CN104817651A - 肝素钠的精制工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了肝素钠的精制工艺。工艺包括以下几个步骤：（1）预处理；（2）过柱；（3）氧化；（4）沉淀。本发明的肝素钠的精制工艺，步骤简单，成本低，超滤膜能去除部分大分子量的杂质，通过分离柱去除粗品中的蛋白质，避免了酶解反应中强酸对于肝素钠造成的失活，且分离效果良好，去除蛋白质彻底；通过氧化脱色，脱色效果好，且通过纳滤膜过滤，小分子量物质去除彻底。
Description
技术领域：
本发明涉及一种肝素钠的精制工艺，属于生化技术领域。
背景技术：
肝素钠是肝素的钠盐形式产物，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖类天然抗凝血物质。可广泛用于防治各种心脑血管疾病，在临床应用中广受青睐。
肝素钠广泛存在于哺乳动物的肠粘膜、肺、肝中，特别是猪小肠粘膜中含量最高。目前我国生产的肝素钠主要以猪小肠粘膜为原料进行提取，由于肝素钠在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在，故使得粗品中会残留一定量的蛋白质，影响了产品的品质。
肝素的精制过程主要是对粗品肝素钠进行除蛋白提纯和脱色，达到国家药典标准要求。在我国肝素的精制多采用高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法或过氧化氢分次加入的二次氧化法生产工艺；同时也有资料报道，采用酶解结合氧化法精制肝素的记载。但是上述几种工艺都存在不足；第一种高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法存在二氧化锰吸食肝素，使肝素活性损失大，回收率低；过滤困难，生产周期长，色泽不好，质量差等缺点；第二种过氧化氧分次加入的二次氧化法工艺，因产品色泽较好，目前被普遍采用。但该工艺主要存在二次氧化氢处理对肝素结构造成破坏，难以得到较高效价的精品肝素产品的不足；第三种酶解结合氧化法工艺，虽有报道但未被广泛采用，同时存在酶解条件、氧化条件与结合运用生物制品萃取、分离、纯化技术等工艺设计优选问题的不足。
发明内容：
本发明目的是，用来弥补现有技术的不足，而提供一种肝素钠的精制工艺。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
肝素钠的精制工艺，包括以下几个步骤：
(1)预处理：将粗品肝素钠溶解在浓度为3-5％的氯化钠水溶液中，过滤取上清液，用超滤膜再次过滤所述上清液，得到清液；
(2)过柱：将清液过分离柱，用10％的乙醇水溶液淋洗，然后用无水乙醇洗脱分离柱，得到洗脱液；
(3)氧化：向洗脱液中加入过氧化氢，调节PH为8-9，搅拌反应2-3h，粗过滤后用纳滤膜再次过滤得到氧化液；
(4)沉淀：向氧化液中加入无水乙醇，静置24h，离心后得到沉淀，丙酮脱水后真空干燥得到精制肝素钠。
所述的肝素钠的精制工艺，步骤(1)中，粗品肝素钠与氯化钠水溶液的重量比为2-4:10。
所述的肝素钠的精制工艺，步骤(2)中采用的分离柱为阳离子交换树脂，洗脱用无水乙醇的重量为清液重量的2-3倍。
所述的肝素钠的精制工艺，步骤(3)中，过氧化氢的加入量为洗脱液的重量的1-3％。
所述的肝素钠的精制工艺，步骤(4)中离心时温度为4℃，转速为5000r/min。
本发明的有益效果如下：
本发明的肝素钠的精制工艺，步骤简单，成本低，超滤膜能去除部分大分子量的杂质，通过分离柱去除粗品中的蛋白质，避免了酶解反应中强酸对于肝素钠造成的失活，且分离效果良好，去除蛋白质彻底；通过氧化脱色，脱色效果好，且通过纳滤膜过滤，小分子量物质去除彻底。
本发明工艺得到的精制肝素钠，色白，单位效价为180-200U/mg，产品中紫外区杂质(260nm,280nm)符合药典要求。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
