CN105477370A - 甜茶和石斛的复合原茶的制备方法 - Google Patents

甜茶和石斛的复合原茶的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，将甜茶和石斛按1～2:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，往提取液加入石灰水调节pH至7.6～7.8，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。本发明制得的复合原茶不仅在糖尿病降糖方面具有协同作用，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。

Description

甜茶和石斛的复合原茶的制备方法
技术领域
本发明涉及一种复合原茶的制备方法，具体涉及一种甜茶和石斛的复合原茶的制备方法。
背景技术
糖尿病是慢性终身性疾病，随着人们生活水平的提高，其发病率呈逐年上升的趋势。为了控制血糖，长期的限糖饮食和药物治疗也严重影响了患者的生活质量。甜茶(RubusSuavissmusSLee)是广西特有的天然甜味植物的叶子，也是世界上最好的高甜、低热、安全无毒性且具有保健功能的甜味植物。甜茶中约含有4.1％的生物类黄酮、18.04％的甜茶多酚和5％的甜茶甙(Rubusoside)。研究发现甜茶甙能降低正常小鼠血糖水平，对小鼠糖异生具有明显的抑制作用。用甜茶提取物对链脲佐菌素诱发的高血糖大鼠灌胃，3周后测血糖、果糖胺、胰岛素和SOD等指标，发现甜茶提取物能显著地降低大鼠血糖，增强其抗氧化能力，同时能刺激胰岛素的分泌来降低血糖。
现有技术虽然公开了甜茶可单独用于治疗糖尿病，但其作用的靶点相对局限，无法有效防治糖尿病并发症的发生。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，该复合原茶不仅在糖尿病降糖方面具有协同作用，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。
本发明提供的技术方案是甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，将甜茶和石斛按1～2:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，往提取液加入石灰水调节pH至7.6～7.8，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
石斛为兰科植物金钗石斛DendrobiumnobileLindl.、鼓槌石斛DendrobiumchrysotoxumLindl.或流苏石斛Den-drobiumfimbriatumHook.的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥茎。
步骤1)中，用体积浓度为60～75％的乙醇提取甜茶和石斛中的多糖、多酚等成分。石灰水调节pH至7.6～7.8，可将提取液中的多酚类物质络合沉淀。甜茶多酚分子中有多个邻位酚羟基，可作为多基配体与Ca2+络合，形成环状的螯合物而产生沉淀，在pH值为7.6～7.8时，甜茶多酚以一个离子态的氧负离子及一个酚羟基与Ca2+络合，或以二个离子态的氧负离子与Ca2+络合，形成的是一配基络合物沉淀。同时，在该pH值条件下，甜茶多酚还与石斛多糖分子也形成了一配基络合物沉淀。
在超声波条件1～3次，每次1～2h；超声波条件为：温度40～50℃、频率为250～400Hz。优选超声波频率为300～400Hz。每次提取时，乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的4～10倍。
甜茶与石斛的优选重量比为1:1。
本发明的原茶可以按照常规工艺加以调配成复合茶，以供糖尿病人饮用。
与现有技术相比，本发明将甜茶和石斛中的多酚分子与Ca2+络合生成一配基络合物沉淀，以及甜茶和石斛多酚分子还可与石斛多糖分子络合形成一配基络合物沉淀，上述一配基络合物的混合物能起到协同降糖效果，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。经验证，该混合络合物的降糖效果远远优于甜茶和石斛的常规提取物。
具体实施方式
实施例1
将甜茶叶和石斛茎按1:1重量比混合粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的4倍，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，往提取液中加入石灰水调节pH至7.6，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
对照例1
将石斛茎粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量石斛重量的4倍，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，将提取液减压浓缩回收溶剂，冷冻干燥，即为石斛原茶。
对照例2
将甜茶叶粉碎，加入甜茶重量4倍的水，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，将提取液浓缩至浸膏，冷冻干燥，即为甜茶原茶。
实施例2
