CN104855542A

CN104855542A - 一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法

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Publication number: CN104855542A
Application number: CN201510228236.5A
Authority: CN
Inventors: 王兴国; 邹孝强; 金青哲; 黄健花; 刘睿杰; 常明; 王小三; 潘秋琴
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2015-05-06
Filing date: 2015-05-06
Publication date: 2015-08-26
Anticipated expiration: 2035-05-06
Also published as: WO2016176988A1; CN104855542B

Abstract

本发明公开了一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，该方法主要包括两步，第一步为通过酸解调节鲶鱼油或其分提物的大量脂肪酸组成(>1％)，第二步为通过物理混合调节酶解产物的微量脂肪酸(<1％)组成。该方法所用原料鲶鱼油及其分提物来源广泛，价格低廉，自身含有较高的sn-2棕榈酸和较低的总棕榈酸含量，酸解反应中所用游离脂肪酸比例小，工艺中同时强调大量脂肪酸组成及分布以及包括中碳链及长碳链多不饱和脂肪酸的微量脂肪酸组成，所得产品同人乳脂肪具有极高的相似度，具有较大的市场应用前景。

Description

一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法

技术领域

本发明属于油脂技术领域，具体涉及一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法。

背景技术

脂肪在人乳中占3-5％，是新生儿主要的能量来源(>50％)，其中，甘油三酯占98％以上。人乳脂肪中含有大约200多种脂肪酸，包括中碳链脂肪酸，饱和脂肪酸，单不饱和脂肪酸，多不饱和脂肪酸，奇数碳链脂肪酸，支链脂肪酸，反式脂肪酸以及羟基脂肪酸等。在这些脂肪酸中，含量大于1％的脂肪酸有油酸(25-35％)、棕榈酸(20-30％)、亚油酸(10-20％)、硬脂酸(5-9％)、肉豆蔻酸(4-9％)、月桂酸(3-7％)以及棕榈油酸(1-3％)。人乳脂肪中甘油三酯的脂肪酸分布比较独特，60％以上的棕榈酸分布在甘油三酯的sn-2位，其他的不饱和脂肪酸主要分布在sn-1,3位。由于这种特殊的脂肪酸分布，人乳脂肪虽然含有200多种脂肪酸，但是其TAG的种类却远远小于随机分布的3²⁰⁰种。人乳脂肪中，TAG含量最多的是USU，如OPO和OPL等。这种结构的甘油三酯同婴幼儿对脂肪的消化、吸收和代谢有重要关系。婴幼儿摄取的脂肪大约有10～30％被舌脂肪酶和胃脂肪酶(对甘油三酯sn-3位有选择性的脂肪酶)水解成为sn-1,2-甘油二酯，大多数甘油三酯被胰脂肪酶(对甘油三酯sn-1,3有选择性的脂肪酶)在小肠中水解成为sn-2单甘酯。sn-2单甘脂可以同胆盐结合以初始形式被吸收，并在小肠上皮细胞中再次酯化为甘油三酯，最后转化为乳糜微粒进入淋巴循环，为机体组织提供能量。在此过程中，60～70％的sn-2位脂肪酸保留在原来的位置。因此，饱和脂肪酸位于甘油三酯的sn-2位将有利于婴幼儿对其吸收，同时避免由于饱和脂肪酸同体内钙镁离子的结合生成皂造成能量及钙离子的损失。此外，有人研究了OPO和POO两种同分异构体对于婴儿淋巴乳糜微粒的影响，由OPO形成的乳糜微粒的平均粒径要大于由OOP形成的乳糜微粒的平均粒径。这说明OPO的运输效率比OOP更高。因此，越来越多的婴幼儿奶粉企业除了关注奶粉中脂肪的脂肪组成外，更加关注脂肪结构。

人乳脂肪中的中碳链脂肪酸主要有己酸，辛酸及月桂酸，长碳链多不饱和脂肪酸主要为二十二碳六烯酸(DHA，Docosahexaenoic Acid)，花生四烯酸(AA，Arachidonic Acid)等。中碳链脂肪酸主要分布在人乳脂肪的sn-3位置，十二指肠前脂酶对在这个位置的中碳链脂肪酸有较高活力。水解的中碳链脂肪酸可以被门静脉吸收，为婴幼儿提供即时能量，而1,2位甘二酯通过增加甘油三酯的可溶性从而有利于其在十二指肠中的消化吸收。长碳链多不饱和脂肪酸在人乳脂肪中含量较少，但是其对于婴幼儿的发育很重要，特别是DHA和AA。DHA和AA在人的视网膜和大脑高度集中，对人的视觉系统和中枢神经的发育具有重要作用。但是，对于一些婴儿来说，由于较低的脱氢酶活力，合成DHA和AA具有一定的困难。因此，基于中碳链脂肪酸以及长碳链多不饱和脂肪酸的特殊功能，在人乳替代脂中适当补充这些脂肪酸将有利于婴幼儿的健康发育。

