CN105412367A - 银杏与石崖茶复合原茶的制备方法 - Google Patents

银杏与石崖茶复合原茶的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，将银杏叶和石崖茶按1～5:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，将提取液浓缩，加入乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶。本发明制得的复合原茶不仅在糖尿病降糖方面具有协同作用，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。

Description

银杏与石崖茶复合原茶的制备方法
技术领域
本发明涉及一种复合原茶的制备方法，具体涉及一种银杏与石崖茶复合原茶的制备方法。
背景技术
石崖茶(AdinandranitidaMerr.exH.L.Li)，又名亮叶杨桐的干燥叶，富含黄酮、酚类物质，具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。《亮叶杨桐的抗氧化活性研究》(发表于2013年5月的西南大学硕士研究生论文，张静怡)公开了将石崖茶的乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，分别真空浓缩干燥后得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，经检测，乙酸乙酯萃取物中黄酮和多酚含量最高。根据相似相容原理，黄酮和多酚在乙酸乙酯中溶解度最高，这说明石崖茶中的有效成分--黄酮和多酚的极性接近于乙酸乙酯。该论文还进一步指出，将三种萃取物进行体外清除自由基、HepG2细胞膜性抗氧化实验测定对体外各种自由基(如超氧阴离子、羟基自由基、DPPH、ABTS自由基等)的清除能力及总还原能力，测定各萃取物对HepG2细胞内活性氧的清除能力，结果发现乙酸乙酯的抗氧化能力最强。将乙酸乙酯萃取物进行长期动物实验，结果表明，乙酸乙酯萃取物可以提高小鼠机体酶促抗氧化防御系统如SOD、CAT的活力，增强自身抗氧化、清除自由基的能力，促进损伤的胰岛素细胞恢复，改善胰岛细胞的生理功能，实现胰岛素分泌水平的正常化，降低STZ诱导的糖尿病小鼠空腹血糖，并增加血浆胰岛素含量。该论文说明了乙酸乙酯可有效提取石崖茶中的黄酮与多酚成分，乙酸乙酯萃取物中黄酮与多酚含量最高，乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性与降血糖效果最好，即石崖茶降血糖效果与黄酮与多酚的含量呈正相关。
现有技术虽然公开了石崖茶可单独用于治疗糖尿病，但其作用的靶点相对局限，无法有效防治糖尿病并发症的发生。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，该复合原茶不仅在糖尿病降糖方面具有协同作用，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。
本发明提供的技术方案是银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，将银杏叶和石崖茶混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，将提取液浓缩，加入乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶原茶。
上述银杏叶为银杏科为银杏科植物银杏GinkgobilobaL.的干燥叶。具有活血化瘀、通络止痛、化浊降脂的功效。
步骤1)中，用体积浓度为60～75％的乙醇提取银杏和石崖茶中的黄酮、多酚等有效成分。乙酸乙酯的作用在于调节极性，使得不溶于乙酸乙酯的组分析出。
上述提取液进行浓缩时，浓缩至提取液原体积的1/2～1/5。用浓缩液体积的2～3倍的乙酸乙酯进行沉淀。
在超声波条件1～3次，每次1～2h；超声波条件为：温度40～50℃、频率为250～400Hz。优超声波频率为300～400Hz。每次提取时，乙醇的加入量为银杏叶和石崖茶总重的4～10倍。
银杏叶与石崖茶的优选重量比为1:1。
本发明的原茶可以按照常规工艺加以调配成复合茶，以供糖尿病人饮用。
与现有技术相比，本发明提取了石崖茶和银杏的乙醇提取物中不溶于乙酸乙酯的组分，即去除了乙醇提取物中与乙酸乙酯极性相近似的组分，将其用以制成复合原茶，不仅具有很好的降糖效果，并对改善糖尿病并发症脂代谢异常和肾脏损伤具有一定的保护作用。
具体实施方式
实施例1
将银杏叶和石崖茶按1:1重量比混合粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量为银杏和石崖茶总重的4倍，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，将提取液浓缩至原体积的1/2，加入浓缩液体积的2倍的乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶原茶。
对照例1
将石崖茶粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量石崖茶重量的4倍，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，将提取液加入乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯萃取物减压浓缩回收溶剂，冷冻干燥，即为石崖茶原茶。
对照例2