将甜茶叶和石斛茎按1:10重量比混合粉碎，加入75v％的乙醇，乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的10倍，在温度50℃、频率为400Hz的超声波条件下提取3次，每次2h，合并提取液，往提取液中加入石灰水调节pH至7.8，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
实施例3
将甜茶叶和石斛茎按2:1重量比混合粉碎，加入70v％的乙醇，乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的6倍，在温度45℃、频率为300Hz的超声波条件下提取2次，每次1.5h，合并提取液，往提取液中加入石灰水调节pH至7.8，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
实施例4
将甜茶叶和石斛茎按2:10重量比混合粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的10倍，在温度40℃、频率为400Hz的超声波条件下提取2h，合并提取液，往提取液中加入石灰水调节pH至7.7，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
实验例
1、糖尿病小鼠模型的建立
将体重在18～22g的健康昆明小鼠100只，雌雄各半，进行适应性喂养一周后随机抽取20只为空白对照组，除空白对照组小鼠喂养正常饲料外其余80只小鼠均喂养高脂饲料，喂养4周后均禁食过夜，称取每只小鼠体重，并根据每只小鼠体重，给除空白组外的80只小鼠左下腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)柠檬酸-柠檬酸钠注射液200mg/kg，空白对照组只注射相等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。注射STZ3天后，禁食12h，尾静脉取血测其空腹血糖，以空腹血糖≥11.1mmol/L的为实验性Ⅱ型糖尿病小鼠模型建立成功的标准。
高脂饲料配方：基础饲料78.8％、蛋黄粉10％、猪油10％、胆固醇1％、胆酸钠0.2％。
将模型建立成功的小鼠随机分为模型对照组、实验组、对照组1、对照组2，每组20只。模型对照组继续给予高脂饲料，用蒸馏水灌胃。其余各组在给予高脂饲料的同时，分别按剂量350mg/kg给予实施例1、对照例1以及对照例2的原茶灌胃。每天早上9点灌胃，每天1次，连续灌胃12周，第12周给药后禁食12h，对每只小鼠按剂量2g/kg葡萄糖灌胃后在其相应时间尾静脉取血测定的糖耐量，之后，称量每只小鼠的体重，采取摘眼球方法取血1.5ml，于3500r/min离心10分钟后吸取上层血清，取摘取小鼠的肝、脾、肾、胰腺，用生理盐水洗净并用干净滤纸吸干后称重和血清一起立即放在-80℃冰箱中保存，备用。
2、对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的实验
灌胃处理12周后，各组小鼠均禁食8h，采取小鼠尾静脉取血测得的血糖值作为0h的血糖值，接着按剂量2g/kg灌胃葡萄糖溶液，然后在灌胃后0.5、1、1.5、2h尾静脉取血测定血糖值。观察各组在各时间点上血糖浓度的变化。
3、各项指标的测定
在糖尿病小鼠模型建立成功后每天观察小鼠的一般情况，如毛发色泽、活动频率、进食进水量、体重等。在灌胃给药12周内每周五早上称量各组小鼠的体重，并且在禁食12h后采用尾静脉取血测定各组小鼠的空腹血糖值。
3.1血液标本指标
去眼球取血，3500r/min离心10min，分离血清，用全自动生化仪测定血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(SCr)；用酶标仪测定糖化血红蛋白(GHbA1c)、生物转化因子β1(TGF-β1)。
3.2尿液标本指标
实验结束前一天收集24h尿，计量后取4ml，3000r/min离心10min去除沉渣，取2ml测定24h尿微量蛋白(mALB)和尿肌酐(UCr)。
4、实验结果：
4.1复合原茶对STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影响见表1：
表1复合原茶对STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影响(n＝20)
注：各组与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
4.2复合原茶对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影响见表2：
表2复合原茶对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影响
由表1和表2可知，实验组的原茶具有明显的降血糖作用，改善其糖耐量，有效的调节了糖尿病小鼠体内的糖代谢。
4.3复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TC\TG的影响见表3：
表3复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TC\TG的影响(n＝20)
组别 TC(mmol/l) TG(mmol/l)
空白对照组 3.00±0.61△ 1.15±0.33△
模型对照组 4.72±3.22 1.36±0.72