目前文献报道的关于人乳替代脂的合成主要原料为棕榈硬脂和猪油。以棕榈硬脂为原料，所用的酸解脂肪酸用量大，同时后处理比较困难，造成较高的成本。猪油同人乳脂肪具有相似的脂肪酸组成及分布，但是由于猪油本身不适用于一些民族信仰的人，所以难以得到通用。因此，有必要找到一种在sn-2位有较高棕榈酸含量又具有较低总棕榈酸含量的油脂，对于开发人乳替代脂产品具有极为重要意义。基于这样的目的，通过分析发现，一些鲶鱼油总棕榈酸含量为30％左右，大约有40％以上的棕榈酸在sn-2位，是制备乳替代脂的良好原料。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有人乳替代脂制备中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种经济可行的以鲶鱼油为原料结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其包括：将鲶鱼油在50～60℃熔化，保持30～60min，并以1～5℃/min的降温速率降温至15～30℃，将鲶鱼油在此温度下保持5～48h后，采用过滤的方式除去液态油，得到在sn-2位富含棕榈酸的鲶鱼油固脂成分；以sn-1,3位特异性脂肪酶为催化剂，以富含油酸的植物油来源的脂肪酸同富含亚油酸来源的普通植物油脂肪酸作为制备人乳替代脂产品的酰基供体，酸解所述鲶鱼油固脂成分，除去所得中间产物的游离脂肪酸；通过油脂物理混合模型指导下的油脂混合，调节中间产品的中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量，从而进一步提高产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似性；以及，通过人乳替代脂评价模型评价最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述富含油酸的植物油来源的脂肪酸同富含亚油酸来源的普通植物油脂肪酸作为制备人乳替代脂产品的酰基供体，其质量比为1:1～4。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述催化剂为Lipozyme RM IM和/或Lipozyme TL IM。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述酸解，其反应温度为40℃～70℃。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述酸解为间歇反应，其鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1：1～5，加酶量为3％～15％，反应时间为1h～5h,搅拌速率为300r/min～800r/min。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述酸解为连续反应，其鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1：1～6，底物停留时间在0.5h～3h。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述油脂混合是根据酶解产物同人乳脂肪在中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量上的差异决定的，包括富含中碳链脂肪酸棕榈仁油和椰子油、富含花生四烯酸的藻油及二十二碳六烯酸的微生物油脂。

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述通过油脂物理混合模型指导下的油脂混合，混合模型如下所示：

FA % = \frac{Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (1)

sn - 2 FA % = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (2)

sn - 1,3 FA % = \frac{3 \times (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}) - (Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i})}{2 \times (1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i})} - - - (3)

% sn - 2 FA = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{3 (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i})} \times 100 - - - (4)

其中，Y₁和Y_i分别为中间产品和所选择油脂的各脂肪酸的含量，Y_1(sn-2)和Y_i(sn-2)分别为中间产品和所选择油脂二位上各脂肪酸的含量，X_i为所选择的油脂同中间产物的摩尔比；

根据以上公式可得到添加油脂后的体系中甘油三酯的脂肪酸组成及分布，根据人乳脂的脂肪酸组成及分布的特点建立不等式，同时根据体系中油脂重量公式(5)，采用Matlab R2010a得到满足人乳脂替代品条件下的最大油脂添加量；

M = X_{1} (M_{1} + Σ_{i = 2}^{n} X_{i} M_{i}) - - - (5)

M为最终产品的重量；X₁是中间产品的摩尔数；M₁是中间产品的分子质，M_i是所选择油脂的分子质量；

作为本发明所述结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法的一种优选方案，其中：所述通过人乳替代脂评价模型评价最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度，评价模型为：

G_{FA / sn - 2 FA / PUFA} = 100 - Σ_{i = 1}^{n} E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)};

E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = 100 \times (C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} \frac{D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}}{Σ_{i = 1}^{n} D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}});

C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = \frac{| B_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} - A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} |}{A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}};