将银杏叶粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量为银杏叶重量的4倍，在温度40℃、频率为250Hz的超声波条件下提取1h，将提取液浓缩回收溶剂，冷冻干燥，即为银杏原茶。
实施例2
将银杏叶和石崖茶按1:10重量比混合粉碎，加入75v％的乙醇，乙醇的加入量为银杏叶和石崖茶总重的10倍，在温度50℃、频率为400Hz的超声波条件下提取3次，每次2h，将提取液合并，浓缩至原体积的1/5，加入浓缩液体积的3倍的乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶原茶。
实施例3
将银杏叶和石崖茶按5:1重量比混合粉碎，加入70v％的乙醇，乙醇的加入量为银杏叶和石崖茶总重的6倍，在温度45℃、频率为300Hz的超声波条件下提取2次，每次1.5h，将提取液合并，浓缩至原体积的1/3，加入浓缩液体积的2.5倍的乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶原茶。
实施例4
将银杏叶和石崖茶按5:10重量比混合粉碎，加入60v％的乙醇，乙醇的加入量为银杏叶和石崖茶总重的10倍，在温度40℃、频率为400Hz的超声波条件下提取2h，将提取液浓缩至原体积的1/5，加入浓缩液体积的2倍的乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶原茶。
实验例
1、糖尿病小鼠模型的建立
将体重在18～22g的健康昆明小鼠100只，雌雄各半，进行适应性喂养一周后随机抽取20只为空白对照组，除空白对照组小鼠喂养正常饲料外其余80只小鼠均喂养高脂饲料，喂养4周后均禁食过夜，称取每只小鼠体重，并根据每只小鼠体重，给除空白组外的80只小鼠左下腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)柠檬酸-柠檬酸钠注射液200mg/kg，空白对照组只注射相等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。注射STZ3天后，禁食12h，尾静脉取血测其空腹血糖，以空腹血糖≥11.1mmol/L的为实验性Ⅱ型糖尿病小鼠模型建立成功的标准。
高脂饲料配方：基础饲料78.8％、蛋黄粉10％、猪油10％、胆固醇1％、胆酸钠0.2％。
将模型建立成功的小鼠随机分为模型对照组、实验组、对照组1、对照组2，每组20只。模型对照组继续给予高脂饲料，用蒸馏水灌胃。其余各组在给予高脂饲料的同时，分别按剂量350mg/kg给予实施例1、对照例1以及对照例2的原茶灌胃。每天早上9点灌胃，每天1次，连续灌胃12周，第12周给药后禁食12h，对每只小鼠按剂量2g/kg葡萄糖灌胃后在其相应时间尾静脉取血测定的糖耐量，之后，称量每只小鼠的体重，采取摘眼球方法取血1.5ml，于3500r/min离心10分钟后吸取上层血清，取摘取小鼠的肝、脾、肾、胰腺，用生理盐水洗净并用干净滤纸吸干后称重和血清一起立即放在-80℃冰箱中保存，备用。
2、对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的实验
灌胃处理12周后，各组小鼠均禁食8h，采取小鼠尾静脉取血测得的血糖值作为0h的血糖值，接着按剂量2g/kg灌胃葡萄糖溶液，然后在灌胃后0.5、1、1.5、2h尾静脉取血测定血糖值。观察各组在各时间点上血糖浓度的变化。
3、各项指标的测定
在糖尿病小鼠模型建立成功后每天观察小鼠的一般情况，如毛发色泽、活动频率、进食进水量、体重等。在灌胃给药12周内每周五早上称量各组小鼠的体重，并且在禁食12h后采用尾静脉取血测定各组小鼠的空腹血糖值。
3.1血液标本指标
去眼球取血，3500r/min离心10min，分离血清，用全自动生化仪测定血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(SCr)；用酶标仪测定糖化血红蛋白(GHbA1c)、生物转化因子β1(TGF-β1)。
3.2尿液标本指标
实验结束前一天收集24h尿，计量后取4ml，3000r/min离心10min去除沉渣，取2ml测定24h尿微量蛋白(mALB)和尿肌酐(UCr)。
4、实验结果：
4.1复合原茶对STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影响见表1：
表1复合原茶对STZ致糖尿病小鼠空腹血糖的影响(n＝20)
注：各组与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
4.2复合原茶对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影响见表2：
表2复合原茶对STZ致糖尿病小鼠糖耐量的影响
由表1和表2可知，实验组的原茶具有明显的降血糖作用，改善其糖耐量，有效的调节了糖尿病小鼠体内的糖代谢。
4.3复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TC\TG的影响见表3：
表3复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TC\TG的影响(n＝20)
组别 TC(mmol/l) TG(mmol/l)
空白对照组 3.00±0.61△ 1.15±0.33△
模型对照组 4.72±3.22 1.36±0.72
实验组 3.70±1.43△ 1.16±0.53△
对照组1 4.29±1.37△△ 1.22±0.65△
对照组2 4.18±1.73△ 1.24±0.85△
