CN104819886A - 一种细菌荚膜快速染色试剂及其染色方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种细菌荚膜快速染色试剂及使用该试剂的染色方法。该试剂主要由碱性品红、硫酸铜、石碳酸溶液、明矾和无水乙醇等试剂配制而成。该染色试剂成本低廉，可在室温下长期贮存而不失效。应用该试剂对细菌荚膜染色，操作简单，只需一个染色步骤。应用该试剂的染色方法克服了目前细菌荚膜常规染色法操作繁琐的缺点；同时用该试剂染色时间只需要60秒，大大缩短了细菌荚膜染色的时间，染色效果好，荚膜和背景对比明显，易于观察。适合在教学科研中对细菌荚膜染色中推广应用。

Description

一种细菌荚膜快速染色试剂及其染色方法

技术领域：

本发明属于一种细菌染色用试剂，具体涉及一种细菌荚膜染色试剂及其使用该试剂的染色方法。

背景技术：

荚膜是细菌的一种特殊结构，是指某些细菌细胞壁外包绕的一层粘液性的物质，主要成分为多糖或蛋白质的多聚体。荚膜是细菌致病重要的毒力因子，也是鉴别细菌的重要标志。因此在教学和科研中，细菌荚膜染色是一种重要的染色方法。由于细菌荚膜对一般碱性燃料亲和力低，不易着色，因此，需要采用特殊的染色方法对其染色才能观察到。目前常采用的方法有Hiss法、Muir法、Anthony染色法、墨水负染法、石碳酸复红墨汁法、刚果红盐酸负染法等方法。但从现有的文献报道，这些方法都存在一定的缺点，如染色方法复杂、操作繁琐、染色时间长、染色效果不稳定等。为此很多研究者对现有荚膜染色法进行了改良，但改良后的荚膜染色法仍然存在操作过程复杂、染色时间长等缺点。因此需要一种更加简单快捷的染色方法，来对细菌荚膜进行染色观察。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术的不足，为细菌荚膜染色提供一种新的快速染色试剂及其使用方法，该试剂可在室温下长期贮存，应用该试剂染色操作简单、染色时间短，染色效果稳定。

本发明是通过以下技术方案实现的：本发明提供的染色试剂包括碱性品红、硫酸铜、石碳酸溶液、明矾、无水乙醇和双蒸水。具体配方如下：

应用本发明染色试剂的染色方法如下：在洁净的载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环挑取少许培养18～24小时含有荚膜细菌的培养物于载玻片上，并均匀涂成薄膜；或直接取注射肺炎链球菌死亡的小鼠腹腔液涂片。涂好的玻片经自然干燥后备用。染色时，将本发明试剂滴加到涂片区2～3滴(以完全覆盖涂片区为准)，染色60秒，用水冲掉染液，吸水纸吸干即可镜检。

本发明的优点在于：

1、试剂配制简单，配制试剂所用材料为常规试剂，成本低、易得。配制的试剂不需要特殊的保存条件，在室温下可长期保存而不失效。

2、染色方法操作简单，将传统荚膜染色的多步骤染色简化为一步染色；而且染色时间仅需60秒，大大缩短染色时间。

3、染色效果好，通过该法染出的细菌荚膜清晰，而且染色效果稳定，标本片可长期保存。

附图说明

图1为实施例1的细菌荚膜染色后观察图(放大倍数10×100)。

图2为实施例2的细菌荚膜染色后观察图(放大倍数10×100)。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，本发明的保护范围不限于以下所述。

实施例1：

一、染液的配制

1、准确称取6.25g碱性品红放入研钵中充分研磨，加入90ml无水乙醇溶解后，再加入4.5％石碳酸溶液80ml充分混匀。

2、准确称取硫酸铜15.8g、明矾1.98g溶解在95ml双蒸水中，充分混匀。

3、将步骤1和2所得的溶液按1:2.5的比例充分混匀，用2层滤纸过滤后，保存在棕色广口瓶中，室温保存备用。

二、染色

1、按常规制片的方法，取一张洁净的载玻片，在载玻片的中央滴加少许生理盐水，用灭菌的接种环取少许血平板上培养好的肺炎链球菌菌苔，放入载玻片上的生理盐水中，充分涂开，然后在室温下自然干燥。

2、用滴管吸取上述染液，滴加到载玻片的涂片区上，以覆盖涂片区为好，染色时间为60秒，然后用流水将染液冲洗掉，用吸水纸将载玻片上多余的水分吸干。

3、将上述染色后的玻片置于显微镜的油镜下观察，可见肺炎链球菌的菌体呈深紫色，荚膜为白色，背景为淡紫色，菌体、荚膜形态典型，染色清晰，易于观察。如附图1所示。

实施例2：

一、染液的配制

1、准确称取7.98g碱性品红放入研钵中充分研磨，加入100ml无水乙醇溶解后，再加入4.5％石碳酸溶液90ml充分混匀。

2、准确称取硫酸铜18.6g、明矾2.05g溶解在100ml双蒸水中，充分混匀。

3、将步骤1和2所得的溶液按1:2.5的比例充分混匀，用2层滤纸过滤后，保存在棕色广口瓶中，室温保存备用。

二、染色

1、按常规方法制片，取注射肺炎链球菌死亡小鼠的腹腔液一滴，滴在一张洁净的载玻片中央，充分涂开后，在室温下自然干燥。

2、用滴管吸取上述染液，滴加到载玻片的涂片区上，以覆盖涂片区为好，染色时间为60秒，然后用流水将染液冲洗掉，用吸水纸将载玻片上多余的水分吸干。

3、将上述染色后的玻片置于显微镜的油镜下观察，可见肺炎链球菌的菌体呈深紫色，荚膜为白色，背景为淡紫色，菌体、荚膜形态典型，染色清晰，易于观察。如附图2所示。

Claims (2)

1.一种细菌荚膜快速染色试剂，其特征在于：该试剂主要由碱性品红、硫酸铜、石碳酸溶液、明矾和无水乙醇组成。具体配方如下：

碱性品红6.25g～8g；4.5％石碳酸溶液80ml～100ml；明矾1.55g～2.15g；硫酸铜15.8g～18.6g；无水乙醇90ml～100ml；双蒸水90ml～100ml。

2.使用权利要求1所述的染色试剂对细菌荚膜进行染色的方法，其特征在于：按下述步骤进行：

(1)制片：在一张洁净的载玻片中央滴加少许生理盐水，用灭菌的接种环取少许培养好的细菌菌苔，放入载玻片上的生理盐水中，充分涂开，室温下自然干燥。

(2)染色：用滴管吸取权利要求1所述的染色剂，滴加到涂片区内，染色时间为60秒，然后用流水将染液冲洗掉，用吸水纸将载玻片上多余水分吸干。