其中，G_{FA/sn-2FA/PUFA}分别为人乳替代脂在脂肪酸组成、sn-2脂肪酸相对含量或多不饱和脂肪酸组成方面同人乳脂肪的相似度；

E_{i(FA/sn-2FA/PUFA)}是分别为人乳替代脂中脂肪酸组成、sn-2脂肪酸相对含量或多不饱和脂肪酸组成在人乳脂肪相应指标含量范围之外所被扣除的相似度；

为人乳脂肪的脂肪酸、sn-2脂肪酸或多不饱和脂肪酸组成同其总含量的相对值；

C_{i(FA/sn-2FA/PUFA)}是浮动系数，其取决于人乳脂代品的总脂肪酸含量、sn-2脂肪酸相对含量或多不饱和脂肪酸组成；

B_{i(FA/sn-2FA/PUFA)}是人乳替代脂中的总脂肪酸含量、sn-2脂肪酸相对含量或多不饱和脂肪酸含量；

A_{i(FA/sn-2FA/PUFA)}是相应的人乳脂肪的总脂肪酸、sn-2相对脂肪酸含量或多不饱和脂肪酸组成；当B高于A时，A选择上限；当B小于A时，A选择下限；如果B在A的范围之内，C为0。

本发明的有益效果：本发明以鲶鱼油或其分提物为原料，根据其同人乳脂肪在脂肪酸组成及分布上的差异，首次采用两步法即酶法酸解和模型指导下的油脂混合的方法制备得到人乳替代脂产品，其中酶法酸解主要调节鲶鱼油或其分提物的大量脂肪酸组成，油脂混合主要调节酶解产物的微量脂肪酸组成，最终所得产品经过人乳替代脂评价模型评价，不仅在大量脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪有较高的相似度，同时在微量脂肪酸组成上也有较大程度提高。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

本发明以鲶鱼油或其分提物为原料，根据鲶鱼油及其分提物的脂肪酸组成及分布同人乳脂肪的差异，选择脂肪酸酰基供体，以sn-1,3位特异性脂肪酶为催化剂，在间歇或者填充床反应器中酸解鲶鱼油或其分提物，调节大量脂肪酸组成(含量>1％)及分布；所得中间产物的游离脂肪酸通过蒸馏除去，再通过油脂物理混合模型指导下的油脂混合，调节中间产品的中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量，从而进一步提高产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似性，最后通过人乳替代脂评价模型评价最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度。

具体步骤如下：

步骤1：将鲶鱼油在一定条件下分提，得到鲶鱼油中sn-2位富含棕榈酸的固脂成分；

步骤2：根据鲶鱼油及其分提物的脂肪酸组成及分布同人乳脂肪的差异，选择不同比例的来源于富含油酸及亚油酸植物油的脂肪酸酰基供体；

步骤3：以sn-1,3位特异性脂肪酶为催化剂，以所选择的不同比例的来源于富含油酸及亚油酸植物油的脂肪酸酰基供体，在间歇或者填充床反应器中酸解鲶鱼油或其分提物，调节大量脂肪酸组成(含量>1％)及分布；

步骤4：脱除反应物中的脂肪酶，采用蒸馏的方式除去酶解产物中的游离脂肪酸得到人乳替代脂产品；

步骤5：根据酶解产物同人乳脂肪在微量脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量上的差异，选择油脂添加，其比例通过油脂物理混合模型优化，采用人乳替代脂评价模型评价所得最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度。

步骤1中所述的鲶鱼油分提条件为：将鲶鱼油在50-60度熔化，并以1-5度/min的降温速率降温至15-30度，将鲶鱼油在此温度下静止5-48h后，采用过滤的方式除去液态油，得到在sn-2位富含棕榈酸的鲶鱼油固脂成分；

步骤2中所述的鲶鱼油及典型人乳脂肪的脂肪酸组成及分布如表1所示：

表1.鲶鱼油及人乳脂肪的脂肪酸组成及分布

步骤2中所述的脂肪酸酰基供体来源的选择是根据鲶鱼油及其分提物同人乳脂肪在大量脂肪酸组成上的差异进行的，主要为富含油酸的普通植物油如茶叶籽油，橄榄油，菜籽油等及富含亚油酸的普通植物油如玉米油，大豆油，葵花籽油等。将富含油酸的植物油来源的脂肪酸同富含亚油酸来源的普通植物油脂肪酸按1:1-1:4的比例混合，作为制备人乳替代脂的酰基供体；