本实施例中，肝素钠的精制工艺，包括以下几个步骤：
(1)预处理：将粗品肝素钠溶解在浓度为3-5％的氯化钠水溶液中，过滤取上清液，用超滤膜再次过滤所述上清液，得到清液；
(2)过柱：将清液过分离柱，用10％的乙醇水溶液淋洗，然后用无水乙醇洗脱分离柱，得到洗脱液；
(3)氧化：向洗脱液中加入过氧化氢，调节PH为8-9，搅拌反应2-3h，粗过滤后用纳滤膜再次过滤得到氧化液；
(4)沉淀：向氧化液中加入无水乙醇，静置24h，离心后得到沉淀，丙酮脱水后真空干燥得到精制肝素钠。
其中，步骤(1)中，粗品肝素钠与氯化钠水溶液的重量比为2:10；步骤(2)中采用的分离柱为阳离子交换树脂，洗脱用无水乙醇的重量为清液重量的3倍；步骤(3)中，过氧化氢的加入量为洗脱液的重量的1％；步骤(4)中离心时温度为4℃，转速为5000r/min。
实施例2
本实施例中，肝素钠的精制工艺，包括以下几个步骤：
(1)预处理：将粗品肝素钠溶解在浓度为3-5％的氯化钠水溶液中，过滤取上清液，用超滤膜再次过滤所述上清液，得到清液；
(2)过柱：将清液过分离柱，用10％的乙醇水溶液淋洗，然后用无水乙醇洗脱分离柱，得到洗脱液；
(3)氧化：向洗脱液中加入过氧化氢，调节PH为8-9，搅拌反应2-3h，粗过滤后用纳滤膜再次过滤得到氧化液；
(4)沉淀：向氧化液中加入无水乙醇，静置24h，离心后得到沉淀，丙酮脱水后真空干燥得到精制肝素钠。
其中，步骤(1)中，粗品肝素钠与氯化钠水溶液的重量比为3:10；步骤
(2)中采用的分离柱为阳离子交换树脂，洗脱用无水乙醇的重量为清液重量的2倍；步骤(3)中，过氧化氢的加入量为洗脱液的重量的2％；步骤(4)中离心时温度为4℃，转速为5000r/min。
实施例3
本实施例中，肝素钠的精制工艺，包括以下几个步骤：
(1)预处理：将粗品肝素钠溶解在浓度为3-5％的氯化钠水溶液中，过滤取上清液，用超滤膜再次过滤所述上清液，得到清液；
(2)过柱：将清液过分离柱，用10％的乙醇水溶液淋洗，然后用无水乙醇洗脱分离柱，得到洗脱液；
(3)氧化：向洗脱液中加入过氧化氢，调节PH为8-9，搅拌反应2-3h，粗过滤后用纳滤膜再次过滤得到氧化液；
(4)沉淀：向氧化液中加入无水乙醇，静置24h，离心后得到沉淀，丙酮脱水后真空干燥得到精制肝素钠。
其中，步骤(1)中，粗品肝素钠与氯化钠水溶液的重量比为4:10；步骤(2)中采用的分离柱为阳离子交换树脂，洗脱用无水乙醇的重量为清液重量的2倍；步骤(3)中，过氧化氢的加入量为洗脱液的重量的3％；步骤(4)中离心时温度为4℃，转速为5000r/min。
Claims (5)
1.肝素钠的精制工艺，其特征在于，包括以下几个步骤：
（1）预处理：将粗品肝素钠溶解在浓度为3-5%的氯化钠水溶液中，过滤取上清液，用超滤膜再次过滤所述上清液，得到清液；
（2）过柱：将清液过分离柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用无水乙醇洗脱分离柱，得到洗脱液；
（3）氧化：向洗脱液中加入过氧化氢，调节PH为8-9，搅拌反应2-3h，粗过滤后用纳滤膜再次过滤得到氧化液；
（4）沉淀：向氧化液中加入无水乙醇，静置24h，离心后得到沉淀，丙酮脱水后真空干燥得到精制肝素钠。
2.根据权利要求1所述的肝素钠的精制工艺，其特征在于，步骤（1）中，粗品肝素钠与氯化钠水溶液的重量比为2-4:10。
3.根据权利要求1所述的肝素钠的精制工艺，其特征在于，步骤（2）中采用的分离柱为阳离子交换树脂，洗脱用无水乙醇的重量为清液重量的2-3倍。
4.根据权利要求1所述的肝素钠的精制工艺，其特征在于，步骤（3）中，过氧化氢的加入量为洗脱液的重量的1-3%。
5.根据权利要求1所述的肝素钠的精制工艺，其特征在于，步骤（4）中离心时温度为4℃，转速为5000r/min。
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