CN104871752B - 一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，包括以下步骤：(1)对可密闭的塑料大棚预消毒；(2)苗木预消毒；(3)苗木定期消毒；(4)剪取新枝。本发明的有益效果为：(1)操作简单，消毒效果好；(2)可持续进行，生产成本低；(3)污染率低，最低为2.7％。

Description

一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法

技术领域

本发明属于橡胶树(Hevea brasiliensis)苗木组织培养快速繁殖技术，具体地说是涉及一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法。

背景技术

目前橡胶树种植材料无性繁殖技术有芽接、扦插和离体微型繁殖等几种。丛生芽诱导技术是一项重要的离体微繁技术，但橡胶树丛生芽诱导技术因其外植体通常是直接取自大田中生长的被大量细菌及内吸性真菌污染的带芽茎段等，造成组织培养污染率很高，几乎为100％，而失败或效率很低。许多科研工作者采用多菌灵、百菌清、杀毒矾、庆大霉素、羧苄青霉素钠、噻孢霉素、链霉素、四环素等试剂单独或者混合药液浸泡外植体作为消毒前的预处理，或者在固体培养基上添加益培隆杀菌剂，这些尝试能在一定程度上降低污染率，但还是不能从根本上解决问题。因此，探索新的外植体高效消毒技术，对解决橡胶树苗木丛生芽诱导培养过程中污染率高的问题有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，以克服其培养过程中污染率高的问题，弥补了现有技术中的不足之处。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对可密闭的塑料大棚预消毒：在橡胶树苗木移入前10天，每隔5天一次，第一次用浓度为0.1％的多菌灵，第二次用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒塑料大棚地面和四周，消毒处理时间为午后，喷药后密闭塑料大棚；

(2)苗木预消毒：苗木移入塑料大棚前，先用浓度为0.1％的多菌灵或者浓度为0.1％的代森锰锌药液对其全株进行喷洒消毒；

(3)苗木定期消毒：将经预消毒过的苗木移入塑料大棚培养，其后每隔7天交替使用浓度为0.1％的多菌灵和浓度为0.1％的代森锰锌或者单用浓度为0.1％的多菌灵亦或者单用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒苗木植株、地面以及塑料大棚四周一次，消毒处理时间为午后；

(4)剪取新枝：待处于塑料大棚内经定期消毒处理的苗木顶部新抽出幼嫩芽段时，从其基部剪断，取出芽段作为组织培养用的外植体材料。

本发明的有益效果为：(1)操作简单，消毒效果好；(2)可持续进行，生产成本低；(3)污染率低，最低为2.7％。

具体实施方式

下面对本发明的橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法做进一步详细说明。

实施例1

实施例1所述的橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，包括以下步骤：

(1)对可密闭的塑料大棚预消毒：在橡胶树苗木移入前10天，每隔5天一次，第一次用浓度为0.1％的多菌灵，第二次用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒塑料大棚地面和四周，消毒处理时间为午后，喷药后密闭塑料大棚；

(2)苗木预消毒：苗木移入塑料大棚前，先用浓度为0.1％的多菌灵或者浓度为0.1％的代森锰锌药液对其全株进行喷洒消毒；

(3)苗木定期消毒：将经预消毒过的苗木移入塑料大棚培养，其后每隔7天交替使用浓度为0.1％的多菌灵和浓度为0.1％的代森锰锌喷洒苗木植株、地面以及塑料大棚四周一次，消毒处理时间为午后；

(4)剪取新枝：待处于塑料大棚内经定期消毒处理的苗木顶部新抽出幼嫩芽段时，从其基部剪断，取出芽段作为组织培养用的外植体材料，用灭菌牛皮纸将枝条带回实验室。

实施例2

实施例2所述的橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，包括以下步骤：

(1)对可密闭的塑料大棚预消毒：在橡胶树苗木移入前10天，每隔5天一次，第一次用浓度为0.1％的多菌灵，第二次用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒塑料大棚地面和四周，消毒处理时间为午后，喷药后密闭塑料大棚；