步骤3中所述的脂肪酶催化剂为对甘油三酯sn-1,3位具有特异选择性的脂肪酶，主要来源于为诺维信的lipozyme RM IM及Lipozyme TL IM等；

步骤3中所述的所选择的混合脂肪酸为步骤2中所选的富含油酸的普通植物油同富含亚油酸的普通植物油的混合物；

步骤3中所述的间歇反应器中的酸解条件包括反应温度，底物比，加酶量及反应时间，其中酸解反应温度为40-70度，鲶鱼油或其分提物与混合脂肪酸的摩尔比为1：1到1：5，加酶量为3％-15％，反应时间为1-5h小时，搅拌速率为300-800转/min；

步骤3中所述的合适比例的酰基供体是通过其同鲶鱼油及其分提物酸解反应后，以人乳替代脂评价模型监控酶解产物在大量脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度的大小得到的；

步骤3中所述的填充床连续反应器中的酸解条件包括底物停留时间，反应温度及底物比，器中，底物停留时间在0.5-3h，鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1：1到1：6，反应温度为40-70度；

步骤4中所述的脱除脂肪酶的方式为离心分离或者过滤，蒸馏方式为分子蒸馏或减压蒸馏；

步骤5中所述的添加油脂主要是根据酶解产物根据同人乳脂肪在中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量上的差异决定的，主要为富含中碳链脂肪酸棕榈仁油和椰子油，富含花生四烯酸的藻油及二十二碳六烯酸的微生物油脂；

步骤5中所述的油脂物理混合模型为:

酶解产物添加油脂后，体系中混和甘三酯的脂肪酸组成及分布可由以下公式计算得到：

FA % = \frac{Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (1)

sn - 2 FA % = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (2)

sn - 1,3 FA % = \frac{3 \times (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}) - (Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i})}{2 \times (1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i})} - - - (3)

% sn - 2 FA = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{3 (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i})} \times 100 - - - (4)

Y₁和Y_i分别为中间产品和所选择油脂的各脂肪酸的含量；Y_1(sn-2)和Y_i(sn-2)分别为中间产品和所选择油脂二位上各脂肪酸的含量；X_i为所选择的油脂同中间产物的摩尔比。根据以上公式可得到添加油脂后的体系中甘油三酯的脂肪酸组成及分布。根据人乳脂的脂肪酸组成及分布的特点建立不等式，同时根据体系中油脂重量公式(5)，采用Matlab R2010a(MathWorks,Natick,Massachusetts)得到满足人乳脂替代品条件下的最大油脂添加量。

M = X_{1} (M_{1} + Σ_{i = 2}^{n} X_{i} M_{i}) - - - (5)

M为最终产品的重量；X₁是中间产品的摩尔数；M₁是中间产品的分子质量，M_i是所选择油脂的分子质量。

步骤5中所述的人乳替代脂评价模型为将所得人乳替代脂同人乳脂肪在脂肪酸组成及分布，多不饱和脂肪酸方面进行比较评价，得到相似度，评价模型如下所示：

G_{FA / sn - 2 FA / PUFA} = 100 - Σ_{i = 1}^{n} E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)};

E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = 100 \times (C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} \frac{D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}}{Σ_{i = 1}^{n} D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}});

C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = \frac{| B_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} - A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} |}{A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}};

实施例1：

在间歇反应器中，以鲶鱼油为原料，以1,3位特异性脂肪酶Lipozyme RMIM为催化剂，反应温度为50度，加酶量为10wt％，搅拌速率为500转/min，选择的来源于富含油酸的菜籽油及富含亚油酸的葵花籽油的游离脂肪酸比例为1:3，鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1:3，搅拌速率为600转/min，反应后通过离心除去反应物中的脂肪酶，同时通过蒸馏除去游离脂肪酸。酸解所用不同比例混合脂肪酸的组成如表2所示，所得产物的脂肪酸组成及分布如表3所示。

表2.菜籽油和葵花籽油脂肪酸不同比例混合物

FA种类	RSO	SFO	1:3
				C12:0	0.90	1.30	1.20
C14:0	1.00	1.70	1.53
				C16:0	6.70	6.80	6.78
C18:0	2.70	5.20	4.58
				C18:1	58.10	25.40	33.58
C18:2	22.50	59.00	49.88
				C18:3	7.80	0.60	2.40