注：给药12周后各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表3可知，实验组的复合原茶能通过降低糖尿病小鼠体内过高的胆固醇TC，三酰甘油TG，增强机体脂质代谢的能力，且效果明显优于对照组。
4.4复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TGF-β1、mALB、GHbA1c的影响见表4：
表4复合原茶对STZ致糖尿病小鼠TGF-β1、mALB、GHbA1c的影响( n＝20)
组别 TGF-β1(pg/ml) mALB(μg/ml) GHbA1c(ng/ml)
空白对照组 6.67±1.21△△ 1.46±1.02△ 4.77±1.09△
模型对照组 17.11±1.30 19.91±3.61 13.77±1.02
实验组 7.28±1.04△ 7.60±2.70△ 5.65±1.80△△
对照组1 10.04±1.23△△ 11.60±2.15△△ 7.89±0.88△
对照组2 10.91±1.06△ 10.60±2.70△ 7.65±1.80△△
注：给药12周后各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表4可知，生物转化因子β1是导致糖尿病小鼠肾脏损伤的重要因子，实验组的复合原茶能够显著地降低糖尿病小鼠体内生物转化因子β1的含量，且效果强于对照组。表明实验组对糖尿病小鼠的肾脏具有保护作用，并对糖尿病肾病的发生和发展起到一定的预防作用。
实验组的复合原茶能明显降低小鼠体内糖化血红蛋白水平，很大程度上减轻了由于糖化血红蛋白水平升高引起的组织缺氧，减轻了糖化血红蛋白水平升高导致的尤其是发生在肾脏末梢微血管丰富的部位微血管病变，进而减轻由此引起组织细胞缺血缺氧和组织损伤，进而尿微量白蛋白的含量也显著降低。实验组的复合原茶能显著降低糖尿病小鼠体内尿微量白蛋白和糖化血红蛋白的含量，对预防糖尿病肾病有一定的作用，且效果明显优于对照组。
4.5复合原茶对STZ致糖尿病小鼠血肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)的影响见表5：
表5复合原茶对STZ致糖尿病小鼠血肌酐(SCr)和尿肌酐(UCr)的影响(n＝20)
组别 SCr(μmol/l) UCr(μmol/l)
空白对照组 9.43±1.41△△ 425.77±1.23△
模型对照组 16.91±1.02* 103.32±1.04**
实验组 9.61±1.70**△△ 221.78±1.20*△
对照组1 10.60±1.15*△ 161.89±0.98*△△
对照组2 10.73±1.64**△△ 158.65±1.36**△△
注：给药12周后各组与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；各组与模型对照组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
由表5可知，血肌酐和尿肌酐都是反映肾脏损伤程度的指标。实验组复合原茶能显著地降低糖尿病小鼠体内血肌酐的含量，并且可以显著地提高糖尿病小鼠体内尿肌酐的含量，说明实验组复合原茶可以有效调节二者在糖尿病小鼠体内的浓度，从而达到保护肾脏的作用，且效果明显优于对照组。
由表1～表5可知，实验组的复合原茶能够通过降低糖尿病小鼠体内过高的胆固醇、三酰甘油，增强机体脂质代谢的能力，显著降低糖尿病小鼠体内的血糖水平，改善其糖耐量，同时还能够提高糖尿病小鼠血液、尿液中的尿肌酐的含量，降低糖尿病小鼠血液、尿液中血肌酐、转化生长因子-β1、尿微量白蛋白、糖化血红蛋白含量的功效，减轻糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤，对预防糖尿病小鼠肾脏的损伤具有保护作用。

Claims (7)

1.银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：将银杏叶和石崖茶按1～5:1～10重量比混合，加入60～75v％的乙醇，在超声波条件下提取，将提取液浓缩，加入乙酸乙酯进行沉淀，抽滤，取沉淀冷冻干燥，即为复合原茶。
2.根据权利要求1所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：所述浓缩是将提取液浓缩至原体积的1/2～1/5。
3.根据权利要求2所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：所述乙酸乙酯的加入量为浓缩液体积的2～3倍。
4.根据权利要求1所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：在超声波条件1～3次，每次1～2h；所述超声波条件为：温度40～50℃、频率为250～400Hz。
5.根据权利要求4所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：所述超声波频率为300～400Hz。
6.根据权利要求1～6中任一项所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：乙醇的加入量为银杏叶和石崖茶总重的4～10倍。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的银杏与石崖茶复合原茶的制备方法，其特征在于：银杏叶与石崖茶的重量比为1:1。
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