实验组 3.70±1.43△ 1.16±0.53△
对照组1 4.29±1.37△△ 1.22±0.65△
对照组2 4.18±1.73△ 1.24±0.85△
注：给药12周后各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表3可知，实验组的复合原茶能通过降低糖尿病小鼠体内过高的胆固醇TC，三酰甘油TG，增强机体脂质代谢的能力，且效果明显优于对照组。
4.4复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TGF-β1、mALB、GHbA1c的影响见表4：
表4复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TGF-β1、mALB、GHbA1c的影响( n＝20)
组别 TGF-β1(pg/ml) mALB(μg/ml) GHbA1c(ng/ml)
空白对照组 6.67±1.21△△ 1.46±1.02△ 4.77±1.09△
模型对照组 17.11±1.30 19.91±3.61 13.77±1.02
实验组 7.28±1.04△ 7.60±2.70△ 5.65±1.80△△
对照组1 10.04±1.23△△ 11.60±2.15△△ 7.89±0.88△
对照组2 10.91±1.06△ 10.60±2.70△ 7.65±1.80△△
注：给药12周后各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表5可知，生物转化因子β1是导致糖尿病小鼠肾脏损伤的重要因子，实验组的复合原茶能够显著地降低糖尿病小鼠体内生物转化因子β1的含量，且效果强于对照组。表明实验组对糖尿病小鼠的肾脏具有保护作用，并对糖尿病肾病的发生和发展起到一定的预防作用。
实验组的复合原茶能明显降低小鼠体内糖化血红蛋白水平，很大程度上减轻了由于糖化血红蛋白水平升高引起的组织缺氧，减轻了糖化血红蛋白水平升高导致的尤其是发生在肾脏末梢微血管丰富的部位微血管病变，进而减轻由此引起组织细胞缺血缺氧和组织损伤，进而尿微量白蛋白的含量也显著降低。实验组的复合原茶能显著降低糖尿病小鼠体内尿微量白蛋白和糖化血红蛋白的含量，对预防糖尿病肾病有一定的作用，且效果明显优于对照组。
5.5复合原茶对STZ致糖尿病小鼠血肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)的影响见表5：
表5复合原茶对STZ致糖尿病小鼠血肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)的影响(n＝20)
组别 SCr(μmol/l) UCr(μmol/l)
空白对照组 9.43±1.41△△ 425.77±1.23△
模型对照组 16.91±1.02* 103.32±1.04**
实验组 9.61±1.70**△△ 221.78±1.20*△
对照组1 10.60±1.15*△ 161.89±0.98*△△
对照组2 10.73±1.64**△△ 158.65±1.36**△△
注：给药12周后各组与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表5可知，血肌酐和尿肌酐都是反映肾脏损伤程度的指标。实验组复合原茶能显著地降低糖尿病小鼠体内血肌酐的含量，并且可以显著地提高糖尿病小鼠体内尿肌酐的含量，说明实验组复合原茶原茶可以有效调节二者在糖尿病小鼠体内的浓度，从而达到保护肾脏的作用，且效果明显优于对照组。
由表1～表5可知，实验组的复合原茶能够通过降低糖尿病小鼠体内过高的胆固醇、三酰甘油，增强机体脂质代谢的能力，显著降低糖尿病小鼠体内的血糖水平，改善其糖耐量，同时还能够提高糖尿病小鼠血液、尿液中的尿肌酐的含量，降低糖尿病小鼠血液、尿液中血肌酐、转化生长因子-β1、尿微量白蛋白、糖化血红蛋白含量的功效，减轻糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤，对预防糖尿病小鼠肾脏的损伤具有保护作用。

Claims (5)

1.甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，其特征在于：将甜茶和石斛按1～2:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，往提取液加入石灰水调节pH至7.6～7.8，离心，滤去上清液，取沉淀物冷冻干燥，即为复合原茶。
2.根据权利要求1所述的甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，其特征在于：在超声波条件1～3次，每次1～2h；所述超声波条件为：温度40～50℃、频率为250～400Hz。
3.根据权利要求2所述的甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，其特征在于：所述超声波频率为300～400Hz。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，其特征在于：乙醇的加入量为甜茶和石斛总重的4～10倍。
5.根据权利要求1～3中任一项所述的甜茶和石斛的复合原茶的制备方法，其特征在于：甜茶与石斛的重量比为1：1。
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