表3.不同混合脂肪酸比例下酶解中间产物的大量脂肪酸组成及分布

	FA	sn-2FA	％sn-2	sn-1,3
					C12:0	0.6	0.4	22.2	0.7
C14:0	3.8	3.0	26.3	4.2
					C16:0	23.8	48.1	67.4	11.7
C18:0	7.8	5.3	22.6	9.1
					C18:1	40.5	33.1	27.2	44.2
C18:2	21.2	9.0	14.2	27.3
					C18:3	0.5	0.3	20.0	0.6

根据人乳脂肪的中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸的组成，结合所得酶解产物的化学组成特征，选择富含中碳链脂肪酸的棕榈仁油，富含花生四烯酸的藻油及二十二碳六烯酸的微生物油脂添加至酶解产物中，添加比例根据人乳脂肪的化学组成，由油脂物理混合模型优化确定。油脂混合模型如下所示：

FA % = \frac{Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (1)

sn - 2 FA % = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i}} - - - (2)

sn - 1,3 FA % = \frac{3 \times (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i}) - (Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i})}{2 \times (1 + Σ_{i = 2}^{n} X_{i})} - - - (3)

% sn - 2 FA = \frac{Y_{1 (sn - 2)} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i (sn - 2)} X_{i}}{3 (Y_{1} + Σ_{i = 2}^{n} Y_{i} X_{i})} \times 100 - - - (4)

M = X_{1} (M_{1} + Σ_{i = 2}^{n} X_{i} M_{i}) - - - (5)

M为最终产品的重量；X1是中间产品的摩尔数；M1是中间产品的分子质，Mi是所选择油脂的分子质量。

由油脂添加模型确定添加入酶解产物的棕榈仁油，藻油及微生物油脂的比例为：1：(0.046-0.1314)：(0.005-0.011)：(0.0076-0.014)；所得油脂混合产物的脂肪酸组成及分布的范围如下表所示：

表4.混合油脂的脂肪酸组成及分布范围

Fatty acid	total	sn-2
			C8:0	0.2-0.5
C10:0	0.2-0.5	0.0-0.1
			C12:0	3.0-6.8	2.2-5.2
C14:0	4.3-5.1	3.6-4.5
			C16:0	21.7-23.0	42.8-46.2
C18:0	7.0-7.5	4.8-5.2
			C18:1n-9	36.6-39.1	31.7-33.4
C18:2n-6	16.9-18.3	8.6-9.7
			C18:3n-3	0.5-0.6	0.3-0.7
C20:0	0.0-0.1	0.0-0.1
			C20:3n-6	0.0-0.1	0.1-0.7
C20:4n-6	0.4-0.6	0.6-3.3
			C22:0	0.0-0.1	0.0-0.1
C22:5n-3	0.0-0.1	0-0.1
			C22:6n-3	0.2-0.4	0.2-0.5

将表4中的数据带入人乳替代脂的评价模型得到酶解产物的脂肪酸组成及分布得分，模型如下所示：

G_{FA / sn - 2 FA / PUFA} = 100 - Σ_{i = 1}^{n} E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)};

E_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = 100 \times (C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} \frac{D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}}{Σ_{i = 1}^{n} D_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}});

C_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} = \frac{| B_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} - A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)} |}{A_{i (FA / sn - 2 FA / PUFA)}};

表5 油脂混合物的模型评价得分范围

得分种类	得分范围
		G_FA	96.2-97.6
G_sn-2FA	94.9-97.0
		G_PUFA	55.7-61.5

实施例2：

在填充床连续反应器中，以鲶鱼油30度固脂分提物为原料，以1,3位特异性脂肪酶Lipozyme RM IM为催化剂，反应温度为60度，停留时间为1h，选择的来源于富含油酸的茶叶籽油及富含亚油酸的玉米油的游离脂肪酸比例为1:2，鲶鱼油固脂分提物与游离脂肪酸的摩尔比为1:4，反应后通过离心除去反应物中的脂肪酶，同时通过蒸馏除去游离脂肪酸。鲶鱼油在30度下分提所得固脂脂肪酸组成及分布如表6，混合脂肪酸的组成如表7所示，所得产物的脂肪酸组成及分布如表8所示。

表6 鲶鱼油30度下分提固脂的脂肪酸组成及分布

表7 原料的脂肪酸组成

FA种类	茶叶籽油	玉米油	1:2
				C16:0	14.72	12.2	13.04
C18:0	3.68	1.6	2.29
				C18:1	58.31	26.51	37.11
C18:2	19.9	56.51	44.31
				C18:3	0.97	0.32	0.54