(2)苗木预消毒：苗木移入塑料大棚前，先用浓度为0.1％的多菌灵或者浓度为0.1％的代森锰锌药液对其全株进行喷洒消毒；

(3)苗木定期消毒：将经预消毒过的苗木移入塑料大棚培养，其后每隔7天单用浓度为0.1％的多菌灵喷洒苗木植株、地面以及塑料大棚四周一次，消毒处理时间为午后；

(4)剪取新枝：待处于塑料大棚内经定期消毒处理的苗木顶部新抽出幼嫩芽段时，从其基部剪断，取出芽段作为组织培养用的外植体材料，用灭菌牛皮纸将枝条带回实验室。

实施例3

实施例3所述的橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，包括以下步骤：

(1)对可密闭的塑料大棚预消毒：在橡胶树苗木移入前10天，每隔5天一次，第一次用浓度为0.1％的多菌灵，第二次用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒塑料大棚地面和四周，消毒处理时间为午后，喷药后密闭塑料大棚；

(2)苗木预消毒：苗木移入塑料大棚前，先用浓度为0.1％的多菌灵或者浓度为0.1％的代森锰锌药液对其全株进行喷洒消毒；

(3)苗木定期消毒：将经预消毒过的苗木移入塑料大棚培养，其后每隔7天单用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒苗木植株、地面以及塑料大棚四周一次，消毒处理时间为午后；

(4)剪取新枝：待处于塑料大棚内经定期消毒处理的苗木顶部新抽出幼嫩芽段时，从其基部剪断，取出芽段作为组织培养用的外植体材料，用灭菌牛皮纸将枝条带回实验室。

之后，在超净工作台上将实施例1、2和3得到的幼嫩芽段剪成2-3cm长的枝条并浸入浓度为70-75％的酒精中消毒30s，再用无菌水不断摇动冲洗3-4次，然后浸入浓度为0.1％的升汞中6min，其间不断摇动，然后再用无菌水不断摇动冲洗6次后，用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌刀切取长0.3-0.4cm带侧芽或顶芽的芽段接种于MS培养基上进行培养，培养条件为：光照时间为14h／d，光照强度2000～2500lx，培养温度为26±1℃。

实验结果

接种30天后统计外植体污染率，结果表明，采用未经预处理的大田外植体的污染率为100％；定期对密闭空间内植株喷洒浓度为0.1％的多菌灵外植体的污染率为6.9％；定期对密闭空间内植株喷洒浓度为0.1％的代森锰锌外植体的污染率为8.5％；定期对密闭空间内植株隔次交替喷洒浓度为0.1％的多菌灵和浓度为0.1％的代森锰锌外植体的污染率为2.7％。其中以定期对密闭空间内植株进行消毒是采取隔次交替喷洒浓度为0.1％的多菌灵和浓度为0.1％的代森锰锌的效果最好，其次是单独喷洒浓度为0.1％的多菌灵，再次是单独喷洒浓度为0.1％的代森锰锌。

上述仅对本发明中的几种具体实施例加以说明，但并不能作为本发明的保护范围，凡是依据本发明中的设计精神所作出的等效变化或修饰，均应认为落入本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种橡胶树苗木丛生芽诱导培养前的外植体预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对可密闭的塑料大棚预消毒：在橡胶树苗木移入前10天，每隔5天一次，第一次用浓度为0.1％的多菌灵，第二次用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒塑料大棚地面和四周，消毒处理时间为午后，喷药后密闭塑料大棚；

(2)苗木预消毒：苗木移入塑料大棚前，先用浓度为0.1％的多菌灵或者浓度为0.1％的代森锰锌药液对其全株进行喷洒消毒；

(3)苗木定期消毒：将经预消毒过的苗木移入塑料大棚培养，其后每隔7天交替使用浓度为0.1％的多菌灵和浓度为0.1％的代森锰锌或者单用浓度为0.1％的多菌灵亦或者单用浓度为0.1％的代森锰锌药液喷洒苗木植株、地面以及塑料大棚四周一次，消毒处理时间为午后；

(4)剪取新枝：待处于塑料大棚内经定期消毒处理的苗木顶部新抽出幼嫩芽段时，从其基部剪断，取出芽段作为组织培养用的外植体材料。