瘤为黑色素瘤、鼻咽癌、肝癌、肺癌、脑胶质瘤、甲状腺癌、胰腺癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌或前列腺癌；所述化疗药物选自紫杉醇、顺铂或/和多西他赛。

10.权利要求1～8任意一项所述树莓多糖泡腾片在制备降血糖或抗疲劳的药物、保健品或食品中的用途。