表8 酶解中间产物的大量脂肪酸组成及分布

FA种类	total	sn-2	％sn-2	sn-1,3
					C12:0	0.11	0.2	60.6	0.1
C14:0	2.78	3.9	46.8	2.2
					C16:0	27.5	58.5	70.9	12.0
C18:0	8.13	4.22	17.3	10.1
					C18:1	38.6	19.1	16.5	48.4

C18:2	18.5	12.3	22.2	21.6
					C18:3	0.43	0.3	23.3	0.5

由油脂添加模型确定添加入酶解产物的椰子油，藻油及微生物油脂的比例为：1：(0.1057-0.1415)：(0.0053-0.0111)：(0.008-0.0143)；所得油脂混合产物的脂肪酸组成及分布的范围如下表所示：

表9 混合油脂的脂肪酸组成及分布范围

FA种类	total	sn-2
			C8:0	0.4-0.5
C10:0	0.5-0.6	0.0-0.1
			C12:0	5.4-6.8	4.2-5.3
C14:0	4.0-4.3	5.1-5.4
			C16:0	24.7-25.4	51.4-53.5
C18:0	7.2-7.4	3.8-4.1
			C18:1n-9	34.4-35.5	19.6-20.4
C18:2n-6	16.2-16.8	11.4-12.4
			C18:3n-3	0.3-0.4	0.3-0.7
C20:0	0.0-0.1	0.0-0.1
			C20:3n-6	0.0-0.1	0.1-0.7
C20:4n-6	0.4-0.6	0.6-3.3
			C22:0	0.0-0.1	0.0-0.1
C22:5n-3	00-0.1	0.0-0.1
			C22:6n-3	0.2-0.4	0.2-0.5

将表9中的数据带入人乳替代脂的评价模型得到酶解产物的脂肪酸组成及分布得分如下表所示：

表10 不同混合脂肪酸比例下酶解中间产物的大量脂肪酸组成及分布的模型评价得分

得分种类	得分范围
		G_FA	97.2-97.8
G_sn-2FA	96.7-97.2
		G_PUFA	54.3-60.3

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，包括：

将鲶鱼油在50～60℃熔化，保持30～60min，并以1～5℃/min的降温速率降温至15～30℃，将鲶鱼油在此温度下保持5～48h后，采用过滤的方式除去液态油，得到在sn-2位富含棕榈酸的鲶鱼油固脂成分；

以sn-1,3位特异性脂肪酶为催化剂，以富含油酸的植物油来源的脂肪酸同富含亚油酸来源的普通植物油脂肪酸作为制备人乳替代脂产品的酰基供体，酸解所述鲶鱼油固脂成分，除去所得中间产物的游离脂肪酸；

通过油脂物理混合模型指导下的油脂混合，调节中间产品的中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量，从而进一步提高产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似性；以及，

通过人乳替代脂评价模型评价最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度。

2.根据权利要求1所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述富含油酸的植物油来源的脂肪酸同富含亚油酸来源的普通植物油脂肪酸作为制备人乳替代脂产品的酰基供体，其质量比为1:1～4。

3.根据权利要求1所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述催化剂为Lipozyme RM IM和/或Lipozyme TL IM。

4.根据权利要求1所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述酸解，其反应温度为40℃～70℃。

5.根据权利要求1或4所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述酸解为间歇反应，其鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1：1～5，加酶量为3％～15％，反应时间为1h～5h,搅拌速率为300r/min～800r/min。

6.根据权利要求1或4所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述酸解为连续反应，其鲶鱼油与游离脂肪酸的摩尔比为1：1～6，底物停留时间在0.5h～3h。

7.根据权利要求1所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述油脂混合是根据酶解产物同人乳脂肪在中碳链脂肪酸及长碳链多不饱和脂肪酸含量上的差异决定的，包括富含中碳链脂肪酸棕榈仁油和椰子油、富含花生四烯酸的藻油及二十二碳六烯酸的微生物油脂。

8.根据权利要求1或7所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述通过油脂物理混合模型指导下的油脂混合，混合模型如下所示：

M为最终产品的重量；X₁是中间产品的摩尔数；M₁是中间产品的分子质，M_i是所选择油脂的分子质量。

9.根据权利要求1或7所述的结合酶法酸解及物理混合的人乳替代脂的制备方法，其特征在于，所述通过人乳替代脂评价模型评价最终产品在脂肪酸组成及分布上同人乳脂肪的相似度，评价模型为：